一種粘紅酵母菌用於生產一種泛醌的方法

2023-11-01 22:23:12 5

專利名稱：一種粘紅酵母菌用於生產一種泛醌的方法
技術領域：
本發明涉及一種粘紅酵母菌用於生產輔酶Qu)的方法，屬於微生物領域。
技術背景 '
輔酶Qio (Ubiquinone-10,CoenzymeQK),CoQK))又稱泛醌。其分子式為C59H9(j04，相對 分子量863.4，是一種脂溶性醌類化合物，化學名稱為2，3-二甲氧基-5-甲-6-癸異戊烯基苯醌。 輔酶Qu)在室溫下為黃色或橙黃色結晶性粉末，熔點49i:，無臭無味。由於具有長的類戊二 烯側鏈，因此易溶於氯仿、苯、四氯化碳，溶於丙酮、石油醚及其乙醚，不溶於水和甲醇。
見光易分解成紅色物質，對溫度和溼度較穩定。結構式如下所示
H3CO、 ,CH3
H3CO
輔酶Qw結構式
輔酶Qio是人體血液中必需的物質，在人體細胞內與線粒體內膜結合，是呼吸鏈中重 要的遞氫體。它是細胞自身產生的天然抗氧化劑，與網狀內皮組織系統有關，能使機體免
疫力提高。正因為它具有多方面的生理活性，因此，是一種良好的生化藥物。輔酶Q!0具
有抗氧化、消除自由基、提高機體免疫力、抗衰老等功能，廣泛應用於各類心臟病、糖尿 病、癌症、急慢性肝炎、帕金森症等疾病的治療。常用作輔助藥物，食品添加劑或用於化
妝品領域。另外，因為輔酶Qu)可以激活細胞呼吸，在細胞能量轉換中具有重要作用，常 作為人體或運動員等的體能增強劑。作為一種代謝激活劑，輔酶Qu)能激活細胞呼吸、加 速產生三磷酸腺苷(ATP)。它是細胞自身產生的天然抗氧劑，能抑制線粒體的過氧化， 保護生物膜結構完整性，對免疫有特殊的增強作用。可用於醫治急慢性病毒性肝炎。輔酶 Qn)的另一生物化學作用能改善男性不育症狀，不育男性通過服用輔酶Qu)，能顯著增強與 男性生育作用有關的物質性能；因為輔酶Qu)與人體代謝碳水化合物密切相關，因此在治
療糖尿病方面可能有效，輔酶QK)的缺乏將影響人體胰腺中胰島素的合成，從而影響血糖
濃度和糖代謝，對於糖尿病病人來說會削弱人體中輔酶Q1Q的含量。目前，輔酶Qn)的生產方法共有4種動植物組織提取法、化學合成法、植物細胞培養 法、微生物發酵法。
(1) 從動植物中提取輔酶Qu)的研究方面。主要是從菸葉、大豆或動物內臟中進行分 離和提取；輔酶qk)從植物中提取方法主要有皂化法，溶劑萃取法，吸附層析法等，提取 法製備工藝較簡單，但提取成本高，且受原料及季節性等限制，不適合於現代化生產。除 採用天然的植物外，從植物組織中獲得輔酶Qn)還可以採用植物細胞培養法。細胞懸浮培 養物中輔酶Qu)最高含量達189^ig/g (以幹細胞計)。
(2) 輔酶Qu)的有機合成。輔酶Qu)的化學合成需要3個關鍵步驟首先是合成母核 化合物(2， 3-二甲氧基-5-甲基-l， 4-苯酮或氫酮)，然後一般採用茄尼醇為出發原料，合 成出具有立體選擇性的多戊烯醇或其滷化物，最後進行兩者的縮合。無論是側鏈引入還是 側鏈延長方式，都需要對母核化合物進行基團保護，還要考慮產物的構型問題，合成過程 複雜，對催化劑要求高，反應條件苛刻，總體產率不高。影響產業化進程。
(3) 微生物發酵法生產輔酶Qn)。該法不受原料、季節等條件限制，可實現規模化生 產。應用微生物發酵法生產，其發酵液中輔酶Qn)含量達到770mg/L。微生物發酵法合成 的輔酶Qn)成本低、無光學異構體，生物學活性高，且該方法具有不受原料限制，分離過
