一種延緩衰老的營養補充劑的製作方法
2023-12-03 06:32:16 1
本發明涉及食品和保健品領域，具體涉及一種營養補充劑。
背景技術：
隨著人民生活水平的提高，公眾對營養和健康的要求日益強烈，食品中含有多種營養素，但因種類不同，其分布和含量也不相同。此外，在食品的生產、加工和保藏過程中，營養素往往遭受損失。為補充食品中營養素的不足，提高食品的營養價值，適應不同人群的需要，可添加營養強化劑。營養強化劑兼有簡化膳食處理、方便攝食和防病保健等作用。特別在當今，食品營養強化已經成為許多國家政府提高其國民整體健康水平的重要手段。
目前市售的營養補充劑多為無機小分子化合物，這些化合物主要通過化學合成獲得。研究人員正在不斷尋找來源天然、功效顯著，特別是具有延緩衰老作用的營養補充劑。
在菸葉眾多成分中，以蛋白質含量最為豐富。菸葉中的蛋白質分為可溶性蛋白和不溶性蛋白。可溶性蛋白中一半左右是葉綠體蛋白質（Fraction I protein ，FI蛋白）， 另一半為其他可溶性蛋白質的複合物（Fraction II protein ， F II 蛋白）。以前人們大都把注意力集中在提高作物結實器官的蛋白質含量上，較少關注植物葉蛋白的開發利用。隨著對葉蛋白研究的不斷深入，人們逐漸認識到植物葉蛋白是世界上最豐富的蛋白資源，是解決當前世界人口日益膨脹問題的一個新的食物蛋白來源。
一些研究結果表明，植物葉蛋白尤以菸草葉片中可溶性蛋白含量高，FI蛋白中的各種必需胺基酸含量不僅均高於世界糧農組織制定的蛋白製品中必需胺基酸含量標準，其中酪氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸和亮氨酸都超過該標準1倍左右，比一些主要糧食作物如水稻、小麥、玉米、大豆蛋白質中的必需胺基酸含量都高，表明菸葉中FI蛋白具有較高的營養價值。菸葉蛋白質比雞蛋、乳酪和牛奶更適合人體吸收利用，具有較高的營養價值和藥用價值。
早期研究工作者提取的FI蛋白往往帶有顏色和味道，且生產工藝複雜，投資大，產量低，人們難以接受。後來，許多科研工作者對菸葉中的FI蛋白進行了提純，得到了高純度的FI蛋白，其中Kung和Tso、Lowe對菸葉FI蛋白提純方法的逐步簡化做出了很大的貢獻。然而，這些提取方法都有超速或高速冷凍離心分離步驟，且大多過程均需控制在0-4℃左右；亦有採用等電聚焦、凝膠電泳、超濾等方法提取FI蛋白的。這些方法雖然能獲得純淨的FI蛋白，但成本較高，單位時間提取的產量較低，難以實現大規模工業化生產。FII蛋白的提取技術要比FI蛋白簡單很多，國內外也進行了深入研究，並已進入了應用階段，如菸葉硒蛋白作為食品添加劑和保健食品在我國食品領域中有著廣泛應用。
菸葉蛋白除了具有蛋白質的基本功能特性外，還具有許多特殊的功能特性。菸葉蛋白中富含硒，以硒蛋氨酸和硒半胱氨酸或其他形式存在。硒具有廣泛的醫療保健作用，補充硒能預防癌症、肝炎、心血管疾病等，硒對癌症病人的化療有防止白細胞減少的作用。然而，硒又是營養劑量與毒性劑量範圍很窄的微量元素，因此，發展具有低毒高效屬性的硒產品，用於預防與治療相關疾病意義重大。利用菸葉對無機硒的代謝，可得到蛋白質態硒；無機硒在轉化為蛋白質態硒的過程中，毒性大大降低，主要表現為急性毒性的大幅下降。已有充分證據表明，與亞硒酸鈉相比，菸葉硒蛋白具有低毒高效特性，因而菸葉硒蛋白作為新的硒源具有潛在優勢。目前，菸葉硒蛋白已被我國衛生部批准作為食品添加劑和具有免疫調節、延緩衰老功效的保健食品。菸葉蛋白的燃燒產物對捲菸的吸味產生不利影響，因而從菸葉中提取出菸葉蛋白，將剩下的部分用於捲菸生產，將是菸草綜合利用的發展方向。
