一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的製作方法
2023-07-22 12:28:51
本發明屬於藥物製劑領域，涉及一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑。
發明背景
目前腫瘤化療主要採取全身給藥的方式，但是這種給藥方式存在一些問題：一是藥物隨血液分布到全身各個器官組織，會帶來全身性毒副作用；二是能夠分布到腫瘤部位的藥物與給藥量相比數量很少，造成腫瘤病灶局部藥物濃度低，持續時間短；三是患者在接受腫瘤切除術後因身體狀況不能立即給與化療藥物，造成錯過最佳治療期等。而化療藥物局部給藥可以很好的解決上述問題。化療藥物局部給藥可以將藥物靶向定量的遞送到病灶部位，減少正常組織器官的藥物分布，降低全身性毒副作用；還可以在腫瘤切除術後立即給藥，並且通過緩慢釋放使腫瘤細胞長時間暴露在藥物環境中，最大程度抑制腫瘤復發。
抗腫瘤藥物大多為難溶性藥物，我們的前期研究表明，製備溶液型的局部給藥系統則會使藥物擴散太快，局部藥物濃度無法在較長時間內保持較高水平；製備微米級別的藥物顆粒局部給藥系統則不夠穩定，藥物會沉降並且釋放速度太慢難以維持治療藥物濃度；而製備成納米級別的藥物顆粒不僅可以使局部給藥系統能夠穩定保持較長時間不沉降，並且藥物釋放速度合適，可以使局部給藥部位在較長時間保持較高的藥物濃度。因此製備納米級別的藥物顆粒用於局部給藥具有很大優勢。
纖維蛋白膠是一種新型安全、可靠的生物止血材料，經cfda批准廣泛運用於各種外科手術。市售纖維蛋白膠一般分為4瓶裝，1瓶為纖維蛋白原，、1瓶為凝血酶，加上2種專用溶劑。各組分分別溶解、混合後，用專用注射器噴灑於創面上，可形成穩定的交聯纖維蛋白多聚體，有效起到止血、促癒合、填充缺損、防止粘連等作用。若將化療藥物的納米晶體與纖維蛋白膠相結合，將能充分利用納米晶體提高藥物溶解度和生物利用度的特點，以及纖維蛋白膠緩慢釋放和生物相容性好的優勢，將化療藥物納米晶體直接遞送到腫瘤病灶部位，實現局部的有效化療。
據此，本發明目的在於提供一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，可用於乳房、肺部、顱內、腹腔等部位實體瘤或病變組織切除後術腔內局部給藥，用於預防腫瘤的復發。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑。
本發明通過以下方式實現上述目的：
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中疏水性藥物為紫杉醇和多西他賽中的一種或兩種。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中疏水性化療藥物納米顆粒平均粒徑大小為10nm到5000nm之間。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中疏水性化療藥物納米顆粒平均粒徑大小優選為50nm到3000nm之間。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中疏水性化療藥物納米顆粒平均粒徑大小優選為100nm到1000nm之間。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中纖維蛋白膠可來源於哺乳動物血液。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中纖維蛋白膠來源優選為豬的血液。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中含有疏水性化療藥物納米顆粒的製劑和纖維蛋白膠製劑分別包裝，可以臨用時配製成所述抗腫瘤劑。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中所述的疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠中纖維蛋白原的質量比為1∶100到1000∶1。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中所述的疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠中纖維蛋白原的質量比優選為1∶10到800∶1。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其中所述的疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠中纖維蛋白原的質量比優選為1∶1到500∶1。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其配製及應用方法包括下列步驟：
a.將含有疏水性化療藥物納米顆粒的製劑與纖維蛋白膠的製劑中的纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液中的一種混合；
b.向需要接受治療的患者體內分別或者同時給予上述步驟中得到的含有疏水性化療藥物納米顆粒的纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液與纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液中的另一種，兩者混合成含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，其配製及應用方法包括下列步驟：
