治療眼病的組合物和方法

2024-01-26 06:56:15

專利名稱：治療眼病的組合物和方法
交叉參考
本申請要求下列申請的權益2005年5月17日申請的美國臨時申請No.60/681,684；2005年5月17日申請的美國臨時申請No.60/681,722；2005年5月17日申請的美國臨時申請No.60/681,772，和2005年5月17申請的美國臨時申請No.60/681,723，每個申請的全文在此結合進來作為參考。
背景技術：
眼科疾病，乾眼病是眼疾患者的常見疾病。未解決的乾眼病症狀能夠導致角膜上皮細胞表面的腐蝕和磨損，提高了對傳染病的易感性。疾病的發展可能導致角膜潰瘍，甚至失明。
各種刺激物、損傷和醫療設備使人們的淚腺分泌物開始減少，導致保護和滋養眼表面的淚水處於缺乏水平。還有一些環境因素能夠引起和/或促使眼淚產生數量和質量的降低，所述因素例如為高緯度、乾旱和多風的氣候、空氣汙染、來自中央暖氣和中央空調的乾燥空氣，以及暴露於香菸中。甚至於計算機的廣泛使用也是一個起作用的因素，因為研究顯示其使注意力集中於計算機屏幕上的使用者的眨眼率明顯降低。一些眼護理方面的進步也促使最近乾眼病患者數量增加，其開始於採用隱形眼鏡，而目前流行LASIK法校正視力。使用隱形眼鏡導致眼鏡吸收了淚膜，引起眼瞼中結膜的生理疼痛。LASIK可能具有因眼損傷而引起的繼發副作用，因為在雷射折射手術過程中神經通常被切斷或融化，其會導致至少暫時的幾個月的乾眼病症狀。
疾病和一些身體不適可能使人易於患乾眼病，這些疾病包括過敏症、糖尿病、淚腺缺陷、狼瘡、帕金森病、金格倫綜合症、類風溼性關節炎、紅斑痤瘡和其它疾病。針對其它疾病的藥物治療可能導致乾眼病或使其惡化，包括利尿劑、抗抑鬱劑、抗過敏藥物、避孕藥丸、減充血劑和其它藥劑。
與年齡有關的變化也可能誘使乾眼病或使其惡化。更年期後的婦女經歷激素水平的變化，其會產生乾眼病或使其惡化，而且甲狀腺不平衡也可能導致類似的變化。最後，變老現象本身也會導致油脂分泌減少，從而導致乾眼病。
直至最近，治療性措施仍只限於用以提高眼的水分水平的緩解措施。這種幹預方法最通常是藉助於作為人工眼淚的滴眼液來實現。這些液體通常為溶液，每天滴一次或多次。對於更嚴重的乾眼病情況而言，結合了增稠劑或眼凝膠的人工淚液可以增加保留在眼部的膜層的量。或者，可以使用幾種夜用藥膏來治療。增稠溶液、凝膠和藥膏的局限性在於施用後會顯著損害視力，因此其很少被用於需要在覺醒、活動時刻大量施用的一般患者中。另一個緩解措施是建立暫時性淚道阻塞，或者甚至是通過外科手術關閉眼淚進入與眼相鄰的鼻腔的正常排淚途徑。
但是，這些措施都不能有效治療這種疾病。因此，希望研製出能夠有效治療乾眼病，優選以最小的副作用治療的藥劑。
發明概述 一方面，本發明提供治療由LFA-1介導的炎症性疾病的方法，該方法通過向患者施用有效量的單獨的LFA-1拮抗劑或者與其它治療藥劑相結合的LFA-1拮抗劑來進行。在本發明的一些實施方案中，本發明的LFA-1化合物所要治療的疾病為抗LFA-1抗體，Raptiva已顯示出治療效果或者已顯示出對於疾病組織中的炎症細胞具有作用的疾病。可以用本發明的化合物治療患有免疫介導的過敏性疾病，包括鼻炎的病人，用以減輕與LFA-1介導的免疫和/或過敏反應相關的炎症。在一些實施方案中，經口或鼻輸送噴霧溶液或分散粉末的局部給藥方式可以用於治療哮喘或其它由LFA-1介導的肺部炎症性疾病。在一些實施方案中，本發明的乳膏製劑可以用於將LFA-1拮抗劑局部施用於患有由LFA-1介導的皮膚病，例如溼疹和牛皮癬的皮膚上。在一些實施方案中，在動物試驗中通過口服途徑給藥LFA-1拮抗劑的口服製劑，已知該LFA-1拮抗劑口服製劑在系統水平下的吸收性很差，其可用於在胃腸道(GI)炎症疾病的治療中局部輸送LFA-1拮抗劑，所述胃腸道炎症疾病包括克羅恩氏病和過敏性腸症候群，或由LFA-1或其它白細胞整聯蛋白，包括VLA4和Mac-1介導的其它GI疾病。
在一些實施方案中，由LFA-1介導的疾病為眼疾病。在一些實施方案中，由LFA-1介導的炎症性疾病為乾眼病。尤其，本發明的方法可以用於治療乾眼綜合症。該綜合症包括由下述原因引起的症狀角膜結膜乾燥、金格倫綜合症、角膜受傷、與年齡相關的乾眼病、史蒂文斯-詹森綜合症、先天性無淚症、藥物副作用、感染、賴利-戴綜合症、結膜纖維化、眼壓、腺體和組織的損壞、眼部瘢痕類天皰瘡、瞼炎、自體免疫和其它免疫缺陷疾病、過敏、糖尿病、淚腺缺乏、狼瘡、帕金森病、金格倫綜合症、類風溼性關節炎、紅斑狼瘡，在乾燥空氣、空氣傳播的顆粒、煙和煙霧環境中的過度暴露，以及不能眨眼，以及其它疾病。許多患有乾眼病的病人還可能有潛在的自體免疫疾病，金格倫綜合症。目前公認的確定病人的診斷標準包括臨床徵兆和口乾症狀。本發明化合物的漱口液或錠劑可以用於治療該症狀。將皮膚乳膏施用於眼瞼外表面就會使LFA-1拮抗劑通過眼瞼到達眼瞼內襯和中間的結膜組織和副淚腺，人們就是希望將這種皮膚乳膏用於治療由LFA-1介導的眼瞼和眼的炎症，尤其是治療乾眼病。
本發明的另一個方面提供藥物組合物，其包括在治療由LFA-1介導的炎症性疾病的方法中施用的LFA-1拮抗劑。在一些實施方案中，由LFA-1介導的炎症性疾病為眼疾病，為了治療該疾病而提供包括LFA-1拮抗劑的藥物組合物。在一些實施方案中，由LFA-1介導的炎症性疾病為乾眼病，為了治療該疾病而提供包括LFA-1拮抗劑的藥物組合物。還提供，該組合物可以進一步包括另一種治療藥劑，其在同一製劑中或者分別地共施用。在一些實施方案中，藥物組合物經口服、注射、鼻內、吸入、直腸、局部、滴至眼表面或經皮膚給藥。
在另一個方面中，本發明提供組合物製劑，其在治療由LFA-1.介導的炎症性疾病的方法中給藥。在一些實施方案中，提供組合物的胃滯留製劑，用於在治療由LFA-1介導的炎症性疾病中給藥。在一些實施方案中，提供組合物的胃滯留製劑，用於在眼疾的治療中給藥，該眼疾為由LFA-1介導的炎症性疾病。在一些實施方案中，提供組合物的眼用製劑，用於在眼疾的治療中給藥，該眼疾為由LFA-1介導的炎症性疾病。在一些實施方案中，提供眼用組合物製劑，用於在治療由LFA-1介導的炎症性疾病中給藥，其為溶液、乳膏、粉末、懸浮液、噴霧、凝膠、固體，等等。本發明的一些實施方案還提供了受控的釋放劑型。在本發明的一些實施方案中，將本發明的化合物製成前藥。
在另一個方面中，提供了用在本發明的方法中的化合物。可用於本發明的方法中的化合物包括抗體、抗體片段、多肽、肽、聚合物和有機小分子。在本發明的方法的另一個實施方案中，將Raptiva用在治療乾眼病的眼用製劑中。
本發明的一個方面將診斷過程與用LFA-1拮抗劑進行治療的方法相結合。在一個實施方案中，對金格倫綜合症進行診斷試驗，並在對疾病進行診斷之後，向病人施用本文中所述的LFA-1拮抗劑。在另一個實施方案中，進行乾眼病診斷試驗，並在對乾眼病進行診斷之後，向病人施用本文中所述的LFA-1拮抗劑。
將本申請中提供化合物施用於患有由LFA-1介導的炎症性疾病的患者，用以提高淚水或粘液素的產生。優選，所治療的炎症性疾病為乾眼病。
在另一個方面中，提供一種鑑定LFA-1抑制劑與ICAM-I之間的相互作用的方法。在一些實施方案中，經鑑定該抑制劑與ICAM-I針對在LFA-1αL亞基內的LFA-1上的結合進行直接競爭。在一些實施方案中，該方法採用競爭性結合試驗來確定LFA-1拮抗劑ICAM-I之間的相互作用。在一些實施方案中使用標記探針分子，已知該分子在金屬離子依賴型黏著位上結合，所述黏著位為LFA-1ICAM-1在LFA-1αL亞基上的相互作用位置。
在另一個方面中，描述了一種對用於人類疾病的可用藥物試劑進行鑑定的方法，該方法使用siRNA(小的幹擾RNA序列)的細胞生長抑制特性曲線，據此在一組培養的細胞系中鑑定出具有類似的細胞生長抑制特性曲線的化合物，其中所述的siRNA指向參與細胞生長和人類疾病的細胞靶標。本發明的方法還可以用於鑑定可用的LFA-1抑制劑、B-細胞受體BR3、Grb2(在信號級聯反應中位於生長因子受體的下遊的蛋白)和其他細胞內和細胞外的蛋白靶標。在本發明的另一個實施方案中，經鑑定與siRNA抑制細胞生長的活性特性曲線相反的化合物可以作為細胞生長的刺激劑，該刺激劑可用於治療細胞生長減緩的疾病和病症。提高的細胞生長率可以用於傷口癒合和其它臨床情況下。在本發明的另一個實施方案中，該方法使用siRNA細胞活性數據採用下述方式進行靶向或者選擇靶標通過對公用和/或私人化合物細胞活性資料庫進行搜索來找尋對化合物或化合物集合產生響應的類似的細胞活性特性曲線，用以作為對可用於鑑定人類藥物的化合物進行鑑定的方法。
參考文獻的結合 本說明書中提及的所有公開物和專利申請都據此結合進來作為參考，每個單獨的公開物或專利申請都按照具體和單獨指定的程度結合進來作為參考。
附圖簡述 所附權利要求對本發明的新穎性進行了特殊闡釋。參考下列闡述了說明性實施方案的詳細描述可以對本發明的特徵和優越性具有更好的理解，所述詳細描述中採用本發明的原則和下述附圖

圖1描述了由LFA-1ICAM-1相互作用產生的滾動、白細胞黏著和穿過內皮的遷移。
圖2描述了LFA-1ICAM-1相互作用的抗原活化。
圖3描述了LFA-1ICAM-1相互作用的共刺激功能。
圖4描述了用於鑑定方法中的小分子拮抗劑。
圖5為表1，其顯示了LFA-1的小分子拮抗劑的陽離子依賴性。
圖6描述了化合物5交聯的LFA-1的SDS-PAGE分析。
圖7描述了化合物2B和ICAM-I-Ig與293細胞的結合，所述293細胞表達野生型LFA-1或缺失結構域I的LFA-1。
圖8描述了化合物2A、3、A-286982和sICAM-1在LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA中的拮抗劑競爭作用。
圖9描述了LFA-1/ICAM-1與LFA-1/小分子ELISA進行拮抗劑競爭作用而得到的IC50值的相互關係。
圖10描述了拮抗劑對結合在LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA上的配體的作用效果。
圖11描述了sICAM-1的Schild回歸和化合物3的拮抗作用。
圖12描述了用於治療人類癌症和炎症的有效細胞生長抑制劑的發現流程圖。
發明詳述 I.白整聯蛋白與黏著受體之間的相互作用生物學和疾病 本發明的第一方面為治療免疫和其它病症的炎症部分的方法。尤其，本申請中描述的方法可以用於治療白細胞介導的炎症。該部分用於在所選疾病中引發和促進炎症，所述疾病例如為銀屑病、溼疹、哮喘、皮炎、風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡(SLE)、多發性硬化、與炎症性腸炎有關的響應、Raynaud綜合症、金格倫病、幼年發病的糖尿病、糖尿病、肉芽腫病、CNS炎性病症、多器官損傷疾病、所有類型的移植，包括移植物對抗宿主或宿主對抗移植物的疾病、HIV和鼻病毒感染和動脈粥樣硬化，以及其它疾病。
本發明的優選實施方案用於治療眼病。尤其，本發明的方法用於治療乾眼綜合症。該綜合症包括由下述原因引起的症狀乾燥性角膜結膜炎、金格倫綜合症、角膜損傷、與年齡有關的乾眼症、史蒂文斯-詹森綜合症、先天性無淚症、藥物副作用、感染、賴利-戴綜合症、結膜纖維化、眼壓、腺體和組織破壞、眼部瘢痕類天皰瘡、目瘍、自體免疫和其它免疫缺陷病症、過敏、糖尿病、淚腺缺陷、狼瘡、帕金森病、金格倫綜合症、風溼性關節炎、環境暴露暴露於過量的乾燥空氣、空氣傳播的顆粒、煙和物和不能眨眼，以及其它疾病。
並非意圖限制作用機理，本發明的方法包括通過抑制LFA-1和ICAM-I之間的相互作用來抑制與炎症有關的疾病的開始和發展。LFA-1和ICAM-I為帶有胞外受體域的分子，其參與淋巴細胞/白細胞的遷移和增殖過程，導致炎症級聯反應。在優選實施方案中，這種方法提供體外和體內的抗-炎作用，例如如下面所作的詳細描述，而且其可以用於治療炎症介導的疾病，尤其是乾眼病。
人類血液中含有白血球(白細胞)，其進一步分類為嗜中性粒細胞、淋巴細胞(分為B-和T-亞型)、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜鹼性粒細胞。這些類白細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞和淋巴細胞中的若干細胞參與炎性病症。LFA-1是表達於大部分白細胞上的白整聯蛋白組中的一種，而且其被認為是與許多作為配體的ICAM發生相互作用的淋巴整聯蛋白。幹擾這些相互作用，並因此幹擾免疫/炎症響應就可以使炎症，尤其是眼的炎症減弱。
例如，ICAM-1(CD54)是免疫球蛋白超家族中的ICAM家族黏著受體(ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3、ICAM-4)中的一員，而且其表達於被激活的白細胞、皮膚成纖維細胞和內皮細胞上。參見，Krensky，A.M.；Sanchez-Madrid，F.；Robbins，E.；Nagy，J.A.；Springer，T.A.Burakoff，SJ.「The functional significance，distribution，and structure ofLFA-1，LFA-2，and LFA-3cell surface antigens associated with CTL-target interactions.」1983 J.Immunol.131，611-616。其正常情況下在沿著脈管細胞的內皮細胞上進行表達，而且在免疫/炎症開始時經暴露於細胞因子，例如IL-I、LPS和TNF下而得到正調節。
近十年來所作的研究有助於說明參與免疫系統分子運動和活化作用的分子事件，其集中級聯反應中的細胞-細胞間引發性相互作用。參見Springer，T.A.「Adhesion receptors of the immune system.」Nature，1990，346，425-434。細胞間黏著分子(ICAMs)和白整聯蛋白之間的相互作用在免疫系統的功能中起到一定作用。人們相信免疫過程，例如抗原呈遞、T-細胞介導的細胞毒和白細胞跨內皮遷移(血細胞滲出)需要由ICAMs與白整聯蛋白相互作用而介導的細胞黏著。參見Kishimoto，T.K.；Rothlein；R.R.「Integrins，ICAMs，and selectinsrole and regulation of adhesion molecules in neutrophil recruitment toinflammatory sites.」AdV.Pharmacol.1994，25，117-138和Diamond，M.；Springer，T.A.「The dynamic regulation of integrin adhesiveness.」Current Biology，1994，4，506-532。
已經顯示，ICAM-I和LFA-1(還稱作αLβ2和CDlla/CD18)的相互作用參與黏著過程，如圖1所示，白細胞跨內皮進行遷移、遷移至傷口位置，淋巴細胞在激活的靶標位置增殖。例如，目前認為在白細胞跨內皮遷移之前，炎症反應成分，細胞因子/趨化因子的存在將在白細胞上組成性表達的整聯蛋白激活。血管內皮細胞也響應該細胞因子/趨化因子的存在而正調節ICAM-I。當滾動的白細胞接近被激活的內皮細胞時，其前進首先被這些正調節的ICAM-I受體延緩。之後被表達在血管內皮細胞表面上的LFA-1和ICAM-I之間的配體/受體相互作用延緩，其阻止淋巴細胞的進一步滾動。然後淋巴細胞變平，從而發生滲透作用(transvasation)。該過程對於淋巴細胞穿過血管內皮的遷移以及淋巴細胞由外部血液行至淋巴結而言都是很重要的。
LFA-1在產生和維持免疫突觸中具有作用，如圖2所示，其可以被定義為T細胞與抗原呈遞細胞(APCs)的相互作用表面的物理結構。LFA-1使T-細胞與APC的作用穩定化，從而激活T細胞。如圖3所示，LFA-1與ICAM-I的相互作用還表現為向停滯的T細胞提供共-刺激信號。CD4+T-細胞的增殖和細胞因子的合成由作為炎症反應一部分的該相互作用來介導。
假設ICAM-I與LFA-1的相互作用在免疫/炎性反應中具有作用，則希望對這些相互作用進行調節，以獲得希望的治療結果(例如，在過度活化的炎症反應情況下對該相互作用進行抑制)。而且，由於LFA-1具有多個屬於ICAM族(ICAM-I、ICAM-2和ICAM-3)並涉及多個信號通道的配體對(ligand partners)，因此在一些實施方案中，希望選擇性調節這些相互作用。還指出可以藉助指向ICAMs和白整聯蛋白中任何一個成分的試劑來實現對ICAMs和白整聯蛋白之間的相互作用的拮抗作用。
本文中描述的方法和組合物可以調節一種或多種本文中描述的通道中的成分。除了抑制LFA-1和ICAM-I之間的相互作用之外，本發明的方法和組合物還可以幹預發炎過程中的早期和晚期部分。例如，可以在粘連和跨內皮遷移之前，通過本文中描述的方法和組合物來調節對ICAM-I或LFA-1的內皮細胞或白細胞的正調節(活化)。本發明可以用於調節在白細胞通行過程中激活ICAM-I和LFA-1的細胞因子或趨化因子的表達、調節細胞因子或趨化因子的運輸，防止停滯白細胞的滲透作用、調節參與白細胞在受傷或炎症部位進行增殖的其它機理的信號傳輸等。
II.治療方法 如本文中所用的，術語「患者」包括動物，尤其是人以及其它哺乳動物。該方法通常包括施用一種或多種用於治療一種或多種疾病的藥物。組合試劑可以用於治療一種疾病或多種疾病，或者用於調節組合中的一種或多種試劑的副作用。本文中描述的化合物可以與其它乾眼症治療試劑結合使用。而且，本發明的化合物還可以與引起作為副作用的乾眼症的藥物組合使用。
如本文中所用的，術語「治療」及其等效措辭包括實現治療性有益效果和/或預防性有益效果。治療性有益效果意指根除或改善被治療的主要病症。
而且，通過根除或改善一種或多種與主要病症有關的生理症狀來實現治療性有益效果，從而在患者身上觀察到改善情況，儘管患者可能仍舊經受主要病症的折磨。對於預防性有益效果而言，即使還未給出疾病的診斷結論，也可以將組合物施用於患者，但有產生特殊疾病的危險，或者施用於記錄具有一種或多種疾病生理症狀的患者。可以將組合物施用於患者，以預防生理症狀或主要病症的發展。
在一些實施方案中，治療試劑以足以產生治療效果的量存在，即該量足以除去平均至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、大於90％或基本上除去疾病或其至少一個主要症狀。優選該治療作用為針對炎症的治療作用。
在一些實施方案中，治療試劑以足以產生治療效果的量存在，即該量減少平均至少約5、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、大於90％的乾眼症症狀或基本上除去乾眼症症狀。
在一些實施方案中，治療試劑的有效量為日劑量1×10-11、1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1×101、1×102g。
可以以任何適當的方式施用治療試劑。在一些實施方案中，通過口服給藥方式施用治療試劑。在一些實施方案中，通過皮膚施用方式施用治療試劑。在一些實施方案中，通過注射方式施用治療試劑。在一些實施方案中，局部施用治療試劑。如果將組合試劑作為獨立的組合物給藥，則其可以以相同途徑或不同途徑給藥。如果組合試劑在單一組合物中給藥，則其可以以任何適當的途徑給藥。在一些實施方案中，將組合試劑作為單一組合物經口服給藥方式給藥。在一些實施方案中，將組合試劑作為單一組合物以皮膚給藥方式施用。在一些實施方案中，將組合試劑作為單一組合物經注射方式給藥。在一些實施方案中，將組合試劑作為單一組合物局部給藥。
本文中描述的本發明方法為一種將LFA-1拮抗劑施用於患者以治療其乾眼症的方法。尤其，該拮抗劑可以調節由白細胞介導的炎症。本發明的優選實施方案通過施用LFA-1拮抗劑來調節與眼部炎症有關的炎症，從而治療患者。本發明的另一個優選實施方案是通過施用LFA-1拮抗劑來治療患有與乾眼綜合症有關的炎症的患者。本發明的一個實施方案治療具有因過敏引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因糖尿病引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因淚腺缺陷引起的乾眼病症狀的患者。本發明的實施方案治療具有由狼瘡引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有由帕金森病引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有由乾燥病引起的乾眼病(Sjoren’s)症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有由類風溼性關節炎引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有由紅斑狼瘡引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有由視力校正的LASIK治療引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因使用隱形眼鏡而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因暴露於乾燥氣候而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因暴露於空氣汙染而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因多風氣候而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因暴露於香菸而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因乾燥性角膜結膜炎而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因角膜損傷而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因結膜纖維化而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有與年齡-有關的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因史蒂文斯-詹森綜合症而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因先天性無淚症而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因病人服用的其它藥物的副作用而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因感染而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因賴利-戴綜合症而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因眼壓，包括因使用計算機而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因腺體和組織缺陷而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因眼瘢痕類天皰瘡而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因目瘍而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因自體免疫和其它免疫缺陷病症引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案治療具有因不能眨眼而引起的乾眼病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有銀屑病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有溼疹症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有狼瘡症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有Reynaud綜合症症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有肉芽腫病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有CNS炎性病症症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有多個器官疾病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有過敏性鼻炎症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有肉芽腫病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有動脈粥樣硬化症症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有移植物對抗宿主的疾病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有與移植有關的炎症反應症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有炎症性腸病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有幼年發病的糖尿病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有糖尿病症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有多發性硬化症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有哮喘症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有皮炎症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有系統性紅斑狼瘡症狀的患者。本發明的一個實施方案用該方法的LFA-1拮抗劑治療具有HIV和鼻病毒感染症狀的患者。
在本發明的一些實施方案中，使用診斷步驟來確定需要使用本發明的方法進行治療的患者。使用螢光素染色的角膜來診斷乾眼病症狀。使用孟加拉玫瑰紅染色的角膜來診斷乾眼病症狀。使用眼淚中斷時間(BUT)來診斷乾眼病症狀。使用Schirmer麻醉試驗診斷乾眼病症狀。使用Schirmer試驗分析法診斷乾眼病症狀。使用壓跡細胞學來診斷乾眼病症狀。使用主觀乾眼症狀來診斷乾眼病症狀。使用淚流分析法診斷乾眼病症狀。使用免疫組織化學方法，包括但不限於人類白細胞抗原II(HLA-DR)來診斷乾眼病症狀。使用抗核抗體試驗(ANA)或螢光抗核抗體試驗(FANA)診斷乾眼病症狀。使用眼部蒸發來診斷乾眼病症狀。使用紅外瞼板圖(meibography)來診斷乾眼病症狀。使用連續掃描共焦顯微術(TSCM)診斷乾眼病症狀。這是可用於診斷乾眼病症狀的示例方法的目錄，其絕對不是用來進行限制的。
本發明方法的拮抗劑可以為抗體、抗體片斷、肽或小分子。在優選的實施方案中，所用的LFA-1拮抗劑為非抗體的肽。本發明的拮抗劑為治療試劑。
針對LFA-1拮抗劑的許多治療指示都要求慢性療法；因此，LFA-1/ICAM-1相互作用的小分子抑制劑是本發明的一組優選實施方案，因為其具有口服給藥以及降低材料成本的潛力。
進一步優選的實施方案為使用治療試劑治療乾眼病的方法，所述治療試劑適於製劑和作為眼部療法來給藥。
此處和下文中描述了本發明的另一個方面，一種對ICAM-I和拮抗劑的結合進行比較的方法，其中所述拮抗劑可用於確定抗體、抗體片斷、肽和作為LFA-1ICAM-I相互作用的拮抗劑的小分子。參見Gadek等，2002。就小分子拮抗劑來描述該方法。但是，不應該將其解釋為以排除其用於確定較大分子類型的LFA-1抑制劑的任何方式來限制該方法，其中所述LFA-1抑制劑例如為抗體、抗體片段或肽。
該方法包括選擇一個或多個下列步驟作為確定拮抗劑的方法的一部分，其中所述拮抗劑作為LFA-1的直接競爭抑制劑(a)使用全長野生型LFA-1進行競爭試驗，對有潛力的拮抗試劑與sICAM-1(LFA-1的天然配體和競爭性LFA-1/ICAM-1抑制劑的胞外域)和A-286982(已知結合在結構域I(插入)變構位(IDAS)上的變構LFA-1/ICAM-1抑制劑)的結合作用進行比較。參見Liu，G.；Huth，J.R.；Olejniczak，E.T.；Mendoza，R.；DeVries，P.；Leitza，S.；Reilly；E.B.，Okasinski；G.F.；Fesik，S.W.和von Geldern，T.W.2001.「Novel p-arylthio cinnamidesas antagonists of leukocyte function-associated antigen-1/intracellularadhesion molecule-1 interaction.2.Mechanism of inhibition andstructure-based improvement of pharmaceutical properties.」J.Med.Cherα，44，1202-1210))，(b)對潛在的拮抗試劑和ICAM-I與LFA-1突變體的結合進行研究，和(c)化學交聯研究。之前已經將靶向於此的ICAM-I結合位局限在包括位於LFA-1α亞基內結構域I內並依賴於金屬離子的黏著位點(MIDAS)基序上。參見Shimaoka，M.，Xiao，T.，Liu，J.-H.，Yang，Y.，Dong，Y.，Jun，C-D.，McCormack，A.Zhang，R.，Joachimiak，A.，Takagi，J.，Wang，J.-H.和Springer，T.A.2003「Structures of the alpha L I domain and its complex with ICAM-I reveala shape-shifting pathway for integrin regulation」，Cell 2003，99-111。可以使用該方法的一個或多個步驟來確定具有下述作用方式的拮抗劑通過直接競爭一個位於LFA-1上的普通高親合力結合位而抑制ICAM-I的結合。
A.作為治療試劑的抗體 本領域已知若干種適當的抗體。用指向其中之一或兩個這些分子的抗體阻斷CAM例如ICAM-I，或白整聯蛋白例如LFA-1，則可以抑制炎症反應。之前的研究對於抗-CD11a Mab對體外許多T-細胞-依賴型免疫功能的影響和對體內許多免疫響應的影響作了考察。在體外，抗-CD11a Mab抑制T-細胞的活化(參見Kuypers T.W.，Roos D.1989「Leukocyte membrane adhesion proteins LFA-1，CR3 and p150，95areview of functional and regulatory aspects」Res.Immunol.，140461-465；Fischer A，Durandy A，Sterkers G，Griscelli C.1986，「Role of the LFA-1 molecule in cellular interactions required forantibody production in humans」，J.Immunol.，136，3198；target cell lysisby cytotoxic T-lymphocytes(Rrensky等，如前所述)，formation ofimmune conjugates(Sanders VM，Snyder JM，Uhr JW，Vitetta ES.，「Characterization of the physical interaction between antigen-specific Band T cells」.J.Immunol.，1372395(1986)；Mentzer SJ，GromkoWskiSH，Krensky AM，Burakoff SJ，Martz E.1985，「LFA-1 membranemolecule in the regulation of homptypic adhesions of human Blymphocytesn」，J.Immunol.，1359)，和T-細胞對血管內皮的黏著(LoSK，Van S eventer GA，Levin SM，Wright SD.，Two leukocyte receptors(CD1 1a/CD18 and CD1 1b/CD18) mediate transient adhesion toendothelium by binding to different ligands.，J.Immunol.，1433325(1989))。兩種抗-CDlla MAbs、HI111和G43-25B可購自Pharmingen/BDBiosciences。此外，包括F8.8、CBR LFA 1/9、BL5、May.035、TS1/11、TS1/12、TS1/22、TS2/14、25-3-1、MHM2和依法麗珠單抗(efalizumab)的研究工作評價了這些抗體佔據的位於LFA-1上的結合位的範圍。參見Lu，C；Shimaoka，M.；Salas，A.；Springer，T.A.2004，「The BindingSites for Competitive Antagonistic，Allosteric Antagonistic，andAgonistic Antibodies to the I Domain of integrin LFA-1」，J.Immun.1733972-3978，及其中的參考文獻。