程相對簡單，不存在手性問題等優點，成為最有潛力的輔酶qk)生產方法。
日本首先實現發酵法輔酶Qu)的工業化生產，是世界上最早也是最主要的輔酶Qu)生 產國，全球90。/。的輔酶Qn)均產自日本，產量最高的是日清制粉及協和發酵株式會社兩家 公司產量達到了 lg/L發酵液。由於沒有技術公開和文獻的報導，我們並不知道產自日本的 輔酶Qu)是通過什麼方法生產，但是據已公開的文獻和專利我們可以知道在工業上，輔酶 Qu)是半合成生產的，或者通過發酵微生物及隨後從生物體中提取產生的。半合成的輔酶 qk)的生物活性與微生物發酵生產的相比要弱很多，因此，選擇好的發酵菌種仍是當前研 究的熱點。目前常用來生產輔酶Qu)的菌有有細菌屬的假單胞菌、黃桿菌、硫桿菌、土 壤桿菌、襲"//《匿平、GeoW薦平禾口 C，/ococcw"p.，以及紅極毛桿菌、脫氮極毛桿菌、 氫極毛桿菌、脫氮副球菌、糞產鹼桿菌、甲垸微環菌、光合細菌、五o^m^改rodK
禾卩0//gowonay wef/ a"o//ca等，黴菌中的紅麴黴、黑麴黴、煙麴黴禾卩5^Wn'c/mm "/Za/o;7/H7/wm等，酵母菌中的異常尚德酒香酵母、假絲酵母、隱球酵母、O^ococcm
微生物體內合成輔酶Qu)已經成為生產熱點，其在生物體內合成的原理在2001年和 2002年分別由Meganathan R.和Makoto Wamukai發表文章綜述中詳細闡明。現現用菌種生產輔酶Q1Q的產量仍相對較低並且不 盡如人意，雖然人們己經嘗試通過分子生物學方法來增加輔酶Qu)的產量，但是工業生產 中通常選用天然的菌株以生產所期望的化合物。因此，在科學界仍需要篩選用於生產輔酶 Qh)的高效菌株。
粘紅酵母是一種常用於生產p-胡蘿蔔素的菌株，有很高的生物量和甲羥戊酸通量，可
以在很多便宜易得的培養基上生長，是很有潛力的工業菌種。目前，粘紅酵母產(3-胡蘿蔔 素的研究已經基本成熟，在酵母代謝途徑中，P-胡蘿蔔素和輔酶Qu)有同樣的前體物。除 了卩-胡蘿蔔素，粘紅酵母還可以合成很多來自於甲羥戊酸途徑的產物，如麥角固醇，番茄 紅素，蝦青素等。因此，輔酶Qu)代謝途徑的碳通量很充足，可以預測輔酶Qu)可以達到 很高的含量。而利用該菌生產輔酶Qu)未見報導。

發明內容
因此，本發明的目的是提供一種粘紅酵母菌用於生產輔酶QIO的方法。 本發明用於生產輔酶Q10的微生物是一種粘紅酵母菌Rhodotorula glutinis,該酵母菌
是已知現有菌種，各大菌種保藏庫中均有保存。本發明使用的菌種購自中科院微生物所，
編號為As2.102。
粘紅酵母具有如下的性質 形態生理生化特徵
形態特徵呈圓形、卵形或長形。多邊芽殖，有明顯的紅色或黃色色素。很多種 因由莢膜而形成粘質狀菌落。
生理生化特徵產P-胡蘿蔔素，人造肉和L苯丙氨酸等。
本發明提供了一種粘紅酵母菌用於生產輔酶QU)的方法，其特徵在於，包括以下步驟:
1) 將粘紅酵母菌在瓊脂平板上於25-35'C培養24-48小時，平板培養基成分質量百分 比為葡萄糖2%，蛋白腖2%，酵母粉1%， 2.5%瓊脂，其餘為水，pH值在4.5-7.5之間；
2) 將培養後的平板用無菌水洗滌後，加入無菌甘油於-8(TC保存；