a.將含有疏水性化療藥物納米顆粒的製劑與纖維蛋白膠製劑中的纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液中的一種混合；
b.將上述步驟得到的含有疏水性化療藥物納米顆粒的纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液與纖維蛋白原溶液或凝血酶溶液中的另一種混合成含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑。
c.患者完成腫瘤切除後，將上述步驟得到的含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑置於切除後的術腔中。
本發明所提供的抗腫瘤劑以含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的一種藥物製劑存在。
本發明所提供的抗腫瘤劑以含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的一種藥物製劑存在時有4種組成：a.纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒，b.凝血酶，c.纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒的溶解液，d.凝血酶的溶解液。
本發明所提供的抗腫瘤劑以含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的一種藥物製劑存在時有4種組成：a.纖維蛋白原，b.凝血酶和疏水性化療藥物納米顆粒，c.纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒的溶解液，d.凝血酶的溶解液。
本發明所提供的一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，可用於乳房、肺部、顱內、腹腔等部位實體瘤或病變組織切除後術腔內局部給藥，用於預防腫瘤的復發。
本發明所提供的用於抗腫瘤治療的含有纖維蛋白膠的組合物具有以下優點：
a.可以減少化療藥物的給藥頻率，與靜脈給藥相比，手術後術腔內一次給藥可以滯留較長時間，達到一次給藥，長時間釋放的目的，提高患者的順應性。
b.通過減小紫杉醇藥物顆粒的粒徑大小，可以提高紫杉醇抗腫瘤藥效，改善生物利用度，同時達到緩釋的目的。
c.局部給藥可以減少甚至避免系統性不良反應，提高患者用藥的安全性。
d.直接在腫瘤術後切除的術腔內給藥，可以使殘留的腫瘤細胞長時間暴露在紫杉烷的環境中，從而抑制腫瘤細胞生長，抑制腫瘤復發。
附圖說明
圖1實施例1中紫杉醇納米顆粒的粒徑分布圖
圖2實施例2中一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的體外釋放曲線
圖3實施例3中一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑給藥後的裸鼠腫瘤生長曲線
圖4實施例4中一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑給藥後的裸鼠腫瘤生長曲線
圖5實施例4中一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑給藥後的裸鼠體重變化曲線
圖6實施例5中一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑給藥後的裸鼠組織中紫杉醇濃度圖。
具體實施方式
以下通過具體的實施例來進一步闡釋和說明本發明，但不作為本發明的限制。
實施例1一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用方法
1、用2.5ml含有3.414mg紫杉醇納米顆粒的生理鹽水(粒徑分布圖如圖1)溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇納米顆粒的豬源性纖維蛋白原溶液。
2、再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液。
3、需要接受治療的患者完成腫瘤切除後，分別或同時將上述兩種溶液噴塗在患者腫瘤切除部位的創面周圍。
即完成含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用
實施例2一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用方法
1、用2.5ml含有3.414mg多西他賽納米顆粒的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有多西他賽納米顆粒的豬源性纖維蛋白原溶液。
2、再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液。
3、需要接受治療的患者完成腫瘤切除後，分別或同時將上述兩種溶液噴塗在患者腫瘤切除部位的創面周圍。
即完成含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用
實施例3一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的製備與應用方法