下述觀察結果是試驗這些分子的Mabs對人體內移植排斥現象的預防作用的基礎LFA-1ICAM-1的相互作用是優化T-細胞在體內的功能所必需的，而且抗-CD1Ia Mabs誘發對於蛋白質抗原的耐受性(Beniamin RJ，Qin SX，Wise MP，Cobbold SP，Waldmann H.1988，「Mechanisms of monoclonal antibody-facilitated tolerance inductionapossible role for the CD4(L3T4)and CD1Ia(LFA-1)molecules inself-non-self discriminaTIon」，Eur，J.Immunol.，181079)，並且延長腫瘤移植物在小鼠體內的存活時間(Heagy W，Walterbangh C，MartzE.1984，「Potent ability of anti-LFA-1 monoclonal antibody to prolongallograft survival」，Transplantation，37520-523)。還在靈長類動物動物體內作了試驗。例如，基於在猴子體內所作的試驗，人們得出結論指向ICAM-I的Mab可以預防或逆轉腎移植排斥作用(Cosimi等，「Immunosuppression of Cynomolgus Recipients of Renal Allografts byR6.5，a Monoclonal Antibody to Intercellular Adhesion Molecule-1，」Springer等(eds.)，Leukocyte Adhesion Molecules New YorkSpringer，(1988)，274頁；Cosimi等，J.Immunology，1444604-4612(1990))。向獼猴體內施用抗-CD11a Mab延長了皮膚同種異體移植存物活時間。參見Berlin等，Transplantation，53840-849(1992)。
B.小分子 對肽用於降低LFA-1與ICAM-I之間的相互作用的用途進行了研究。美國專利No.5,747,035中對不含有IgG的Fc區域的多肽進行了描述，該多肽可以用於治療LFA-1介導的病症，尤其是乾眼症。美國專利No.5,843,885中描述了使用二肽來降低LFA-1和ICAM-I的相互作用，其中所述二肽中第一個是ICAM-I調節劑，第二是具有從LFA-1獲得的序列的阻斷肽。美國專利No.6,630,447中對環肽進行了描述，所述環肽作為LFA-1ICAM-I相互作用的抑制劑。
小分子拮抗劑包括結合在LFA-1 CD11結構域上的抑制素。參見Kallen，J.，Welzenbach，K.，Ramage，P.Geyl，D.Kriwacki，R.，Legge，G.，Cottens，S.，Weitz-Schmidt，G.，和Hommel，U.1999.「Structural basis for LFA-1 inhibition upon lovastatin binding to theCD1 Ia I-domain」，J.MoI.Biol.，2921-9；和Weitz-Schmidt，G.，Welzenbach，K.，Brinkmann，V.，Kamata，T.，Kallen，J.，Bruns，C，Cottens，S.，Takada，Y.和Hommel，U.2001.Statins selectively inhibitleukocyte function antigen-1 by binding to a novel regulatory integrinsite，Nature Med.，7687-692；和Frenette，P.S.2001.「Locking a leukocyteintegrin with statins」，N.Engl.J.Med.，3451419-1421。衍生自美維諾林(mevinolin)/美伐他汀(compactin)基序的分子也顯示抗LFA-1活性。參見Welzenbach，K.，Hommel，U.和Weitz-Schmidt，G.2002.「Small molecule inhibitors induce conformational changes in the Idomain and the I-like domain of Lymphocyte Function-AssociatedAntigen-1」，J.Biol.Chem.，27710590-10598，和美國專利No.6,630,492。
基於乙內醯脲的抑制劑家族也可以用作拮抗劑。參見Kelly，T.A.，Jeanfavre，D.D.，McNeil，D.W.，Woska，J.R.Jr.，Reilly，P.L.，Mainolfi，E.A.，Kishimoto，K.M.，Nabozny，G.H.，Zinter，R.，Bormann，B.-J.和Rothlein，R.1999.「Cutting edgea mall moleculeantagonist of LFA-1-mediated cell adhesion」，J.Immunol.，1635173-5177。相信這些化合物是LFA-1的變構抑制劑。
新的對芳基硫代肉桂醯胺族可以用作LFA-1拮抗劑。參見Liu，G.；Link，J.T.；Pei，Z.；Reilly，E.B.；Nguyen，B.；Marsh，K.C.；Okasins ki，G.F.；von Geldern，T.W.；Ormes，M.；Fowler，K.；Gallatin，M.2000.「Discovery of novel p-arylthio cinnamides as antagonists ofleukocyte function-associated antigen-1/intracellular adhesionmolecule-1 interaction.1.Identification of an additional binding pocketbased on an anilino diaryl sulfide lead.」J.Med.Chem.43，4015-4030。
其它小分子抑制劑族在出版物(參見Gadek，T.R.，Burdick，D.J.，McDowell，R.S.，Stanley，M.S.，Marsters，J.C.Jr.，Paris，K.J.，Oare，D.A.，Reynolds，M.E.，Ladner，C，Zioncheck，K.A.，Lee，W.P.，Gribling，P.，Dennis，M.S.，Skelton，N.J.，Tumas，D.B.，Clark，K.R.，Keating，S.M.，Beresini，M.H.，Tilley，J.W.，Presta，L.G.，和Bodary，S.C.2002.「Generation of an LFA-lantagonist by thetransfer of the ICAM-I immunoregulatory epitope to a small molecule」，Science，2951086-1089和在線補充資料)和專利，包括美國專利No.6,872,735、美國專利No.6,667,318、美國專利No.6803384、美國專利No.6,515,124、美國專利No.6331640，和美國申請，包括U.S.20020119994、U.S.20040058968、U.S.20050080119、WO99/49856、WO00/21920、WO01/58853、WO02/59114、WO05/044817，以及其它文獻中進行了公開。所有引用文獻的全部內容結合進來作為參考。
在一些實施方案中，本文中描述的化合物與麗眼達(restasis)(環孢黴素A)結合使用。本發明的化合物還可以用於提高T粘蛋白的產生和/或淚液的產生。因此，本發明的化合物除了降低炎症外還可以通過提高補償一部分淚膜的粘蛋白的產生來提供附加的緩解。
已知LFA-1與ICAMs的相互作用參與各種自體免疫和炎症疾病，尤其是那些涉及淋巴細胞(T-或B-細胞)、樹突狀單環細胞的疾病，其中所述單環細胞將LFA-1表達在其表面上，它們是疾病的一部分炎症成分。LFA-1拮抗劑可以特別用於治療這些疾病，因為治療靶標在疾病組織內的表達被限制在免疫系統的浸潤細胞內。LFA-1可以通過免疫系統的細胞而將炎症信號的黏著、遷移、增殖和釋放阻斷在周邊組織內。對疾病組織內的炎症細胞具有效力的抗-LFA-1抗體，Raptiva可以用於治療乾眼症。
許多患有乾眼症的病人可能也患有潛在的自體免疫疾病，金格倫綜合症。目前認可的診斷標準包括臨床病症和口乾症狀。本發明的化合物可以以漱口製劑或錠劑形式用於治療該症狀。結合了本發明化合物並混於固體或蠟狀物質中的錠劑可以刺激唾液分泌，同時以持續釋放的形式釋放出化合物。
可以用本發明的化合物治療患有免疫介導的過敏疾病，包括鼻炎的病人。例如，可將LFA-1拮抗劑局部輸送至鼻、鼻管和/或鼻腔，以減少與免疫和/或過敏響應有關的炎症。
當對本發明化合物進行局部施用，經口或鼻輸送作為霧狀溶液或分散粉末的化合物時，其可以用於治療哮喘或其它LFA-1介導的肺炎疾病。
本發明化合物的乳膏製劑可以用於將LFA-1拮抗劑局部輸送至患有由LFA-1介導的皮膚病的皮膚處，所述皮膚病例如為溼疹和銀屑病。可用於該問題的化合物包括LFA-1拮抗劑及其前藥，所述前-藥在用於炎性皮膚時轉化為活性藥物。將皮膚乳膏施用於眼瞼外表面從而將LFA-1拮抗劑輸送過眼瞼而到達眼瞼內襯和中間的結膜組織以及附屬的淚腺處，人們希望使用這種乳膏來治療LFA-1介導的眼瞼和眼部炎症，尤其是治療乾眼症。
已知在動物研究中，LFA-1拮抗劑的口服製劑在系統水平下經口服途徑施用時吸收性很差，則該製劑可以用以局部輸送LFA-1拮抗劑，以用於治療胃腸(GI)道的炎症疾病，包括克羅恩氏病和腸綜合症，或者用於治療由LFA-1或其它白細胞整聯蛋白包括VLA4和Mac-1介導的其它GI疾病。
II.用於該方法中的化合物 A.定義 如本文中所用的，術語「脂肪族的」包括飽和和不飽和的、直鏈(非支鏈)或支鏈脂肪族烴，其任選被一個或多個官能團取代。本領域普通技術人員應該理解，本文中的「脂肪族的」意圖包括但不限於烷基、鏈烯基、炔基部分。因此，如本文中所用的，術語「烷基」包括直鏈和支鏈烷基。類似的規則適用於其他同類的術語，例如「鏈烯基」、「炔基」等。
此外，如本文中所用的，術語「烷基」、「鏈烯基」、「炔基」等包括取代和未取代的基團。如本文中所用的，在某些實施方案中，「低級烷基」用於指示具有約1-6個碳原子的那些烷基(取代的、未取代的、支鏈的或非支鏈的)。
在某些實施方案中，本發明中所用的烷基、鏈烯基和炔基含有約1-20個脂肪族碳原子。在另外的某些實施方案中，本發明中所用的烷基、鏈烯基和炔基含有約1-10個脂肪族碳原子。在另外的其它實施方案中，本發明中所用的烷基、鏈烯基和炔基含有約1-8個碳原子。在進一步的其它實施方案中，本發明中所用的烷基、鏈烯基和炔基含有約1-6個碳原子。在另外的其它實施方案中，本發明中所用的烷基、鏈烯基和炔基含有約1-4個碳原子。因此，說明性脂肪族基團包括但不限於，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、異戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等，其同樣可以含有一個或多個取代基。
鏈烯基包括但不限於，例如乙烯基、丙烯基、丁烯基等。代表性的炔基包括但不限於乙炔基、2-丙炔基等。
如本文中所用的，術語「低級亞烷基」指與兩個其它基團相連，即在兩端分別與另一個基團鍵合的烴鏈，例如亞甲基、亞乙基、亞丁基等。這種取代基優選具有1-10個碳原子，更優選具有1-5個碳原子。這種基團可以被取代，優選被氨基、乙醯基氨基(通過氮原子鍵合的低級烷基羰基)取代，或者為環狀低級烷基。後者意指飽和烴環，優選總計具有3-10個亞甲基(包括連接的碳)，更優選3-6個亞甲基。
如本文中所用的，術語「脂環的」指結合了脂肪族和環族化合物的性質的化合物，其包括但不限於單環或多環脂肪族烴和橋接環烷基化合物，其任選被一個或多個官能團取代。
本領域普通技術人員應該理解，本文中的「脂環的」意圖包括但不限於環烷基、環鏈烯基和環炔基部分，其任選被一個或多個官能團取代。
因此，說明性的脂環族基團包括但不限於，例如環丙基、-CH2-環丙基、環丁基、-CH2-環丁基、環戊基、-CH2-環戊基、環己基、-CH2-環己基、環己烯基乙基、環己烷基乙基、降莰烷基部分等，其同樣可以含有一個或多個取代基。
如本文中所用的，術語「烷氧基」或「烷基氧基」指貫穿氧原子的飽和或不飽和母體分子部分。在某些實施方案中，烷基含有約1-20個脂肪族碳原子。在另外的某些實施方案中，烷基含有約1-10個脂肪族碳原子。在另外的其它實施方案中，本發明中所用的烷基含有約1-8個脂肪族碳原子。在進一步的其它實施方案中，烷基含有約1-6個脂肪族碳原子。在進一步的其它實施方案中，烷基含有約1-4個脂肪族碳原子。
烷氧基的例子包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基、正己氧基等。
如本文中所用的，術語「低級烷氧基」指通過氧與另一個基團連接的如上定義的低級烷基(即，烷基醚)，同樣如上面的定義該烷基可以為支鏈或非支鏈的。
如本文中所用的，術語「硫烷基」指通過硫原子與母體分子部分相連的飽和或不飽和(即，S-鏈烯基和S-炔基)基團。在某些實施方案中，烷基含有約1-20個脂肪族碳原子。在另外的某些實施方案中，烷基含有約1-10個脂肪族碳原子。在另外的其它實施方案中，本發明中所用的烷基含有約1-8個脂肪族碳原子。在進一步的其它實施方案中，烷基含有約1-6個脂肪族碳原子。在另外的其它實施方案中，烷基含有約1-4個脂肪族碳原子。硫烷基的例子包括但不限於甲硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、正丁硫基等。
如本文中所用的，術語「低級烷硫基「指通過二價硫原子鍵合的低級烷基，例如甲基巰基或異丙基巰基。低級亞烷基硫基意指在每個端基處鍵合的這種基團。
如本文中所定義的，術語「烷基氨基」指具有-NHR′結構的基團，其中R′為烷基。術語「氨基烷基」指具有NH2R′-結構的基團，其中R′如此處的定義。在某些實施方案中，烷基含有約1-20個脂肪族碳原子。在另外的某些實施方案中，烷基含有約1-10個脂肪族碳原子。在另外的其它實施方案中，本發明中所用的烷基含有約1-8個脂肪族碳原子。在進一步的其它實施方案中，烷基含有約1-6個脂肪族碳原子。在另外的其它實施方案中，烷基含有約1-4個脂肪族碳原子。烷基氨基的例子包括但不限於甲基氨基等。
本發明化合物的上述脂肪族(以及其它)部分的一些取代基的例子包括但不限於脂肪族；脂環族；雜脂肪族；雜環族；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳氧基；雜烷氧基；雜芳氧基；烷硫基；芳硫基；雜烷硫基；Rx獨立地包括但不限於脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基部分，其中上述和此處描述的任何脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的基團，而且其中上述和此處描述的任何芳基或雜芳基取代基可以為取代或未取代的基團。常用取代基的其它例子在本文所述實施例所顯示的具體實施方案中進行了說明。
通常，如本文中所用的，術語「芳香族部分」指具有優選3-14個碳原子的穩定的單-或多環不飽和部分，每個環可以為取代或未取代的環。在某些實施方案中，術語「芳香族部分」指在每個環原子上具有垂直於環平面的p-軌道並且滿足Huckel規則其中環中的π電子數為(4n+2)(其中n為整數)的平面環。本文中將不滿足一個或多個這些芳香性規則的單-或多環、不飽和部分定義為「非-芳香族的」，並且包括在術語「脂環族」中。
通常，如本文中所用的，術語「雜芳族部分」指具有優選3-14個碳原子的穩定的單-或多環不飽和部分，每個環可以為取代或未取代的環而且在環內的環碳原子位置處包括至少一個選自O、S和N的雜原子。在某些實施方案中，術語「雜芳香族部分」指包括至少一個雜原子、在每個環原子上具有垂直於環平面的p-軌道並且滿足Huckel規則其中環中的π電子數為(4n+2)(其中n為整數)的平面環。
應該理解，如本文中所定義的，芳香族和雜芳族部分可以通過烷基或雜烷基部分進行連接，因此其還包括-(烷基)芳香族、-(雜烷基)芳香族、-(雜烷基)雜芳族和-(雜烷基)雜芳族部分。因此，如本文中所用的，措辭「芳香族或雜芳族部分」和「芳香族、(雜烷基)芳香族、-(雜烷基)雜芳族和(雜烷基)雜芳族」是可以互換的。取代基包括但不限於之前提及的任何取代基，即針對脂肪族部分或本文中公開的其它部分所闡述的取代基，而且得到穩定的化合物。
如本文中所用的，術語「芳基」與該術語在本領域中的一般含義並沒有顯著差別，其指包括至少一個芳香族環的不飽和環部分。在某些實施方案中，「芳基」指具有一個或兩個芳香族環的單-或雙環碳環體系，其中所述芳香族環包括但不限於苯基苯基、萘基、四氫萘基、茚滿基、茚基等。
如本文中所用的，術語「雜芳基」與該術語在本領域中的一般含義並沒有顯著差別，其指具有5-10個環原子的環芳族基團，其中環原子中的一個環原子選自S和N；0、1或2個環原子為另外的獨立選自S和N的雜原子；剩餘的環原子為為碳，該基團通過任何環原子連接在剩餘分子上，例如吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、硫苯基、呋喃基、喹啉基、異喹啉基等。
應該理解，芳基和雜芳基(包括雙環芳基)可以為未取代或取代的基團，其中的取代包括獨立地以任意一個或多個下列部分代替基團上的一個或多個氫原子，所述部分包括但不限於脂肪族；脂環族；雜脂肪族；雜環族；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳氧基；雜烷氧基；雜芳氧基；烷硫基；芳硫基；雜烷硫基；雜芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(O)Rx；-C(O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中每次出現的Rx獨立地包括但不限於脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族、雜芳族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處描述的任何脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代和未取代、支鏈或非支鏈、飽和或不飽和基團，而且其中上述和此處描述的任何芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、-(烷基)芳基或-(烷基)雜芳基取代基可以為取代或未取代的基團。此外，應該理解，任何兩個相鄰的基團連接在一起可以代表4、5、6或7-元取代或未取代的脂環族-或雜環族部分。常用取代基的其它例子在本文所述實施例所顯示的具體實施方案中進行了說明。
如本文中所用的，術語「環烷基」具體指具有3-7，優選3-10個碳原子的基團。適當的環烷基包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基等，其在脂肪族、脂環族、雜脂肪族或雜環族部分的情況下可以任選被取代基取代，所述取代基包括但不限於脂肪族；脂環族；雜脂肪族；雜環族；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳基氧；雜烷氧基；雜芳基氧；烷基硫；雜芳基硫；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(O)N(Rx)2；-OC(O)Rx；-OCO2Rx；-OC(O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中每次出現的Rx獨立地包括但不限於脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處描述的任何脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的基團，而且其中上述和此處描述的任何芳香族、雜芳香族、芳基或雜芳基取代基可以為取代或未取代的基團。常用取代基的其它例子在本文所述實施例所顯示的具體實施方案中進行了說明。
如本文中所用的，術語「雜脂肪族」指主鏈上的一個或多個碳原子已被雜原子取代的脂肪族部分。因此，雜脂肪族基團指含有一個或多個代替碳原子的氧、硫、氮、磷或矽原子的脂肪族鏈。雜脂肪族部分可以為直鏈或支鏈，飽和或不飽和部分。在某些實施方案中，雜脂肪族部分上的一個或多個氫原子獨立地被一個或多個包括但不限於下述基團的部分取代脂肪族；脂環族；雜脂肪族；雜環族；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；烷基雜芳基；烷氧基；芳基氧；雜烷氧基；雜芳基氧；烷硫基；芳硫基；雜芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(＝O)Rx；-C(C＝O)N(Rx)2；-OC(＝O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中Rx在每次出現時獨立地包括但不限於脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處描述的任何脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的基團，而且上述和此處描述的任何芳香族、雜芳香族、芳基或雜芳基取代基可以為取代或未取代的基團。常用取代基的其它例子在本文所述實施例所顯示的具體實施方案中進行了說明。
如本文中所用的，術語「雜環烷基」、「雜環」或「雜環的」指結合了雜脂肪族和環化合物的性質的化合物，其包括但不限於具有5-16個原子的飽和和不飽和單-或多環環系，而且其中至少一個環原子為選自S和N的雜原子(其中氮和硫雜原子可以任選被氧化)，其中環系任選被一個或多個本文中定義的官能團取代。在某些實施方案中，術語「雜環烷基」、「雜環」或「雜環的」指其中至少一個環雜原子選自S和N(其中氮和硫雜原子可以任選被氧化)的非-芳香族5-、6-或7-元環或多環基團，其包括但不限於二-或三-基團，包括具有1-3個獨立地選自氧、硫和氮的雜原子的稠合六元環，其中(i)每個5元環具有0-2個雙鍵，每個6元環具有0-2個雙鍵，每個7元環具有0-3個雙鍵，(ii)氮和硫雜原子可以任選被氧化，(iii)氮雜原子可以任選被季銨化，和(iv)上面的任何雜環可以與芳環或雜芳環稠合。代表性的雜環包括但不限於雜環，例如呋喃基、吡喃基、吡咯基、噻吩基、吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶子基、哌嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁唑烷基、二噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、三唑基、噻三唑基、噻二唑基、噁二唑基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基、二噻唑基、二噻唑烷基、四氫呋喃基，及其苯並稠合的衍生物。在某些實施方案中，使用「取代的雜環，或雜環烷基或雜環」基團，且如本文中所用的，其指上述定義的雜環，或雜環烷基或雜環基，環上的一個、兩個或三個氫原子獨立地被下述但並不限於此的基團取代脂肪族；脂環族；雜脂肪族；雜環族；芳香族；雜芳香族；芳基；雜芳基；烷基芳基；雜烷基芳基；烷基雜芳基；雜烷基雜芳基；烷氧基；芳基氧；雜烷氧基；雜芳基氧；烷硫；芳基硫基；雜烷硫基；雜芳硫基；F；Cl；Br；I；-OH；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-C(C＝O)Rx；-CC＝O)N(Rx)2；-OC(O)Rx；-OCO2Rx；-OC(＝O)N(Rx)2；-N(Rx)2；-S(O)2Rx；-NRx(CO)Rx，其中Rx在每次出現時獨立地包括但不限於脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族、雜芳香族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基或雜烷基雜芳基，其中上述和此處所述的任何脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、烷基芳基或烷基雜芳基取代基可以為取代或未取代的、支鏈或非支鏈的、飽和或不飽和的基團，而且其中上述和此處所述的任何芳香族、雜芳香族、芳基或雜芳基可以為取代或未取代的。此外，應該理解，上述和此處所述的任何脂環族或雜環族部分可以包括稠合在其上的芳基或雜芳基部分。
本文中所用的術語「滷代」和「滷素」選自氟、氯、溴和碘的原子。
術語「滷代烷基」意指連接有一個、兩個或三個滷素原子的上述定義的烷基，其例如為這種基團氯甲基、溴甲基、三氟甲基等。
如本文中所用的，術語「氨基」指伯(-NH2)、仲(-NHRx)、叔(-NRxRy)或季胺(-N+RxRyR2)，其中Ry和Rz獨立地為本文中定義的脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族或雜芳香族部分。氨基的例子包括但不限於甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、二乙基氨基羰基、異丙基氨基、哌啶子基、三甲基氨基和丙基氨基。
如本文中所用的，術語「醯基」指具有通式-C(＝O)R的基團，其中R為本文中定義的脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族或雜芳香族部分。
如本文中所用的，術語「磺醯氨基」指通式-SO2NRxRy的基團，其中Rx和Ry獨立地為氫，或本文中定義的脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族、雜芳香族或醯基部分。
如本文中所用的，術語「苯甲醯氨基」指通式PhNRx的基團，其中Rx為氫，或本文中定義的脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳香族、雜芳族或醯基部分。
如本文中所用的，術語「C1-6亞烷基」指具有1-6個碳原子、在基團的兩端都具有自由價「-」、僅由碳和氫原子組成的取代或未取代的、直鏈或支鏈的飽和二價基團。
如本文中所用的，術語「C2-6亞鏈烯基」指具有2-6個碳原子、在基團的兩端都具有自由價「-」、僅由碳和氫原子組成的取代或未取代的、直鏈或支鏈的不飽和二價基團，而且其中的不飽和狀態僅以雙鍵形式存在，且雙鍵可以存在於鏈的第一個碳原子和剩餘分子之間。
如本文中所用的，術語「脂肪族」、「雜脂肪族」、「烷基」、「鏈烯基」、「炔基」、「雜烷基」、「雜鏈烯基」、「雜炔基」等包括取代和未取代的、飽和和不飽和的和直鏈和支鏈基團。類似地，術語「脂環族」、「雜環族」、「雜環烷基」、「雜環」等包括取代和未取代的和飽和和不飽和的基團。此外，術語「環烷基」、「環鏈烯基」、「環炔基」、「雜環烷基」、「雜環鏈烯基」、「雜環炔基」、「芳香族」、「雜芳香族」、「芳基」、「雜芳基」等包括被取代和未被取代基團。
如本文中所用的，術語「天然胺基酸」指在天然產生的蛋白質中發現的任何一種常見、天然產生的L-胺基酸甘氨酸(GIy)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(VaI)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(He)、賴氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、組氨酸(His)、脯氨酸(Pro)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)、天冬氨酸(Asp)、穀氨酸(GIu)、天冬醯胺(Asn)、穀氨醯胺(GIn)、半胱氨酸(Cys)和甲硫氨酸(Met)。
如本文中所用的，術語「非天然胺基酸」指非天然胺基酸的所有胺基酸。其包括，例如α-、β-、D-、L-胺基酸殘基，和下列通式的化合物
其中，側鏈R不同於天然產生的胺基酸的側鏈。
更通常，如本文中所用的，術語「胺基酸」包括天然胺基酸和非天然胺基酸。
如本文中所用的，術語「生物電子等排體」通常指擁有類似的分子形狀和/或體積的兩個或多個化合物或部分。在某些實施方案中，生物電子等排體具有大約相同的電子分布。在另外的某些實施方案中，生物電子等排體顯示類似的生物學性質。在優選的實施方案中，生物電子等排體擁有類似的分子形狀和體積；具有大約相同的電子分布；並且顯示類似的生物學性質。
如本文中所用的，術語「藥物可接受的衍生物」意指任何藥物可接受的鹽、酯或這種酯的鹽、該化合物的鹽，或施用於病人後能夠提供(直接或間接)如本文中另外描述的化合物的任何其它加合物或衍生物，或其代謝物或剩餘物。因此，除了其它物質之外，藥物可接受的衍生物還包括前藥。前藥是通常能夠顯著降低藥物活性的化合物衍生物，其含有在體內易於除去而產生作為藥物活性物質的母體分子的另外部分。前藥的例子是酯，其在體內裂解產生目標化合物。各種化合物和物質的前藥以及衍生母體化合物產生前藥的方法是已知的，而且可以用於本發明。下文中將詳細討論某些示例性藥物組合物和藥物可接受的衍生物。
如本文中所用的，術語「藥物可接受的鹽」指適於藥物用途，優選適用於人和低級動物身體組織且沒有不適當的疼痛、過敏反應等的那些鹽。胺、羧酸和其它類型化合物的藥物可接受的鹽是本領域已知的。例如，S.M.Berge等在J Pharmaceutical Sciences，661-19(1977)中詳細描述了藥物可接受的鹽，其在此結合進來作為參考。該鹽可以在本發明化合物的最後分離和純化過程中就地製備，或者如下文中總述的，通過使游離鹼或游離酸的官能團與適當的試劑反應而單獨製備。例如，游離鹼官能團可以與適當的酸反應。此外，當本發明的化合物帶有酸性部分時，其適當的藥物可接受的鹽可以包括金屬鹽，例如鹼金屬鹽，如鈉或鉀鹽；和鹼土金屬鹽，如鈣或鎂鹽。藥物可接受的無毒酸加合鹽的例子為氨基與無機酸形成的鹽，所述無機酸例如為鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或與有機酸形成的鹽，所述有機酸例如為醋酸、草酸、馬來酸、酒石酸、檸檬酸、琥珀酸、丙二酸，或利用本領域採用的其它方法，例如離子交換法製備的鹽。其它藥物可接受的鹽包括己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、硫氫酸鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、葡糖酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、櫛酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。代表性的鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂鹽等。其它藥物可接受的包括，如果適當，無毒銨鹽、季銨鹽，和使用抗衡離子形成的胺陽離子，所述抗衡離子例如為滷化物離子、氫氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、磺酸根和芳基磺酸根。
如本文中所用的，術語「藥物可接受的酯」指在體內發生水解的酯，其包括那些在人體內容易分解釋放出母體化合物或其鹽的酯。適當的酯包括例如衍生自藥物可接受的脂肪族醇化合物，尤其是烷醇、鏈烯醇、乙二醇、環烷醇等，其中每個烷基或鏈烯基部分有利地具有不大於6個的碳原子。這些物質只是示範，並不以任何方式限制本領域已知的酯的使用可能性。
如本文中所用的，術語「藥物可接受的前藥」指適於藥物用途的本發明化合物的那些前藥，優選用於人和低級動物的身體組織並且沒有不當的毒性、疼痛、過敏反應等，而且對於意圖的用途而言是有效的，以及如果可能的話指本發明化合物的兩性離子形式。術語「前藥」指在體內迅速轉化得到上式的母體化合物的化合物，例如通過在血液中水解進行轉化。T.Higuchi和V.Stella，Pro-drugs as Novel DeliverySystems，A.C.S.專題論文集系列14卷，和Edward B.Roche，ed.，Bioreversible Carriers in Drug Design，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987中提供了透徹的論述，該兩篇文獻據此結合進來作為參考。
B.該方法的示例化合物 在一個實施方案中，可用於本發明的方法中的化合物包括式I化合物