菸葉蛋白經酶水解後，得到各種各樣的生物活性肽。這些肽可以是小到只有2個胺基酸的二肽，也可以是複雜的長鏈或環狀多肽，並且多半是經過糖苷化、磷酸化衍生的產物。現代生物代謝研究發現：人類攝取的蛋白質經過消化道的多種酶水解後，不像以前認為的那樣僅以胺基酸的形式被吸收，更多的是以低肽的形式被直接吸收，而且二肽和三肽的吸收速度比同一組成的胺基酸更快。近年來的研究表明：生物活性肽是一類多功能因子，生物的生長發育、細胞分化、大腦活動、腫瘤病變、免疫防禦、生殖控制、抗衰老、生物鐘規律及分子進化等均涉及到生物活性肽。如抗菌活性肽，是一類生物活性小肽，一般具有抗細菌或真菌的作用，有些還具有抗原蟲、病毒或腫瘤細胞的功能。抗菌肽具有廣譜的抗菌作用，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌均具有抑制作用；還可以殺死動物體內的腫瘤細胞，卻不破壞動物體內的正常細胞。又如降血壓肽，是天然蛋白水解後具有顯著降血壓活性的一類肽，長期使用也無毒副作用。降血壓肽主要是通過競爭性抑制人體內的血管緊張素轉化酶的活性而達到降血壓目的。從菸葉蛋白中提取出來的十三肽，具有抗菌活性和蛋白酶抑制活性，且具有較高的穩定性，是一種潛在的蛋白酶抑制劑。
目前，有關以菸草蛋白為原料生產生物活性肽和胺基酸的研究國內鮮有報導，特別是製備生物活性肽方面，國外也很少報導。而從食品和營養的角度講，以生物活性肽為功能因子，可以開發出低抗原食品、嬰兒食品、運動食品、促鈣吸收食品、降壓食品、醒酒食品等一系列產品。
植物生理學家認為，菸葉蛋白的質量最好，含胺基酸種類多，最易被人體吸收利用；而且每667m2生長良好的菸草，可提取出35kg無色無味的蛋白質。菸草蛋白既可稀釋成蛋白清，又可加工成各種美味的糕點、人造奶油和牛奶代用品，如點上滷，又可變成白嫩的菸葉豆腐。在冰凍條件下，可製成軟的奶油，與目前市場上的動物性奶油相比，這種奶油有兩大突出的優點：①含不飽和脂肪多；②產熱量低，多食不會肥胖。另外，菸草蛋白還具有滋潤腸胃和促進血液循環等功效。
利用內外切蛋白複合酶，將菸葉蛋白進行可控酶解處理，根據其酶解程度的不同，可以得到一系列生物活性肽和胺基酸。應用分級膜分離技術、分級膜分離與大孔樹脂吸附分離或離子交換樹脂分離聯用技術分離純化、濃縮富集目標產物，再經相應加工處理，可製得一系列功能性食品；將低次菸葉的酶解液與還原糖、醇等發生Maillard反應，可合成具有濃鬱果香、堅果香、烤香、醬香、中草藥香或菸草香的煙用和食用香料，這些香料能夠改善菸絲的香氣質，增加香氣量，減輕捲菸的雜氣和刺激性，使煙氣醇和飽滿，並能協調煙香，改善餘味，用於高、中檔捲菸的加香，可強化高、中檔捲菸的優良品質。
將大豆球蛋白的cDNA轉移到菸草基因組Agrobacterium-mediated transformation中，大豆球蛋白在菸草種子中得到了表達，且以一種特殊的方式出現。與大豆中的球蛋白相比，所得到的轉基因菸草大豆球蛋白在蛋白質表達水平、加工特性、活性功能和積累水平上均沒有明顯區別。
試驗數據表明，菸草是用於生產醫療和科學研究方面的膠原質重組產品的最有價值的原料。在哺乳動物體中膠原質佔其總蛋白的30%，其主要成分是纖維狀膠原質I-III，這些膠原質組成了細胞外矩陣蛋白的交織纖維網絡結構，在人體內具有非常重要的作用。將菸草用於生產膠原質重組系列產品，不僅能解決醫藥學中生產膠原質產品的原料難題，還有利於醫療技術水平的提高，促進醫療事業的進一步發展。
研究發現，菸草花的蜜腺內有特殊的cDNAs。cDNAs能編碼出特殊的植物蛋白酶，這種蛋白酶具有抵抗微生物侵害的功能，從而保護整個植株免受侵害。目前正在研究怎樣利用轉基因技術，進行這種特殊的cDNAs轉基因處理，實現在別的植株內進行相應的基因表達，那麼這種植株就能抵抗相應的微生物侵害，增強自身的保護功能，從而降低農藥的使用量，降低農產品的農藥殘留，同時也減輕對自然環境的汙染。