3) 取-80'C保存的平板菌種一個單菌落接種到活化培養基中，活化培養基成分質量百 分比為葡萄糖2%，蛋白腖2%，酵母粉1%，其餘為水，pH值在4.5-7.5之間；放至搖床 內培養，培養溫度25-3(TC，搖床轉速為100-200 r/min，活化24-48 h;
4) 將活化後的菌種，放入錐形瓶中培養或者發酵罐中的培養；在錐形瓶中培養是以10%的體積接種量接入己滅菌的發酵培養基中，搖床20-35'C培 養，搖床轉速為100-200 r/min，培養至少60小時；在發酵罐中的培養以10%的體積接種量接入已滅菌的發酵培養基中，pH在4.5-7.5之 間，搖床20-35。C培養，攪拌速度在100-300rpm之間，培養時間至少50小時；所述的發酵培養基成分質量百分比為葡萄糖3%，蛋白腖1%，酵母粉1%， (NH4)2S04 0.5%， KH2PO40.1%， NaC10.1%， MgSO40.5%， NaAc0.2%， CaCl20.01%，其餘為水，pH 值在4.5-7.5之間；5)從菌體中提取輔酶Qu)。從菌體中提取輔酶Q,。的方法是已知的，包括酸熱法破壁，丙酮萃取等。任選一種方 法進行進一步的純化，例如通過沉澱、結晶、柱層析、薄層層析等進行純化。鑑別和量化 的分析方法包括HPLC、質譜分析法、核磁共振質譜法等。技術人員可以自己選擇正確的 方法。本發明的再一方面涉及一種培養本發明微生物的方法，該方法是以在發酵期間將具有 刺激輔酶Q1的生產潛力的添加劑與所述微生物接觸的方式進行的，所述添加劑選自由以 下所組成的組輔酶Qu)的前體物對羥基苯甲酸酯(PHB) (100-200mg/L)、異戊烯醇 (100-200mg/L)、酪氨酸(100-300mg/L)、苯丙氨酸(100-300mg/L)、分支酸(100-200mg/L)、 色氨酸(100-300mg/L)，茄尼醇(50-100mg/L)，西紅柿提取物(30-100ml/L)，胡蘿蔔汁 (30-100ml/L)，豆油(5-10ml/L)，及刺激菌體生產輔酶Q1Q的酶的激活劑等，如酮康唑 (5-20mg/L)，兩性黴素B (5-20mg/L)，檸檬酸(100-200mg/L)，丙二酸鈉(100-200mg/L)， 硝酸鈉(100-200mg/L)，青黴素(l-2mg/L)，氯黴素(l-2mg/L)等。以上數值均為添加劑和發 酵培養基的質量體積比。已經證實使用這樣的添加劑，輔酶Qw的產量可以加倍(見表1)。 在本發明中，優選使用酮康唑，茄尼醇和酪氨酸。這些藥品或試劑是可以商購的。從上述可以看出，本發明提供了一種發酵生產輔酶Qu)的新的及高潛力的候選菌。本發明的術語微生物是指包括了完整生物體形式的完整細胞以及破碎形式的細胞。
具體實施方式
實施例h篩選輔酶QH)高產菌株所篩選菌種購於中科院微生物所，所內編號為As2，102。對於篩選輔酶Qn)高產菌種， 我們採用的方法是先將粘紅酵母菌株活化，活化36h後在已倒入活化培養基的平皿上分別 劃線，挑選出其中長勢最好的單菌落，放入富集培養基的液體中，28。C培養36h，接著轉移富集培養基固體培養基中培養，由於此培養基中的葡萄糖含量相對較高，所以菌落形狀 飽滿，顏色也比較紅。