包含第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的化療栓塞用組合物及其製備方法與流程

2024-01-27 02:21:15 1

本發明涉及以規定比例包含具有不同的抗癌劑釋放特性的第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的化療栓塞用組合物及其製備方法。

背景技術：

近來，隨著影像技術的發展，可以找出隱藏在體內的癌腫的準確位置，並利用放射線照射、內窺鏡手術等的多種方法來去除癌腫。但是，即使準確地發現癌腫的位置，也存在因癌腫擴散至整個臟器或緊貼於其他臟器等的多種原因，而無法通過手術來去除的情況。肝癌、胰腺癌等的情況即使被發現，也無法通過手術來進行根治的情況較多。

目前，化療栓塞術(Transarterial Chemoembolization，TACE)作為在肝腫瘤的治療中最為廣泛施行的手術之一，是一種找出向肝腫瘤提供營養的動脈，並將抗癌劑進行給藥之後閉塞血管的治療方法。肝組織利用經過小腸及大腸等的門靜脈(portal vein)和從大動脈直接延伸形成的肝動脈接收氧氣和營養，正常的肝組織是主要從門靜脈中接收血液，腫瘤組織是主要從肝動脈中接收血液。因此，若在向腫瘤供給營養的肝動脈上將抗癌劑進行給藥之後閉塞血管，則在不損傷正常肝組織的情況下，可以選擇性地僅使腫瘤壞死。這種治療方法沒有與癌腫的發展程度相關的約束，因此具有適用範圍廣、對治療對象的限制少等的諸多優點，因此目前在提高肝癌的治癒率的方法中做出了最大貢獻。化療栓塞術先在位於腹股溝的股動脈插入導管，來接近肝動脈之後，通過注射血管造影劑來取得腫瘤的位置、大小及血液供給狀態等的治療上所需的信息，當確定治療方針時，將具有約1mm左右厚度的細管插入於導管，並找出靶動脈之後進行手術。

目前，在臨床上應用最頻繁的代表性的方法為利用碘油的肝動脈栓塞法，並且具有很多有關利用這些方法的專利技術方面的報導。由於碘油大量包含作為組成成分的碘，因而具有可進行電子計算機斷層掃描(Computed Tomography，CT)影像的優點，由此為手術提供了方便。但是，存在為了載入阿黴素而在手術之前需要將溶解有藥物的注射液和油狀的碘油進行振蕩來混合的缺點。並且，據有關臨床上的報導有手術之後，溶解在水中的阿黴素未被積累在肝癌部位，急速地流向全身血液，因此不僅未能得到充分的抗癌效果，而且患者對藥物的副作用也相當大。

在美國專利7，442，385號中敘述了如下的方法，即，通過交聯聚乙烯醇(poly vinyl alcohol，PVA)來製備微尺寸的顆粒之後，利用電引力在微珠的表面吸附作為抗癌劑的阿黴素，並向肝癌部位傳遞，從而同時實現抗癌劑的持續性釋放和栓塞效果。為此，在交聯聚乙烯醇的過程中，在交聯末端上與作為陰離子單體的2-丙烯醯胺-2-甲基丙磺酸(2-acrylamido-2-methylpropane sulfonic acid，AMPS)形成共價鍵，來改質聚合物，由此可吸附如阿黴素等的陽離子藥物。但是，在利用聚乙烯醇的肝動脈栓塞術中，由於形成交聯的聚乙烯醇在體內中未被分解，因此肝腫瘤壞死之後，因聚乙烯醇微珠以非特定的方式進行擴散而引起炎症，或者更為擔心的是，在沿著血管擴散至其他臟器的情況下，會引起腦血栓等的問題。因此，需要可同時取得作為可以改善問題的抗癌傳遞系統的功能和血管栓塞功能的藥物傳遞體。

根據這種需求，本發明的發明人曾開發了解決以往的癌症局部治療用微珠存在的問題的白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(韓國專利申請第10-2013-0139303號)及白蛋白/糖胺聚糖微珠(韓國專利申請第10-2013-0139304號)。上述微珠是由生物相容性材料的白蛋白和陰離子性高分子製備而成，因此當適用於人體時具有安全性，由此可以有效閉塞向肝腫瘤供給營養的血管的同時，並且釋放吸附在微珠的表面的抗癌劑，因此可有效控制腫瘤的生長。