式I 其中，R1和R2彼此獨立地為氫、胺基酸側鏈、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳基，其中m為0-6、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任選被U-T-Q取代的脂肪族、脂環族、雜脂肪族或雜脂環族部分；其中U可以為不存在或下列之一-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(O)(R1A)-O-；其中T為不存在，或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；Q為氫、滷素、氰基、異氰酸酯、-OR1B；-SR1B；-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHS O2R1B、NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2、-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B，或脂肪族雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中R1和R2連接在一起為脂環族或雜環族部分，或一起為
其中，R1A和R1B每次出現時獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-C(＝O)R1C，或-C(＝O)NRICR1D；其中R1C和R1D每次出現時獨立地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；和R1E為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C； 其中R3為-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中R3A每次出現時獨立地為氫、保護基團、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分，或藥物可接受的鹽或酯，或者R3A與R1和R2連接在一起形成雜環族部分；其中X0為選自F、Br或I的滷素； R4每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為GRG，其中G為-O-、-S-、NRG2-、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、C(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，和RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分； n為0-4的整數； AR1為單環或多環芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環族或雜環族部分； 按照價態允許的情況，A、B、D和E通過單鍵或雙鍵連接；其中A、D和E每次出現時獨立地為C＝O、CRiRii、NRi、CRi、N、O、S、-S(＝O)或SO2；其中Ri每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或者為-GRG1，其中，G為-O-、-S-、-NRG2、-CO-、-SO-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，和RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或任意兩個相鄰基團連接在一起代表脂環族、雜脂環族、芳基、或雜芳基部分； p為0-4的整數；和 L為不存在或V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z每次出現時獨立地為不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亞鏈烯基(alkenylidene)或C2-6亞鏈烯基(alkenylidine)鏈，其中最多兩個不相鄰亞甲基單元獨立地任選被下述基團代替-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-，或-NRL3-；其中RL3和RL4每次出現時獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或醯基；或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；RL1和RL2每次出現時獨立地為氫、羥基、被保護的羥基、氨基、被保護的氨基、硫代、被保護的硫代基團、滷素、氰基、異氰酸酯、羧基、羧烷基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰基、烷氧基、芳氧基、巰基、亞磺醯氨基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基，或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或其中的一個或多個RL1和RL2連接在一起，或者與V、W、X、Y或Z之一連接在一起形成脂環族或雜環族部分或形成芳基或雜芳基部分。
本發明方法的一些優選實施方案為式II化合物
其中，R28為下列基團之一


或
且R27為下列基團之一


或
式II 且R29為氫、藥物可接受的鹽或酯。
本發明的一些優選實施方案為II′化合物
式II′ 其中的取代情況如式II中所示。
本發明方法的化合物的一些特別優選的實施方案為式IIA、IIB和IIC的化合物
式IIA 其中各自的R17可以各自選自氫、藥物可接受的鹽和酯。
本發明方法的化合物的另一組優選實施方案為式III化合物
式III 其中，Cy為任選被下述基團取代的芳香族碳環、芳香族雜環或非-芳香族碳環或雜環羥基(-OH)、巰基(-SH)、硫烷基、滷素(例如，F、Cl、Br、I)、氧代(＝O)、硫代(＝S)、氨基、氨基烷基、脒基(-C(NH)-NH2)、胍基(-NH2-C(NH)-NH2)、硝基、烷基或烷氧基。在特殊的實施方案中，Cy為3-5元環。在優選的實施方案中，Cy為任選被羥基、巰基、滷素(優選F或Cl)、氧代(＝O)、硫代(＝S)、氨基、脒基、胍基、硝基、烷基或烷氧基取代的5或6元非芳香族雜環。在更優選的實施方案中，Cy為任選被羥基、氧代、硫代、Cl、C1-4烷基(優選甲基)或C1-4烷醯基(優選乙醯基、丙醯基或丁醯基)取代的5元非芳香族雜環。更優選，該非芳香族雜環包括一個或多個雜原子(N、O或S)，並且任選被羥基、氧代、巰基、硫代、甲基、乙醯基、丙醯基或丁基取代。在特殊的實施方案中，該非芳香族雜環包括至少一個任選被甲基或乙醯基取代的氮原子。在特別優選的實施方案中，該非-芳香族雜環選自下組哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫呋喃、四氫噻吩、噁唑烷、噻唑烷，其任選被羥基、氧代、巰基、硫代、烷基或烷醯基取代。在最優選的實施方案中，Cy為選自下組的非-芳香族雜環四氫呋喃-2-基、噻唑烷-5-基、噻唑烷-2-酮-5-基和噻唑烷-2-硫酮-5-基和環丙烷吡咯烷。在優選的實施方案中，Cy為任選被羥基、巰基、滷素(優選F或Cl)、氧代(＝O)、硫代(＝S)、氨基、脒基、胍基、硝基、烷基或烷氧基取代的5或6元芳香族碳環或雜環。在更優選的實施方案中，Cy為任選被羥基、氧代、硫代、Cl、C1-4烷基(優選甲基)或C1-4烷醯基(優選乙醯基、丙醯基或丁醯基)取代的5元芳香族碳環或雜環。更優選，芳香族或雜環包括一個或多個雜原子(N、O或S)，並且任選被羥基、氧代、巰基、硫代、甲基、乙醯基、丙醯基或丁基取代。
在另一個優選的實施方案中，Cy為任選被羥基、巰基、滷素、氧代、硫代、氨基、脒基、胍基、烷基、烷氧基或醯基取代的3-6元碳環。在一個具體的實施方案中，碳環為飽和或部分不飽和環。在一個具體的實施方案中，Cy為選自下組的碳環環丙基、環丙烯基、環丁基、環丁烯基、環戊基、環戊烯基、環己基和環己烯基。
X2為任選具有一個或多個被N、O、S、SO或SO2代替的碳原子並且任選被羥基、巰基、滷素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代取代的C1-5二價烴連接基團。在優選的實施方案中，X2具有至少一個碳原子。經代替和取代可以在烴鏈內或在各端或兩端處形成醯胺部分(-NRC(＝O)-或-C(＝O)NR-)。其它部分包括氨磺醯基(-NRSO2-或-SO2NR)、醯基、醚、硫醚和胺。在特別優選的實施方案中，X2為基團-CH2-NR10-C(O)-，其羰基-C(O)-部分與Cy相鄰(即，共價鍵合)，且R10為烷基，即甲基，更優選為H。
K為任選被羥基、巰基、滷素、氧代、硫代、烴、滷素-取代的烴、氨基、脒基、胍基、氰基、硝基、烷氧基或醯基取代的碳環或雜環。在具體的實施方案中，K為任選被滷素、羥基取代的芳基或雜芳基。在特別優選的實施方案中，K為被滷素(優選Cl)或羥基取代的苯基、呋喃-2-基、噻吩-2-基、苯基，優選在間位取代。
L2為具有一個或多個被N、O、S、SO或SO2代替的碳原子並且任選被羥基、滷素、氧代、或硫代取代的二價烴；或者該烴的三個碳原子被胺基酸殘基代替。優選L2的長度為小於10個原子，更優選為5或更小，最優選長度為5或3個原子。在特別優選的實施方案中，L2選自下組-CH＝CH-C(O)-NR-CH2-、-CH2-NR10-C(O)-、-C(O)-NR10-CH2-、-CH(OH)-(CH2)2-、-(CH2)2-CH(OH)-、-(CH2)3-、-C(O)-NR10-CH(R7)-C(O)-NR10-、-NR10-C(O)-CH(R16)-NR10-C(O)-、-CH(OH)-CH2-O-和-CH(OH)-CF2-CH2-，其中每個R10獨立地為H或烷基，R16為胺基酸側鏈。優選的胺基酸側鏈包括非天然形成的側鏈，例如苯基，或者天然形成的側鏈。優選的側鏈為選自Phe、Tyr、Ala、GIn和Asn的側鏈。在優選的實施方案中，L2為-CH＝CH-C(O)-NR10-CH2-，其中，其-CH＝CH-部分與K相鄰(即，共價鍵合)。在另一個優選的實施方案中，L2為-CH2-NR10-C(O)-，其中，其亞甲基部分(-CH2-)與K相鄰。
R5為H、OH、氨基、O-碳環或任選被氨基、碳環、雜環取代的烷氧基，或藥物可接受的鹽或酯。在優選的實施方案中，R5為H、苯基或任選被碳環，例如苯基取代的C1-4烷氧基。在特別優選的實施方案中，R5為H。在另一個特別優選的實施方案中，R5為甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、苯氧基或苄氧基。在又一個特別優選的實施方案中，R5為NH2。在特別優選的實施方案中，R5為乙氧基。在另一個特別優選的實施方案中，R5為異丁氧基。在另一個特別優選的實施方案中，R5為被氨基取代的烷氧基，所述氨基例如為2-氨基乙氧基、N-嗎啉代乙氧基、N，N-二烷基氨基乙氧基、季銨羥基烷氧基(例如，三甲基銨羥基乙氧基)。
R6-9獨立地為H、羥基、巰基、滷素、氰基、氨基、脒基、胍基、硝基或烷氧基；或R7和R8在一起形成任選被羥基、滷素、氧代、硫代、氨基、脒基、胍基或烷氧基取代的稠合碳環或雜環。在一個特殊的實施方案中，R6和R7獨立地為H、F、Cl、Br或I。在另一個特殊的實施方案中，R8和R9均為H。在另一個特殊的實施方案中，R6和R7之一為滷素，而另一個為氫或滷素。在特別優選的實施方案中，R7為Cl而R6、R8和R9各自為H。在另一個特別優選的實施方案中，R6和R7均為Cl而R8和R9均為H。
R10為H或任選被碳環或雜環取代的烴鏈。在優選的實施方案中，R10為H或烷基，即甲基、乙基、丙基、丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。在具體的實施方案中，R10為H。
本發明方法的進一步優選的實施方案為式IV的化合物
式IV 其中，R11為下式基團
其中，A為氫、羥基、氨基或滷素，B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、三氟甲基、滷素、低級烷基，或低級烷氧基； R12為下式基團
其中，R13為氫、羧基或低級烷基；n為0或1；U2、V2和W2獨立地為氫、滷素或低級烷基，條件是U2和V2不都為氫；X3為羰基、苯基-取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；Y2為低級亞烷基，其可以被一個或多個氨基、取代的氨基、低級烷基或環低級烷基取代，或Y2為低級亞鏈烯基或低級亞烷基硫基； k為0或1；當k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-COOH、-CONH2、氨基；當k為0或1時，Z2為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯代吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基、羥基、苯基甲乙÷氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，6-二氯苯基)甲氧基]苯基；此外，當k為0或1時，Z2可以為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，該環可以獨立地為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，任何一個環可以為未取代的，或被至少下列之一取代滷素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、低級烷磺醯基、低級烷硫基、乙醯基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧基羰基、乙醯氧基、或者還可以被氨基低級烷基取代；R20為氫、藥物可接受的鹽或酯。
式IV化合物的優選實施方案具有式指示的立體化學結構
式IV』 本發明方法的化合物的另一組優選實施方案為式V化合物
式V 其中，R14為下式基團


或
其中，R15為氫、羧基或低級烷基；U3、V3和W3獨立地為氫、滷素；或U3、V3和W3為低級烷基，條件是U3和V3不都為氫；X4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基，包括氰基，或磺醯基的取代的亞氨基；Y3為低級亞鏈烯基、低級亞烷基硫基，或為低級亞烷基，其可以被氨基、乙醯基氨基、或環低級烷基取代； k2為0或1；當k2為1時，Z為氫、低級烷基硫基、-COOH、-T-CONH2-或氨基；當k2為0或1時，Z3為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基；當k2為0或1時，Z可以為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，其中該環獨立地為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，其中任何一個環都可以為未取代的，或者被至少下列之一取代滷素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素-取代的低級烷基、低級烷氧基-取代的低級烷基、低級烷氧基、羧基、烷氧基羰基或乙醯氧基；和， R21為氫、其藥物可接受的鹽或酯。
式V化合物的優選實施方案中具有式V所指示的立體化學
式V』 該方法的另一類優選化合物由式VI代表
式VI 其中，D4為單-、二-或三環飽和、不飽和，或芳香族環，每個環的環中具有5-、6-或7個原子，其中環內的原子為碳或為1-4個選自氮、氧和硫的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；L3為選自下列基團的二價連接基團 -L3-L2-L1-， -L4-L3-L2-L1-，和 -L5-L4-L3-L2-L1-， 其中，L1選自氧代(-O-)、S(O)3、C(＝O)、CR32、R32、CR32 het、NR30和N， L2選自氧代(-O-)、S(O)3、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR34R34′、CR34、het NR30和N， L3選自氧代(-O-)、S(O)3、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR35R35′、CR35、het NR30和N， L4為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)3、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR36R36′、CR36、NR30和N， L5為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)3、C(＝O)、CR37R37′、CR37、NR30和N，條件是L1-L3中只有一個可以為het，而且當L1-L3之一為het時，L1-L5中的另一個可以為不存在， 其中， R32、R32′、R34、R3 4′、R35、R35′、R36、R36′、R37和R37′各自獨立地選自R38、R39和U-Q-V-W， 任選地，R24和R34′獨立地或者一起可以通過位於B上的取代基RP而與B3形成飽和、不飽和或芳香族稠合環，該稠環在環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中，任何S或N可以任選被氧化；任選地，R35和R35獨立地或者一起，R36和R36′獨立地或者一起可以通過位於D3上的取代基R31而與D3形成飽和、不飽和或芳香族稠環，該稠環的環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中，任何S或N可以任選被氧化，同樣任選地，每個R32-R37、NR30或L1-L5中的N與任何其它的R32-R37、NR30或L1-L5中的N一起可以形成5、6或7元飽和、不飽和的同素-或雜環或芳香族，其任選含有1-3個另外的，選自N、O和S的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；其中，s為0-2；B選自下列基團

和

其中
其為含有5、6或7個原子的稠合雜或同素環，該環為不飽和、部分飽和或芳香族環，雜原子選自1-3個O、S和N， Y3選自CH和NR30；n為0-3； G3選自氫和C1-C6烷基，任選G與T一起可以形成任選被-V-W取代的C3-C6環烷基； T3選自天然形成的α-胺基酸側鏈，和U4-Q4-V4-W4； U4為選自下列的任選被取代的二價基團 C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6鏈烯基-Q，和C2-C6炔基-Q 其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38； Q4為不存在或選自下列基團 -O-、-S(O)s-、-SO2-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-、-N(R30)-C(＝O)-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-O-、-N(R30)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-het-、-C(＝O)-N(R30)-、-O-C(＝O)-N(R30)-、-PO(OR30)O-和-P(O)O-； 其中， s為0-2，且 het為單-或雙環的5、6、7、9或10元雜環，每個環含有1-4個選自N、O和S的雜原子，其中雜環可以為飽和、部分飽和或芳香族環，而且任何N或S任選被氧化，該雜環被0-3個R41取代； V4為不存在，或為選自C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C0-C6烷基-C6-C10芳基和C0-C6烷基-het的任選取代的二價基團； 其中，任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31； W4選自下列基團 氫、OR33、SR42、NR30R30、NH-C(＝O)-O R43、NH-C(＝O)-NRnRn，NH-C(＝O)-R43、NH-SO2-R37、NH-SO2-NR30R30、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-NR30R30′、C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-SO2-NR30R30′、C(＝S)-NR30R30′、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-NR37R37′、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-NR30R30′、SO2-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NR30R30′、O-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-SO2R46和O-SO2-R37； R44選自C(＝O)-R45、C(＝O)-H、CH2(OH)和CH2O-C(＝O)-C1-C6烷基； R38為被1-3個R38′取代的R38』或R38″；其中， R38′選自下列基團 氫、滷代(F、Cl、Br、I)、氰基、異氰酸酯、羧基、羧基-C1-C11烷基、氨基、氨基-C1-C8烷基、氨基羰基、羧醯胺基、氨基甲醯基、氨基甲醯氧基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、咪唑基、脲基、硫脲基、硫氰基、羥基、C1-C6烷氧基、巰基、亞磺醯氨基、het、苯氧基、苯基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基，吡咯啉基、咪唑基和吲哚基； R38″選自下列基團 C0-C10烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C10鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C0-C10炔基-Q-C0-C6烷基、C3-C11環烷基-Q-C0-C6烷基、C3-C10環鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C1-C6烷基-C6-C12芳基-Q-C0-C6烷基、C6-C10芳基-C1-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-het-C0-C6烷基、het-C0-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-C6-C12芳基和-Q-C1-C6烷基； R43選自氫和取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C6烷基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基和het， 其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，任何芳基或het上的取代基為1-3個R31； R31選自R40和R41； R41選自下列基團 OH、OCF3、OR43、SR42、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、NO2、CF3、C0-C6烷基-NR30 R30′、C0-C6烷基-C(＝O)-NR30R30′、C0-C6烷基-C(＝O)-R38、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C6環烷基、C3-C6環鏈烯基、C1-C6烷基苯基、苯基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基、苯基C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基和het，其中任何烷基、鏈烯基或炔基可以任選被1-3個選自OH、滷代(F、Cl、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰基的基團取代，而且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、滷代(F、Cl、Br、I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基； R42選自S-C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-NR30R30′、C1-C6烷基、滷代(F、Cl、Br、I)-C1-C6烷基、苄基和苯基； R30選自下列基團R43、NH-C(＝O)-O-R43、NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NHR43、NH-SO2-R46、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-O-R43、C(＝O)-R43、C(＝O)-NHR43、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-SO2-R46、C(＝O)-NH-SO2-NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N(R43)2、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-O-R43和SO2-NH-C(＝O)-R43； R30′選自氫、羥基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C-6烷基、C6-C10芳基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基、het、C1-C6烷基羰基、C1-C8烷氧基羰基、C3-C8環烷基羰基、C3-C8環烷氧基羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧基羰基、雜芳基烷氧基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺醯基、雜芳基磺醯基、C1-C6烷基磺醯基、和C6-C10芳基磺醯基，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31； R30和R30′與相連的氮一起可以形成任選取代的雜環，所述雜環選自嗎啉基、哌嗪基、硫嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1，2，3，4-四氫-喹啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉基、噻唑烷基和氮雜二環壬基，其中的取代基為1-3個R38；R33選自氫和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基和苯甲醯基，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R40； R40選自下列基團OH、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、OR43、SR42、SOR43、NO2、CF3、R43、NR30R30′、NR30C(＝O)-O-R43、NRC(＝O)-R43、C0-C6烷基-SO2-R43、C0-C6烷基-SO2-NR30R30′、C(＝O)-R43、O-C(＝O)-R43、C(＝O)-O-R43和C(＝O)-NR30R30′，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R31； R46為取代或未取代的、選自下列的基團 C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C8環烷基、C3-C6環鏈烯基、C0-C6烷基苯基、苯基-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het和het-C0-C6烷基， 其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31； R45為取代或未取代的、選自下列的基團羥基、C1-C11烷氧基、C3-C12環烷氧基、C8-C12芳烷氧基、C8-C12芳環烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰基烷氧基、C5-C10環烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰基烷氧基，C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳基羰氧基烷氧基、C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30)(R30)N(C1-C10烷氧基)-，


和
其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31，及其藥物可接受的鹽。
式I-VI的化合物還包括藥物可接受的鹽，和包括式I-VI的前藥化合物的酯，其中，R3A、R5R10、R17、R18、R19、R20、R21、R29和R44上的羧酸酯可以為低級烷基或-CH2CH2-R22，其中R22為下列基團之一


或
其中，R23為氫或甲基，R24為低級烷基或低級環烷基。
式VI化合物的優選實施方案具有式VI′所指示的立體化學。

式VI』 本文中描述的一些化合物可以包括一個或多個不對稱中心，因此其可以包括單獨的立體異構體、單獨的非對映體及其任意的混合物。此外，本發明的化合物可以含有雙鍵的幾何異構體，包括Z和E異構體，而且可以作為純的幾何異構體或其混合物存在。
在一些優選實施方案中，本發明的方法採用下列化合物或其藥物可接受的鹽或酯來實施
本發明的化合物包括下列化合物或其藥物可接受的鹽或酯



本發明的化合物可以通過本領域熟練技術人員公知的方法製備，並且可以以多種方式純化，包括在不同條件下結晶或沉積得到一種或多種多晶型物。因此，本發明包括上述發明的化合物、其多晶型物、其藥物可接受的鹽、其藥物可接受的溶劑化物，及含有這些物質的藥物可接受的組合物。
本發明的化合物可以通過本領域熟練技術人員公知的方法製備，並且可以以多種方式純化，包括在不同條件下經結晶或沉積而得到一種或多種多晶型物。因此，本發明包括上述發明的化合物、其多晶型物、其藥物可接受的鹽、其藥物可接受的溶劑化物，及含有這些物質的藥物可接受的組合物。
上述優選實施方案的例子意圖說明一些潛在的治療試劑，並不意圖以任何方式限制發明。本發明的方法可以採用抗體、抗體片斷、肽和其它合成分子來實施，從而用來治療乾眼病，其中所述其它合成分子為採用上述的確定治療試劑的方法可以確定的分子，其中上述確定方法確定的治療試劑為針對LFA-1和ICAM-I相互作用的選擇性的、有效的和直接的競爭性抑制劑。
本發明還提供了使用本發明中描述的化合物和診斷及治療方法的商業方法。一種商業方法包括確定肽或小分子的LFA-1拮抗性質，和研發治療由LFA-1介導的疾病的方法，優選通過局部輸送的方式進行治療。由於未對該化合物進行系統給藥，因此這些藥物的系統藥物代謝動力學特徵通常並未確定，因而針對可用於研發的藥物的試驗對象群是龐大的。在一個實施方案中，將LFA-1拮抗劑研製成眼用製劑，之後再改進並銷售出去以用於治療眼病，例如乾眼症。Hut78試驗通常用於確定LFA-1的拮抗性質。除了LFA-1的拮抗性質之外，還可以確定白細胞的拮抗性質。
III.給藥 本發明的方法可以採用許多適當的給藥方式，用以輸送本文中描述的方法的LFA-1拮抗劑。可以通過局部或系統給藥來實現藥物至受影響的身體區域的輸送。適當的製劑和附加載體在Remington「TheScience and Practice of Pharmacy」(20版，Lippincott Williams &Wilkins，Baltimore MD)中進行了描述，其全部教導據此結合進來作為參考。
在一些實施方案中，本發明提供一種用於施用於患者的藥物組合物，其含有(i)有效量的治療試劑；和(ii)適於口服給藥的藥物賦形劑。在一些實施方案中，該組合物進一步含有(iii)有效量的第二治療試劑。
為了減少眼病的炎症，優選將本發明的藥物組合物輸送至眼表面、連通的神經分布、結膜、淚腺或瞼板腺。預計的有效治療可包括通過下述途徑施用本發明的治療試劑口服給藥、局部給藥、注射、鼻內、直腸、經皮膚、經浸漬或塗覆裝置，例如眼注入或移植，或者經離子電滲，以及其它給藥途徑。