然後挑一株長勢最好的單菌落接入苛刻培養基中，再接入缺乏營養 物質的固體培養基中培養，由於缺乏性培養基中氮源碳源等營養物質含量較少，因此會致 使一部分生長狀況不好的菌種死亡，剩下的存活菌種即為篩選出的性能較好的菌落。最後 將其放至發酵培養基中擴大培養。提取菌體中輔酶Q,o，選出產量最高的菌株，擴大培養， 並保存甘油管。富集培養基葡萄糖60g，蔗糖20g，蛋白腖10g，酵母粉10g， (NH4)2S045g， KH2P04 lg， NaCllg， MgS045g, NaAc 2g， CaCl20.1g， NaN032g，定容到1L，自然pH值。 固體富集培養基在液體條件下加入25g瓊脂。苛刻培養基葡萄糖10g，蛋白腖5g，酵母粉5g，定容到1L，自然pH值。 固體苛刻培養基在液體條件下加入25g瓊脂。活化培養基葡萄糖20g，蛋白腖20g，酵母粉10g，定容到1L，自然pH值。 固體活化培養基在液體條件下加入25g瓊脂。發酵培養基葡萄糖30g，蛋白腖10g，酵母粉10g， (NH4)2S045g， KH2P04lg， NaCl lg， MgS045g， NaAc2g, CaCl20.1g，定容到1L，自然pH值。培養篩選出的高產菌株1) 將篩選出的粘紅酵母菌在瓊脂平板上於28'C培養30小時，平板培養基成分質量百 分比為葡萄糖2%，蛋白腖0.5%，酵母粉0.5%， 2.5%瓊脂，其餘為水，自然pH值；2) 將培養後的平板用無菌水洗滌後，加入無菌甘油於-8(TC保存；3) 取-80'C保存的平板菌種一個單菌落接種到活化培養基中，活化培養基成分質量百 分比為葡萄糖2%，蛋白腖2%，酵母粉1%，其餘為水，自然pH值；放至搖床內培養，培 養溫度28'C，搖床轉速為200r/min，活化30h;4) 將活化後的菌種，放入錐形瓶中培養在錐形瓶中培養是以10%的體積接種量接入已滅菌的發酵培養基中，搖床28。C培養， 搖床轉速為200 r/min，培養至少60小時；所述的發酵培養基成分質量百分比為葡萄糖3%，蛋白腖1%，酵母粉1%， (NH4)2S04 0.5%， KH2PO40,l%， NaC10.1%， MgSO40.5%， NaAc0.2%， CaCl20,01%，其餘為水，自 然pH值。對分離的菌株生產輔酶Ql的檢測提取方法熟知本領域的技術人員均熟悉提取分析方法離心，破壁，丙酮萃取，分析。輔酶Qu)產量的提高為增加粘紅菌株中輔酶QU)的產量，在培養期間將不同的添加劑加入基本培養基中，所述添加劑即酪氨酸，茄尼醇，青黴素，酮康唑，丙二酸鈉(表l)。基本的輔酶Qu)的 產量為9.83mg/L。補加不同的添加劑以增加輔酶Qu)的產量，其中效果最好的是產量達到 19.87mg/L，產量增加了 102.1%。這些結果清晰地表明粘紅菌株特別適用於生產輔酶Q10。 也顯示了這些添加物在生產輔酶Q1的過程中的巨大潛力。表1:添加劑在粘紅菌株生產輔酶Q1Q中的作用。添加物CoQuj產量mg/L乾重g/L(DCW)CoQ,。mg/g(DCW)空白9.8314. 130. 69酪氨酸18. 5516. 141. 15丙二酸鈉12. 6314. 780.85茄尼醇15. 5714. 251. 09酮康唑19.8712.921, 54青黴素13. 2416. 460. 80所有數據均為三次獨立實驗的平均值。