紫錐菊（Echinacea），又名紫錐菊屬或松果菊屬，為多年生的菊科草本開花植物，原產於北美洲中部及東部。目前，該屬共發現有9個種及2個變種，其中3種具有藥用價值，即紫錐菊（Echinacea purpurea）、狹葉紫錐菊（Echinacea augustifolia）以及白紫錐菊（Echinacen pallida）。紫錐菊廣泛分布於美國、加拿大和歐洲。近年來，我國成功引種紫錐菊，在陝西、河南、湖南等地均有種植。該植物最早被北美土著人用於治療外傷、牙痛、蛇咬傷和膿毒血症等，目前則用於防治上呼吸道疾病、皮膚病以及過敏性疾病等病症。紫錐菊具有免疫調節、抗炎、抗氧化、殺菌、抗病毒及抗癌症等多種高效生物活性，因而備受關注。
免疫調節活性是紫錐菊最重要的，也最受矚目的生物活性，包括以下幾方面：（1）促進免疫器官的生長和發育。研究發現，紫錐菊提取物（Echinacea purpurea extract，EE）能夠顯著提高小鼠脾臟的質量。據文獻報導，複方紫錐菊能夠顯著提高雞腔上囊、胸腺和脾臟指數，促進免疫器官發育。試驗證明，EE顯著提高AA肉仔雞的免疫器官指數。（2）改善血液的免疫功能和生化指標。EE不僅能夠提高小鼠血清免疫球蛋白水平並降低總膽固醇水平，而且可以提高肉雞的紅細胞RBG-C3bR花環率和血清白介素-2與腫瘤壞死因子含量，還能夠改善血常規指標。紫錐菊複方能夠提高嶺南黃肉雞血漿中總蛋白和白蛋白的含量，降低甘油三酯水平。（3）調節免疫細胞的功能與增殖。EE既能夠顯著促進正常小鼠骨髓和脾臟自然殺傷細胞與單核細胞的增殖，也增加白血病小鼠脾臟NK細胞的數量，還可顯著提高肉雞NK細胞的殺傷能力。研究發現，EE能夠明顯刺激T淋巴細胞的增殖，並且對外周血單個核細胞的增殖也有促進作用。EE能夠激活巨噬細胞，增強其吞噬能力並刺激其產生IL-1、IL-10和TNF-a等細胞因子以及一氧化氮。（4）增強體液免疫。研究表明，EE能顯著提高肉雞外周血的IBDV與新城疫病毒抗體滴度，且複方紫錐菊對海藍白公雞的NDV抗體效價也有明顯的增強作用。（5）其他。紫錐菊中的多酸類物質對大鼠應激性胃潰瘍也有預防性保護作用，並可能與提高機體免疫力及增強NO合成酶活力有關。紫錐菊還能提高畜禽的詞料轉化率，從而改善生產性能。
研究人員發現，狹葉紫錐菊的多糖成分具有抗炎活性，其能夠抑制角叉菜膠誘導的小鼠足水腫以及巴豆油誘導的小鼠耳廓腫脹。據報導，紫錐菊中的一種異丁基醯胺-dodecatetraenoic acid，能夠通過抑制脂氧合酶，發揮抗炎作用。通過體外試驗證明，EE中的烷基醯胺類物質能夠抑制環氧合酶和5-脂氧合酶。EE還能夠抑制小鼠巨噬細胞前列腺素E2的產生。菊苣酸被認為是紫錐菊中最能抑制透明質酸酶的物質。而透明質酸酶會水解透明質酸和軟骨素，促進促炎因子穿過基質，擴大炎症反應。研究表明，紫錐菊的抑炎作用還與抑制巨唾細胞產生NO和TNF-a有關。而進一步的研究指出，紫錐菊對NO合成的抑制作用是通過提高精氨酸酶活性，並抑制誘導型NOS表達。
文獻報導，三種藥用紫錐菊（Echinacea purpurea、Echinacea augustifolia、Echinacen pallida）的根提取物對多種自由基均具有清除能力，並能夠抑制人低密度脂蛋白的氧化。通過自由基清除實驗和脂質過氧化實驗證實了上述三種藥用紫錐菊葉和根提取物的抗氧化能力。研究發現，EE中的咖啡酸衍生物具有良好的抗氧化作用，且與EE的其他成分聯合使用時，抗氧化效果更強。研究結果顯示，三種方法製備的EE樣品（多酸含量分別為3.76%、6.40%、33.56%）均具有抗氧化作用，且它們的還原能力以及對H2O2的清除作用均強於維生素C。EE不僅自身具有一定的抗氧化作用，而且能夠增強動物機體的抗氧化能力。研究表明，EE能夠增強小鼠和AA肉仔雞的抗氧化能力。