對於注射給藥，可以經肌內、動脈內、皮下或靜脈內注射藥物組合物。可以利用泵機理在預定時間內施用藥物組合物。對於本發明的一些實施方案，希望局部輸送藥物，因此可以在眼周、眼內、結膜下(subconjunctively)、眼球後或眼房內進行注射。對於本發明的一些實施方案，優選採用系統輸送方式。
對於系統給藥，可以將本發明的化合物製成口服藥劑並口服給藥。對於可以將治療試劑局部或系統分布的給藥方式，可以經鼻內、皮膚，或經一些口服給藥形式施用本發明的組合物，例如使用漱口液或錠劑，其中結合了根據G.I.而言吸收率很差的本發明化合物。對於可以經部位或局部輸送本發明組合物的給藥方式，可以使用離子電滲或局部給藥。
此外，可以經泵-導液管體系將本發明的藥物組合物施用至眼表面，或者從連續或選擇性釋放裝置內釋放出來，所述裝置例如為膜，例如但不限於用作OcusertTM系統(Alza Corp，Palo Alto，CA)中的那些裝置。可以將藥物組合物結合至隱形眼鏡內、由隱形眼鏡運載或者附著在隱形眼鏡上，然後該隱形眼鏡被患者用廢。可以將藥物組合物噴在眼表面上。
本發明的藥物組合物可以與用於治療病症或潛在疾病的其它療法結合給藥。例如，在患者接受免疫抑制力療法治療的過程中，將本發明的LFA-1拮抗劑同時或分別給藥，其中所述免疫抑制療法例如為咪唑硫嘌呤、環磷醯胺、甲氨蝶呤、抗瘧藥、麥考酚酸酯(mycophenolanmofetile)、達可如美(daclizumab)、靜脈內免疫球蛋白療法等。在另一個例子中，在患者接受其它抗-炎治療的治療期間，將本發明的LFA-1拮抗劑同時或分別給藥，所述抗-炎治療例如為環孢黴素A、皮質甾類、NSAIDS、阿司匹林、脫氧土黴素。在進一步的例子中，在患者接受激素療法等的治療期間，將本發明的LFA-1拮抗劑同時或分別給藥。在更進一步的例子中，在患者接受抗-過敏療法、乾眼症緩解護理的治療期間，將本發明的LFA-1拮抗劑同時或分別給藥，所述乾眼症緩解護理包括人工淚液或人工唾液、毒蕈鹼M3受體拮抗劑以提高含水分泌物、自體同源血清、透明質酸鈉滴液等。這些實施例僅用於說明並不意圖限制本發明。在一些實施方案中，以單一劑量給藥LFA-1拮抗劑。當與另一種物質(例如，止痛藥)共施用以治療急性病症時，也可以使用單一劑量的LFA-1拮抗劑。在一些實施方案中，分多個劑量給藥LFA-1拮抗劑(其本身或與其它藥物結合)。劑量給藥可以為每日約1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次或多於10次。劑量給藥還可以為約每月1次、每兩周1次、每周1次，或每隔一天1次。在一個實施方案中，該藥物為止痛藥。在另一個實施方案中，LFA-1拮抗劑和另一種物質一起給藥，每日施用約1次-約10次。在另一個實施方案中，LFA-1拮抗劑和另一種治療物質持續給藥小於約7天。在又一個實施方案中，共施用持續進行大於約6、10、14、28天、2個月、6個月或1年。在一些情況下，共施用的給藥方式維持儘量長的時間，例如在針對慢性炎症進行劑量給藥時。本發明組合物的給藥可以持續儘可能長的時間。在一些實施方案中，將本發明的組合物給藥大於1、2、3、4、5、6、7、14或28天。在一些實施方案中，將本發明的組合物給藥小於28、14、7、6、5、4、3、2或1天。在一些實施方案中，基於病情進展狀態而長期給藥本發明的化合物，例如用於治療慢性疼痛。
在本發明的方法中，通過常規試驗可以找到LFA-1拮抗劑的給藥劑量。每日劑量可以為約1×10-7g-5000mg。每日劑量範圍可以取決於LFA-1拮抗劑的形式，例如所用的酯或鹽，和/或給藥途徑。例如，對於系統給藥，常用的每日劑量範圍為例如，約1-5000mg，或約1-3000mg，或約1-2000mg，或約1-1000mg，或約1-500mg，或約1-100mg，或約10-5000mg，或約10-3000mg，或約10-2000mg，或約10-1000mg，或約10-500mg，或約10-200mg，或約10-100mg，或約20-2000mg，或約20-1500mg，或約20-1000mg，或約20-500mg，或約20-100mg，或約50-5000mg，或約50-4000mg，或約50-3000mg，或約50-2000mg，或約50-1000mg，或約50-500mg，或約50-100mg，約100-5000mg，或約100-4000mg，或約100-3000mg，或約100-2000mg，或約100-1000mg，或約100-500mg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的每日劑量為約100、200、300、400、500、600、700、800、900或1000mg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為10mg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為100mg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為500mg。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為1000mg。
對於局部輸送至眼表面的情況而言，常用的日劑量範圍為例如，約1×10-7g-5.0g，或約1×10-7g-2.5g，或約1×10-7g-1.00g，或約1×10-7g-0.5g，或約1×10-7g-0.25g，或約1×10-7g-0.1g，或約1×10-7g-0.05g，或約1×10-7g-0.025g，或約1×10-7g-1×10-2g，或約1×10-7g-5×10-3g，或約1×10-7g-2.5×10-3g，或約1×10-7g-1×10-3g，或約1×10-7g-5×10-3g，或約1×10-6g-5.0g，或約1×10-6g-2.5g，或約1×10-6g-1g，或約1×10-6g-0.5g，或約1×10-6g-0.25g，或約1×10-6g-0.1g，或約1×10-6g-5×10-2g，或約1×10-6g-5×10-2g，或約1×10-6g-2.5×10-2g，或約1×10-6g-1×10-2g，或約1×10-6g-5×10-3g，或約1×10-6g-2.5×10-3g，或約1×10-6g-1×10-3g，或約1×10-6g-5×10-4g，或約1×10-5g-5g，或約1×10-5g-2.5g，或約1×10-5g-1g，或約1×10-5g-0.5g，或約1×10-5g-0.25g，或約1×10-5g-0.1g，或約1×10-5g-0.05g，或約1×10-5g-2.5×10-2g，或約1×10-5g-1×10-2g，或約1×10-5g-5×10-3g，或約1×10-5g-2.5×10-3g，或約1×10-5g-1×10-3g，或約1×10-5g-5×10-4g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為約1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4、1×10-3g、1×10-2g、1×10-1g或1g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為1×10-7g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為1×10-5g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為1×10-3g。在一些實施方案中，LFA-1拮抗劑的日劑量為1×10-2g。在一些實施方案中，單獨的劑量範圍為約1×10-7g-5.0g，或約1×10-7g-2.5g，或約1×10-7g-1.00g，或約1×10-7g-0.5g，或約1×10-7g-0.25g，或約1×10-7g-0.1g，或約1×10-7g-0.05g，或約1×10-7g-0.025g，或約1×10-7g-1×10-2g，或約1×10-7g-5×10-3g，或約1×10-7g-2.5×10-3g，或約1×10-7g-1×10-3g，或約1×10-7g-5×10-4g，或約1×10-6g-5.0g，或約1×10-6g-2.5g，或約1×10-5g-1g，或約1×10-6g-0.5g，或約1×10-6g-0.25g，或約1×10-6g-0.1g，或約1×10-6g-5×10-2g，或約1×10-6g-5×10-2g，或約1×10-6g-2.5×10-2g，或約1×10-6g-1×10-2g，或約1×10-6g-5×10-3g，或約1×10-6g-2.5×10-3g，或約1×10-6g-1×10-3g，或約1×10-6g-5×10-4g，或約1×10-5g-5g，或約1×10-5g-2.5g，或約1×10-5g-1g，或約1×10-5g-0.5g，或約1×10-5g-0.25g，或約1×10-5g-0.1g，或約1×10-5g-0.05g，或約1×10-5g-2.5×10-2g，或約1×10-5g-1×10-2g，或約1×10-5g-5×10-3g，或約1×10-5g-2.5×10-3g，或約1×10-5g-1×10-3g，或約1×10-5g-5×10-4g。在一些實施方案中，將如上所述的單一劑量每日重複1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
對於其它給藥形式，日劑量可以為約所述的用於系統給藥的範圍，或者可以為約所述的用於局部給藥的範圍。
IV製劑 可以將本發明的化合物製成本領域公知的混在適當載體中的無菌溶液或懸浮液。適當的製劑和附加載體在Remington″The Scienceand Practice of Pharmacy″(20版，Lippincott Williams & Wilkins，Baltimore MD)中進行了描述，其全部教導據此結合進來作為參考。
對於可注射製劑，載體可以選自本領域公知的適當載體，包括水溶液或油懸浮液，或乳液和芝麻油、玉米油、棉籽油和花生油，以及酏劑、甘露糖醇、葡萄糖或無菌水溶液，以及類似的藥物載體。
可以對藥物濃度進行調節，如本領域公知的，可以將緩衝液pH值和等滲性調節至與靜脈注射相容。
口服製劑可以為片劑、膠囊、藥片、藥丸、幹膠片(wafers)、口膠、錠劑、水溶液或懸浮液、油狀懸浮液、糖漿、酏劑或可分散的粉末或顆粒等，而且可以按照本領域已知的任何方式製備。口服製劑還可以含有甜味劑、調味劑、著色劑和防腐劑。
用於片劑形式的藥物可接受的賦形劑可以包括無毒成分，例如惰性稀釋劑，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉等。
在用於口服使用的片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米澱粉，而且通常加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對於膠囊形式的口服給藥，可用的載體包括乳糖和玉米澱粉。載體和賦形劑的其它非限制性例子包括牛乳、糖、某些類型的粘土、凝膠、硬脂酸或其鹽、硬脂酸鈣、滑石、植物脂肪或油、口膠和乙二醇。
可用於形成藥物組合物和本發明的劑型的表面活性劑包括但不限於親水性表面活性劑、親油性表面活性劑及其混合物。也就是說，可以使用親水性表面活性劑的混合物，可以使用親油性表面活性劑的混合物，或者可以使用至少一種親水性表面活性劑和至少一種親油性表面活性劑的混合物。
適當的親水性表面活性劑通常具有至少10的HLB值，而適當的親油性表面活性劑通常具有小於約10的HLB值。用於表徵非離子型兩性化合物的親水性和親油性的經典參數是親水-親油平衡(「HLB」值)。具有較低HLB值的表面活性劑親油性或疏水性更強，並且在油中的溶解性更大，而具有較高的HLB值的表面活性劑親水性更強，並且在水溶液中的溶解性更大。通常認為親水性表面活性劑為HLB值大於約10的那些化合物，以及HLB範圍通常不適用的陰離子、陽離子或兩性離子化合物。類似地，親油性(即，疏水性)表面活性劑為HLB值等於或小於約10的化合物。但是，表面活性劑的HLB值僅是常用於進行工業、藥物和化妝品乳液判斷的粗略的指導。
親水性表面活性劑可以為離子型或非離子型。適當的離子型表面活性劑包括但不限於烷基銨鹽；梭鏈孢酸鹽；胺基酸、低聚肽和多肽的脂肪酸衍生物；胺基酸、寡肽和多肽的甘油酯衍生物；卵磷脂和氫化卵磷脂；溶血卵磷脂和氫化溶血卵磷脂；磷脂及其衍生物；溶血磷脂及其衍生物；肉毒鹼脂肪酸酯鹽；烷基硫酸鹽；脂肪酸鹽；多庫酯鈉；醯基乳酸酯；單和二甘油酯的單和二乙醯基化酒石酸酯；琥珀醯化的單和二甘油酯；單和二甘油酯的檸檬酸酯；及其混合物。
在前面提及的組中，優選的離子型表面活性劑包括例如卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂、溶血磷脂及其衍生物；肉毒鹼脂肪酸酯鹽；烷基硫酸鹽；脂肪酸鹽；多庫酯鈉；醯基乳酸酯；單和二甘油酯的單和二乙醯基化酒石酸酯；琥珀醯化的單和二甘油酯；單和二甘油酯的檸檬酸酯；及其混合物。
離子型表面活性劑可以為卵磷脂、溶血卵磷脂、卵磷脂、腦磷酯、磷脂醯甘油、磷脂酸、磷脂醯絲氨酸、溶血磷脂醯膽鹼、溶血磷脂醯乙醇胺、溶血磷脂醯甘油、溶血磷脂酸、溶血磷脂醯絲氨酸、PEG-磷脂醯乙醇胺、聚乙烯吡咯烷酮-磷脂醯乙醇胺、脂肪酸乳酸鹽、硬脂醯-2-乳酸鹽、硬脂醯乳酸鹽、琥珀酸單甘油酯、單/二甘油酯的單/二乙醯化酒石酸酯、單/二甘油酯的檸檬酸酯、肌氨膽酸鹽、已酸鹽、辛酸鹽、癸酸鹽、月桂酸鹽、十四烷酸鹽、棕櫚酸鹽、油酸鹽、蓖麻醇酸鹽、亞油酸鹽、亞麻酸鹽、硬脂酸鹽、月桂烷硫酸鹽、四乙醯基硫酸鹽、多庫酸鹽、月桂醯肉毒鹼、棕櫚醯肉鹼、十四醯肉毒鹼，及其鹽和混合物。
親水性非離子型表面活性劑可以包括但不限於烷基糖苷；烷基麥芽糖苷；烷基硫糖苷；月桂醯聚乙二醇甘油酯；聚氧化烯烷基醚，例如聚乙二醇烷基醚；聚氧化烯烷基酚，例如聚乙二醇烷基酚；聚氧化烯烷基酚脂肪酸酯，例如聚乙二醇脂肪酸單酯和聚乙二醇脂肪酸二酯；聚乙二醇脂肪酸甘油酯；聚甘油脂肪酸酯；聚氧化烯山梨聚糖脂肪酸酯，例如聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯；多元醇與至少一個下組物質的親水性酯交換產物甘油酯、植物油、氫化植物油、脂肪酸和甾醇；聚氧乙烯甾醇，其衍生物和類似物；聚氧乙烯化維生素及其衍生物；聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；及其混合物；聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯，和多元醇與至少一個下組物質的親油性酯交換產物甘油三酸酯、植物油和氫化植物油。多元醇可以為甘油、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、丙二醇、季戊四醇或糖類。
其它親水性-非-離子型表面活性劑包括但不限於PEG-10月桂酸酯、PEG-12月桂酸酯、PEG-20月桂酸酯、PEG-32月桂酸酯、PEG-32二月桂酸酯、PEG-12油酸酯、PEG-15油酸酯、PEG-20油酸酯、PEG-20二油酸酯、PEG-32油酸酯、PEG-200油酸酯、PEG-400油酸酯、PEG-15硬脂酸酯、PEG-32二硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-20二月桂酸酯，PEG-25甘油基三油酸酯、PEG-32二油酸酯、PEG-20甘油基月桂酸酯，PEG-30甘油基月桂酸酯，PEG-20甘油基硬脂酸酯、PEG-20甘油基油酸酯、PEG-30甘油基油酸酯、PEG-30甘油基月桂酸酯、PEG-40甘油基月桂酸酯、PEG-40棕櫚仁油、PEG-50氫化蓖麻油、PEG-40蓖麻油、PEG-35蓖麻油、PEG-60蓖麻油、PEG-40氫化蓖麻油、PEG-60氫化蓖麻油、PEG-60玉米油、PEG-6癸酸酯/辛酸酯甘油酯、PEG-8癸酸酯/辛酸酯甘油酯、聚甘油基-10月桂酸酯，PEG-30膽甾醇、PEG-25植物甾醇、PEG-30大豆甾醇、PEG-20三油酸酯、PEG-40山梨聚糖油酸酯、PEG-80山梨聚糖月桂酸酯、多山醇酯20、多山醇酯80、POE-9月桂基醚、POE-23月桂基醚、POE-10油烯基醚、POE-20油烯基醚、POE-20硬脂醯基醚、兒茶酚基PEG-100琥珀酸酯、PEG-24膽甾醇、聚甘油基-10油酸酯、Tween 40、Tween 60、蔗糖單硬脂酸酯、乳糖單月桂酸酯、乳糖單棕櫚酸酯、PEG 10-100壬基酚同系物、PEG 15-100辛基酚同系物，和泊洛沙母。
僅作為舉例的形式，適當的親油性表面活性劑包括脂肪醇；脂肪酸甘油酯；乙醯基化甘油脂肪酸酯；低級醇脂肪酸酯；丙二醇脂肪酸酯；山梨聚糖脂肪酸酯；聚乙二醇山梨聚糖脂肪酸酯；甾醇和甾醇衍生物；聚氧乙烯化甾醇和甾醇衍生物；聚乙二醇烷基醚；糖酯；糖醚；單和二甘油酯的乳酸衍生物；多元醇與至少一個下組物質的疏水性酯交換產物甘油酯、植物油、氫化植物油、脂肪酸和甾醇；油溶性維生素/維生素衍生物；及其混合物。在該組中，優選的親油性表面活性劑包括脂肪酸甘油酯、脂肪酸丙二醇酯及其混合物，或者為多元醇與至少一個下組物質的疏水性酯交換產物植物油、氫化植物油和三甘油酯。
表面活性劑可以用在本發明的任何製劑中，只要其使用不會產生矛盾。在本發明的一些實施方案中，優選不使用或使用有限種類的表面活性劑。
當本發明的化合物製成口服給藥形式時，可能希望採用胃滯留製劑，用以提高胃腸(GI)道的吸收。在胃中停留若干小時的製劑可以緩慢釋放出本發明的化合物並且可以提供持續的釋放，這在本發明的一些實施方案中可能是優選的。這種胃滯留製劑的公開內容可以在下述文獻中找到Klausner，E.A.；Lavy，E.；Barta，M.；Cserepes，E.；Friedman，M.；Hoffman，A.2003「Novel gastroretentive dosage formsevaluation of gastroretentivity and its effect on levodopa in humans.」Pharm.Res.20，1466-73，Hoffman，A.；Stepensky，D.；Lavy，E.；Eyal，S.Klausner，E.；Friedman，M.2004「Pharmacokinetic andpharmacodynamic aspects of gastroretentive dosage forms」Int.-J.Pharm.11，141-53，Streubel，A.；Siepmann，J.；Bodmeier，R.；2006「Gastroretentive drug delivery systems」Expert Opin.Drug Deliver.3，217-3，和Chavanpatil，M.D.；Jain，P.；Chaudhari，S.；Shear，R.；Vavia，P.R.「Novel sustained release，swellable and bioadhesivegastroretentive drug delivery system for olfo×acin」Int.J.Pharm.2006epub 3月24。可以採用擴展、浮動和生物黏著技術來使本發明化合物的吸收率最大化。
鼻內給藥可以採用由本發明化合物組成的可呼吸的顆粒的氣溶膠懸浮液，其被患者吸入。經肺部吸收或經由鼻淚管而與淚囊組織接觸從而將藥物有效量的本發明化合物吸收到血液流中，隨後將其輸送到淚囊組織中。可呼吸的顆粒可以為具有適當粒度的固體或液體，如本領域已知的吸收有效的情況。吸入或吹入組合物包括藥物可接受的、水或有機溶劑的溶液和懸浮液或其混合物，和粉末。液體或固體組合物可以含有適當的如前所述的藥物可接受的賦形劑。優選，該組合物通過口服或鼻內呼吸途徑進行局部或系統給藥。可以使用惰性氣體對溶於優選的藥物可接受的溶劑中的組合物進行噴霧。可以從噴霧裝置直接吸入噴霧溶液，或者可以將噴霧裝置連接在面罩或間歇式正壓呼吸機上。可以從以適當形式輸送製劑的裝置中施用溶液、懸浮液或粉末組合物，優選通過口或鼻內形式。
對於經皮膚給藥，可以採用本領域已知的任何適當製劑，所述製劑為溶液、懸浮液、凝膠、粉末、乳膏、油、固體、二甲基亞碸(DMSO)-基溶液或用於貼劑的脂質體製劑或本領域已知的其它輸送體系。藥物組合物還可以包括適當的固體和凝膠相載體或賦形劑，其為具有下述作用的化合物能夠提高治療分子的透過性或者有助於治療分子的輸送，即透過皮膚角質層滲透障礙的透過性和輸送。對於局部製劑領域的熟練技術人員而言，有許多已知的滲透性-增強分子。這種載體和賦形劑的例子包括但不限於溼潤劑(例如，尿素)、乙二醇類(例如，丙二醇)、醇類(例如，乙醇)、脂肪酸(例如，油酸)、表面活性劑(例如，十四酸異丙酯和月桂基硫酸鈉)，吡咯烷酮、單月桂酸甘油酯，亞碸，萜烯(例如，薄荷醇)、胺類、醯胺類、鏈烷烴、烷醇、水、碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類、澱粉、纖維素衍生物、凝膠和聚合物，例如聚乙二醇。用於輸送藥物試劑的皮膚貼劑的組成和用途是本領域已知的。參見，例如，美國專利No.5,023,252、4,992,445和5,001,139。這種貼劑可以製成連續、脈動或按需輸送藥物試劑的形式。
對於局部給藥，如本領域中已知的，可以使用眼科領域使用的用於眼局部給藥的所有製劑(例如，滴眼液、插入物、眼罩(eye pack)、浸漬的隱形眼鏡、泵送體系、二甲基亞碸(DMSO)-基溶液懸浮液、脂質體和眼膏)，和皮膚科和耳鼻喉科領域使用的用於外部使用的所有製劑(例如，藥膏、乳膏、凝膠、粉末、油膏、洗液、晶體形式、泡沫和噴霧)。此外，可以使用用於局部給藥於皮膚和鼻部通道的黏液薄膜的所有適當製劑來輸送本發明的化合物。本發明的藥物組合物可以為用於局部或口服給藥的脂質體製劑，適合於本發明目的的任何一種形式都是本領域已知的。
可以用於形成本發明的藥物組合物和劑型的潤滑劑包括但不限於硬脂酸酯鈣、硬脂酸酯鎂、礦物油、輕礦物油、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇、其它二醇、硬脂酸、月桂基硫酸鈉、滑石、氫化植物油(例如，花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油)、硬脂酸鋅、油酸乙酯、月桂酸乙酯、瓊脂，或其混合物。其它潤滑劑包括，例如矽酸鹽矽膠、合成矽的凝結氣霧劑，或其混合物。任選以小於藥物組合物的約1重量％的量加入潤滑劑。
此外，預計可以將本發明的化合物可釋放地連接在用於持續釋放製劑的生物相容聚合物中，其中所述持續釋放型製劑位於用於局部或系統給藥的插入物上、內部或與其連接。可以採用水溶性聚合物從生物相容的聚合物中受控釋放，用以同樣形成可點滴的製劑。
可以將活性成分溶解在無菌水溶液，例如生理鹽水、緩衝溶液等中，或者在使用之前將粉末組合物結合進來並使其溶解而製得滴眼液。如本領域中已知的，還可以選擇其它載體，包括但不限於平衡鹽溶液、食鹽溶液、水溶性聚醚，例如聚乙二醇、聚乙烯，例如聚乙烯醇和聚乙烯基吡咯烷酮、纖維素衍生物，例如甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素、石油衍生物，例如礦物油和白礦脂、動物脂肪，例如羊毛脂，丙烯酸聚合物，例如羧基聚亞甲基凝膠、植物脂肪，例如花生油和多糖，例如右旋糖苷和葡糖胺聚糖基，例如透明質酸鈉。如果希望，還可以加入常用於滴眼液中的添加劑。這種添加劑包括等滲試劑(例如，氯化鈉等)，緩衝試劑(例如，硼酸、磷酸一氫鈉、磷酸二氫鈉等)，防腐劑(例如，苯扎氯銨、苄索氯銨、三氯叔丁醇等)，增稠劑(例如糖，如乳糖、甘露糖醇、麥芽糖等；例如透明質酸或其鹽，如透明質酸鈉、透明質酸鉀等；例如粘多糖，如硫酸軟骨素等；例如聚丙烯酸鈉、羧基乙烯基聚合物、交聯聚丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基纖維素，或本領域熟練技術人員已知的其它試劑)。
通過在組合物中使用表面活性劑或其它適當的共溶劑可以提高本發明組合物的組分溶解性。這種共溶劑包括多山醇酯20、60和80、Pluronic F68、F-84和P-103、環糊精或本領域熟練技術人員已知的其它試劑。所用的這種共溶劑的水平可以為約0.01％-2％重量。
可以將本發明的組合物製成不含防腐劑的無菌單元劑型。可以將本發明的組合物包裝為多劑量形式。優選在使用過程中採用防腐劑來防止微生物汙染。適當的防腐劑包括苯扎氯銨、硫汞撒、三氯叔丁醇、甲基帕拉貝、丙基帕拉貝、苯乙醇、依地酸鈣鈉、山梨酸、OnamerM，或本領域熟練技術人員已知的其它試劑。在現有技術的眼用產品中，這種防腐劑的使用水平為0.004％-0.02％。在本申請的組合物中，防腐劑，優選苯扎氯銨的使用水平為0.001％-小於0.01％，例如0.001％-0.008％，優選約0.005％重量。已經發現，0.005％的苯扎氯銨濃度足以使本發明的化合物防止微生物的侵襲。
用於本發明中的活性成分的給藥量和給藥次數根據病人的性別、年齡和體重、治療症狀、希望的治療效果、給藥途徑和治療周期而變化。對於成人用滴眼液來說，含有本發明化合物的製劑的濃度可以為約0.0001-10.0 W/V％、約0.005-10.0 W/V％、約0.01-10.0 W/V％、約0.05-10.0 W/V％、約0.1-10.0 W/V％、約0.5-10.0 W/V％、約1.0-10.0 W/V％、約20-10.0 W/V％、約3.0-10.0 W/V％、約4.0-10.0 W/V％，或約5.0-10.0 W/V％。本發明一個實施方案的製劑具有約1.0-10.0 W/V％的本發明化合物。本發明一個實施方案的製劑具有約0.01-10.0 W/V％的本發明化合物。本發明一個實施方案的製劑具有約5.0-10.0 W/V％的本發明化合物。給藥方式可以為每日每隻眼施用若干次，優選1-10次，更優選1-4次，最優選每日1次。給藥的液滴大小可以為約10-100μl、約10-90μl、約10-80μl、約10-70μl、約10-60μl、約10-50μl、約10-40μl、約10-30μl、約20-100μl、約20-90μl、約20-80μl、約20-70μl、約20-60μl、約20-50μl、約20-40μl或約20-30μl。本發明的一個實施方案給藥10-30μl的滴眼液。本發明的一個實施方案給藥10-100μl的滴眼液。本發明的一個實施方案給藥20-50μl的滴眼液。本發明的一個實施方案給藥10-60μl的滴眼液。
本發明的製劑可以每次給藥若干滴，1-4滴，優選1-3滴，更優選1-2滴，最優選每日1滴。
在軟膏、乳膏、洗液或噴霧製劑中，製劑中的本發明化合物的濃度可以為約0.0001-10.0 W/V％、約0.005-10.0 W/V％、約0.01-10.0W/V％、約0.05-10.0 W/V％、約0.1-10.0 W/V％、約0.5-10.0 W/V％、約1.0-10.0 W/V％、約20-10.0 W/V％、約3.0-10.0 W/V％、約4.0-10.0 W/V％，或約5.0-10.0 W/V％。本發明一個實施方案的製劑具有約1.0-10.0 W/V％的本發明化合物。本發明一個實施方案的製劑中含有約0.01-10.0 W/V％的本發明化合物。本發明一個實施方案的製劑中含有約5.0-10.0 W/V％的本發明化合物。這些製劑可以每日施用或噴霧若干次，優選1-6次，更優選1-4次，最優選每日1次。可以根據炎症或感染的程度適當提高和降低每種成分的化合比例。
本發明的製劑可以進一步包括其它藥物活性成分，只要其不與本發明的目的相矛盾。在多種活性成分相結合的情況下，考慮到其效果和安全性可以適當提高或降低其各自的含量。
V.試劑盒 本發明還提供試劑盒。試劑盒包括適當包裝的本發明的化合物，和可以包括使用說明、臨床研究討論、副作用列表等的書寫材料。試劑盒還可以進一步含有與本發明的LFA-1共施用的另一種治療試劑。在一些實施方案中，將該治療試劑和本發明的LFA-1拮抗劑作為在試劑盒的分隔容器內的分開組合物來提供。在一些實施方案中，將該治療試劑和本發明的LFA-1拮抗劑作為試劑盒容器內的單一組合物來提供。適當的包裝和其它使用物件(例如，用於液體製劑的量杯、使在空氣中的暴露最小化的鋁箔包裝、配藥器等)是本領域已知的，其也可以包括在試劑盒中。
VI.可用於本發明治療方法中的新化合物的確定方法 A.試驗方式背景 1.配體親合力對二價陽離子的依賴性 二價陽離子在整聯蛋白/配體的結合中起至關重要的作用，而且其存在對於這些相互作用的試驗研究是必需的。參見Hynes，R.O.1992.IntegrinsVersatility，modulation，and signaling in cell adhesion，Cell，6911-25；Humphries，M.J.1996.Integrin activationthe link betweenligand binding and signal transduction，Curr.Op.Cell Biol.，8632-640.在兩組常用的二價陽離子條件下，使用螢光偏振測量ICAM-I-Ig和化合物1、3和4對LFA-1(結構如表4所示)的親合力。首先在直接結合試驗中測量化合物1對LFA-1的親合力，然後在與親合LFA-1的化合物1進行競爭的條件下測量ICAM-I-Ig和化合物3和4對LFA-1的親合力(圖4和圖5中的表1)。未對結合在IDAS上的A-286982的親合力進行測量，因為其不與結合在LFA-1上的化合物發生競爭(參見下文)。在對於ICAM-I-Ig而言的不同的陽離子條件下測量化合物1、3和4對LFA-1的親合力的類似變化。在MnCl2存在下測得的小分子親合力是在CaCl2和MgCl2存在下測得的親合力的至少10倍。不存在二價陽離子時這些小分子不與LFA-1結合(數據未給出)。類似地，在MnCl2存在下以同樣方法測量在溶液中可溶性蛋白，ICAM-I-Ig對LFA-1的結合親合力，其比在CaCl2和MgCl2存在下的親合力至少好4倍。因此，與包括A-286982的LFA-1拮抗劑類型不同，A-286982已知與結構域I的IDAS區域結合(Liu，G.，Huth，J.R.，Olejniczak，E.T.，Mendoza，R.，DeVries，P.，Leitza，S.，Reilly，E.B.，Okasinski，G.F.，Fesik，S.W.，和von Geldern，T.W.2001.Novel p-arylthiocinnamides as antagonists of leukocyte function-associatedantigen-1/intracellular adhesion molecule-1 interaction.2.Mechanism ofinhibition and structure-based improvement of pharmaceuticalproperties，J.Med.Chem.，441202-1210.，Huth，J.R.，Olejniczak，E.T.，Mendoza，R.，Liang，H.，Harris，E.A.S.，Lupher，M.L.Ir.，Wilson，A.E.，Fesik，S.W.，和Staunton，D.E.2000.NMR andmutagenesis evidence for an I domain allosteric site that regulateslymphocyte function-associated antigen 1 ligand binding，Proc.Natl.Acad.ScL U.S.A.，975231-5236.)，而且據報導其以非陽離子-依賴型方式與LFA-1結合(Welzenbach，K.，Hommel，U.，和Weitz-Schmidt，G.2002.Small molecule inhibitors induce conformational changes in the Idomain and the I-like domain of lymphocyte Function-AssociatedAntigen-1，J.Biol.Chem.，27710590-10598)，ICAM-I-Ig和由化合物1-4代表的LFA-1類拮抗劑共享一個對LFA-1結合敏感的二價陽離子(表1)。因此，為了確定以類似方式與ICAM-I-Ig和化合物1-4結合的LFA-1/ICAM-I拮抗劑，在MnCl2存在下，在類似條件下進行本文中報導的所有結合試驗，已知其可以使ICAM-I和這些陽離子-敏感拮抗劑的結合都達到最大化。
2.化合物5對LFA-1αL亞基的交聯 為了確定小分子拮抗劑的結合點，將化合物5、化合物3的氚-標記的光激活類似物結合在LFA-1上，之後進行光致交聯。為了使特定的、高親合力交聯作用最大化，必須用凝膠過濾樣品，用以在輻射之前除去未結合或弱結合的化合物5(圖6，通道e對f，和g對h)。不進行凝膠過濾則化合物5對LFA-1α亞基、β亞基和雜二聚物具有顯著的交聯作用(約200,000的帶)，而在凝膠過濾試樣中不會觀察到非特定的交聯作用(數據未示出)。在凝膠過濾條件下，化合物5具體地只與αL亞基發生交聯(圖6，泳道c和g)。而且，在溫育過程中化合物3的存在會充分降低氚對αL亞基的結合(圖6，道e對g)。類似地，在不進行凝膠過濾的條件下，化合物3的存在會使氚結合入αL亞基、β2亞基和雜二聚體的情況下稍微減少(圖6，泳道fVs.h)。當使用分離出來的、結構完好的αL或β2亞基的凝膠過濾試樣時，沒有發生化合物5的交聯(數據未示出)。因此，藉助LFA-1雜二聚體提供了在凝膠過濾之後所必需的高親合力結合位。在分離出來的αL亞基中高親合力位的缺少與之前的、表明xVA143與分離出來的結構域I之間缺少相互作用的研究(Welzenbach等，2002)相一致。