另一方面，每個微珠的化療栓塞用微珠的藥物洗脫特性具有差異，目前因缺乏臨床結果，因而實際情況為，對於洗脫速度快為有效還是洗脫速度慢為有效的統計結果還欠妥。進而，理所當然地需要有關腫瘤的大小及癌腫的發展程度的藥物的釋放速度的調節。

在本發明的說明書全文中，參照了大量的論文及專利文獻，並標記了其引用。被引用的論文及專利文獻的公開內容是以全文的形式作為參照來插入於本發明的說明書中，由此更加明確地說明了本發明所屬的技術領域的水平及本發明的內容。

技術實現要素：

技術問題

本發明的發明人致力於為了開發可根據微珠的使用環境和使用目的等有效地調節從化療栓塞用微珠中釋放的藥物的釋放速度的技術開發的研究。其結果，本發明的發明人發現白蛋白/右旋糖酐硫酸酯的微珠的藥物釋放特性與白蛋白/糖胺聚糖的微珠的藥物釋放特性不同，由此確認到當將兩個微珠以特定比例來混合使用時，可根據混合比例調節藥物的釋放速度的事實，並完成了本發明。

因此，本發明的目的在於提供包含上述兩種微珠的化療栓塞用組合物。

本發明的再一目的在於提供用於製備化療栓塞用組合物的上述兩種微珠的用途。

本發明的另一目的在於提供上述化療栓塞用組合物的製備方法。

本發明的還一目的在於提供通過將表面吸附有抗癌劑的上述兩種微珠進行給藥來治療癌症的方法。

本發明的又一目的及優點可以根據如下的發明的詳細的說明、發明要求保護範圍及附圖更加明確。

解決問題的方案

根據本發明一實施方式，本發明提供化療栓塞用組合物，上述化療栓塞用組合物的特徵在於，包含第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠，上述第一生物降解性微珠包含通過交聯結合來形成微珠形態的白蛋白以及作為包含在上述白蛋白的交聯物內的陰離子性高分子的右旋糖酐硫酸酯，上述第二生物降解性微珠包含通過交聯結合來形成微珠形態的白蛋白以及作為包含在上述白蛋白交聯物內陰離子性高分子的糖胺聚糖(glycosaminoglycan)類高分子，上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠能夠通過包含在上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠中的陰離子性高分子的靜電引力，在微珠表面上吸附抗癌劑。

根據本發明另一實施方式，本發明提供用於製備上述化療栓塞用組合物的上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的用途。

本發明的發明人致力於為了開發可根據微珠的使用環境和使用目的等有效地調節從化療栓塞用微珠中釋放的藥物的釋放速度的技術開發的研究。其結果，本發明的發明人發現白蛋白/右旋糖酐硫酸酯的微珠的藥物釋放特性與白蛋白/糖胺聚糖的微珠的藥物釋放特性不同，由此確認到了當將兩個微珠以特定比例來混合使用時，可根據混合比例調節藥物的釋放速度的事實。

根據本發明一實施例，當向體內將包含有第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的本發明的組合物進行給藥時，可向周圍釋放抗癌劑，此時的抗癌劑的釋放速度根據包含在組合物中的第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的配合比例發生變化。

如通過下述實施例得到的確認所示，白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(第一生物降解性微珠)的抗癌劑的釋放速度顯著慢於白蛋白/糖胺聚糖微珠(第二生物降解性微珠)，在混合這些微珠的情況下，根據混合比例表示出了各不相同的抗癌劑的釋放特徵(洗脫特性)(參照圖6至圖10)。因此，可以通過調節第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的混合比例，來調節組合物所表示出的抗癌劑的釋放速度(洗脫速度)。