研究發現，紫錐菊細胞培養上清中的多糖成分能夠增強吞噬細胞的功能，從而在小鼠感染白色念珠菌和單增李斯特菌的過程中起到保護作用。科研人員發現，紫錐菊的正己燒提取物具有抗真菌活性，能夠抑制啤酒酵母和多種念珠菌的生長。研究表明，紫錐菊屬根部提取物對新型隱球菌、白色念珠菌以及多種致病性絲狀真菌，例如毛癬菌、鬚髮毛癖菌、石膏樣小袍子菌、波氏假阿利什菌均有抗真菌活性。除上述真菌外，EE還對其他多種致病細菌，如化膿性鏈球菌、流感嗜血桿菌、嗜肺軍團菌、艱難梭菌和痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、恥垢分枝桿菌具有抑制作用。
據報導，EE能夠增加白血病小鼠脾臟NK細胞數量並延長其壽命。紫錐菊的抗癌作用主要與NK細胞密切相關：一方面，紫錐菊的烷基醯胺類物質能夠通過抑制5-LOX和COX的產生，下調PG的產生，從而促進NK細胞的增殖；另一方面，紫錐菊多糖成分中的阿拉伯半乳聚糖通過激活巨噬細胞，誘導其分泌IL-1、INF-α、IFN-β等細胞因子，從而增強NK細胞的細胞殺傷能力。EE不但能夠通過NK細胞間接發揮抗癌作用，其本身也能夠直接殺傷癌細胞。試驗發現，紫錐菊根的己烷提取物對人胰腺癌MIA PACA-2細胞系和結腸癌COLO320細胞系均有殺傷作用。
研究表明，紫錐菊的各種生物活性基於其自身不同的化學成分。目前，EE被液相色譜質譜聯用技術鑑定出的活性成分，主要有烷基醯胺類化合物與咖啡酸衍生物兩大類：前者包括十二碳-2E，4E，8Z，10E/Z-四烯酸異丁醯胺、十一碳-2E，4Z-二烯-8，10-二炔酸異丁醯胺、十一碳-2Z，4E-二烯-8，10-二炔酸異丁醯胺、十一碳-2E，4Z-二烯-8，10-二炔酸-2-甲基丁醯胺等；後者包括菊苣酸、單咖啡醯酒石酸、綠原酸、咖唏酸等，而EE中的多糖主要由山梨糖、甘露糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、木糖6種單糖組成。
從紫錐菊Echinacea purpurea的地上部分分離得到具有免疫活性的兩種多糖，PS I和PS II，其結構分別為：4-O-甲基-葡萄糖醛-阿拉伯糖-木聚糖聚糖（平均分子量為35000）和酸性的阿拉伯糖-鼠李半乳糖聚糖（平均分子量為50000）。由於從紫錐菊中提取純化多糖費用高且難於獲得，因此有人用組織培養技術從組織培養液中進行分離，獲得2個分子量分別為10000、25000的中性多糖及1個分子量為75000的酸性多糖，從組織培養中獲得的多糖主要是培養細胞的初生壁成分，因此與從植物中分離的多糖不同，其活性也有差異。
目前，將菸草蛋白與紫錐菊多糖組合用於營養補充的應用尚未見報導。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題是提供一種能有效延緩機體衰老，無毒副作用，活性成分來源天然的營養補充劑。
本發明解決上述問題所採用的技術方案是，提供一種延緩衰老的營養補充劑，補充劑中活性成分由菸草蛋白和紫錐菊多糖組成，其中菸草蛋白佔活性成分的重量百分比為80-20%，紫錐菊多糖佔活性成分的重量百分比為20-80%。
優選的，菸草蛋白佔活性成分的重量百分比為80-50%，紫錐菊多糖佔活性成分的重量百分比為20-50%。
更優選的，菸草蛋白和紫錐菊多糖佔活性成分的重量百分比分別為75%和25%。
優選的，所述菸草蛋白為菸草FI蛋白（Fraction I protein）。