通過下述方式進一步定義交聯位用羥胺打碎親合標記的αL亞基，用電泳法分離該片段，然後在放射性同位素標記的片段上進行N-末端排序，用以確定其在蛋白質序列中的位置。確定兩個序列，第一個從殘基1開始(實際序列YNLDVRGARSFS)，第二個從殘基30開始(實際序列GVIVGAPGEGNST)(Larson，R.S.，Corbi，A.L.，Berman，L.，和Springer，T.1989.Primary structure of the leukocytefunction-associated molecule-1 alpha subunitan integrin with anembedded domain defining a protein superfamily，J.Cell Biol，.108703-712)。在SDS-PAGE(50-60 kDa)上對其大小進行確定，兩種肽均為約500個胺基酸長；該片段大小與接下來的兩個預測的羥胺裂解位(N-G)，N507和N530相一致(Larson等，1989，Bornstein，P.1969.Thenature of a hydroxyamine-sensitive bond in collagen，Biochem.Biophys.Res.Comm.，36957-964)。未將標記結合在亞基一半處的C-末端上。試圖對交聯位作進一步改進，但是並未成功。用溴化氰或Lys-C對標記的αL亞基進行有限地消化之後，不能重新獲得可定義的肽。
3.化合物2B與缺少結構域I的LFA-1的結合 通過製備缺少結構域I的αL構建體來說明結構域I在化合物2B和相關的類似物與LFA-1的結合中的作用。將單獨的β2構建體(模擬物)或與缺少結構域I的構建體或野生型αL結合在一起的β2構建體轉染到293細胞中，並且考察化合物2B對轉染細胞的結合(圖7)。化合物2B顯示出對野生型αL轉染細胞的充分的結合力，但是也說明與對於模擬(B2)轉染細胞的結合力相比，其對於被缺少結構域I的αL轉染的細胞沒有顯著的結合力。還對轉染物對於ICAM-I-Ig的黏著能力進行了試驗，正如所預計的，缺少結構域I的LFA-1轉染細胞和模擬轉染物顯示出沒有區別的背景結合水平，而野生型αL轉染細胞顯示出很強的黏著力(圖7B)(Yalamanchili，P.，Lu，C，Oxvig，C和Springer T.A.2000.Folding and function of I domain-deleted Mac-1 andlymphocyte function-associated antigen-1，J.Bio1.Chem.，27521877-21882)。對一組LFA-1抗體對轉染細胞的結合力的評價顯示，除了對應於結構域I的抗體的結合損失之外，在缺少αL結構域I的轉染細胞中的LFA-1雜二聚體看起來是不受影響的(數據未示出)。
數據支持下述結論化合物3和相關分子結合至LFA-1上的高親合力位上，該位置與ICAM-I結合位重疊，且之前已經顯示ICAM-I結合位包括在LFA-1αL亞基內的結構域I上的MIDAS基序(Shimaoka，M.，xiao，T.，Liu，J.-H.，Yang，Y.，Dong，Y.，Jun，C-D.，McCormack，A.Zhang，R.，Joachimiak，A.，Takagi，J.，Wang，J.-H.，和Springer，T.A.2003a.Structures of the alpha L I domain and itscomple×with ICAM-I reveal a shape-shifting pathway for integrinregulation，Cell，11299-111.)。
從刪除ICAM-I-Ig與化合物2B結合處的結構域I的一般效果中可以看出，有確鑿證據表明ICAM-I和小分子拮抗劑在LFA-1上的結合位極其相近。化合物2B和ICAM-I都不能結合至缺少結構域I的LFA-1上，而ICAM-I的結合位就位於該結構域中。而且，A-286982對於ICAM-I-Ig與化合物2B的結合的變構改進能力與下述情況一致其結合位與LFA-1α亞基I域內的IDAS基序內的A-286982結合位極其相近(Liu，G.2001b.Small molecule antagonists of the LFA-1/ICAMrI interaction as potential therapeutic agents，E×pert Opin.Ther.Patents，1113 83-1393，Liu等，2001)。化合物5與LFA-1α鏈的選擇性光化學結合作用使其結合位局限在該亞基的殘基30-507中。上面提到的所有發現都與位於LFA-1α鏈的結構域I內的單一的高親合力小分子相一致。
利用較高濃度的化合物5(4.1μM，圖6)進行光化學交聯研究的密切考察，其提供直接證據表明在LFA-1上具有另外的低親合力小分子結合位。在存在和不存在凝膠過濾的情況下觀察到大大不同的蛋白質和交聯特性曲線。當在輻射之前對樣品進行凝膠過濾以除去未結合或弱結合的分子時，只觀察到高親合力標記的α亞基。但是，在不存在凝膠過濾步驟的情況下，對化合物5與LFA-1的複合物進行輻射後導致其以高強度交聯至α亞基上，並以較低強度交聯至β亞基中的低親合力結合位上，該亞基與化合物5的複合情況太弱以致於不能經歷凝膠過濾。在兩種情況下，觀察到的交聯都部分受到大量過量的(290μM)化合物3的抑制(圖6，道e和g，f和h)，其說明了與兩個位置的結合的特殊性質。試圖將化合物5結合至分離出來的α或β亞基上，但是未能提供能夠經過凝膠過濾過程的高親合力複合物。因此，可以看出化合物3代表的化合物類型的高親合力競爭性結合需要存在完整全長的LFA-1雜二聚體。試圖獲得在LFA-1亞基或分離出來的結構域I構造內的該結合位，結果導致LFA-1對於ICAM-I和化合物3的小分子類似物(例如，xVA143)的親合力減小(Shimaoka，M.，Lu，C，Palframan，R.T.，von Andrian，U.H.，McCormack，A.，Takagi，J.，和Springer，T.A.200 1.Reversibly locking a protein fold in an activeconformation with a disulfide bondintegrin alphaL I domains with highaffinity and antagonist activity in vivo，Proc.Natl.Acad.Sci，美國，986009-6014.，Welzenbach等，2002)。尤其有趣的是可以看到少量LFA-1雜二聚體的存在，其通常出現在不存在凝膠過濾的情況下(圖6，＞200,000道爾頓的帶)。根據考馬斯藍染色和放射自顯影術的判斷，LFA-1帶的強度與在使雜二聚體穩定化的β鏈上的第二位具有的低親合力相一致。
公開的凝膠穩定化研究顯示(Shimaoka，M.，Salas，A.，Yang，W.，Weitz-Schmidt，G.和Springer，T.2003b.Small molecule integrinantagonists that bind to the β2 subunit I-like domain and activate signalsin one direction and block them in another，Immunity，19391-402，Salas，A.，Shimaoka，M.，Kogan，A.N.，Harwood，C，von Andrian，U.H.，和Springer，T.A.，2004.Rolling adhesion through an extendedconformation of integrin αLβ2 and relation to α I and β I-like domaininteraction，Immunity，20393-406，Yang，W.，Shimaoka，M.，Salas，A.，Takagi，J.，和Springer，T.A.2004.Intersubunit signal transmissionin integrins by a receptor-like interaction with a pull spring.PNAS，1012906-2911)，對LFA-1至SDS-PAGE的穩定化負責的結合位位於β亞基的類似結構域I區域中。本文中提供的數據顯示該β亞基結合位與α亞基內的高親合力結合位沒有關聯，而α亞基內的高親合力結合位對直接的競爭性抑制ICAM-I結合負責。但是，通過化合物3而對LFA-1穩定化作用負責的β亞基結合位可以與我們觀察到的低親合力β亞基交聯位相同。
總而言之，本文中提供的交聯和結合試驗的結果指出，本文中所用的LFA-1類小分子拮抗劑探針具有兩個不同的結合位。第一個是位於LFA-1 αL亞基內的高親合力結合位，通過該結合位小分子與LFA-1形成足夠穩定以經歷凝膠過濾過程的複合物(例如，Kd＜25 nM)。此處報導的結合試驗對這個小分子結合位進行了表徵，表明其與ICAM-I結合位重疊並且與下述作用相關通過化合物3和4有效抑制LFA-1/ICAM-I的結合(化合物4的IC50＝1.4 nM)；其在體外對LFA-1的有效抑制作用誘使淋巴細胞增殖(化合物4的IC50＝3 nM)；而且其在體內抑制免疫系統的響應(Gadek等，2002)。第二個位點是β亞基內的低親合力結合位(例如，Kd＞1μM)，其在SDS-PAGE作用下參與LFA-1雜二聚體的穩定化。該位點的性質更加活躍(即，更快的解離速率)，而且不能經歷凝膠過濾/光解過程。該第二低親合力位的特徵與最近描述的在β亞基的I-類域內的α/β I-類變構拮抗劑結合位相一致(Welzenbach等，2002，Shimaoka等，2003b，等，2004，Yang等，2004)。本文中描述的ICAM-I模擬物在LFA-1β亞基(假設為類似結構域I的結構域)上的低親合力結合很可能是由於I和結構域I類似結構域之間的序列同源性，尤其是在下述情況時MIDAS基序與其對於這類拮抗劑中常有的羧酸部分的親合力具有類似性。假設包括MAC-I的β2族整聯蛋白共用該亞基，則為了選擇特定用於LFA-1的拮抗劑，化合物對於β2亞基的類似結構域I的結構域的親合力必須衰減(Keating，S.，Marsters，J.，Beresini，M.，Ladner，C，Zioncheck，K.，Clark，K.，Arellano，F.，和Bodary，S.2000.Putting the pieces togetherContribution of fluorescence polarization assays to small molecule leadoptimization，SPIE Proceedings，3913128-137)。
上述試驗證實了化合物3和4對於LFA-1具有高親合力，結合方式與ICAM-I相似，結合位與包括LFA-1亞基結構域I內的MIDAS基序的ICAM-I結合位重疊(Shimaoka，M.，xiao，T.，Liu，J.-H.，Yang，Y，Dong，Y.，Jun，C-D.，McCormack，A.Zhang，R.，Joachimiak，A.，Takagi，J.，Wang，J.-H.，和Springer，T.A.2003a.Structures of thealDha L I domain and its complex with ICAM-I reveal a shape-shiftingpathway for integrin regulation，Cell，11299-111)。該現象與提出的對其ICAM-I表位的模擬相一致(Gadek等，2002)，而且與具有下述內容的任何結論都不一致其功能是作為LFA-1/ICAM-I的α/β類I變構拮抗劑(Shimaoka等，2003b，Shimaoka，M.，和Springer，TA.2004.Therapeutic antagonists and the conformational regulation of the β2integrins，Curr.Topics Med.Chem.，41485-1495)。這些ICAM-I模擬物對β2整聯蛋白亞基的結合雖然只有較低的親合力，但是其提出了如下問題作為反饋機理的一部分，ICAM-I本身是否結合至類I結構域內的第二位點上(Welzenbach等，2002，Shimaoka等，2003b，Salas等，2004，Yang等，2004，Shimaoka和Springer 2004)。本發明中所用的試驗細節為為了確保形成LFA-1的活性構象而對二價陽離子提出的要求，和對於探針分子1-5、已知的LFA-1調節劑與ICAM-I直接進行競爭所進行的物理證實，通過這些試驗細節形成了確定新的拮抗劑的方法，所述新拮抗劑為直接競爭性LFA-1拮抗劑。該方法可用於確定新的LFA-1拮抗劑，該方法將被用在本發明的治療乾眼病的方法中。
之前已經顯示，小分子可以以高親合力結合至α-L亞基上，這相對於LFA-1而言是獨一無二的。因此，這些化合物可以選擇性用於LFA-1(αLβ2)而非Mac-1(αMβ2)。本發明的一個優選實施方案是確定和使用選擇性的LFA-1抑制劑，其可以帶來治療安全性方面的優越性。
B.試驗方法競爭性結合試驗 1.拮抗劑在LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISA中的競爭 使用化合物2A和3、A-286982和sICAM-1來說明該方法。為了說明對於ICAM-I-Ig與LFA-1的結合的抑制作用，將這些拮抗劑滴定至LFA-1/ICAM-1 ELISA中。通過加入1/5系列稀釋的化合物3(-●-)、化合物2A(-▲-)、A-286982(-◆-)和sICAM-1(--)來進行試驗，在含有捕獲的LFA-1的板上用CAM-1-Ig(A)或化合物2B(B)對其進行培養。顯示的數據是來自單個試驗的兩個板的平均值，其是若干個獨立測量的代表結果。實線是數據的擬合值。在圖例中提供了IC50值(nM)。
圖8A中顯示了針對ELISA中的這些抑制劑的典型競爭曲線。化合物3有效抑制ICAM-I-Ig與LFA-1的結合，其IC50為2nM。化合物2A、化合物3的類似物也抑制結合，但是其IC50值約高出10倍。A-2869S2和sICAM-1抑制ICAM-I-Ig與LFA-1的結合，但是IC50值比化合物3高出100倍。
還說明了這些相同化合物對於FITC標記的小分子拮抗劑、化合物2B與LFA-1的結合的抑制能力(圖8B)。化合物2A和3以及可溶的ICAM-I作為化合物2B的結合抑制劑的效力與其作為ICAM-I-Ig的結合抑制劑的效力類似。化合物3、化合物2A和sICAM-1抑制化合物2B與LFA-1的結合，其IC50值分別為3，56和1200 nM。吸收值經歷短暫提高-在約4μM處達到最大值，之後降低，這說明A-286982不能抑制而是提高化合物2B對LFA-1的結合。
將對於LFA-1/小分子和LFA-1/ICAM-1 ELISAs中的IC50值的評價擴展到更大的化合物組中，所述化合物組包括蝮蛇毒素衍生的肽和代表該LFA-1小分子拮抗劑類的小分子(Gadek等，2002)。如圖9所示(由LFA-1ICAM-I和LFA-1小分子ELISAs中的拮抗劑競爭而得的IC50值關係)，將與化合物2B競爭的多組化合物的IC50值(4種肽，5個小分子和sICAM-1)相對於與ICAM-I-Ig和LFA-1的結合進行競爭而確定的IC50值進行作圖。圖的斜率為0.964，y-截距為0.237且R＝0.940。每個數據點為來自兩個板的IC50值平均值，在該多組化合物的兩個配體結合試驗中，每個配體的競爭IC50值之間具有良好的關聯(R＝0.94)，該關聯特性曲線經歷5個效力對數單位，其中所述多組化合物包括sICAM-1、化合物2A和3。相競爭的兩個拮抗劑ELISAs和ICAM-I-Ig與作為配體的化合物2B之間的一般效力趨勢說明每個化合物都按照類似的機械方式中斷ICAM-I和小分子配體的結合。該類似的抑制效力說明ICAM-I-Ig和化合物2B都結合在LFA-1上的相同位點上(Wong，A.，Hwang，S.M.，Johanson，K.，Samanen，J.，Bennett，D.，Landvatter，S.W.，Chen，W.，Heys，J.R.，AIi，F.E.，Ku，T.W.，Bondinell，W.，Nichols，A.J.，Powers，D.A.，和Stadel，J.M.1998.Binding of[3H]-SK&F 107260 and[3H]-SB 214857 topurified integrin alphallbbeta3evidence for a common binding site forcyclic arginyl-glycinyl-aspartic acid peptides and nonpeptides，J.Pharmacol.Exp.Therapeutics，285228-235)。
2.結合在LFA-1/ICAM-I和LFA-1/小分子ELISAs上的配體的拮抗劑調節 通過與目標配體直接競爭而產生抑制作用的拮抗劑顯示出如下性質當拮抗劑濃度增大時，其在配體結合曲線中經不可飽和的向右遷移而移到較高的表觀EC50值處，而且不使配體的最大結合值減小(Lutz，M.，和Kenakin，T.1999.Quantitative Molecular Pharmacology andInformatics in Drug Discovery，John Wiley & Sons，Ltd.，New York，Pratt，W.B.，和Taylor，P.1990.Principles of Drug Action；The Basis ofPharmacology，Churchill Livingstone，New York Matthews，J.C.1993.Fundamentals of Receptor，Enzyme，and Transport Kinetics，CRC Press，Boca Raton，Kenakin，T.1997.Pharmacologic Analysis of Drug-ReceptorInteraction，Lippincott-Raven，Philadelphia)。可以克服這種抑制作用，但是需要在提高直接競爭的抑制劑濃度的條件下提高配體的量(Gaddum，I.H.，Hameed，K.A.，Hathway，D.E.，和Stephens，F.F.1955.Quantitative studies of antagonists for 5-hydroxytryptamine，Q.J.Exp.Physiol.，4049-74)。圖10顯示了直接競爭的化合物3、A-286982和sICAM-1對於ICAM-I-Ig和化合物2B與LFA-1相結合所得的曲線的影響，其為顯示直接競爭作用的拮抗劑的例子。在不存在(-◇-)或存在拮抗劑的條件下將ICAM-I-Ig(A，C，E)或化合物2B(B、D、F)滴定至LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISAs中。加入稀釋了2倍的拮抗劑，起始濃度為2.4(A)和2.7(B)μM的sICAM-1，0.040(C)和0.10(D)μM的化合物3和20(E)和50(F)μM的A-286982。拮抗劑濃度的數量級為，-□-(加入的最低拮抗劑濃度)，-△-，-○-，-◆-，-■-，-▲-至-●-(最高的拮抗劑濃度)。該組數據如實線所示。所示數據都來自一個板，並且代表兩個試驗的最小值。(注意A-286982(F)導致化合物2B對LFA-1的結合力增大)。相反，變構抑制劑可以通過減小最大結合力或使曲線的向右飽和位移減小來改變配體的結合曲線。(Lutz和Kenakin 1999，Matthews 2993)。如圖10A所示，增大的sICAM-1濃度明顯使ICAM-I-Ig結合曲線向右移至較高的EC50值處。此外，正如預期的，當相同的天然配體的兩種分子形式直接競爭於結合在受體的一個位置上時，在存在和不存在sICAM-1的條件下觀察到相同的ICAM-I-Ig至LFA-1的最大結合程度(Lutz和Kenakin 1999，Pratt，W.B.，和Taylor，P.1990.Principles of Drug ActionThe Basis ofPharmacology，Churchill Livingstone，New York，Matthews 1993，Kenakin，T.1997.Pharmacologic Analysis of Drug-Receptor Interaction，Lippincott-Raven，Philadelphia)。類似地，化合物3濃度的增大還會使ICAM-I-Ig的結合遷移至較高的EC50值，並使ICAM-I-Ig的最大結合發生最小的變化(圖10C)。雖然在競爭性拮抗劑存在下，在配體結合曲線中的向右遷移通常是平行的，但情況並非總是如此(Coultrap，S.J.，Sun，H.，Tenner，T.E.Jr.，和Machu，T.K.1999.Competitiveantagonism of the mouse 5-hydroxytryptamine3 receptor bybisindolylmaleimide I，a″selective″protein kinase C inhibitor，Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics.29076-82)。在存在或不存在化合物3的條件下，LFA-1/ICAM-I-Ig結合曲線的非平行斜率可能是因為在異種配體結合的ELISA條件下其不能實現與該化合物的完全平衡。在LFA-1/化合物2B形式的配體結合的ELISA中，化合物3濃度的增大明顯地使化合物2B的結合曲線向右遷移至較高的EC50值處，並且不使最大結合力減小(圖10D)。sICAM-1濃度的增大也顯示出類似的作用(圖10B)，雖然在曲線中的遷移程度受到在2.7μM處可獲得的最大sICAM-1濃度的限制。因此，sICAM-1和化合物3對ICAM-I-Ig和化合物2B至LFA-1的結合的影響就是如上所述的直接競爭的特徵。
A-286982對ICAM-I-Ig和化合物2B至受體的結合的影響則明顯不同(圖10E和10F)。在LFA-1/ICAM-1 ELISA中，ICAM-I-Ig曲線向右遷移至較高的EC50值處；但是，隨著A-286982濃度增大，ICAM-I-Ig至LFA-1的最大結合顯著降低。隨著A-286982濃度的增大，最大結合力和配體結合曲線的向右遷移也減小，該減小即是如上所述的變構抑制作用的反映。A-286982使配體親合力和結合能力都減小(Lutz，M.，and Kenakin，T.1999.Quantitative MolecularPharmacology and Informatics in Drug Discovery，John Wiley & Sons，Ltd.，New York，Matthews 1993)；這說明A-286982是一種不能克服的ICAM-I-Ig結合拮抗劑。相反，在LFA/小分子ELISA中，微摩爾濃度的A-286982的存在使化合物2B的結合曲線遷移至較低的EC50值處，並且顯示可以增強化合物2B至LFA-1的結合(圖10F)。A-286982對化合物2B和ICAM-I-Ig的結合的作用差異可能是由於已知的結合至LFA-1 IDAS位上的化合物的變構作用引起的。在闡述該方法的結合試驗中，A-286982結合數據用以說明對於小分子和結合至LFA-1上的蛋白配體的變構抑制作用。
Schild分析法還可以用於研究化合物是否通過競爭一個結合位而抑制配體的結合(Lutz and Kenakin 1999，Pratt和Taylor 1990，Matthews1993，Kenakin 1997，Coultrap 1999)。該模型基於下述假設在試驗中同等活性的反應是配體佔據等量受體的結果，而且拮抗劑的存在並不改變最大結合。在Schild分析法中，劑量比為存在或不存在拮抗劑時的EC50值的比，而且其是產生等活性響應的配體濃度的量度。針對各個拮抗劑的濃度確定該劑量比，並且如圖11所示，對Schild回歸進行作圖。在Schild回歸中，斜率為1的線性響應表示拮抗劑的抑制作用是直接競爭和不可逆的(Lutz和Kenakin 1999，Kenakiα 1997)。在不會使最大結合減小的變構抑制劑的情況下，Schild分析法會產生非線性關係和/或顯著偏離1的斜率(Lutz和Kenakin 1999，Kenakin1997)。圖11中顯示了sICAM-1和化合物3的Schild回歸，其可比的斜率分別為1.26和1.24。根據圖5(A)和(C)的數據，分別對s-ICAM-1 (-▲-)和化合物3(-●-)在LFA-1/ICAM-1配體結合的ELISA中的拮抗作用進行Schild回歸作圖。化合物3的斜率為1.24，y-截距為10.9且R＝0.99832。sICAM-1圖的斜率為1.26，y-截距為8.51且R＝0.99131。雖然Schild分析法需要斜率接近1的線性回歸，用以說明直接的競爭抑制作用，但是大量文獻中並沒有指出何種範圍是可以接受的Schild值。斜率1.24和1.26落入了許多公開的用於支持競爭性結合結論的Schild值內，因此，這些斜率值並不被認為是顯著不同於1。回歸圖的線性和斜率關係的類似性與配體(ICAM-I-Ig)的結合相一致，而且兩種拮抗劑(sICAM-1和化合物3)以相同方式結合至同一位置上。
上述結合試驗和所討論的分析法用於形成確定直接競爭性LFA-1抑制劑的方法。使用一種或多種本文中描述的試驗類型可以對潛在的直接競爭性治療試劑進行研究，用以確定該有益試劑是否確實與已知的天然和合成配體形成競爭，從而在ICAM-1進行結合的相同的LFA-1位上結合。因此，直接競爭性拮抗治療劑被確定為可用於本發明的方法中，用以治療需要對由LFA-1及其與ICAM-I的相互作用介導的炎性病症進行治療的病人。
VII.確定可用於治療人類疾病的化合物的方法 本文中描述了一種精細的研究方法，其使用細胞增長的siRNA(小分子幹擾RNA序列)抑制特性曲線來確定在一組培養的細胞系中具有類似的細胞增長特性曲線的化合物，其中所述siRNA指向參與細胞增長和人類疾病的細胞靶標。人們希望使用siRNA數據，因為siRNA使靶標基因靜止並且直接與由該靶標產生的細胞增長抑制作用相聯繫。因此，siRNA數據可用於將對靶標功能的抑制與對細胞增長的抑制關聯起來。以此方式確定的化合物可以用於治療人類疾病。
圖12為用於鑑定用以治療人類疾病的化合物的流程圖，所述鑑定過程使用siRNA生長抑制數據。
該方法包括選擇參與細胞生長並含有所述靶標的細胞靶標(例如，蛋白質或其它二元共聚物，而且其形成受到基因轉錄和/或轉譯的控制)，所述靶標的抑制作用可用於控制細胞生長。可以從包括科學文獻的公開物中的這種靶標列表中進行選擇，其包括酶、受體和參與蛋白質-蛋白質相互作用的蛋白質。一種該可用的靶標是β-連環蛋白與TCF族蛋白，例如TCF-4的締合。這些蛋白質位於Wnt路徑中並且參與多種人體腫瘤包括常見癌的生長和增殖。與β-連環蛋白結合併阻擋其與TCF-4結合的化合物可用於阻止所選基因的轉錄和人體癌，尤其是結腸癌內的腫瘤的生長。靶標獨有的小的幹擾RNA(siRNA)序列可購自商業供應商，例如Dharmacon，Boulder CO。從NationalCancer Institute獲得60個與癌(例如，衍生自結腸和乳腺的NCI細胞系)和/或炎症(例如，NCI白血病細胞系)有關的細胞系，在增大量的、指向靶標的siRNA存在下使這些細胞系生長，直到細胞生長受到抑制為止。可選地，單一濃度的siRNA可以用於拮抗所有細胞系，而且可以測量對細胞生長的相對抑制。生長依賴於靶標的存在的細胞系將受到抑制，而其它細胞系的依賴性可能較小，因此其生長會受到較小的抑制。因此，對NCI的60細胞系組的抑制會產生對於各個siRNA和試驗靶標的一種生長抑制。預計使用不普遍存在於NCI-60細胞系組的細胞系也是該方法的一部分。此外還預計諸如LipofectinTM，LipofectamineTM等的試劑可以調節siRNA至細胞的輸送。可以使用NCI的COMPARE程序搜索所得的劑量滴定化合物對於該60個細胞系的生長的NCI影響數據，或者用以確定具有類似活性特性曲線的化合物(例如，與未抑制的生長相比，以50％比例抑制細胞生長的化合物的濃度，化合物的GI50值)。可以通過統計或其它方法對該類似性進行定量，所述其它方法包括用在NCI COMPARE程序中的Pearson相關性。可以將不同於NCI COMPARE的其它檢索算法用於定義化合物與siRNA的類似性。可以通過網際網路在線分析從NCI獲得數據，或者可以將其下載到計算機或計算機網絡上並進行離線分析。其它資料庫包括將化合物結構與其細胞生長抑制性結合起來的公用和私人資料庫，這些資料庫也可以用於本發明的目的中。對於每個靶標而言，當某化合物的生長活性模式與由siRNA試驗產生的生長抑制的模式類似時，該化合物應具有常見的亞結構特徵(例如，苯基、羧基、氫鍵供體基團等)，該特徵可以定義結構活性關係(SAR)。藥物研發領域的熟練藥劑師通常使用這種SAR關係，用以將拮抗靶標的化合物的活性與常見的結構圖連接起來。對SAR的研發和改進可用於確定和設計可能顯示類似或改善的細胞活性的結構類似的化合物。通過對結構相關的化合物進行比較來研發和改進SAR。在NCI資料庫或其它資料庫中進行計算機檢索以查找可商購獲得的化合物，或在計算機圖書館內檢索目標和不同結構特性和計算性質(例如『藥物類似性』)的化合物，從而合成或確定可用的化合物。可以在細胞生長試驗中檢驗商購或合成的化合物，以改善其細胞生長抑制效力，而且該試驗數據(用於效力的改善和降低)可以用於改善SAR對於由靶標介導的細胞生長的抑制性能。重複循環性的數據採集、SAR的改善、化合物的獲取、化合物的試驗/數據採集可以確定在10微摩爾以下就具有細胞生長抑制作用的化合物。這種化合物可以用於藥物研發中，因為其在用作人類疾病模型的動物中通常可以實現大於10微摩爾的循環水平(例如，人類癌症的小鼠異種移植模型，作為非限制性例子)。為了改善效力、效能和作用時間而在動物模型中進行的其它試驗可以確定用於臨床治療人類疾病的候選分子，所述疾病包括由異常細胞生長引起的癌症和炎症疾病。可選地，經確定與siRNA抑制細胞生長的活性特性曲線相反的化合物可以作為細胞生長的刺激劑，該刺激劑可用於治療細胞生長減緩的疾病和病症。提高的細胞生長速度可以用於傷口癒合和其它臨床情況下。本文中描述的方法還可以利用已知蛋白質調節劑的基因轉染來幫助確定區別性足夠大的抑制特性曲線，其中要求該區別足以用來確定具有類似活性特性曲線的分子。
該方法可用於確定有效的化合物，該化合物在10微摩爾以下就具有顯著的抑制細胞生長的能力。這些化合物可以用於患有人類癌症和炎症的動物模型中。更優選的是在1微摩爾以下就能抑制細胞生長(GI50)的化合物。再更優選的是生長抑制(GI50)小於100nM的化合物。最優選的是GI50值小於10nM的化合物。本發明的方法還可以用於確定可用的LFA-1、B-cel受體BR3、Grb2(在串聯信號中的生長因子受體的下遊蛋白質)和在細胞內和外的其它蛋白質靶標的抑制劑。其尤其可用於抵抗位於Wnt路徑的靶標，所述靶標包括用於治療人類結腸癌的β-連環蛋白。還可以用於抵抗與疾病有關的其它靶標，所述靶標位於淋巴瘤、白血病、結腸癌、黑素瘤、乳腺癌、腦瘤、肺癌、腎癌和其它人類癌症。該方法還可用於確定可用於治療由炎症細胞的生長和增殖介導的人類炎症疾病的化合物。這些包括但不限於銀屑病、溼疹、哮喘、風溼性關節炎和乾眼症。以上述方式確定並且在人類疾病的動物模型中具有活性的化合物可用於治療包括癌症和炎症疾病的人類疾病。涉及非癌症和炎症疾病的靶標也可以用於該方法中，而所述癌症和炎症疾病涉及異常細胞的增殖。
此外，預計的方法是使用siRNA細胞活性數據按照下述方式進行靶向或者選擇靶標通過對共用和/或私人化合物細胞活性資料庫進行搜索來找尋對化合物或化合物集合產生響應的類似的細胞活性特性曲線，用以作為對可用於確定人類藥物的化合物進行確定的方法。
VIII.實施例 A.材料 在人體293細胞中製備全長的重組人類膜結合的LFA-1和重組人類結構域5ICAM-I-Ig融合體(ICAM-I-Ig)，並按照所述方式進行純化(Fisher等，1997，Keating等，2000)。sICAM-1(為了方便用在體外試驗中，其為不具有跨膜和胞漿結構域的天然ICAM-I的截短形式，但是具有完整的LFA-1結合表位)和MEM-48得自R&D系統(Minneapolis，MN)。使用標準步驟產生小鼠單細胞系抗人類β2整聯蛋白(克隆PLM2)(Fisher等，1997)。按照描述的方式合成小分子和肽拮抗劑(Gadek等，2002，Burdick 1999，Liu等，2000)。化合物1-5和A-286982如圖4所示。化合物1、2A和2B與化合物3類似，但是加入連接物而使其與螢光素(化合物1和2B；2A未與螢光素結合)結合。通過使胺官能團與螢光素-5-異硫氰酸酯(FITC)偶合來製備螢光素綴合物(Keating等，2000)。其它被分析的分子包括化合物6和7(Gadek等，2002)、蝮蛇毒素(Dennis等，1990)、蝮蛇毒素七肽H2N-CGFDMPC-CO2H和H2N-CGY(m)DMPC-CO2H、環蝮蛇毒素肽CRIPRGDMPDDRC和四肽H2N-CN(F)PC-CO2H，其中Y(m)為β-酪氨酸和N(F)為N′-3-苯基丙基天冬醯胺。