根據本發明一實施例，包含在本發明的組合物的第一生物降解性微珠與第二生物降解性微珠的比例為0.01～99.99︰99.99～0.01(v/v％)。

根據本發明一實施例，本發明的組合物示出的抗癌劑的釋放速度，可以根據對於第一生物降解性微珠的第二生物降解性微珠的比例增加而加快。

本發明的化療栓塞用組合物是為了治療實體癌而注射在體內來的。作為一例，本發明的組合物是為了肝癌的化療栓塞術(肝動脈栓塞術)而向體內進行給藥。除了肝癌之外可適用的實體癌可例舉為通過直腸動脈來治療直腸細胞癌的方法(K.Tsuchiya,Urology.Apr；55(4):495-500(2000))。

根據本發明一實施例，本發明的組合物能夠以將第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠包裝在適當的容器(例如，樣品瓶)內的方式實現。上述生物降解性微珠可以同溶液一起包裝在樣品瓶(溼式)，並且可以將生物降解性微珠形成粉末狀態來包裝在樣品瓶(乾式)。並且，上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠能夠以混合於容器內的狀態來存在，也可以在選擇性地額外劃分的空間獨立存在。

以下，對上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠進行詳細的說明。有關上述微珠的說明還分別記載於韓國專利申請第10-2013-0139303號及第10-2013-0139304號，上述專利文獻作為參照來插入於本發明的說明書中。

作為上述第一生物降解性微珠的組成成分包含白蛋白及右旋糖酐硫酸酯。上述白蛋白起到支撐體的作用，即，通過交聯結合來形成微珠的形態並保持。上述右旋糖酐硫酸酯作為陰離子性高分子，其作用在於，通過包含在進行交聯結合的白蛋白內，來使抗癌劑吸附於微珠表面。上述白蛋白及右旋糖酐硫酸酯均作為生物相容性高分子，可以在體內進行分解，因此可以解決因以往的聚乙烯醇的微珠所存在的無法在體內進行分解而產生的問題，例如，因聚乙烯醇以非特定的方式擴散於體內而引起炎症，或者因沿著血管擴散至其他臟器而有可能引起腦血栓等的問題。

上述第二生物降解性微珠作為組合成分包含白蛋白及糖胺聚糖類高分子。上述白蛋白與第一生物降解性微珠相同地起到支撐體的作用，即，通過交聯結合來形成微珠的形態並保持。上述糖胺聚糖類高分子作為陰離子性高分子，其作用在於，通過包含在進行交聯的白蛋白內，來使抗癌劑吸附於微珠表面。上述白蛋白及糖胺聚糖類高分子均作為生物相容性高分子物質，可以在體內進行分解，因此與上述第一生物降解性微珠相同地，可以解決因以往的聚乙烯醇的微珠所存在的無法在體內進行分解而產生的問題，例如，因聚乙烯醇因以非特定的方式擴散於體內而引起炎症，或者因沿著血管擴散至其他臟器，而有可能引起腦血栓等的問題。

根據本發明一實施例，上述第一生物降解性微和/或第二生物降解性微珠的陰離子性高分子與進行交聯結合的白蛋白進行醯胺結合。在這種情況下，上述白蛋白與陰離子性高分子的羧基或氨基形成醯胺結合，並且白蛋白之間進行交聯結合，來起到形成微珠的形態並保持的支撐體的作用。上述陰離子性高分子通過與白蛋白的氨基或羧基來形成醯胺結合使抗癌劑吸附於微珠的表面。

根據本發明一實施例，上述第二生物降解性微珠包含通過進行交聯結合的白蛋白與陰離子性高分子的糖胺聚糖類高分子形成醯胺結合，來形成的白蛋白-糖胺聚糖的結合物。

在本發明的說明書中所使用的術語「生物降解性」是指，當露出在生理溶液(physiological solution)時可被分解的性質，例如，在包括人類的哺乳動物的體內，可被體液或微生物等分解的性質。

根據本發明一實施例，上述白蛋白作為廣泛分布於體細胞或體液中的蛋白質，包含動物白蛋白及植物白蛋白。

根據一特定例，上述動物白蛋白包含卵清白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白及肌漿蛋白，上述植物白蛋白包含麥清蛋白(大麥種子)、豆白蛋白(豌豆)及賴氨酸(蓖麻種子)。在上述白蛋白中也包含白蛋白的變異體。