實施例2:篩選輔酶QH)高產菌株所篩選菌種購於中科院微生物所，所內編號為As2,102，對於篩選輔酶Qu)高產菌種， 我們採用的方法是先將粘紅酵母菌株活化，活化40h後在已倒入活化培養基的平皿上分別 劃線，挑選出其中長勢最好的單菌落，放入富集培養基的液體中，32'C培養40h，接著轉 移富集培養基固體培養基中培養，由於此培養基中的葡萄糖含量相對較高，所以菌落形狀 飽滿，顏色也比較紅。然後挑一株長勢最好的單菌落接入苛刻培養基中，再接入缺乏營養 物質的固體培養基中培養，由於缺乏性培養基中氮源碳源等營養物質含量較少，因此會致使一部分生長狀況不好的菌種死亡，剩下的存活菌種即為篩選出的性能較好的菌落。最後8將其放至發酵培養基中擴大培養。提取菌體中輔酶Qn),選出產量最高的菌株，擴大培養， 並保存甘油管。富集培養基葡萄糖70g，蔗糖15g，蛋白腖15g，酵母粉15g， (NH4)2S04 3g， K2HP04lg， NaCllg， MgS043g， NaAc lg， CaCl20.5g， NaN032g，定容到1L， pH=7。固體富集培養基在液體條件下加入25g瓊脂。苛刻培養基葡萄糖5g，蛋白腖3g，酵母粉3g，定容到1L， pH=7。 固體苛刻培養基在液體條件下加入25g瓊脂。活化培養基葡萄糖25g，蛋白腖15g，酵母粉10g，定容到1L， pH=7。 固體活化培養基在液體條件下加入25g瓊脂。發酵培養基葡萄糖25g，蛋白腖20g，酵母粉5g， (NH4)2S042g， KH2PO40.5g， NaCl lg， MgS042g， NaAclg， CaCl20.1g，定容到1L， pH=7。培養篩選出的高產菌株1) 將篩選出的粘紅酵母菌在瓊脂平板上於32。C培養40小時，平板培養基成分質量百 分比為葡萄糖2.5%，蛋白腖1.5%，酵母粉1%， 2.5%瓊脂，其餘為水，pH值為7;2) 將培養後的平板用無菌水洗滌後，加入無菌甘油於-8(TC保存；3) 取-8(TC保存的平板菌種一個單菌落接種到活化培養基中，活化培養基成分質量百 分比為葡萄糖2.5%，蛋白腖1.5%，酵母粉1%，其餘為水，pH值為7;放至搖床內培養， 培養溫度32°C ，搖床轉速為150 r/min，活化40h;4) 將活化後的菌種，放入錐形瓶中培養在錐形瓶中培養是以10%的體積接種量接入已滅菌的發酵培養基中，搖床32'C培養， 搖床轉速為150 r/min，培養至少60小時；所述的發酵培養基成分質量百分比為葡萄糖2.5%，蛋白腖2%，酵母粉0.5%， (NH4)2S04 0.2%, KH2PO40.05%， NaC10.1%， MgSO40.2%， NaAc 0.1%， CaCl20.01%，其餘為水， pH值為7;對分離的菌株生產輔酶Q1Q的檢測提取方法熟知本領域的技術人員均熟悉提取分析方法離心，破壁，丙酮萃取，分析。 輔酶Qu)產量的提高為增加粘紅菌株中輔酶Q1Q的產量，在培養期間將不同的添加劑加入基本培養基中， 所述添加劑即苯丙氨酸，西紅柿提取物，豆油，兩性黴素B (表2)。基本的輔酶Qu)的產 量為9.83mg/L。補加不同的添加劑以增加輔酶Qu)的產量，其中效果最好的是產量達到 17.95mg/L，產量增加了82.6%。這些結果清晰地表明粘紅菌株特別適用於生產輔酶Q10。 也顯示了這些添加物在生產輔酶Qu)的過程中的巨大潛力。