1、用2.5ml含有3.414mg紫杉醇納米顆粒的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇的豬源性纖維蛋白原溶液。
2、再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液。
3、將上述得到的兩種溶液混合得到含有紫杉醇納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，然後置於患者的腫瘤切除部位。
即完成含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用
實施例4一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用方法
1、用2.5ml含有3.414mg多西他賽納米顆粒的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有多西他賽納米顆粒的豬源性纖維蛋白原溶液。
2、再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液。
3、將上述得到的兩種溶液混合得到含有多西他賽納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑，然後置於患者的腫瘤切除部位。
即完成含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的配製與應用
實施例5一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的體外釋放研究
1、在franz擴散池下層接收池中加入0.5％sds溶液18.5ml，在上層釋放池中加入0.5ml含有200iu/ml 尿激酶的50％胎牛血清，在上層和下層之間放一張孔徑為0.22微米的濾膜。
2、用2.5ml含有3.75mg紫杉醇(平均粒徑大小為400nm)的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇的豬源性纖維蛋白原溶液。
3、再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液。
4、依次將凝血酶溶液和含有紫杉醇的豬源性纖維蛋白原溶液滴入到franz擴散池上層接收池中。
5、迅速將franz擴散池轉移到37℃水浴中恆溫攪拌，每隔一段時間從取樣口取樣0.4ml，之後補充0.4ml的0.5％sds溶液。取出的樣品溶液用hplc測定紫杉醇含量，計算各時間點累計釋放紫杉醇的總量，繪製釋放曲線，如圖2。
結果顯示紫杉醇可以從組合物中持續釋放超過100個小時，顯現出明顯的緩釋特點。
實施例6一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的體內藥效學研究
選取雌性balb/c裸鼠(6-8周)，於右側腋下接種人源乳腺癌細胞mcf-7約1×106個，兩周後待腫瘤長到50-100mm3後將腫瘤切除，在體外剪碎並切成約2mm3大小的腫瘤塊，然後迅速將腫瘤塊接種到另外一隻健康的雌性balb/c裸鼠(6-8周)右側腋下。待接種瘤塊的裸鼠腋下腫瘤長到50-100mm3後切除腫瘤，按不同方式分組給藥，具體如下：
空白對照組：切除腫瘤後縫合傷口，不做任何處理；
市售製劑對照組：尾靜脈注射，0.6mg/mltaxol6mg/kg，每三天給藥一次，給藥3次，總劑量18mg/kg；
治療組：先用2.5ml含有3.414mg紫杉醇的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液；再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液；之後在術腔內先滴入0.05ml凝血酶溶液，再迅速滴入0.05ml含有紫杉醇0.07mg(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液。最後縫合傷口。
給藥後每3天或4天使用遊標卡尺測量各組裸鼠腫瘤的長徑(l)短徑(r)，計算腫瘤體積v(v＝[l×(r)2]/2)，繪製腫瘤生長曲線，結果見圖3
結果表明治療組的藥物組合物有抑制腫瘤復發，延緩疾病進展的作用。
實施例7一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的體內藥效學研究
選取雌性balb/c裸鼠(6-8周)，於右側腋下接種人源非小細胞肺癌細胞a549約1×106個，兩周後待腫瘤長到50-100mm3後將腫瘤切除，在體外剪碎並切成約2mm3大小的腫瘤塊，然後迅速將腫瘤塊接種到另外一隻健康的雌性balb/c裸鼠(6-8周)右側腋下。待接種瘤塊的裸鼠腋下腫瘤長到50-100mm3後切除腫瘤，按不同方式給藥，具體如下：
空白對照組：切除腫瘤後縫合傷口，不做任何處理；
市售製劑對照組1：手術當天開始尾靜脈注射，0.6mg/mltaxol6mg/kg，每三天給藥一次，給藥3次，總劑量18mg/kg；
市售製劑對照組2：術後第三天開始尾靜脈注射，0.6mg/mltaxol6mg/kg，每三天給藥一次，給藥3次，總劑量18mg/kg
治療組1：先用2.5ml含有5.938mg紫杉醇的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液；再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液；之後在術腔內先滴入0.05ml凝血酶溶液，再迅速滴入0.05ml含有紫杉醇0.12mg(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液。最後縫合傷口。