優選的，本發明的菸草FI蛋白（Fraction I protein）採用以下方法製備：取去中脈的菸草葉子，加入NaCl溶液、陰離子交換樹脂和疏基乙醇，用組織搗碎機高速搗碎，綠色勻漿液用紗布過濾。將濾液於50℃保溫，然後迅速冷卻，棄去沉澱。上清液通過DEAE-纖維素柱，用三氯醋酸檢測蛋白質，並收集蛋白部份。向收集的蛋白部份加入Tris-Cl緩衝液，於4℃放置4-6天後析出大量結晶，即得。
優選的，本發明的紫錐菊多糖採用以下方法製備：取超微粉碎的紫錐菊全草原料，加水煮沸，提取清液；活性炭脫色後濃縮，再用乙醇沉析；離心得沉析物；將沉析物烘乾、研磨、過篩，得粗多糖；粗多糖加水充分攪拌，在4℃下過濾，離心後取上清液；加入Sevage試劑去除蛋白，將上層液濃縮，用乙醇沉澱析出多糖，經離心獲得沉析物；用乙醇洗滌沉析物，真空乾燥，研磨，得到白色粉末狀的物質。
優選的，所述組合物中進一步包括食品或保健品上可接受的添加劑。
更優選的，所述食品上可接受的添加劑選自防腐劑、增稠劑和調味劑等中的一種或多種。
最優選的，所述防腐劑為苯甲酸；增稠劑為果膠或明膠，優選為果膠；調味劑為阿斯巴甜。
本發明還提供一種上述營養補充劑在製備延緩衰老的食品或保健品中的應用。
本發明具有積極有益的效果：令人驚奇的是，經過反覆多次試驗，本發明意外發現將菸草蛋白與紫錐菊多糖組合使用對於機體延緩衰老具有協同增效的效果。與傳統營養補充劑相比，本發明的補充劑製備方法簡單，配伍合理，兩種活性成分在發揮各自功效的同時，又能協同改善機體衰老速度。
具體實施方式
下面結合實施方式對本發明作更進一步的說明，但本發明的實施方式不限於此。
製備例1、菸草FI蛋白（Fraction I protein）的製備
取130克去中脈的菸草葉子，加入130g 0.1M的NaCl溶液，30克711陰離子交換樹脂和1ml疏基乙醇，用組織搗碎機高速搗碎半分鐘，綠色勻漿液用四層紗布過濾。將濾液於50℃保溫10分鐘，然後迅速冷卻，棄去沉澱。上清液通過DEAE-纖維素柱DE53，流速為1.0ml/min/cm3。用三氯醋酸檢測蛋白質，收集流出的蛋白部份。向收集的蛋白部份加入等體積0.025M Tris-Cl，pH 7.4內含0.2mM EDTA的緩衝液。於4℃放置6天後析出大量結晶，即得。經換算，結晶產量約7mg/克鮮重葉子。
製備例2、紫錐菊多糖的製備
取超微粉碎的紫錐菊全草原料，加入20倍量的水，加熱煮沸3小時，濾除雜質，提取清液；再經活性炭脫色；脫色後液體進行濃縮，再用乙醇沉析；採用離心方法獲取沉析物；再將沉析物烘乾、研磨、過60目篩、獲得粗多糖；粗多糖加水充分攪拌，在4℃下過濾，離心後取上清液；加入Sevage試劑去除蛋白，將上層液濃縮，用5倍量乙醇沉澱析出多糖，經離心獲得沉析物；再用乙醇洗滌2次，真空乾燥，研磨，得到白色粉末狀的物質。
下述實施例1-5和試驗例1中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法，使用的原料菸草蛋白和紫錐菊多糖分別為製備例1和2製得的菸草FI蛋白和紫錐菊多糖。
實施例1
稱量3重量份的菸草蛋白和1重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合後倒入攪拌機中攪拌10分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老營養補充劑。
實施例2
稱量30重量份的菸草蛋白和10重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合後與50重量份的明膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養補充劑。
實施例3
