瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑及其製備工藝的製作方法

2023-12-03 08:32:16 1

專利名稱：：瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑及其製備工藝的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種生物源除草劑，具體地說涉及一種以瓜果腐黴粗毒素為主要成分的生物源除草劑水劑，本發明還涉及該除草劑水劑的製備工藝。技術背景瓜果腐黴(P"/n'wwap/zamV/wma加w)是一種重要的植物病原真菌，具有廣泛的寄主範圍。該病原菌除了可以寄生於多年生黑麥草、匍匍剪股穎、早熟禾、高羊茅等草坪草引起草坪草腐黴菌枯萎病外，還可以寄生於瓜類、豆類、棉花、菸草、甜菜、玉米、水稻等作物的病害，引起寄主植物產生相應的病害症狀。這已為公眾所熟知。《河北農業大學學報》登載，瓜果腐黴在幾種不同的液體培養基中進行培養，可以產生具有除草活性的毒素組分，用乙酸乙酯來萃取瓜果腐黴培養濾液製備出的粗毒素仍具有較高的除草活性，見《坪草腐黴病菌毒素產生除草活性物質的條件優化》，作者張金林，龐民好，劉穎超，張利輝，董金皋，《河北農業大學學報》，2005，28(4)79-83;本申請人在實驗中發現，利用現有方法在製備瓜果腐黴粗毒素時存在如下缺點(l)耗費大量的乙酸乙酯；(2)費工、費時、費水、費電，效率低下，生產成本高；(3)利用乙酸乙酯不能較完全地將瓜果腐黴毒素培養濾液中的除草活性成分萃取出來；(4)所製備出粗毒素的穩定性差、除草效果不穩定。通過檢索，未見以瓜果腐黴粗毒素為主要成分的生物源除草劑劑型的相關報導。
發明內容本發明的目的是提供一種瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑，可以安全地用於玉米的苗後除草，該除草劑對於馬唐、反枝莧、稗草、狗尾草、虎尾草、馬齒莧、藜等雜草具有較高的防治效果。本發明的另一個目的，是提供該除草劑水劑的製備工藝。本發明解決其技術問題所採用的方案是瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑，其特徵在於，各組分重量百分含量為瓜果腐黴粗毒素10%50%，表面活性劑5%20%，水30%70%組成，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號1601=1:35，所述的農乳500號為十二烷基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型。瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑，優選的各組分重量百分含量為瓜果腐黴粗毒素20%40%，表面活性劑8。％15%，水50%60%，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號1601=1:35，所述的農乳500號為十二垸基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型。瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑的製備工藝，將保存於PDA斜面上的瓜果腐黴菌株接種於平板上，所述的PDA其組成為馬鈴薯200g，瓊脂20g，葡萄糖20g，水1000mL，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約(POmm時，用*5mm無菌打孔器切取菌落外緣菌絲製備成菌餅；將PD培養基裝於250mL三角瓶中，所述的PD培養基其組成為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL，每三角瓶盛裝150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min34。C黑暗條件下培養培養59天，其特徵是，A.將瓜果腐黴培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液，取粗毒素培養濾液，用樹脂進行吸附，樹脂的使用量為粗毒素培養濾液的1/51/8;B.將吸附粗毒素後的樹脂用50%的乙醇溶液或50%丙酮溶液作為解吸附劑進行解吸附，解吸附劑的使用量為樹脂重量的2倍，收集解吸附劑即得到粗毒素；C.向粗毒素中加入表面活性劑，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號1601=1:35，所述的農乳500號為十二烷基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型；D.餘量用水補齊，最後充分混勻即可。本發明的有益效果是，基於已有的研究結果存在的缺點和不足，本發明在瓜果腐黴粗毒素的製備方法上進行了改進，利用吸附樹脂對瓜果腐黴毒素培養濾液進行吸附，然後用溶劑進行解吸附，從而製備成粗毒素；同時把利用改進的方法製備的瓜果腐黴粗毒素加工成了除草劑的水劑。本發明與已有的研究相比具有以下明顯的優點節省大量的有機溶劑，省工、省時，節水、節電，生產效率高，成本大幅度降低；利用所選定型號的樹脂可以將瓜果腐黴毒素培養濾液中具有除草活性的成分充分吸附，所製備得到的粗毒素除草生物活性明顯增強；將本發明製備得到的粗毒素加工成除草劑水劑後的除草活性顯著高於粗毒素；加工成的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑穩定性明顯高於粗毒素。具體實施方式瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑的各原料投料比見表1。