表2:添加劑在粘紅菌株生產輔酶Qu)中的作用。添加物CoQK)產量mg/L乾重g/L(DCW)CoQ禍g/g(DCW)空白9.8314. 130. 69苯丙氨酸17.9515.341.17西紅柿提取物16.8715.251.11豆油16.3314.931.09兩性黴素B12. 1412.920.94所有數據均為三次獨立實驗的平均值。實施例3:篩選輔酶QH)高產菌株所篩選菌種購於中科院微生物所，所內編號為As2，102，對於篩選輔酶Qn)高產菌種， 我們釆用的方法是先將粘紅酵母菌株活化，活化32h後在已倒入活化培養基的平皿上分別 劃線，挑選出其中長勢最好的單菌落，放入富集培養基的液體中，28'C培養32h，接著轉 移富集培養基固體培養基中培養，由於此培養基中的葡萄糖含量相對較高，所以菌落形狀 飽滿，顏色也比較紅。然後挑一株長勢最好的單菌落接入苛刻培養基中，再接入缺乏營養 物質的固體培養基中培養，由於缺乏性培養基中氮源碳源等營養物質含量較少，因此會致 使一部分生長狀況不好的菌種死亡，剩下的存活菌種即為篩選出的性能較好的菌落。最後 將其放至發酵培養基中擴大培養。提取菌體中輔酶Qu)，選出產量最高的菌株，擴大培養， 並保存甘油管。富集培養基葡萄糖65g，蔗糖20g，蛋白腖13g，酵母粉13g， (NH4)2S042g， K2HP04 1.5g， NaCllg， MgS042.5g， NaAc 1.5g， CaCl2 lg， NaN032g，定容到1L， pH=6.5。固體富集培養基在液體條件下加入25g瓊脂。苛刻培養基葡萄糖2g，蛋白腖lg，酵母粉lg，定容到1L, pH=6.5。固體苛刻培養基在液體條件下加入25g瓊脂。活化培養基葡萄糖20g，蛋白腖10g，酵母粉15g，定容到1L， pH=6.5。 固體活化培養基在液體條件下加入25g瓊脂。發酵培養基葡萄糖25g，蛋白腖20g，酵母粉5g， (NH4)2S042g， KH2PO40.5g， NaCl lg， MgS042g， NaAclg， CaCl20.1g，定容到1L， pH=6.5。培養篩選出的高產菌株1) 將篩選出的粘紅酵母菌在瓊脂平板上於28'C培養32小時，平板培養基成分質量百 分比為葡萄糖2%，蛋白腖1%，酵母粉1.5%， 2.5%瓊脂，其餘為水，pH值為6.5;2) 將培養後的平板用無菌水洗滌後，加入無菌甘油於-8(TC保存；3) 取-8(TC保存的平板菌種一個單菌落接種到活化培養基中，活化培養基成分質量百 分比為葡萄糖2%，蛋白腖1%，酵母粉1.5%，其餘為水，pH值為6.5;放至搖床內培養， 培養溫度28'C，搖床轉速為150r/min，活化32h;4) 將活化後的菌種，放入發酵罐中培養在發酵罐中的培養以10。/。的體積接種量接入已滅菌的發酵培養基中，pH值為6.5，28°C 培養，攪拌速度在150rpm之間，培養時間為48小時；所述的發酵培養基成分質量百分比為葡萄糖2.5%，蛋白腖2%，酵母粉0.5%， (NH4)2S04 0.2%, KH2PO40.05%， NaC10.1%， MgSO40.2%， NaAc0.1%， CaCl20.01%，其餘為水， pH值為6.5;對分離的菌株生產輔酶Q1G的檢測提取方法熟知本領域的技術人員均熟悉提取分析方法離心，破壁，丙酮萃取，分析。 