稱量10重量份的菸草蛋白和30重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合後與50重量份的果膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養補充劑。
實施例4
稱量8重量份的菸草蛋白和32重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合後與50重量份的明膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養補充劑。
實施例5
稱量32重量份的菸草蛋白和8重量份的紫錐菊多糖，將兩者混合後與50重量份的果膠、5重量份的阿斯巴甜和5重量份的苯甲酸一同倒入攪拌機中攪拌15分鐘，按照要求分裝，包裝成袋裝，即得延緩衰老的營養補充劑。
試驗例1、含菸草蛋白/紫錐菊多糖的營養補充劑在延緩小鼠衰老中的應用
1. 動物分組及給藥
將70隻小鼠隨機均分為7組：空白組、模型組和本發明藥物組A1-A5。標準飼料分籠飼養，自由飲食飲水，飼養1周後進行實驗。藥物組A1-A5以活性成分的生理鹽水溶液灌胃給藥，活性成分的總劑量為1.0g/kg，其中A1組灌胃1.0g/kg菸草蛋白，A2組灌胃1.0g/kg紫錐菊多糖，A3組灌胃0.2g/kg的菸草蛋白和0.8g/kg紫錐菊多糖，A4組灌胃0.5g/kg的菸草蛋白和0.5g/kg紫錐菊多糖，A5組灌胃0.75g/kg的菸草蛋白和0.25g/kg紫錐菊多糖，空白組和模型組用等體積生理鹽水溶液灌胃給藥；給藥同時模型組及藥物組A1-A5按100mg·kg-1造模劑量頸背部皮下注射D-半乳糖，連續6周。空白組以等體積生理鹽水注射，灌胃與注射同時進行，連續42d後進行疲勞測試。
2. 小鼠疲勞實驗及結果
小鼠灌胃造模6周後，進行轉棒儀疲勞實驗，將小鼠放在轉棒（轉棒直徑30mm，長度60mm）上，轉速為10r·min-1，每隻小鼠分別訓練5min，使其適應在轉棒的轉動。次日，將小鼠放在轉棒上，轉速調為30r·min-1，準確記錄小鼠在轉棒上的停留時間，最長時間限制為10min，超過10min則記為10min，每批測試前用70%乙醇擦拭轉棒及其他部件。
和空白組相比較，D-半乳糖造模衰老小鼠在轉棒停留時間明顯縮短，而藥物組A1-A5均可以增加衰老小鼠體力，其中A5組效果最佳，各實驗組之間的差異均有統計學意義，具體結果見表1。
表1 本發明營養補充劑對小鼠在轉棒疲勞儀上停留時間的影響
3. 小鼠疲勞相關生化指標測定及結果
給藥結束後稱量小鼠體重，進行眼眶採血，4000r·min-1離心10min後收集血清待測。血清中BUN 、MDA、NO、NOS等生化指標測定均採用相關試劑盒提供的方法，嚴格按照試劑盒說明進行操作，測定各生化指標數值。
與空白組比較，D-半乳糖造模衰老小鼠血清中BUN、MDA、NO和NOS含量顯著增加，而藥物組A1-A5均顯著降低上述生化指標含量，其中A5組效果最佳，具體實驗結果見表2。
表2 本發明營養補充劑對小鼠血清中疲勞與抗氧化相關生化指標的影響
4. 結論
結果證明，本發明藥物組合物可以降低小鼠血清中BUN 、MDA、NO和NOS的含量，提示該藥物組合物可以提高機體的抗氧化能力，清除體內過氧化脂質，降低D-半乳糖致衰老過程中升高的NO和NOS含量，從而減輕NO增高所致的細胞毒性，起到延緩衰老的作用。
特別是在活性成分總量保持不變的情況下，使用本發明含菸草蛋白和紫錐菊多糖的營養補充劑較單獨使用含菸草蛋白或紫錐菊多糖的補充劑，小鼠血漿各生化指標含量明顯降低，證明菸草蛋白和紫錐菊多糖的組合使用產生了協同效果，減少了活性成分的使用量。其中菸草蛋白與紫錐菊多糖重量比為3:1的營養補充劑效果最為突出，產生了難以預期的優異效果。