治療組2：先用2.5ml含有2.969mg紫杉醇的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液；再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液；之後在術腔內先滴入0.05ml凝血酶溶液，再迅速滴入0.05ml含有紫杉醇0.06mg(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液。最後縫合傷口。
給藥後每3天或4天使用遊標卡尺測量各組裸鼠腫瘤的長徑(l)短徑(r)，計算腫瘤體積v(v＝[l×(r)2]/2)，繪製腫瘤生長曲線，結果見圖4。
給藥後每3天或4天使用天平稱量裸鼠體重。如圖5。
結果顯示，治療組的藥物組合物有延緩腫瘤進展的作用，且各組中裸鼠體重變化不明顯，沒有顯著性差異，說明初步安全性良好。
實施例8一種含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的抗腫瘤劑的組織分布研究
選取雌性balb/c裸鼠(6-8周)，於右側腋下接種人源非小細胞肺癌細胞a549約1×106個，兩周後待腫瘤長到50-100mm3後將腫瘤切除，在體外剪碎並切成約2mm3大小的腫瘤塊，然後迅速將腫瘤塊接種到另外一隻健康的雌性balb/c裸鼠(6-8周)右側腋下。待接種瘤塊的裸鼠腋下腫瘤長到50-100mm3後切除腫瘤，按不同方式給藥，具體如下：
市售製劑對照組：手術當天開始尾靜脈注射0.6mg/ml的taxol，劑量為6mg/kg，給藥一次；
治療組：先用2.5ml含有6mg紫杉醇的生理鹽水溶解100mg豬源性纖維蛋白原，形成分散均勻的含有紫杉醇(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液；再用2.5ml氯化鈣溶液溶解凝血酶，輕微攪拌震蕩至完全溶解，得到凝血酶溶液；之後在術腔內先滴入0.05ml凝血酶溶液，再迅速滴入0.05ml含有紫杉醇0.12mg(平均粒徑400nm)的豬源性纖維蛋白原溶液。最後縫合傷口。
市售製劑對照組在第30min、4h和24h以頸椎脫臼處死法處死動物，取動物新鮮的腫瘤組織和血漿，在-20℃中凍存。治療組在第3d、5d、10d、14d和25d以頸椎脫臼處死法處死動物，取動物新鮮的腫瘤和血漿，在-20℃中凍存。
之後採用液質聯用的方法測量分析血漿和腫瘤組織中的紫杉醇含量，繪製圖表，如圖6。
結果可見採用靜脈給taxol的市售製劑對照組腫瘤組織中的藥物含量在30min達到較高水平，但是很快在24h以內降到很低。市售製劑組的血漿中的紫杉醇濃度同樣也是在30min達到較高濃度，在24h內降 到很低，在液質方法定量限以下。而給本發明涉及的抗腫瘤劑的治療組，腫瘤中的紫杉醇含量能夠在25d的時候仍在比較高的水平，而血漿中的紫杉醇含量除了在第14天能夠檢測到，其餘時間點均在定量限以下。結果說明本發明提供的抗腫瘤劑能夠使局部藥物濃度在較長時間保持較高水平，並且只有很少量藥物進入血液循環，從而減少甚至避免了全身性毒副作用。
實施例8疏水性化療藥物納米顆粒的製備
1、溼法研磨：將紫杉醇和吐溫80按以下配比加入溼法研磨機中進行溼法研磨
紫杉醇10g
吐溫803g
去離子水100g
研磨45min後導出研磨液，得到紫杉醇納米顆粒混懸液原液備用。
2、冷凍乾燥：將紫杉醇納米顆粒混懸液原液用適量去離子水稀釋後，使紫杉醇含量為1.5mg/ml，再將稀釋後的紫杉醇納米顆粒混懸液加入安瓿瓶中，每瓶2ml，經冷凍乾燥後即製得疏水性化療藥物納米顆粒的凍幹製品。
臨用時用生理鹽水復溶上述步驟得到的納米顆粒凍幹製品即可得到疏水性化療藥物納米顆粒混懸液。
實施例9疏水性化療藥物納米顆粒的製備
1、溼法研磨：將多西他賽和吐溫80按以下配比加入溼法研磨機中進行溼法研磨
多西他賽10g
吐溫803g
去離子水100g
研磨45min後導出研磨液，得到紫杉醇納米顆粒混懸液原液備用。
2、冷凍乾燥：將多西他賽納米顆粒混懸液原液用適量去離子水稀釋後，使多西他賽含量為1.5mg/ml，再將稀釋後的多西他賽納米顆粒混懸液加入安瓿瓶中，每瓶2ml，經冷凍乾燥後即製得疏水性化療藥物納米顆粒的凍幹製品。
臨用時用生理鹽水復溶上述步驟得到的納米顆粒凍幹製品即可得到疏水性化療藥物納米顆粒混懸液。
實施例10抗腫瘤劑以含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的一種藥物製劑存在。該藥物製劑為4瓶裝：a.纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒，b.凝血酶，c.纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒的溶解液，d.凝血酶的溶解液。纖維蛋白原採用豬纖維蛋白原，凝血酶採用豬凝血酶，纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒的溶解液採用生理鹽水，凝血酶的溶解液採用氯化鈣溶液。
實施例11抗腫瘤劑以含有疏水性化療藥物納米顆粒和纖維蛋白膠的一種藥物製劑存在。該藥物製劑為4瓶裝：a.纖維蛋白原，b.凝血酶和疏水性化療藥物納米顆粒，c.纖維蛋白原和疏水性化療藥物納米顆粒的溶解液，d.凝血酶的溶解液。纖維蛋白原採用豬纖維蛋白原，凝血酶採用豬凝血酶，纖維蛋白原和 疏水性化療藥物納米顆粒的溶解液採用生理鹽水，凝血酶的溶解液採用氯化鈣溶液。