輔酶Qn)產量的提高為增加粘紅菌株中輔酶Qu)的產量，在培養期間將不同的添加劑加入基本培養基中， 所述添加劑即胡蘿蔔汁，酮康唑，西紅柿提取物，檸檬酸(表2)。基本的輔酶Qn)的產 量為19.26mg/L。補加不同的添加劑以增加輔酶Qn)的產量，其中效果最好的是產量達到 34.65mg/L，產量增加了卯.3%。這些結果清晰地表明粘紅菌株特別適用於生產輔酶Q10。 也顯示了這些添加 在生產輔酶Qu)的過程中的巨大潛力。11表3:添加劑在粘紅菌株生產輔酶Qn)中的作用。添加物CoQw產量mg/L乾重g/L(DCW)CoQi。mg/g(DCW)空白19.2626.530.73酮康唑36.6524.15L52胡蘿蔔汁33.5730.791.09西紅柿提取物32.1829.631.09檸檬酸28.1428.720.98所有數據均為三次獨立實驗的平均值。
權利要求
1.一種粘紅酵母菌用於生產輔酶Q10的方法，其特徵在於，包括以下步驟1)將粘紅酵母菌在瓊脂平板上於25-35℃培養24-48小時，平板培養基成分質量百分比為葡萄糖2％，蛋白腖2％，酵母粉1％，2.5％瓊脂，其餘為水，pH值在4.5-7.5之間；2)將培養後的平板用無菌水洗滌後，加入無菌甘油於-80℃保存；3)取-80℃保存的平板菌種的一個單菌落接種到活化培養基中，活化培養基成分質量百分比為葡萄糖2％，蛋白腖2％，酵母粉1％，其餘為水，pH值在4.5-7.5之間；放至搖床內培養，培養溫度25-30℃，搖床轉速為100-200r/min，活化24-48h；4)將活化後的菌種，放入錐形瓶中培養或者發酵罐中的培養；在錐形瓶中培養是以10％的體積接種量接入已滅菌的發酵培養基中，搖床20-35℃培養，搖床轉速為100-200r/min，培養至少60小時；在發酵罐中的培養以10％的體積接種量接入已滅菌的發酵培養基中，pH在4.5-7.5之間，搖床20-35℃培養，攪拌速度在100-300rpm之間，培養時間至少50小時；所述的發酵培養基成分質量百分比為葡萄糖3％，蛋白腖1％，酵母粉1％，(NH4)2SO4 0.5％，KH2PO4 0.1％，NaCl 0.1％，MgSO4 0.5％，NaAc 0.2％，CaCl20.01％，其餘為水，pH值在4.5-7.5之間；5)從菌體中提取輔酶Q10。
2. 根據權利要求1所述的一種粘紅酵母菌用於生產輔酶Qn)的方法，其 特徵在於，還在發酵培養基中加入以下添加劑對羥基苯甲酸酯、異戊烯醇、 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、茄尼醇、西紅柿提取物、胡蘿蔔汁、豆油、酮 康唑、兩性黴素B、檸檬酸、丙二酸鈉、硝酸鈉、青黴素或氯黴素。
全文摘要
本發明涉及一種粘紅酵母菌用於生產輔酶Q10的方法，屬於微生物領域。本發明包括以下步驟平板培養，無菌水洗滌後於-80℃保存，活化後菌种放入發酵培養基培養。本發明提供了一種發酵生產輔酶Q10的新的及高潛力的候選菌。一種粘紅酵母菌用於生產一種泛醌的方法。
文檔編號C12P7/66GK101619330SQ20091008491
公開日2010年1月6日 申請日期2009年5月27日 優先權日2009年5月27日
發明者孫新曉, 申曉林, 袁其朋, 陳長京 申請人:北京化工大學