化合物6 化合物7 將所有小分子拮抗劑製成50％DMSO中的10mM溶液，貯存於-20℃下。化合物5為Hoffman-La Roche Inc.(Nutley，NJ)贈送的贈品。
B.試驗 實施例1親合力的測量 按照之前的描述，使用與小分子拮抗劑、化合物1(圖2)呈競爭形式的螢光偏振(FP)(Lakowicz 1999，Panvera 1995)測量小分子對LFA-1的親合力(Keating等，2000)。在含有50mM Hepes，pH 7.2，150mMNaCl，0.05％正辛基糖苷和0.05％牛γ球蛋白(BGG)以及1mMMnCl2，或1mM CaCl2和1mM MgCl2的緩衝溶液中進行所有的測量。首先按照下述方式測量化合物1對LFA-1的親合力將2nM化合物1加入到LFA-1的系列稀釋液中，最初為在含有MnCl2或CaCl2和MgCl2的緩衝液中的1μM溶液。通過將拮抗劑的系列稀釋液加入到2nM化合物1(使用3nM的LFA-1(溶於MnCl2)或40nM的LFA-1(溶於CaCl2和MgCl2))中來進行競爭試驗。在ICAM-I-Ig競爭試驗中，將LFA-1濃度降低至溶於二價陽離子緩衝液中的2和20nM LFA-1，用以使ICAM-I-Ig的抑制作用最大化。試驗中使用的不同LFA-1濃度要考慮在親合力的計算中(參見下文)。在37℃下，在96-孔黑色HE96板(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)上培養溶液2小時。在分析讀板器上485nm的激發態光、530nm的發射光和505nm的二向色過濾器測量螢光偏振(FP)。測定不含化合物1的適當試樣的強度，通過減去該試樣強度來校正除去所有粗略強度數據的背景發射。用KaleidaGraph軟體(Synergy Software，Reading，PA)，使用非線性最小二乘方擬合的4參數方程式分析LFA-1結合和拮抗劑競爭數據，用以獲得LFA-1滴定的EC50值和拮抗劑的IC50值。用於擬合數據的方程式為Y＝((A-D)/(1+(×/C)λB))+D，其中Y為試驗響應，A為Y-在最上端漸近線處的值，B為斜率因子，C為IC50或EC50，且D為Y-在最下端漸近線處的值。通常，在下述的同類FP和異種ELISA形式中測量的數據含有較大的信號-背景比例，而且在擬合的數據中偏差估計值通常小於擬合參數終值的10％。使用Klotz和Hill分析法計算存在和不存在A-286982時LFA-1對化合物1的平衡離解常數(Kd)(Panvera，1995)。使用IC50值、化合物1/LFA-1的Kd和化合物1和LFA-1在競爭試驗中的濃度計算拮抗劑對於LFA-1的親合力(Kj)(Keating等，2000，Jacobs等，1975)。
實施例2LFA-1/ICAM-I和LFA-1/小分子酶-結合的免疫吸收試驗(ELISAs)。
(A)拮抗劑競爭在競爭形式下評價小分子和sICAM-1對ICAM-I-Ig或螢光素-標記的小分子拮抗劑、化合物2B至LFA-1的結合的破壞能力(Gadek等，2002，Burdick 1999，Quan等，1998)。化合物2B與化合物1類似，但是其在小分子和螢光素之間具有更長的連接，用以使抗-螢光檢測抗體的結合最大化。4℃下，在96-孔板上塗覆5μg/ml(33.3nM)溶於磷酸鹽緩衝的鹽水(PBS)中的小鼠抗-人類B2整聯蛋白(非官能阻斷抗體)並經歷整夜。室溫下用試驗緩衝液(20mM Hepes，pH7.2，140mM NaCl，1mM MnCl2，0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.05％Tween-20)封閉該板1小時。在緩衝液中洗滌(50mMTris-HCl，pH7.5，100mM NaCl，1mM MnCl2和0.05％Tween-20)之後，加入8nM LFA-l(LFA-1/ICAM-1 ELISA)或2nM LFA-1(LFA-1/小分子ELISA)，之後在37℃下培養1小時。洗滌該板，且對於LFA-1/ICAM-A ELISA而言，將小分子拮抗劑或sICAM-1的系列稀釋液加入到板中並保持30分鐘，之後在37℃下加入0.89nM的ICAM-I-Ig(終濃度)並保持2小時。再次洗滌之後，加入山羊抗-huIgG(特定的Fc)-HRP並在37℃下培養1小時。在LFA-1/小分子ELISA中，將稀釋的拮抗劑和25nM化合物2B同時加入到板中，之後在37℃下培養2小時。洗滌之後加入綿羊抗螢光素-HRP，並在37℃下再培養1小時。對於兩次試驗而言，在洗滌之後通過下述方式檢測結合的HRP-綴合抗體加入四甲基聯苯胺(TMB)，之後在加入1M H3PO4使反應停止之後測量產物在450nm處的吸收率。使用KaleidaGraph軟體擬合出上述的4參數方程式，從而確定每個曲線的IC50值。LFA-1/ICAM-1試驗的形式和結果與之前報導的情況類似(Gadek等，2002，Burdick 1999)；但是，由於抗體是捕獲LFA-1而非直接被塗覆在ELISA板上，因此該形式更加穩固。
(B)配體結合按照上述方式進行LFA-1/ICAM-1和LFA-1/小分子ELISAs，只是在存在或不存在拮抗劑的情況下將ICAM-I-Ig或化合物2B的系列稀釋液加入到板中。在所有情況下配體都與拮抗劑同時加入。在加入拮抗劑和配體之後，進行洗滌和加入檢測抗體之前，在37℃下將板培養6小時以達到平衡狀態。通過擬合如上所述的4參數模型來確定每個曲線的EC50值。通過Schild回歸來分析存在和不存在拮抗劑的情況下所產生的EC50值(Arunlakshana和Schild 1959，Lutz和Kenakin 1999，Pratt和Taylor 1990，Matthews 1993，Kenakin，1997)。按照下述方式計算Log(濃度比-1)對拮抗劑濃度的Schild圖(濃度比-1)＝((帶有拮抗劑的配體EC50)/(沒有拮抗劑的配體EC50))-1。通過將線擬合到線性方程式Y＝A+BX中來計算Log(濃度比-1)對拮抗劑濃度的圖的斜率。
實施例3放射性同位素標記的、可光激活的化合物3的類似物對LFA-1的交聯 在存在或不存在290μM化合物3的情況下，在37℃下用4.1μM化合物5、氚標記的可光激活的化合物3的類似物(Kauer等，1986)將全長的人體膜結合的LFA-1或BSA(0.35mg/mL[分別為1.4和5.3μM]，溶於20mM Hepes、150mM NaCl、5mM CaCl2、5mM MgCl2、1mM MnCl2和1％正辛基糖苷中，pH7.2)培養過夜。化合物5與LFA-1的摩爾比為3∶1。使用預塗了1％BSA的96孔板進行培養。在即將進行交聯之前通過凝膠過濾迅速除去過量的化合物5，所述凝膠過濾採用與同一緩衝液達到平衡的96孔形式的G-25微旋柱。通過暴露在高壓汞蒸汽燈下(450瓦，一級玻璃，Vineland，NJ)而使LFA-1/化合物5複合物發生交聯。在照射過程中，在冰上冷卻試樣並用5mm厚的硼矽玻璃進行保護，以使蛋白質的降解最小化。按照上述方式用凝膠過濾法(G-25)除去剩餘的未連接的化合物5。然後在8M胍基鹽酸鹽(GuHCl)中使交聯複合物變性並還原和烷基化。使經處理的蛋白質經歷SDS-PAGE，之後進行考馬斯藍染色。用自身放射線照相法觀察放射性同位素標記的蛋白質。
為了確定化合物5的結合位，在6M GuHCl，20mM Hepes，10mMEDTA，pH6.8存在下，用粒度排除色譜分離經處理的αL和B2亞基，然後在75℃下用具有7M GuHCl且溶於10％醋酸的2.6 M羥胺進行化學裂解。用SDS-PAGE分離放射性同位素標記的蛋白質，並且用聲放射線照相法觀察或將其轉移至聚偏二氟乙烯膜上，用考馬斯藍染色，之後用N末端蛋白質序列進行確定。
實施例4缺少結構I的αL構建體的產生 所用的構建體，pLFA.huID.Δp，含有從結構域I的Narl限制性位點5′至結構域I的第二PfIM1限制位3′的αL基因序列，其中刪除了結構域I的第一PfIM1限制性位點3′(Edwards等，1995)。為了產生缺少結構域I的突變體，製備了下列引物正向引物 CACTGTGGCGCCCTGGTTTTCAGGAAGGTAGTGGATCAGGCACAAGCAAACAGGACCTGACTTC，含有從Narl位點至結構域I開始處的序列、編碼GSGSG的DNA序列和在結構域I結束之後的αL序列的2bp，以及反向引物TCTGAGCCATGTGCTGGTATCGAGGGGC，其在結構域I之後的第二PfIM1限制性位點上引發聚合反應。使用這些引物和經BgI II線性化的pLFA.huID.Δp進行PCR，其在結構域I內的位置內剪切。該DNA片段被擴增，所述片段含有從Nar 1位點至第二PfIM1位點的序列，而且其中整個結構域I，從C125至G311均被編碼為GSGSG的DNA序列代替。純化該段DNA，用Nar1和PfIM1對其進行消化並將其插入到人的αL質粒的(pRKLFAαm)相應的Nar1和PfIM1位點上。通過序列分析對編碼為GSGSG的DNA序列的插入進行確認。
實施例5缺少結構域I的LFA-1與ICAM-I或化合物2B的結合 用單獨的β2構建體(模擬物)或用野生型αL構建體(wt)或缺少結構域I(I-less)的αL構造轉染293細胞，並使其恢復3天。分離細胞並將其重新懸浮在黏著緩衝液(0.02M HEPES，pH7.2，0.14MNaCl，0.2％葡萄糖)中。按照所述方式與結合在板上的ICAM-I-Ig相結合(Edwards等，1998)。為了使化合物2B進行結合，將2×105個細胞加入到圓底96孔板的每個孔中，所述板位於含有0.5％BGG，0.1mM MnCl2，1μg/ml抗B2活化抗體MEM-48和1μM化合物2B的黏著緩衝液中。在37℃下將細胞培養1小時，用冷PBS洗滌並用1％的甲醛/PBS固定。然後在室溫下用1∶500的綿羊抗螢光素-HRP稀釋液培養細胞1小時，用PBS洗滌並用TMB培養15分鐘。用1MH3PO4終止反應並在450nm下讀數。平行地對轉染物進行試驗，用以試驗表面表達的αL/B2複合物的結構完整性，並通過FACS分析法，使用一組具有已知的結合表位的抗體來試驗結構域I的存在或不存在(Edwards等，1998)。
實施例6人類T細胞黏著試驗(細胞粘接試驗) 使用人類T淋巴細胞系HuT 78進行T-細胞黏著試驗。在PBS中將山羊抗-HuigG(Fc)稀釋至2mg/ml，並在37℃下將96孔板的每個孔塗覆50ml而且保持1小時。用PBS洗滌盤並在室溫下用溶於PBS的1％BSA封閉1小時。在PBS中將結構域5ICAM-Ig稀釋至100ng/ml，並在4℃下以50ml/孔的量將其加入到板O/N中。對100g HuT 78細胞進行離心，並在37℃下於5％CO2培養箱中用5mM EDTA處理細胞團5分鐘。在0.14 M NaCl，0.02M Hepes，0.2％葡萄糖和0.1mMMnCl2(試驗緩衝液)中洗滌細胞並離心。將細胞重新懸浮在試驗緩衝液中，使濃度達到3.0×106c.ml。在試驗緩衝液中將抑制劑稀釋至2×終濃度，並在室溫下用HuT78細胞預培養30分鐘。將100μl/孔的細胞和抑制劑加入到板中並在室溫下培養1小時。加入100μl/孔的PBS並將板密封，在將100g物質離心轉化5分鐘。將未粘接的細胞從板中輕輕彈出，並將過量的PBS印跡在紙巾上。將60μl/孔的對硝基苯基N-乙醯基-β-D-氨基葡糖苷(0.257g，成為100ml檸檬酸鹽緩衝液)加入到盤中，並在37℃下培養1.5小時。用90μl/孔的50mMglycione/5mM EDTA終止酶反應，並在讀板器上讀取405 nM處的讀數。使用Langegren對硝基苯基法測量黏著在5dICAM-Ig上的HUT 78細胞，U.(1984).J.Immunol.Methods 57，379-388。
實施例7T細胞增殖試驗 該試驗為由激活作用產生的淋巴細胞增殖的體外模型，其由T細胞受體和LFA-1的參與而被誘發，對與抗原呈遞細胞之間的相互作用產生影響(Springer等，1990，Nature)。在4℃下經整夜時間用溶於無菌PBS中的50μl的2μg/ml山羊抗人Fc(Caltag H1 0700)和50μl的0.07μg/ml單克隆抗體至CD3(免疫技術0178)預包被微滴定盤(經認證的Nunc 96孔ELISA)。
第二天吸入包被溶液。然後用PBS洗滌板2次，在37℃下加入100μl的17ng/ml 5d-ICAM-Ig並保持4小時。在加入CD4+T細胞之前用PBS洗滌板2次。從取自健康獻血者的肝素化全血中分離末梢血的淋巴細胞。一種可選方法是通過增白細胞防病法(leukophoresis)從健康的獻血者體內獲得全血。用鹽水將血液稀釋為1∶1、分層並在LSM上離心分離2500×g物質30分鐘(每100ml中含有6.2g Ficoll和9.4g泛影葡胺鈉)(Organon Technica，NJ)。使用骨髓樣細胞消耗試劑法消耗單核細胞(Myeloclear，Labs，Hornby，Ontario，Canada)。將PBL重新懸浮在90％的熱減活胎牛血清和10％的DMSO中，等分試樣並貯存在液氮中。融解後，將細胞重新懸浮在RPMI 1640培養基中(Gibco，Grand Island，NY)，所述培養基中補充了10％的熱減活胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)、1mM丙酮酸鈉、3mM L-穀氨醯胺、1mM非必需胺基酸、500μg/ml青黴素、50μg/ml鏈黴素、50μg/ml慶大黴素(Gibco)。
通過負選擇法對CD4+T細胞進行純化(人CD4細胞回收柱Kit #CLl10-5精確的)。37℃下在100ml含有5％CO2的培養培養基(RPMI1640(Gibco)，其中補充了10％的熱減活FBS(Intergen)、0.1mM非必需胺基酸、1nM丙酮酸鈉、100單位/ml青黴素、100μg/ml鏈黴素、50μg/ml慶大黴素、10mM Hepes和2mM穀氨醯胺)中對100,000個純化的CD4+T細胞(90％純度)/微滴定板孔進行72小時培養。在培養開始時將抑制劑加入到板中。在收集細胞之前的最後6小時內滴定加入1μCi/孔的胸腺嘧啶，用以測量這些培養物的增殖響應。通過液體閃爍計數來測量放射性標記的結合(Packard 96孔收集器和計數器)。結果用計數/分鐘(cpm)表達。
實施例8體外混合淋巴細胞培養模型 混合淋巴細胞培養模型為體外移植模型(A.J.Cunningham，″Understanding Immunology，Transplantation Immunology″157-159頁(1978))，用其考察各種LFA-1拮抗劑在人類混合淋巴細胞響應的增殖和效應臂中的影響。
細胞的分離從取自健康獻血者的肝素化全血中分離出末梢血(PBMC)的單核細胞。用鹽水將血液稀釋至1∶1、分層並在LSM上對×2500g物質離心分離30分鐘(每100ml中含有6.2g Ficoll和9.4g泛影葡胺鈉)(Organon Technica，NJ)。一種可選方法是通過增白細胞防病法從健康的獻血者體內獲得全血。按照上述方式分離PBMC，將其重新懸浮在90％的熱減活胎牛血清和10％的DMSO中，等分試樣並貯存在液氮中。融解後，將細胞重新懸浮在RPMI 1640培養基中(Gibco，Grand Island，NY)，所述培養基中補充了10％的熱減活胎牛血清(Intergen，購得，NY)、1mM的丙酮酸鈉、3mM的L-穀氨醯胺、1mM的非必需胺基酸、500μg/ml青黴素、50μg/ml鏈黴素、50μg/ml慶大黴素(Gibco)。
混合淋巴細胞的反應(MLR)在96孔平底微滴定板內建立單向人體混合淋巴細胞的培養。在200μl的完全培養基中，對1.5×105個響應子(responder)PBMC和等數量的異基因輻射(3000拉得，3分鐘，52秒)刺激子PBMS進行共培養。在培養開始時加入LFA-1拮抗劑。
在37℃下，在5％的CO2中將培養物培養6天，然後用3H-胸腺嘧啶核苷(6.7 Ci/mmol，NEN，Boston，MA)脈衝6小時。在Packard細胞收集器中收集細胞(Packard，Canberra，加拿大)。用液體閃爍計數法測量[3H]TdR的結合。結果表示為每分鐘的計數(cpm)。
實施例9用以逆轉乾眼症發病的兔子模型 通過手術閉合淚腺排洩管而使兔子患上乾眼症，並使兔子在不治療的情況下維持至少4周。參見Gilbard，J.P，1996「Dry Eyephramcological approaches，effects，and progress」CLAO J.22，141-145。經Schirmer試驗確定了乾眼症和眼表面的染色之後，滴入本發明的LFA-1拮抗劑，其為溶於中性、等滲緩衝水溶液中的濃度為0.01、0.1和1.0％的溶液。給藥方式為向眼表面滴入一滴50微升的液滴，每日5次，持續4周每天滴入。每天對乾眼症的症狀進行一次監測，監測4周，Schirmer分數的升高和/或眼表面染色量的降低表明了LFA-1拮抗劑在治療乾眼病中的作用。
實施例10I期人體研究 多達56個健康個體參加了試驗。進行了單次和多次給藥LFA-1拮抗劑的隨機、受控、逐步提高劑量的試驗。在6-8個LFA-1拮抗劑劑量水平中的各水平下對同齡的7個患者(5個治療，2個對照)各自進行治療，其中所述拮抗劑製成無菌、中性、等滲的緩衝水溶液。患者每天接受單一的眼內給藥。在隨後的一周內獲得是試樣的藥物代謝動力學和藥效評價。第8天開始，患者每天接受同樣劑量的LFA-1拮抗劑，總共持續14天。評價了PK/PD評價、安全性試驗室研究、Schirmer試驗、角膜染色和結膜活組織檢查。
實施例11II期人體研究 150個患有乾眼病的成年患者參加了試驗，所述乾眼症如主要的包含/排除標準所作的定義。患者可以患有或不患有乾燥綜合症或乾燥病。對LFA-1拮抗劑進行隨機、受控的劑量測定試驗。三組患者接受標記劑量的麗眼達或者兩個LFA-1拮抗劑劑量水平中的一個劑量，所述拮抗劑被製成中性、緩衝、等滲的水溶液，每日給藥，持續12周。隨後在接下來的三個月時間內，在Schirmer′s試驗、角膜染色和整個疾病嚴重性中對病人進行安全性和改進性的證明試驗。在一小組病人中獲得了結膜活組織檢查。
雖然本文中描述和顯示了本發明的優選實施方案，但是對本領域熟練技術人員而言顯而易見這種實施方案只是提供作為實施例。在不偏離本發明的情況下，本領域熟練技術人員現可以進行各種變型、改變和替換。應該理解，在本發明的實施中可以採用本文中描述的本發明實施方案的各種替換形式。意圖利用下列權利要求定義本發明的範圍，以及在這些權利要求及其覆蓋的等效範圍內的方法和結構。
權利要求
1.一種在需要治療的患者中治療乾眼病的方法，其包括向所述患者施用有效量的與淋巴細胞功能相關的抗原-1(LFA-1)的拮抗劑或其藥物可接受的鹽或酯，其中LFA-1拮抗劑為肽、有機小分子或其組合。
2.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑直接與ICAM-1在LFA-1αL亞基上進行結合競爭。
3.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式I化合物及其藥物可接受的鹽或酯，其中
式I
其中，R1和R2彼此獨立地為氫、胺基酸側鏈、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳基，其中m為0-6、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任選被U-T-Q取代的脂肪族、脂環族、雜脂肪族或雜脂環族部分；
其中U可以為不存在或下列之一-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(O)(R1A)-O-；
T為不存在，或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；
Q為氫、滷素、氰基、異氰酸酯、-OR1B；-SR1B；-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2、-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B，或脂肪族雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中R1和R2連接在一起為脂環族或雜環族部分，或一起為
其中，R1A和R1B每次出現時獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-C(＝O)R1C，或-C(＝O)NR1CR1D；其中R1C和R1D每次出現時獨立地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；和R1E為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3為-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中R3A每次出現時獨立地為氫、保護基團、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分，或藥物可接受的鹽或酯，或者R3A與R1和R2連接在一起形成雜環族部分；
其中X0為選自F、Br或I的滷素；
R4每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為GRG1，其中G為-O-、-S-、NRG2-、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、C(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，且RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；
n為0-4的整數；
AR1為單環或多環芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環族或雜環族部分；
按照價態允許的情況，A、B、D和E通過單鍵或雙鍵連接；其中A、D和E每次出現時獨立地為C＝O、CRiRii、NRi、CRi、N、O、S、-S(＝O)或SO2；其中Ri每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或者為-GRG1，其中，G為-O-、-S-、-NRG2、-CO-、-SO-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，和RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或任意兩個相鄰基團連接在一起脂環族、雜脂環族、芳基、或雜芳基部分；
p為0-4的整數；和
L為不存在或V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z每次出現時獨立地為不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亞鏈烯基或C2-6亞鏈烯基鏈，其中最多兩個不相鄰亞甲基單元獨立地任選被下述基團代替-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或-NRL3-；其中RL3和RL4每次出現時獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或醯基；或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；RL1和RL2每次出現時獨立地為氫、羥基、被保護的羥基、氨基、被保護的氨基、硫代、被保護的硫代基團、滷素、氰基、異氰酸酯、羧基、羧烷基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰基、烷氧基、芳氧基、巰基、亞磺醯氨基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基，或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或其中的一個或多個RL1和RL2連接在一起，或者與V、W、X、Y或Z之一連接在一起形成脂環族或雜環族部分或形成芳基或雜芳基部分。
4.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式II的化合物
式II
其中，R27選自下列基團
或
和R28選自下列基團
或
和
且R29為氫、藥物可接受的鹽或酯。
5.權利要求4的方法，其中式II化合物進一步包括如式II』所示的立體化學
式II』。
5.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式IIA化合物
式IIA
其中R17包括氫，藥物可接受的鹽和酯。
8.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式III化合物
式III
其中，Cy為任選被下述基團取代的芳香族碳環、芳香族雜環或非芳香族碳環或雜環羥基、巰基、硫烷基、滷素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒基、胍基、硝基、烷基或烷氧基或醯基；
X2為-CH2-NR10-[二價烴鏈]-，其中所述二價烴鏈任選被羥基、巰基、滷素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代；
K為任選被下述基團取代的雜環羥基、巰基、滷素、氧代、硫代、硫烷基、氨基、氨基烷基、碳環或雜環、烴、滷素取代的烴、氨基、脒基、胍基、氰基、硝基、烷氧基或醯基；
L2為-[二價烴鏈]-NR10-CH2-，其中所述二價烴鏈任選被羥基、滷素、氧代或硫代取代，且R10為H或烷基；
R5為H、OH、氨基、O-碳環或任選被氨基、碳環、雜環取代的烷氧基，或者為藥物可接受的鹽或酯；
R6-9獨立地為H、羥基、巰基、滷素、氰基、氨基、脒基、胍基、硝基或烷氧基；
R10為H或任選被碳環或雜環取代的烴鏈；及其鹽、溶劑化物和水合物。
9.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式IV化合物
式IV
其中，R11為下式基團
其中，A為氫、羥基、氨基或滷素，B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、三氟甲基、滷素、低級烷基或低級烷氧基；
R12為下式基團
其中，R13為氫、羧基或低級烷基；
n為0或1；
U2、V2和W2獨立地為氫、滷素或低級烷基，條件是U2和V2不都為氫；
X3為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；
Y2為低級亞烷基，其可以被一個或多個氨基、取代的氨基、低級烷基或環低級烷基取代，或Y2為低級亞鏈烯基或低級亞烷基硫基；
k為0或1；
當k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-COOH、-CONH2、氨基；
當k為0或1時，Z2為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯代吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基、羥基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，6-二氯苯基)甲氧基]苯基；
當k為0或1時，Z2為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，該環獨立地為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，任何一個環可以為未取代的，或被至少下列之一取代滷素，氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、低級烷磺醯基、低級烷硫基、乙醯基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧基羰基、乙醯氧基，或者還可以被氨基低級烷基取代；
R20為氫，藥物可接受的鹽或酯。
10.權利要求8的方法，其中式III化合物進一步包括式III』所示的立體化學。
式III』。
11.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式V化合物，
其中
式V
其中，R14為下式基團
或
其中，R15為氫、羧基或低級烷基；
U3、V3和W3獨立地為氫、滷素；
U3、V3和W3為低級烷基，條件是U3和V3不都為氫；
X4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；
Y3為低級亞鏈烯基、低級亞烷基硫基，或為低級亞烷基，其可以被氨基、乙醯基氨基或環低級烷基取代；
k2為0或1；
當k2為1時，Z為氫、低級烷基硫基、-COOH、-CONH2-，或氨基；
當k2為0或1時，Z3為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯代吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基；
當k2為0或1時，Z可以為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，其中該環獨立地為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，其中任何一個環都可以為未取代的，或者被至少下列之一取代滷素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、羧基、烷氧基羰基或乙醯氧基；和，
R21為氫，其藥物可接受的鹽或酯。
12.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為式VI化合物，
其中
式VI
其中，D4為單-、二-或三環飽和、不飽和，或芳香族環，每個環的環中具有5、6或7個原子，其中環內的原子為碳或為1-4個選自氮、氧和硫的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；L3為選自下列基團的二價連接基團
-L3-L2-L1-，
-L4-L3-L2-L1-，和
-L5-L4-L3-L2-L1-，
其中，L1選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR32、R32、CR32 het、NR30和N，
L2選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR34R34′、CR34、het NR30和N，
L3選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR35R35′、CR35、het NR30和N，
L4為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR36R36′、CR36、NR30和N，
L5為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR37R37′、CR37、NR30和N，條件是L1-L3中只有一個可以為het，而且當L1-L3之一為het時，L1-L5中的另一個可以為不存在，
其中，
R32、R32′、R34、R34′、R35、R35′、R36、R36′、R37和R37′各自獨立地選自R38、R39和U-Q-V-W，
任選地，R24和R34′獨立地或者一起可以通過位於B上的取代基RP而與B3形成飽和、不飽和或芳香族稠合環，該稠環在環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中，任何S或N可以任選被氧化；
任選地，R35和R35』獨立地或者一起，R36和R36′獨立地或者一起可以通過位於D3上的取代基R31而與D3形成飽和、不飽和或芳香族稠環，該稠環的環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中，任何S或N可以任選被氧化；
同樣任選地，每個R32-R37、NR30或L1-L5中的N與任何其它的R32-R37、NR30或L1-L5中的N一起可以形成5、6或7元飽和、不飽和的同素-或雜環或芳香族，其任選含有1-3個另外的，選自N、O和S的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；而且其中s為0-2；B選自下列基團
和
其中
其為含有5、6或7個原子的稠合雜或同素環，該環為不飽和、部分飽和或芳香族環，雜原子選自1-3個O、S和N，
Y3選自CH和NR30；n為0-3；
G3選自氫和C1-C6烷基，任選G與T一起可以形成任選被-V-W取代的C3-C6環烷基；
T3選自天然形成的α-胺基酸側鏈，
和U4-Q4-V4-W4；
U4為選自下列的任選被取代的二價基團
C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6鏈烯基-Q，和C2-C6炔基-Q
其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38；
Q4為不存在或選自下列基團