表l瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑的各原料投料比tableseeoriginaldocumentpage6農乳500號和1601的分子結構式如下:農乳5。。號formulaseeoriginaldocumentpage7實施例1:將瓜果腐黴菌株接種於PDA平板上，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約4>80mm時，用(j)5mm無菌打孔器切取菌落外緣菌絲製備成菌餅。將PD培養基裝於250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min34。C黑暗條件下培養7天。將瓜果腐黴培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液。取10000mL粗毒素培養濾液，用2000g的X-5型樹脂進行吸附，然後將吸附粗毒素後的樹脂用4000mL50%乙醇溶液作為解吸附劑進行解吸附，收集解吸附劑即得到粗毒素。將30g的農乳500號和90g的1601充分混合攪拌均勻，加入到200g的粗毒素中，然後加入680g水，充分攪拌均勻後得到20%瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑1000g。加工製成20%的水劑，取10mL的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑和瓜果腐黴粗毒素密封於試管中並置於54"C士2"C的恆溫條件下貯存14天，然後將經熱貯後的水劑樣品和粗毒素利用莖葉處理法對4葉期馬唐進行除草生物活性測定。結果見表2，試驗結果表明利用本發明的方法製備得到的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑及瓜果腐黴粗毒素的除草活性明顯高於己有formulaseeoriginaldocumentpage7的研究結果。瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑和瓜果腐黴粗毒素經熱貯後都有不同程度的生物活性降低現象，但水劑的生物活性降低程度要明顯低於粗毒素。由此可見，將瓜果腐黴粗毒素加工成水劑後不僅除草生物活性明顯增強，而且提高了瓜果腐黴粗毒素的熱貯穩定性。表2瓜果腐黴粗毒素水劑和瓜果腐黴粗毒素熱貯前後對馬唐的生物活性測定結果處理稀釋倍數48小時生長抑制率(％)經熱貯的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑6084.6未經熱ie的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑6095.7經熱貯的瓜果腐黴粗毒素6053.4未經熱貯的瓜果腐黴粗毒素6073.4用已有方法製備的瓜果腐黴粗毒素6048.6實施例2:將瓜果腐黴菌株接種於PDA平板上，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約(J)80mm時，用(J)5mm無菌打孔器切取菌落外緣菌絲製備成菌餅。將PD培養基裝於250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min34。C黑暗條件下培養7天。將瓜果腐黴培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液。取5000mL粗毒素培養濾液，用1000g的X-5型樹脂進行吸附，然後將吸附粗毒素後的樹脂用2000mL的50%丙酮溶液作為解吸附劑進行解吸附，收集解吸附劑即得到粗毒素。將25g的農乳500號和75g的1601充分混合攪拌均勻，加入到300g的粗毒素中，然後加入600g的水，充分攪拌均勻後得到30%瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑1000g。將所得到的30%瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑進行防除玉米田雜草的田間藥效試驗，試驗地設在保定市五蕘鄉烏馬莊村，試驗地地勢平坦，肥力一致，播種密度為3500株/667m2，前茬作物為小麥。田間主要雜草有馬唐、反枝莧、稗草、狗尾草、虎尾草、馬齒莧、藜等。玉米於2006年6月3日播種，待玉米長至56葉期，株高約1520cm時進行藥效試驗，施藥方法為玉米田行間定向莖葉噴霧處理，所用噴霧器為工農16型手動噴霧器，噴水量為30L/667m2。玉米品種為鄭單958。在每個小區中，按棋盤式隨機取5個調査點，每點面積為0.25m2，於施藥前調查雜草基數，施藥後3天、5天、7天調査各處理區雜草種類和雜草株數，每個處理重複3次。按下列公式計算防效防除效果(%)=(1—TaXCb/TbXCa)XIOO。其中T;為處理區防治後殘存的雜草株數；Tb為處理區防治前殘存的雜草株數；c;為對照區防治後殘存的雜草株數；Cb為對照區防治前殘存的雜草株數。結果見表3，田間結果表明30%瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑對玉米田雜草的防效明顯高於瓜果腐黴粗毒素的防效。表330%瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑對玉米田雜草的防除效果藥劑處理雜草株數(株數/m2)防除效果(％)施藥前3天5天7天3天5天7天30%瓜果腐黴粗毒素水劑60倍液23534211485.2790.4593,1730%瓜果腐黴粗毒素60倍液18661433266.6175.3180,30用已有方法製備的瓜果腐黴粗毒素60倍液1931231069537.4048,6157.00清水對照276281295316_一_實施例3:將瓜果腐黴菌株接種於PDA平板上，在253(TC黑暗條件下培養，待菌落約々80mm時，用々5mm無菌打孔器切取菌落外緣菌絲製備成菌餅。