根據本發明一實施例，上述糖胺聚糖類高分子選自由硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)、硫酸皮膚素(dermatan sulfate)、硫酸角質素(keratan sulfate)、硫酸乙醯肝素(heparan sulfate)、肝素(heparin)及透明質酸(hyaluronan)組成的組。

根據本發明一實施例，上述白蛋白的交聯通過熱交聯或醛類交聯來進行。

根據一特定例，上述醛類交聯劑選自由戊二醛、甲醛、二醛澱粉、琥珀酸醛、丙烯醛、草酸醛、2-甲基丙烯酸醛及2-氧代丙醛組成的組。

根據本發明一實施例，上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的每1ml微珠可分別吸附10～100mg的抗癌劑。

根據一特定例，作為上述生物降解性微珠的抗癌劑的吸附能力為每1ml微珠吸附20～60mg，在再一特定例中，每1ml微珠吸附20～55mg，在還一特定例中，每1ml微珠吸附20～50mg。

根據本發明一實施例，上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠還包含利用與陰離子性高分子之間的靜電引力而吸附於在微珠表面的抗癌劑。

根據一特定例，上述抗癌劑為蒽環類抗癌劑。上述蒽環類抗癌劑具有，例如，阿黴素、柔紅黴素、表阿黴素、含去甲氧柔紅黴素、吉西他濱、米託蒽醌、吡柔比星及戊柔比星等。

根據其他特定例，上述抗癌劑為伊立替康。

根據本發明的另一實施方式，本發明提供包括如下的步驟的化療栓塞用組合物的製備方法，上述化療栓塞用組合物的製備方法包括：步驟(a)，通過對微尺寸的泡沫進行交聯，使白蛋白進行交聯結合，來製備在上述白蛋白交聯物內包含有右旋糖酐硫酸酯的第一生物降解性微珠，上述微尺寸的泡沫是通過對溶解有白蛋白和作為陰離子性高分子的右旋糖酐硫酸酯的微珠製備用溶液進行乳化而形成的；步驟(b)，通過對微尺寸的泡沫進行交聯，使白蛋白進行交聯結合，來製備在上述白蛋白交聯物內包含有糖胺聚糖類高分子的第二生物降解性微珠，上述微尺寸的泡沫是通過對溶解有白蛋白和作為陰離子性高分子的右旋糖酐硫酸酯的微珠製備用溶液進行乳化而形成的；以及步驟(c)，以規定比例對上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠進行混合之後包裝在容器中，根據上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的配合比例來調節化療栓塞用組合物的抗癌劑釋放速度。

根據本發明一實施例，本發明的方法還包括在步驟(a)和/或步驟(b)之後使製備的第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠與抗癌劑相接觸，並利用微珠的陰離子性高分子的靜電引力使抗癌劑吸附於微珠表面的步驟。

根據本發明的另一實施例，本發明的方法還包括在步驟(c)之後使包裝在容器的第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠與抗癌劑相接觸，並利用微珠的陰離子性高分子的靜電引力，使抗癌劑吸附於微珠表面的步驟。此時，抗癌劑的吸附可以在上述生物降解性微珠被包裝在容器內的狀態下實施，或者可以從容器中拿出微珠之後，在另外的容器中實施。

根據本發明一實施例，上述步驟(a)及步驟(b)的微珠製備用溶液的乳化為利用包含天然油或增粘劑的有機溶劑來實施。

作為可利用的天然油的例，可以舉出中鏈甘油三酯(medium cha in triglyceride，MCT)、棉子油、玉米油、杏仁油、杏油、鱷梨油、巴巴蘇油、椰子油、春黃菊油、芥花油、可可脂、椰子油、魚肝油、咖啡油、魚油、亞麻籽油、霍霍巴油、葫蘆油、葡萄籽油、榛子油、薰衣草油、檸檬油、芒果籽油、橙油、橄欖油、貂油、棕櫚樹油、迷迭香油、芝麻油、牛油果油、豆油、向日葵油及核桃油等。