-O-、-S(O)s-、-SO2-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-、-N(R30)-C(＝O)-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-O-、-N(R30)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-het-、-C(＝O)-N(R30)-、-O-C(＝O)-N(R30)-、-PO(OR30)O-和-P(O)O-；
其中，
s為0-2，且
het為單或雙環的5、6、7、9或10元雜環，每個環含有1-4個選自N、O和S的雜原子，其中雜環可以為飽和、部分飽和或芳香族環，而且任何N或S任選被氧化，該雜環被0-3個R41取代；
V4為不存在，或為選自C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C0-C6烷基-C6-C10芳基和C0-C6烷基-het的任選取代的二價基團；
其中，任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
W4選自下列基團
氫、OR33、SR42、NR30R30、NH-C(＝O)-O R43、NH-C(＝O)-NRnRn，NH-C(＝O)-R43、NH-SO2-R37、NH-SO2-NR30R30、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-NR30R30′、C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-SO2-NR30R30′、C(＝S)-NR30R30′、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-NR37R37′、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-NR30R30′、SO2-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NR30R30′、O-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-SO2R46和O-SO2-R37；
R44選自C(＝O)-R45、C(＝O)-H、CH2(OH)和CH2O-C(＝O)-C1-C6烷基；
R38為被1-3個R38′取代的R38』或R38″；其中，
R38′選自下列基團
氫、滷代(F、Cl、Br、I)、氰基、異氰酸酯、羧基、羧基-C1-C11烷基、氨基、氨基-C1-C8烷基、氨基羰基、羧醯胺基、氨基甲醯基、氨基甲醯氧基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、咪唑基、脲基，硫脲基、硫氰基、羥基、C1-C6烷氧基、巰基、亞磺醯氨基、het、苯氧基、苯基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基，吡咯啉基、咪唑基和吲哚基；
R38″選自下列基團
C0-C10烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C10鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C0-C10炔基-Q-C0-C6烷基、C3-C11環烷基-Q-C0-C6烷基、C3-C10環鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C1-C6烷基-C6-C12芳基-Q-C0-C6烷基、C6-C10芳基-C1-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-het-C0-C6烷基、het-C0-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-C6-C12芳基和-Q-C1-C6烷基；
R43選自氫和取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C6烷基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基和het，
其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
R31選自R40和R41；
R41選自下列基團
OH、OCF3、OR43、SR42、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、NO2、CF3、C0-C6烷基-NR30R30、C0-C6烷基-C(＝O)-NR30R30′、C0-C6烷基-C(＝O)-R38、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C6環烷基、C3-C6環鏈烯基、C1-C6烷基苯基、苯基-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基、苯基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基和het，其中任何烷基、鏈烯基或炔基可以任選被1-3個選自OH、滷代(F、Cl、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰基的基團取代，而且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、滷代(F、Cl、Br、I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基；
R42選自S-C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-NR30R30′、C1-C6烷基、滷代(F、Cl、Br、I)-C1-C6烷基、苄基和苯基；
R30選自下列基團R43、NH-C(＝O)-O-R43、NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NHR43、NH-SO2-R46、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-O-R43、C(＝O)-R43、C(＝O)-NHR43、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-SO2-R46、C(＝O)-NH-SO2-NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N(R43)2、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-O-R43和SO2-NH-C(＝O)-R43；
R30′選自氫、羥基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C-6烷基、C6-C10芳基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基、het、C1-C6烷基羰基、C1-C8烷氧基羰基、C3-C8環烷基羰基、C3-C8環烷氧基羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧基羰基、雜芳基烷氧基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺醯基、雜芳基磺醯基、C1-C6烷基磺醯基，和C6-C10芳基磺醯基，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31；
R30和R30′與相連的氮一起可以形成任選取代的雜環，所述雜環選自嗎啉基、哌嗪基、硫嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1，2，3，4-四氫喹啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉基、噻唑烷基和氮雜二環壬基，其中的取代基為1-3個R38；
R33選自氫和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基和苯甲醯基，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R40；
R40選自下列基團OH、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、OR43、SR42、SOR43、NO2、CF3、R43、NR30R30′、NR30C(＝O)-O-R43、NRC(＝O)-R43、C0-C6烷基-SO2-R43、C0-C6烷基-SO2-NR30R30′、C(＝O)-R43、O-C(＝O)-R43、C(＝O)-O-R43和C(＝O)-NR30R30′，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R31；
R46為取代或未取代的、選自下列的基團
C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C8環烷基、C3-C6環鏈烯基、C0-C6烷基苯基、苯基C0-C6烷基、C0-C6烷基-het和het-C0-C6烷基，
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
R45為取代或未取代的、選自下列的基團羥基、C1-C11烷氧基、C3-C12環烷氧基、C8-C12芳烷氧基、C8-C12芳環烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰基烷氧基、C5-C10環烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰基烷氧基，C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳基羰氧基烷氧基、C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30)(R30)N(C1-C10烷氧基)-，
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31，及其藥物可接受的鹽。
13.根據權利要求1的方法，其中所述施用包括藉助載體局部施用所述化合物，其中載體選自滴眼液、液體洗液、凝膠、軟膏、噴霧和脂質體。
14.根據權利要求13的方法，其中所述局部施用包括藉助裝置將所述化合物輸注至所述眼部，所述裝置選自泵導管系統、連續或選擇性釋放裝置和隱形眼睛。
15.根據權利要求1的方法，其中所述施用包括通過滴鼻液或鼻部噴霧或噴霧液體將所述化合物的液體或液體懸浮液系統施用至所述患者的口或鼻咽道內，從而使治療有效量的所述化合物通過系統吸收和循環而與所述患者的眼部接觸。
16.根據權利要求1的方法，其中所述施用包括系統施用所述化合物的口服形式，從而使治療有效量的所述化合物通過吸收和循環而與所述患者的眼部接觸。
17.根據權利要求1的方法，其中所述施用包括胃腸滯留型口服製劑。
18.根據權利要求1的方法，其中通過施用所述化合物的可注射形式來實現所述給藥，從而使治療有效量的所述化合物通過系統吸收和循環而與所述患者的淚腺組織接觸。
19.根據權利要求1的方法，其中通過施用所述化合物的栓劑形式來實現所述施用，從而使治療有效量的所述化合物通過系統吸收和循環而與所述患者的淚腺組織接觸。
20.根據權利要求1的方法，其中通過施用所述化合物的凝膠、乳膏、粉末、泡沫、晶體、脂質體、噴霧或液體懸浮液形式的手術中滴注來實現所述施用。
21.根據權利要求1的方法，其中將所述化合物施用至所述患者的眼表面，給藥量為足以獲得約1×10-7-約1×10-1摩爾/升的濃度。
22.一種在需要治療的患者中治療乾眼症的方法，其包括向所述患者的眼部施用有效量的包括LFA-1拮抗劑的藥物組合物或其藥物可接受的鹽或酯；以及藥物可接受的載體；從而所述施用有效促進所述患者的所述眼部的淚液分泌或粘蛋白的產生。
23.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式I化合物及其藥物可接受的鹽或酯，其中
式I
R1和R2彼此獨立地為氫、胺基酸側鏈、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳基，其中m為0-6、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任選被U-T-Q取代的脂肪族、脂環族、雜脂肪族或雜脂環族部分；
其中U可以為不存在或下列之一-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(O)(R1A)-O-；
T為不存在，或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；
Q為氫、滷素、氰基、異氰酸酯、-OR1B；-SR1B；-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B、C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2、-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B，或脂肪族雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中R1和R2連接在一起為脂環族或雜環族部分，或一起為
其中，R1A和R1B每次出現時獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-C(＝O)R1C，或-C(＝O)NR1CR1D；其中R1C和R1D每次出現時獨立地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；和R1E為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3為-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中R3A每次出現時獨立地為氫、保護基團、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分，或藥物可接受的鹽或酯，或者R3A與R1和R2連接在一起形成雜環族部分；
其中X0為選自F、Br或I的滷素；
R4每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為GRG1，其中G為-O-、-S-、NRG2-、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、C(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，和RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；
n為0-4的整數；
AR1為單環或多環芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環族或雜環族部分；
如果價態允許，A、B、D和E通過單鍵或雙鍵連接；其中A、D和E每次出現時獨立地為C＝O、CRiRii、NRi、CRi、N、O、S、-S(＝O)或SO2；其中Ri每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或者為-GRG1，其中，G為-O-、-S-、-NRG2、-CO-、-SO-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，和RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或任意兩個相鄰基團連接在一起代表脂環族、雜脂環族、芳基或雜芳基部分；
p為0-4的整數；和
L為不存在或V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z每次出現時獨立地為不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亞鏈烯基(alkenylidene)或C2-6亞鏈烯基(alkenylidine)鏈，其中最多兩個不相鄰亞甲基單元獨立地任選被下述基團代替-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或-NRL3-；其中RL3和RL4每次出現時獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或醯基；或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；並且RL1和RL2每次出現時獨立地為氫、羥基、被保護的羥基、氨基、被保護的氨基、硫代、被保護的硫代基團、滷素、氰基、異氰酸酯、羧基、羧烷基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰基、烷氧基、芳基氧、巰基、亞磺醯氨基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基，或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或其中的一個或多個RL1和RL2連接在一起，或者與V、W、X、Y或Z之一連接在一起形成脂環族或雜環族部分或形成芳基或雜芳基部分。
24.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式II化合物
式II
其中，R27選自下列基團
或
且R28選自下列基團
且R29為氫，藥物可接受的鹽或酯。
25.根據權利要求24的方法，其中式II化合物進一步包括如式II』的立體化學
式II』。
26.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式IIA化合物
其中，R17包括氫，藥物可接受的鹽或酯。
29.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式III化合物及其藥物可接受的鹽或酯，其中
式III
其中，Cy為任選被下述基團取代的芳香族碳環、芳香族雜環或非芳香族碳環或雜環羥基、巰基、硫烷基、滷素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒基、胍基、硝基、烷基或烷氧基或醯基；
X2為-CH2-NR10-[二價烴鏈]-，其中所述二價烴鏈任選被羥基、巰基、滷素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代取代；
K為任選被下述基團取代的雜環羥基、巰基、滷素、氧代、硫代、硫代烷基、氨基、氨基烷基、碳環或雜環、烴、滷素取代的烴、氨基、脒基、胍基、氰基、硝基、烷氧基或醯基；
L2為-[二價烴鏈]-NR10-CH2-，其中所述二價烴鏈任選被羥基、滷素、氧代或硫代取代，且R10為H或烷基；
R5為H、OH、氨基、O-碳環或任選被氨基、碳環、雜環取代的烷氧基，或者為藥物可接受的鹽或酯；
R6-9獨立地為H、羥基、巰基、滷素、氰基、氨基、脒基、胍基、硝基或烷氧基；
R10為H或任選被碳環或雜環取代的烴鏈；及其鹽、溶劑化物和水合物。
30.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式IV化合物及其藥物可接受的鹽或酯，其中
式IV
其中，R11為下式基團
其中，A為氫、羥基、氨基或滷素，B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、三氟甲基、滷素、低級烷基或低級烷氧基；
R12為下式基團
其中，R13為氫、羧基或低級烷基；
n為0或1；
U2、V2和W2獨立地為氫、滷素或低級烷基，條件是U2和V2不都為氫；
X3為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；
Y2為低級亞烷基，其可以被一個或多個氨基、取代的氨基、低級烷基或環低級烷基取代，或者Y2為低級亞鏈烯基或低級亞烷基硫基；
k為0或1；
當k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-COOH、-CONH2、氨基；
當k為0或1時，Z2為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯代吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基、羥基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，6-二氯苯基)甲氧基]苯基；
當k為0或1時，Z2為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，該環獨立地為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，任何一個環可以為未取代的，或被至少下列之一取代滷素，氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、低級烷磺醯基、低級烷硫基、乙醯基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧基羰基、乙醯氧基，或者還可以被氨基低級烷基取代；
R20為氫、藥物可接受的鹽或酯。
31.根據權利要求30的方法，其中式IV化合物進一步包括如式IV』的立體化學
式IV』。
32.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式V化合物及其藥物可接受的鹽或酯，其中
R14為下式基團
或
R15為氫、羧基或低級烷基；
U3、V3和W3獨立地為氫、滷素；
U3、V3和W3為低級烷基，條件是U3和V3不都為氫；
X4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；
Y3為低級亞鏈烯基、低級亞烷基硫基，或者為可以被氨基、乙醯基氨基或環低級烷基取代的低級亞烷基；
k2為0或1；
當k2為1時，Z為氫、低級烷基硫基、-COOH、-CONH2-，或氨基；
當k2為0或1時，Z3為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基；
當k2為0或1時，Z可以為含有0-3個可相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，其中該環獨立地為含有0-3個可相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，其中任何一個環都可以為未取代的，或者被至少下列之一取代滷素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素取代的低級烷基、低級烷氧基取代的低級烷基、低級烷氧基、羧基、烷氧基羰基或乙醯氧基；和，
R21為氫，其藥物可接受的鹽或酯。
33.根據權利要求22的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式VI化合物
式VI
其中，
D4為單-、二-或三環飽和、不飽和或芳香族環，每個環的環中具有5、6或7個原子，其中環內的原子為碳或為1-4個選自氮、氧和硫的雜原子，其中任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；
L3為選自下列基團的二價連接基團
-L3-L2-L1-，
-L4-L3-L2-L1-，和
-L5-L4-L3-L2-L1-，
其中，
L1選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR32、R32、CR32 het、NR30和N，
L2選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR34R34′、CR34、het NR30和N，
L3選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR35R35′、CR35、het NR30和N，
L4為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR36R36′、CR36、NR30和N，
L5為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR37R37′、CR37、NR30和N，條件是L1-L3中只有一個可以為het，而且當L1-L3之一為het時，L1-L5中的另一個可以為不存在，
其中，
R32、R32′、R34、R34′、R35、R35′、R36、R36′、R37和R37′各自獨立地選自R38、R39和
U-Q-V-W，
任選地，R24和R34′獨立地或者一起可以通過位於B上的取代基RP而與B3形成飽和、不飽和或芳香族稠合環，該稠環在環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中任何S或N可以任選被氧化；
任選地，R35和R35』獨立地或者一起，R36和R36′獨立地或者一起可以通過位於D3上的取代基R31而與D3形成飽和、不飽和或芳香族稠環，該稠環的環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中任何S或N可以任選被氧化；
同樣任選地，每個R32-R37、NR30或L1-L5中的N與任何其它的R32-R37、NR30或L1-L5中的N一起可以形成5、6或7元飽和、不飽和的同素或雜環或芳香族，其任選含有1-3個另外的，選自N、O和S的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；而且其中s為0-2；B選自下列基團
和
其中
其為含有5、6或7個原子的稠合雜或同素環，該環為不飽和、部分飽和或芳香族環，雜原子選自1-3個O、S和N，
Y3選自CH和NR30；n為0-3；
G3選自氫和C1-C6烷基，任選地G與T一起可以形成任選被-V-W取代的C3-C6環烷基；
T3選自天然形成的α-胺基酸側鏈，
和U4-Q4-V4-W4；
U4為選自下列的任選被取代的二價基團
C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6鏈烯基-Q，和C2-C6炔基-Q
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38；
Q4為不存在或選自下列基團
-O-、-S(O)s-、-SO2-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-、-N(R30)-C(＝O)-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-O-、-N(R30)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-het-、-C(＝O)-N(R30)-、-O-C(＝O)-N(R30)-、-PO(OR30)O-和-P(O)O-；
其中，
s為0-2，且
het為單或雙環的5、6、7、9或10元雜環，每個環含有1-4個選自N、O和S的雜原子，其中雜環可以為飽和、部分飽和或芳香族環，而且任何N或S任選被氧化，該雜環被0-3個R41取代；
V4為不存在，或為選自C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C0-C6烷基-C6-C10芳基和C0-C6烷基-het的任選取代的二價基團；
其中，任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
W4選自下列基團
氫、OR33、SR42、NR30R30、NH-C(＝O)-O-R43、NH-C(＝O)-NRnRn，NH-C(＝O)-R43、NH-SO2-R37、NH-SO2-NR30R30、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-NR30R30′、C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-SO2-NR30R30′、C(＝S)-NR30R30′、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-NR37R37′、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-NR30R30′、SO2-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NR30R30′、O-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-SO2R46和O-SO2-R37；
R44選自C(＝O)-R45、C(＝O)-H、CH2(OH)和CH2O-C(＝O)-C1-C6烷基；
R38為被1-3個R38′取代的R38』或R38″；其中，
R38′選自下列基團
氫、滷代(F、Cl、Br、I)、氰基、異氰酸酯、羧基、羧基-C1-C11烷基、氨基、氨基-C1-C8烷基、氨基羰基、羧醯胺基、氨基甲醯基、氨基甲醯氧基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、咪唑基、脲基、硫脲基、硫氰基、羥基、C1-C6烷氧基、巰基、亞磺醯氨基、het、苯氧基、苯基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯啉基、咪唑基和吲哚基；
R38″選自下列基團
C0-C10烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C10鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C0-C10炔基-Q-C0-C6烷基、C3-C11環烷基-Q-C0-C6烷基、C3-C10環鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C1-C6烷基-C6-C12芳基-Q-C0-C6烷基、C6-C10芳基-C1-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-het-C0-C6烷基、het-C0-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-C6-C12芳基和-Q-C1-C6烷基；
R43選自氫和取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C6烷基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基和het，
其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
R31選自R40和R41；
R41選自下列基團
OH、OCF3、OR43、SR42、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、NO2、CF3、C0-C6烷基-NR30R30′、C0-C6烷基-C(＝O)-NR30R30′、C0-C6烷基-C(＝O)-R38、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C6環烷基、C3-C6環鏈烯基、C1-C6烷基苯基、苯基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基、苯基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基和het，
其中任何烷基、鏈烯基或炔基可以任選被1-3個選自OH、滷代(F、Cl、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰基的基團取代，而且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、滷代(F、Cl、Br、I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基；
Rm選自S-C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-NR30R30′、C1-C6烷基、滷代(F、Cl、Br、I)-C1-C6烷基、苄基和苯基；