作為可利用的有機溶劑，可以舉出丙酮、乙醇、醋酸丁酯等。上述有機溶劑為了賦予適當的粘度而包含增粘劑。作為上述增粘劑的例，可以舉出羥甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙酸丁酸纖維素等的纖維素類聚合物。

根據本發明一實施例，上述步驟(a)及步驟(b)的微尺寸的泡沫是利用微流體系統或封裝物而形成的。微流體系統作為利用微觀結構的碎片來製備微珠的方法，在大的管的內部放置更小的管之後，若在反方向上流入水和油，則藉助相互之間的張力而形成微珠。即，若將微珠製備用溶液用作內部的流體，且將上述天然油或有機溶劑(收集溶液)用作外部流體來流入，則藉助張力形成微珠之後，將它再次收集在收集溶液中，並可通過交聯反應來製備微珠。

封裝物的特徵在於，利用類似於靜電紡絲的方法，在噴嘴與收集溶液之間形成電磁場之後，將藉助張力來形成的水珠精細分裂成具有細小尺寸的微珠。將微珠製備用溶液轉移到合適容量的注射器，將此安裝在注射器泵之後與封裝物相連接。並且，也將收集溶液轉移到適合於容量的盤子之後，放置在攪拌器的上部，並適當地設定封裝物的環境之後，在收集溶液中噴射微珠製備用溶液來形成泡沫。封裝物的適用條件為如下：流速為1～5ml/分鐘，施加電力為1000～3000V，超聲波為2000～6000Hz，旋轉數為100rpm以下，所使用的釋放噴嘴的大小應該根據需要製備的微珠的大小來選擇。

根據本發明另一實施例，本發明的步驟(a)及步驟(b)的微尺寸的泡沫可以利用混合微珠製備用溶液與收集溶液之後，根據適當的旋轉數來進行攪拌的乳化法來製備。此時，微珠的大小取決於旋轉數和攪拌時間。當形成適當大小的泡沫時，通過對泡沫進行交聯來形成微珠。

根據本發明一實施例，繼續攪拌來保持反應，直到白蛋白的交聯反應結束為止，當反應結束時，為了清潔收集溶液而利用過量的丙酮或乙醇，來多次清洗微珠。

根據本發明一實施例，上述交聯利用醛類交聯劑，或者熱交聯的方法來進行。在利用熱交聯來製備本發明的微珠的情況下，由於不使用對體內有害的化學交聯劑，因而在身體適宜性上優秀，而且可以省略化學交聯劑的去除工序而具有經濟性。

根據本發明一實施例，上述熱交聯的溫度為60℃以上(例如，60～160℃)，進行熱交聯的時間為1至4小時。

根據本發明一實施例，上述步驟(b)的微珠製備用溶液包含白蛋白與糖胺聚糖類高分子形成醯胺結合的白蛋白-糖胺聚糖結合物。在這種情況下，在步驟(b)中，通過交聯微尺寸的泡沫，來製備形成交聯的白蛋白的第二生物降解性微珠，上述微尺寸的泡沫是通過乳化由白蛋白和糖胺聚糖類高分子的醯胺結合而形成的白蛋白-糖胺聚糖結合物而形成的。由此，製備包含由形成交聯的白蛋白與糖胺聚糖類高分子的醯胺結合而形成的白蛋白-糖胺聚糖結合物的第二生物降解性微珠。

在上述步驟(c)中，為了體現化療栓塞用組合物所要達到的抗癌劑的釋放速度，將第一生物降解性微珠及第二生物降解性微以規定比例來混合，並包裝在容器(例如，樣品瓶)。此時，以100％(v/v)為基準，上述第一生物降解性微珠和第二生物降解性微珠的混合比例可以為0.01～99.99︰99.99～0.01(v/v％)範圍。

根據本發明另一實施方式，本發明提供癌症的治療方法，其特徵在於，包括將包含第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的組合物向需要它的患者進行給藥的步驟，上述第一生物降解性微珠包含通過交聯結合來形成微珠形態的白蛋白以及作為包含在上述白蛋白交聯物內的陰離子性高分子的右旋糖酐硫酸酯，上述第二生物降解性微珠包含通過交聯結合來形成微珠形態的白蛋白以及作為包含在上述白蛋白交聯物內的陰離子性高分子的糖胺聚糖類高分子，通過包含在上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠中的陰離子性高分子的靜電引力，在上述第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的表面吸附有抗癌劑。

根據本發明，可以通過將上述組合物向癌症患者進行給藥之後，利用化學栓塞來治療癌腫。

根據本發明一實施例，上述患者為肝癌患者，將上述微珠注射到患者的肝動脈。

發明的效果

以下，對本發明的特徵及優點進行概括。

(ⅰ)本發明提供包含具有不同的抗癌劑的釋放特徵的兩種生物降解性微珠的化療栓塞用組合物及其製備方法。

(ⅱ)根據本發明，可通過調節第一生物降解性微珠及第二生物降解性微珠的配合比例，來有效地製備體現所需的抗癌劑的釋放特性的化療栓塞用組合物。

(ⅲ)因此，本發明可以有效地應用於肝癌的化療栓塞術。

附圖說明

圖1為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸軟骨素微珠(白硫軟)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠(DC-BEAD)和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖2為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸皮膚素微珠(白硫皮)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖3為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸角質素微珠(白硫角)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖4為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸乙醯肝素微珠(白硫乙)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖5為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/肝素微珠(白肝)、它們的混合微珠及在上市銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖6為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸軟骨素微珠(白硫軟)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖7為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸皮膚素微珠(白硫皮)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖8為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸角質素微珠(白硫角)、它們的混合微珠及在上市銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖9為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/硫酸乙醯肝素微珠(白硫乙)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

圖10為按時間段示出白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠(白硫葡)、白蛋白/肝素微珠(白肝)、它們的混合微珠及銷售中的載藥微珠和作為肝癌治療劑的HpaSphere的抗癌劑的吸附量的曲線圖。

具體實施方式

以下，利用實施例對本發明進行更詳細的說明。這些實施例僅用於更詳細地說明本發明，並且根據本發明的要旨，本發明的範圍並不局限於這些實施例，這對於本發明所屬技術領域的普通技術人員是顯而易見的。

實施例

製備例1.白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠的製備

白蛋白通過交聯結合來形成微珠的形態，根據如下的方法來製備了在上述白蛋白交聯物內包含有右旋糖酐硫酸酯的微珠。用於製備微珠的白蛋白及陰離子性高分子的組成為如下列表1所示。

表1

利用封裝物來製備了上述的組成1～5的微粒，並且製備條件為如下：流速為1～5ml/分鐘，施加電力為1000～3000V，超聲波為2000～6000Hz，旋轉數為100rpm以下。所使用的釋放噴嘴的大小是根據需要製備的微珠的大小來選擇的。將微珠製備用溶液轉移到合適容量的注射器之後，將此安裝在注射器泵之後，與封裝物(B-390，BUCHI)相連接，並且，將收集溶液轉移到合適容量的盤子上之後，放置在攪拌器的上部。設定封裝物的環境之後，在收集溶液噴射微珠製備溶液，並且將收集溶液加熱至80～120℃，來形成熱交聯，由此形成了微珠。交聯時間為2～6小時，作為收集溶液使用了包含溶解有10％的乙酸丁酸纖維素(cellulose acetate butyrate)的n-醋酸丁酯或羥丙基甲基纖維素的丙酮。在以下的實施例1中使用了組合1的白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠。

製備例2.白蛋白/糖胺聚糖微珠的製備

為了白蛋白的氨基(NH2-)和作為陰離子性高分子的糖胺聚糖的羧基(COOH-)形成醯胺結合，而使用了氰基硼氫化鈉(sodium cyano borohydride，SCBH)或氯化1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺(1-Ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl)carbodiimide，EDC)/N-羥基丁二醯亞胺(N-Hydroxysuccini mide，NHS)。首先，利用氰基硼氫化鈉或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺/N-羥基丁二醯亞胺來活化了陰離子性高分子之後，如下列表2的組合1～5，通過與白蛋白的反應來形成了結合。之後，將此透析1～2天，去除未反應物之後，取得了微珠製備用溶液。