R30選自下列基團R43、NH-C(＝O)-O-R43、NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NHR43、NH-SO2-R46、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-O-R43、C(＝O)-R43、C(＝O)-NHR43、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-SO2-R46、C(＝O)-NH-SO2-NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N(R43)2、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-O-R43和SO2-NH-C(＝O)-R43；
R30′選自氫、羥基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C-6烷基、C6-C10芳基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基、het、C1-C6烷基羰基、C1-C8烷氧基羰基、C3-C8環烷基羰基、C3-C8環烷氧基羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧基羰基、雜芳基烷氧基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺醯基、雜芳基磺醯基、C1-C6烷基磺醯基，和C6-C10芳基磺醯基，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31；
R30和R30′與相連的氮一起可以形成任選取代的雜環，所述雜環選自嗎啉基、哌嗪基、硫嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1，2，3，4-四氫喹啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉基、噻唑烷基和氮雜二環壬基，其中的取代基為1-3個R38；
R33選自氫和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基和苯甲醯基，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R40；
R40選自下列基團OH、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、OR43、SR42、SOR43、NO2、CF3、R43、NR30R30′、NR30C(＝O)-O-R43、NRC(＝O)-R43、C0-C6烷基-SO2-R43、C0-C6烷基-SO2-NR30R30′、C(＝O)-R43、O-C(＝O)-R43、C(＝O)-O-R43和C(＝O)-NR30R30′，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R31；
R46為取代或未取代的、選自下列的基團
C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C8環烷基、C3-C6環鏈烯基、C0-C6烷基苯基、苯基-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het和het-C0-C6烷基，
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
R45為取代或未取代的、選自下列的基團羥基、C1-C11烷氧基、C3-C12環烷氧基、C8-C12芳烷氧基、C8-C12芳環烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰基烷氧基、C5-C10環烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰基烷氧基，C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳基羰氧基烷氧基、C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30)(R30)N(C1-C10烷氧基)-，
和
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31，及其藥物可接受的鹽。
34.一種眼用藥物製劑，其包括LFA-1拮抗劑、藥物可接受的載體和藥物可接受的賦形劑。
35.根據權利要求35的藥物製劑，其中所述LFA-1拮抗劑包括肽或有機小分子。
36.根據權利要求34的藥物製劑，其不進一步包括防腐劑。
37.根據權利要求34的方法，其進一步包括至少一種防腐劑。
38.根據權利要求34的方法，其進一步包括增稠劑。
39.根據權利要求34的方法，其中所述LFA-1拮抗劑包括式I化合物
式I
其中，R1和R2彼此獨立地為氫、胺基酸側鏈、-(CH2)mOH、-(CH2)m芳基、-(CH2)m雜芳基，其中m為0-6、-CH(R1A)(OR1B)、-CH(R1A)(NHR1B)、U-T-Q，或任選被U-T-Q取代的脂肪族、脂環族、雜脂肪族或雜脂環族部分；
其中U可以為不存在或下列之一-O-、-S(O)0-2-、-SO2N(R1A)、-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝O)-、-N(R1A)C(＝O)-O-、-N(R1A)C(＝O)-N(R1B)-、-N(R1A)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、-C(＝O)-N(R1A)-、-OC(＝O)N(R1A)、-C(＝N-R1E)-、-C(＝N-R1E)-O-、-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-O-C(＝N-R1E)-N(R1A)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-O-、-N(R1A)C(＝N-R1E)-N(R1B)-、-P(＝O)(OR1A)-O-或-P(O)(R1A)-O-；
T為不存在，或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；
Q為氫、滷素、氰基、異氰酸酯、-OR1B；-SR1B；-N(R1B)2、-NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)N(R1B)2、-NHC(＝O)R1B、-NHSO2R1B、NHSO2N(R1B)2、-NHSO2NHC(＝O)OR1B、-NHC(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHC(＝O)OR1B，C(＝O)NHC(＝O)R1B、-C(＝O)NHC(＝O)N(R1B)2、-C(＝O)NHSO2R1B、-C(＝O)NHSO2N(R1B)2、C(＝S)N(R1B)2、-SO2R1B、-SO2OR1B、-SO2N(R1B)2、-SO2-NHC(＝O)OR1B、-OC(＝O)-N(R1B)2、-OC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHC(＝O)R1B、-OC(＝O)NHSO2R1B、-OSO2R1B，或脂肪族雜脂肪族、芳基或雜芳基部分，或其中R1和R2連接在一起為脂環族或雜環族部分，或一起為
其中，R1A和R1B每次出現時獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-C(＝O)R1C，或-C(＝O)NR1CR1D；其中R1C和R1D每次出現時獨立地為氫、羥基或脂肪族、雜脂肪族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；和
R1E為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分、-CN、-OR1C、-NR1CR1D或-SO2R1C；
R3為-C(＝O)OR3A、-C(＝O)H、-CH2OR3A、-CH2OC(＝O)-烷基、-C(＝O)NH(R3A)、-CH2X0；其中R3A每次出現時獨立地為氫、保護基團、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、雜烷基芳基、雜烷基雜芳基部分，或藥物可接受的鹽或酯，或者R3A與R1和R2連接在一起形成雜環族部分；
其中X0為選自F、Br或I的滷素；
R4每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或為GRG1，其中G為-O-、-S-、NRG2-、-CO-、-SO-、-SO2-、C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、C(＝O)-、-NRG2C(O)-或-SO2NRG2-，且RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；
n為0-4的整數；
AR1為單環或多環芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基、脂環族或雜環族部分；
如果價態允許，A、B、D和E通過單鍵或雙鍵連接；其中A、D和E每次出現時獨立地為C＝O、CRiRii、NRi、CRi、N、O、S、-S(＝O)或SO2；其中Ri每次出現時獨立地為氫、滷素、-CN、-NO2、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或者為-GRG1，其中，G為-O-、-S-、-NRG2、-CO-、-SO-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C(＝O)-或-SO2NRG2-，和RG1和RG2獨立地為氫、脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或任意兩個相鄰基團連接在一起代表脂環族、雜脂環族、芳基、或雜芳基部分；
p為0-4的整數；和
L為不存在或V-W-X-Y-Z，其中V、W、X、Y和Z每次出現時獨立地為不存在、C＝O、NRL1、-O-、-C(RL1)＝、＝C(RL1)-、-C(RL1)(RL2)、C(＝N-ORL1)、C(＝NRL1)、-N＝、S(O)0-2；取代或未取代的C1-6亞鏈烯基或C2-6亞鏈烯基鏈，其中最多兩個不相鄰亞甲基單元獨立地任選被下述基團代替-C(＝O)-、-CO2-、-C(＝O)C(＝O)-、-C(C＝O)NRL3-、-OC(＝O)、-OC(＝O)NRL3-、-NRL3NRL4-、-NRL3NRL4C(＝O)-、-NRL3C(＝O)-、NRL3CO2-、NRL3C(＝O)NRL4-、-S(＝O)-、-SO2-、-NRL3SO2-、-SO2NRL3、-NRL3SO2NRL4、-O-、-S-或-NRL3-；其中RL3和RL4每次出現時獨立地為氫、烷基、雜烷基、芳基、雜芳基或醯基；或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分；RL1和RL2每次出現時獨立地為氫、羥基、被保護的羥基、氨基、被保護的氨基、硫代、被保護的硫代基團、滷素、氰基、異氰酸酯、羧基、羧烷基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、脲基、硫脲基、硫氰基、烷氧基、芳氧基、巰基、亞磺醯氨基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基，或脂肪族、脂環族、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、烷基芳基或烷基雜芳基部分，或其中的一個或多個RL1和RL2連接在一起，或者與V、W、X、Y或Z之一連接在一起形成脂環族或雜環族部分或形成芳基或雜芳基部分。
40.根據權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑包括式II化合物
式II
其中，R27選自下列基團
或
且R28選自下列基團
或
和
且R29為氫，藥物可接受的鹽或酯。
38.根據權利要求37的製劑，其中式II化合物進一步包括如式II』的立體化學。
式II』。
41.根據權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑包括式IIA化合物
式IIA
其中，R17包括氫，藥物可接受的鹽或酯。
44.根據權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑包括式III的化合物，其中
式III
Cy為任選被下述基團取代的芳香族碳環、芳香族雜環或非芳香族雜環羥基、巰基、硫烷基、滷素、氧代、硫代、氨基、氨基烷基、脒基、胍基、硝基、烷基或烷氧基或醯基；
X2為CH2-NR10-[二價烴鏈]-，其中所述二價烴鏈任選被羥基、巰基、滷素、氨基、氨基烷基、硝基、氧代或硫代取代；
K為任選被下述基團取代的雜環羥基、巰基、滷素、氧代、硫代、硫代烷基、氨基、氨基烷基、碳環或雜環、烴、滷素取代的烴、氨基、脒基、胍基、氰基、硝基、烷氧基或醯基；
L2為-[二價烴鏈]-NR10-CH2-，其中所述二價烴鏈任選被羥基、滷素、氧代或硫代取代，且R10為H或烷基；
R5為H、OH、氨基、O-碳環或任選被氨基、碳環、雜環取代的烷氧基，或者為藥物可接受的鹽或酯；
R6-9獨立地為H、羥基、巰基、滷素、氰基、氨基、脒基、胍基、硝基或烷氧基；
R10為H或任選被碳環或雜環取代的烴鏈；及其鹽、溶劑化物和水合物。
45.權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑為式IV化合物
式IV
其中，R11為下式基團
其中，A為氫、羥基、氨基或滷素，B為氨基、羧基、氫、羥基、氰基、三氟甲基、滷素、低級烷基或低級烷氧基；
R12為下式基團
其中，R13為氫、羧基或低級烷基；
n為0或1；
U2、V2和W2獨立地為氫、滷素或低級烷基，條件是U2和V2不都為氫；
X3為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；
Y2為低級亞烷基，其可以被一個或多個氨基、取代的氨基、低級烷基或環低級烷基取代，或Y2為低級亞鏈烯基或低級亞烷基硫基；
k為0或1；
當k為1時，Z2為氫、低級烷硫基、-COOH、-CONH2、氨基；
當k為0或1時，Z2為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯代吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基、羥基、苯基甲氧基、2-氯-4-[[[(3-羥基苯基)甲基]氨基]羰基]苯基、[2，6-二氯苯基)甲氧基]苯基；
當k為0或1時，Z2為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，該環獨立地為含有0-3個相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，任何一個環可以為未取代的，或被至少下列之一取代滷素，氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素取代的低級烷基、低級烷氧基-取代的低級烷基、低級烷氧基、低級烷磺醯基、低級烷硫基、乙醯基、氨基羰基、肼基、羧基、烷氧基羰基、乙醯氧基，或者還可以被氨基低級烷基取代；
R20為氫，藥物可接受的鹽或酯。
46.權利要求45的製劑，其中式IV化合物進一步包括如式IV』的立體化學
式IV』。
47.權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑為式V化合物
式V
其中，R14為下式基團
或
R15為氫、羧基或低級烷基；
U3、V3和W3獨立地為氫、滷素；
U3、V3和W3為低級烷基，條件是U3和V3不都為氫；
X4為羰基、苯基取代的低級亞烷基、亞氨基、取代的亞氨基或磺醯基；
Y3為低級亞鏈烯基、低級亞烷基硫基，或為低級亞烷基，其可以被氨基、乙醯基氨基或環低級烷基取代；
k2為0或1；
當k2為1時，Z為氫、低級烷基硫基、-COOH、-CONH2-，或氨基；
當k2為0或1時，Z3為1-金剛烷基、二苯基甲基、3-[[(5-氯吡啶-2-基)氨基]羰基]吡嗪-2-基；
當k2為0或1時，Z可以為含有0-3個可以相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，或者為含有2或3個環的稠合環系，其中該環獨立地為含有0-3個可以相同或不同的雜原子的環烷基或芳基，其中任何一個環都可以為未取代的，或者被至少下列之一取代滷素、氰基、氨基、取代的氨基、氨基磺醯基、硝基、氧代、羥基、芳基、芳氧基、未取代的低級烷基、滷素-取代的低級烷基、低級烷氧基-取代的低級烷基、低級烷氧基、羧基、烷氧基羰基或乙醯氧基；和，
R21為氫，其藥物可接受的鹽或酯。
48.權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑包括式VI化合物
式VI
其中，
D4為單-、二-或三環飽和、不飽和，或芳香族環，每個環的環中具有5、6或7個原子，其中環內的原子為碳或為1-4個選自氮、氧和硫的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；
L3為選自下列基團的二價連接基團
-L3-L2-L1-，
-L4-L3-L2-L1-，和
-L5-L4-L3-L2-L1-，
其中，
L1選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR32、R32、CR32 het、NR30和N，
L2選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR34R34′、CR34、het NR30和N，
L3選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR35R35′、CR35、het NR30和N，
L4為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、C(＝N-O-R33)、CR36R36′、CR36、NR30和N，
L5為不存在，或選自氧代(-O-)、S(O)s、C(＝O)、CR37R37′、CR37、NR30和N，條件是L1-L3中只有一個可以為het，而且當L1-L3之一為het時，L1-L5中的另一個可以為不存在，
其中，
R32、R32′、R34、R34′、R35、R35′、R36、R36′、R37和R37′各自獨立地選自R38、R39和
U-Q-V-W，
任選地，R24和R34′獨立地或者一起可以通過位於B上的取代基RP而與B3形成飽和、不飽和或芳香族稠合環，該稠環在環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中任何S或N可以任選被氧化；
任選地，R35和R35』獨立地或者一起，R36和R36′獨立地或者一起可以通過位於D3上的取代基R31而與D3形成飽和、不飽和或芳香族稠環，該稠環的環中含有5、6或7個原子，並且任選含有1-3個選自O、S和N的雜原子，其中任何S或N可以任選被氧化；
同樣任選地，每個R32-R37、NR30或L1-L5中的N與任何其它的R32-R37、NR30或L1-L5中的N一起可以形成5、6或7元飽和、不飽和的同素或雜環或芳香族，其任選含有1-3個另外的，選自N、O和S的雜原子，其中，任何碳或硫原子可以任選被氧化，每個環被0-3個R31取代；而且其中s為0-2；B選自下列基團
和
其中
其為含有5、6或7個原子的稠合雜-或同素環，該環為不飽和、部分飽和或芳香族環，雜原子選自1-3個O、S和N，
Y3選自CH和NR30；n為0-3；
G3選自氫和C1-C6烷基，任選G與T一起可以形成任選被-V-W取代的C3-C6環烷基；
T3選自天然形成的α-氨基-酸側鏈，
和U4-Q4-V4-W4；
U4為選自下列的任選被取代的二價基團
C1-C6烷基、C0-C6烷基-Q、C2-C6鏈烯基-Q，和C2-C6炔基-Q
其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38；
Q4為不存在或選自下列基團
-O-、-S(O)s-、-SO2-N(R30)-、-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-、-N(R30)-C(＝O)-N(R30)-、-N(R30)-C(＝O)-O-、-N(R30)-SO2-、-C(＝O)-、-C(＝O)-O-、-het-、-C(＝O)-N(R30)-、-O-C(＝O)-N(R30)-、-PO(OR30)O-和-P(O)O-；
其中，
s為0-2，且
het為單或雙環的5、6、7、9或10元雜環，每個環含有1-4個選自N、O和S的雜原子，其中雜環可以為飽和、部分飽和或芳香族環，而且任何N或S任選被氧化，該雜環被0-3個R41取代；
V4為不存在，或為選自C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C0-C6烷基-C6-C10芳基和C0-C6烷基-het的任選取代的二價基團；
其中，任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
W4選自下列基團
氫、OR33、SR42、NR30R30、NH-C(＝O)-O-R43、NH-C(＝O)-NRnRn，NH-C(＝O)-R43、NH-SO2-R37、NH-SO2-NR30R30、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-NR30R30′、C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-NH-SO2-NR30R30′、C(＝S)-NR30R30′、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-NR37R37′、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-NR30R30′、SO2-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NR30R30′、O-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、O-C(＝O)-NH-SO2R46和O-SO2-R37；
R44選自C(＝O)-R45、C(＝O)-H、CH2(OH)和CH2O-C(＝O)-C1-C6烷基；
R38為被1-3個R38′取代的R38』或R38″；其中，
R38′選自下列基團
氫、滷代(F、Cl、Br、I)、氰基、異氰酸酯、羧基、羧基-C1-C11烷基、氨基、氨基-C1-C8烷基、氨基羰基、羧醯胺基、氨基甲醯基、氨基甲醯氧基、甲醯基、甲醯氧基、疊氮基、硝基、咪唑基、脲基，硫脲基、氫硫基、羥基、C1-C6烷氧基、巰基、亞磺醯氨基、het、苯氧基、苯基、苯甲醯氨基、甲苯磺醯基、嗎啉代、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基，吡咯啉基、咪唑基和吲哚基；
R38″選自下列基團
C0-C10烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C10鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C0-C10炔基-Q-C0-C6烷基、C3-C11環烷基-Q-C0-C6烷基、C3-C10環鏈烯基-Q-C0-C6烷基、C1-C6烷基-C6-C12芳基-Q-C0-C6烷基、C6-C10芳基-C1-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-het-C0-C6烷基、het-C0-C6烷基-Q-C0-C6烷基、C0-C6烷基-Q-C6-C12芳基和-Q-C1-C6烷基；
R43選自氫和取代或未取代的C1-C10烷基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C6烷基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基和het，
其中，任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
R31選自R40和R41；
R41選自下列基團
OH、OCF3、OR43、SR42、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、NO2、CF3、C0-C6烷基-NR30R30、C0-C6烷基-C(＝O)-NR30R30′、C0-C6烷基-C(＝O)-R38、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C6環烷基、C3-C6環鏈烯基、C1-C6烷基苯基、苯基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基羰基、苯基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、SO2-het、-O-C6-C12芳基、-SO2-C6-C12芳基、-SO2-C1-C6烷基和het，其中任何烷基、鏈烯基或炔基可以任選被1-3個選自OH、滷代(F、Cl、Br、I)、硝基、氨基和氨基羰基的基團取代，而且任何芳基或het上的取代基為1-2個羥基、滷代(F、Cl、Br、I)、CF3、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、硝基和氨基；
Rm選自S-C1-C6烷基、C(＝O)-C1-C6烷基、C(＝O)-NR30R30′、C1-C6烷基、滷代(F、Cl、Br、I)-C1-C6烷基、苄基和苯基；
R30選自下列基團R43、NH-C(＝O)-O-R43、NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NHR43、NH-SO2-R46、NH-SO2-NH-C(＝O)-R43、NH-C(＝O)-NH-SO2-R37、C(＝O)-O-R43、C(＝O)-R43、C(＝O)-NHR43、C(＝O)-NH-C(＝O)-O-R43、C(＝O)-NH-C(＝O)-R43、C(＝O)-NH-SO2-R46、C(＝O)-NH-SO2-NHR37、SO2-R37、SO2-O-R37、SO2-N(R43)2、SO2-NH-C(＝O)-O-R43、SO2-NH-C(＝O)-O-R43和SO2-NH-C(＝O)-R43；
R30′選自氫、羥基和取代或未取代的C1-C11烷基、C1-C11烷氧基、C2-C10鏈烯基、C2-C10炔基、C3-C11環烷基、C3-C10環鏈烯基、C1-C6烷基-C6-C12芳基、C6-C10芳基-C1-C-6烷基、C6-C10芳基-C0-C6烷氧基、C1-C6烷基-het、het-C1-C6烷基、C6-C12芳基、het、C1-C6烷基羰基、C1-C8烷氧基羰基、C3-C8環烷基羰基、C3-C8環烷氧基羰基、C6-C11芳氧基羰基、C7-C11芳基烷氧基羰基、雜芳基烷氧基羰基、雜芳基烷基羰基、雜芳基羰基、雜芳基烷基磺醯基、雜芳基磺醯基、C1-C6烷基磺醯基，和C6-C10芳基磺醯基，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基、het或雜芳基上的取代基為1-3個R31；
R30和R30′與相連的氮一起可以形成任選取代的雜環，所述雜環選自嗎啉基、哌嗪基、硫嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1，2，3，4-四氫喹啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉基、噻唑烷基和氮雜二環壬基，其中的取代基為1-3個R38；
R33選自氫和取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烷基羰基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C3-C8環烷基和苯甲醯基，其中任何烷基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R40；
R40選自下列基團OH、滷代(F、Cl、Br、I)、CN、異氰酸酯、OR43、SR42、SOR43、NO2、CF3、R43、NR30R30′、NR30C(＝O)-O-R43、NRC(＝O)-R43、C0-C6烷基-SO2-R43、C0-C6烷基-SO2-NR30R30 ′、C(＝O)-R43、O-C(＝O)-R43、C(＝O)-O-R43和C(＝O)-NR30R30′，其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基上的取代基為1-3個R31；
R46為取代或未取代的、選自下列的基團
C1-C8烷基、C2-C8鏈烯基、C2-C8炔基、C3-C8環烷基、C3-C6環鏈烯基、C0-C6烷基-苯基、苯基-C0-C6烷基、C0-C6烷基-het和het-C0-C6烷基，
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31；
R45為取代或未取代的、選自下列的基團羥基、C1-C11烷氧基、C3-C12環烷氧基、C8-C12芳烷氧基、C8-C12芳環烷氧基、C6-C10芳氧基、C3-C10烷基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰氧基烷氧基、C3-C10烷氧基羰基烷氧基、C5-C10環烷基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰氧基烷氧基、C5-C10環烷氧基羰基烷氧基，C8-C12芳氧基羰基烷氧基、C8-C12芳氧基羰氧基烷氧基、C8-C12芳基羰氧基烷氧基、C5-C10烷氧基烷基羰氧基烷氧基、(R30)(R30)N(C1-C10烷氧基)-，
和
其中任何烷基、鏈烯基或炔基上的取代基為1-3個R38，而且任何芳基或het上的取代基為1-3個R31，及其藥物可接受的鹽。
49.權利要求34的製劑，其中所述製劑適於經滴注、注射、口服、鼻內、局部或離子電滲施用。
50.權利要求45的製劑，其中所述適於注射給藥的可注射製劑經皮下、結膜下、眼球後或眼房內注射施用。
51.權利要求31的製劑，其中所述製劑包括溶液、懸浮液、軟膏、貼劑或眼插入物。
52.一種確定LFA-1拮抗劑的方法，所述化合物為LFA-1ICAM相互作用的競爭性抑制劑，該方法包括
在結合試驗中將已知濃度的拮抗劑候選分子結合在選自ICAM-1、s-ICAM-1和LFA-1的配體上；
加入一組濃度的標記化合物，其中所述化合物已知為處於LFA-1α鏈結構域I上的LFA-1和ICA相互作用的抑制劑；
得到結合曲線；
確定每組結合競爭作用的EC50值；和
根據所述EC50值確定所述候選分子的拮抗劑分子。
53.權利要求52的方法，其中所述標記化合物包括式VII化合物
式VII。
54.一種治療患者的乾眼病的方法，其包括對所述患者進行乾眼診斷試驗；基於所述診斷步驟來確定所述患者是否患有乾眼病；和根據所述乾眼病的診斷，向所述患者給藥有效量的淋巴細胞功能相關抗原-1(LFA-1)的拮抗劑或其藥物可接受的鹽或酯。
55.權利要求54的方法，其中通過對所述患者的眼進行成像或者對所述患者的眼生理試樣進行分析來進行所述診斷步驟。
56.一種鑑定可用於治療人類疾病的化合物的方法，包括
從預選的一組細胞系中獲得siRNA細胞活性數據；
獲得用所述siRNA治療的所述細胞系的生長調節特性曲線，和用潛在的治療試劑治療時所述細胞系的生長調節特性曲線，將兩個特性曲線進行比較；和，
根據下述方式鑑定活性治療試劑所述治療試劑顯示基本上類似於將所述活性治療試劑施用於所述細胞系時的siRNA的細胞活性特性曲線。
57.權利要求1的方法，其中所述LFA-1拮抗劑為有機小分子。
58.權利要求1或22的方法，或權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑選自下式基團
59.權利要求1或22的方法，或權利要求34的製劑，其中所述LFA-1拮抗劑選自下式基團
全文摘要
本發明提供治療由LFA-1介導的疾病的化合物和方法。尤其，本申請中描述了LFA-1拮抗劑，而且將這些拮抗劑用於治療由LFA-1介導的疾病。本發明的一個方面提供治療由LFA-1介導的疾病的診斷方法，和在診斷出病人患有LFA-1介導的疾病之後給藥LFA-1拮抗劑。在一些實施方案中，被治療的由LFA-1介導的疾病為乾眼症。本申請還提供了鑑定作為LFA-1拮抗劑的化合物的方法。
文檔編號A61K31/166GK101175488SQ200680017188
公開日2008年5月7日 申請日期2006年5月17日 優先權日2005年5月17日
發明者T·蓋德特, J·伯尼爾 申請人:薩可德公司