表2

利用封裝物來製備了上述的組合1～5的微粒，並且製備條件為如下：流速為1～5ml/分鐘，施加電力為1000～3000V，超聲波為2000～6000Hz，旋轉數為100rpm以下。所使用的釋放噴嘴的大小是根據需要製備的微珠的大小來選擇的。將微珠製備用溶液轉移到合適容量的注射器之後，將此安裝在注射器泵之後，與封裝物(B-390，BUCHI)相連接，並且，將收集溶液轉移到合適容量的盤子上之後，放置在攪拌器的上部。設定封裝物的環境之後，在收集溶液噴射微珠製備溶液，並且將收集溶液加熱至80～120℃，來形成熱交聯，由此形成了微珠。交聯時間為2～6小時，作為收集溶液使用了包含溶解有10％的乙酸丁酸纖維素(cellulose acetate butyrate)的n-醋酸丁酯或羥丙基甲基纖維素的丙酮。在以下的實施例1中使用了組合1的白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠。

實施例1.肝動脈化療栓塞用微珠的混合

在上述製備例1中所製備的白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠載入速度慢於在製備例2中所製備的白蛋白/糖胺聚糖微珠，而且藥物的洗脫速度也慢於在製備例2中所製備的白蛋白/糖胺聚糖微珠。由此，本發明的發明人試圖通過調節這些微珠的配合比例，來調節吸附在這些微珠的藥物的釋放速度。在下列表3中示出了混合微珠的組合。

表3

實施例2.阿黴素的吸附實驗

按照如下的方式進行了阿黴素的吸附實驗。首先，將50mg的阿黴素溶解於2ml的蒸餾水。按照配合比例正確測量2ml的微珠(白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠、白蛋白/葡萄糖胺聚糖微珠、它們的混合微珠、載藥微珠或作為肝癌治療劑的HpaSphere)，並放入阿黴素溶液之後混合。將這些放置於常溫狀態，在10、20、30、40及60分鐘的時間段取出上清液之後用高效液相色譜法(High Performance Liquid Chrom atography，HPLC)進行了分析。可以通過與預先製作的校準曲線之間的對比，來計算出從50mg/2ml的阿黴素溶液中被排出的阿黴素的量，並且該值是阿黴素吸附於微珠的量。

在圖1至圖5中示出了實驗結果。如附圖中所示，作為肝癌治療劑的HpaSphere的阿黴素的吸附時間長於其他微珠，相反，剩餘微珠以類似的狀態來吸附了阿黴素(圖1至圖5)。

實施例3.阿黴素的洗脫實驗

為了確認藥物的洗脫行為，利用洗脫器進行了洗脫實驗。實驗方法為如下。將通過阿黴素的吸附實驗載入有50mg的藥物的2ml的微珠(白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠、白蛋白/葡萄糖胺聚糖微珠、這些的混合微珠、載藥微珠或作為肝癌治療劑的HpaSphere)放入裝有500ml的洗脫液(PBS，pH 7.4)的玻璃容器之後，在37℃中溫育，並以50rpm的速度攪拌。無需更換洗脫液可繼續使用，並在10、20、30、40、60、90及120分鐘的時間段取出上清液之後，利用高效液相色譜法來進行了分析。

在圖6至圖10中示出了洗脫結果。如附圖中所示，各微珠的抗癌劑的洗脫特性互不相同。尤其，示出了如下的狀態，即，白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠的抗癌劑的洗脫速度顯著慢於白蛋白/葡萄糖胺聚糖微珠，在白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠上混合白蛋白/葡萄糖胺聚糖微珠的混合微珠的情況下，根據白蛋白/葡萄糖胺聚糖微珠的混合比例的增加，洗脫速度也增加(圖6至圖10)。

從這些結果中可見，通過調節白蛋白/右旋糖酐硫酸酯微珠和白蛋白/糖胺聚糖微珠的混合比例，可以自由調節抗癌劑的釋放速度。

以上，詳細地敘述了本發明的特定部分，對於本發明所屬技術領域的普通技術人員可以明確的是，這些具體的技術只是優選的實施例之一，而不是限定本發明的範圍。因此，本發明的實際範圍是按照附加的發明要求保護範圍和該等同物而定義。