將PD培養基裝於250mL三角瓶中，每瓶150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min34"C黑暗條件下培養7天。將瓜果腐黴培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液。取10000mL粗毒素培養濾液，用1666.7g的AB-8型樹脂進行吸附，然後將吸附粗毒素後的樹脂用3333.3mL50%丙酮溶液作為解吸附劑進行解吸附，收集解吸附劑即得到粗毒素。將20g的農乳500號和80g的1601充分混合攪拌均勻，加入到400g的粗毒素中，然後加入500g水，充分攪拌均勻後得到40%瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑1000g。實驗實施例4:分別取實施例1、實施例2、實施例3的除草劑水劑採用莖葉處理法對其進行除草生物活性測定。具體方法為在口徑07cm、高10cm的塑料杯中，杯底有3個0O.2cm的孔，裝入8cm深的蛭石，在每杯中分別均勻地播種已發芽的馬唐種子25粒，然後覆蓋lcm厚的蛭石，將播種後的塑料杯轉入瓷盤中，同時保持約0.5cm的水層，置於溫度25°C、光照強度為3800LX、相對溼度70%條件下進行培養，待雜草生長至約35cm時供試驗用。用喉頭噴霧器均勻噴灑各藥劑處理，以雜草葉片溼潤為止，以清水為對照，每個處理重複3次，在培養雜草生長的條件下培養48小時後測量各處理的雜草鮮重(g)，按下列公式計算生長抑制率(％)。供試驗用的實施例1、實施例2、實施例3所得到除草劑水劑的稀釋倍數依次為40倍、60倍、80倍，從而使各處理的藥液中瓜果腐黴粗毒素的含量相同。牛長袖制蜜("—對照組雜草鮮重(g)—處理組雜草鮮重(g)><inn生長抑制率--對照組雜草鮮重(g)-X100試驗結果表明將上述試驗中所得到的20%、30%和40%的瓜果腐黴粗毒素水劑依次稀釋成40倍、60倍和80倍的藥液處理馬唐，48小時後對馬唐的生長抑制率依次為80.6%、92.5%和87.4%。試驗結果表明將瓜果腐黴粗毒素加工成30%水劑效果最好。權利要求1、瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑，其特徵在於，各組分重量百分含量為瓜果腐黴粗毒素10%50%，表面活性劑5%20%，水30%70%組成，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號1601=1:35，所述的農乳500號為十二烷基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型。2、根據權利要求1所述的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑，其特徵在於，各組分重量百分含量為瓜果腐黴粗毒素20%40%，表面活性劑8%15%，水50%60%，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號1601=1:35，所述的農乳500號為十二烷基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型。3、瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑的製備工藝，將保存於PDA斜面上的瓜果腐黴菌株接種於平板上，所述的PDA其組成為馬鈴薯200g，瓊脂20g，葡萄糖20g，水1000mL，在2530。C黑暗條件下培養，待菌落約^80mm時，用$5mm無菌打孔器切取菌落外緣菌絲製備成菌餅；將PD培養基裝於250mL三角瓶中，所述的PD培養基其組成為馬鈴薯200g，葡萄糖20g，水1000mL，每三角瓶盛裝150mL，定量接種菌餅3塊，在150r/min34'C黑暗條件下培養培養59天，其特徵是，A.將瓜果腐黴培養液用雙層脫脂棉紗布濾去菌絲，即得到粗毒素培養濾液，取粗毒素培養濾液，用樹脂進行吸附，樹脂的使用量為粗毒素培養濾液的1/51/8;B.將吸附粗毒素後的樹脂用50。^的乙醇溶液或50%丙酮溶液作為解吸附劑進行解吸附，解吸附劑的使用量為樹脂重量的2倍，收集解吸附劑即得到粗毒素；C.向粗毒素中加入表面活性劑，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號1601=1:35，所述的農乳500號為十二垸基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型；D.餘量用水補齊，最後充分混勻即可。全文摘要本發明公開了一種瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑，各組分重量百分含量為瓜果腐黴粗毒素10％～50％，表面活性劑5％～20％，水30％～70％組成，所述的表面活性劑為混合型，其組成重量比為農乳500號∶1601＝1∶3～5，所述的農乳500號為十二烷基苯磺酸鈣，所述的1601為三苯乙烯基酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚EPE型。本發明還公開了瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑的製備工藝。採用本發明配方及工藝可節省大量的有機溶劑，省工、省時，節水、節電，生產效率高，成本大幅度降低；所製備得到的粗毒素除草生物活性明顯增強，加工成的瓜果腐黴粗毒素除草劑水劑穩定性明顯高於粗毒素。文檔編號A01P13/00GK101120683SQ20071006186公開日2008年2月13日申請日期2007年4月30日優先權日2007年4月30日發明者劉穎超,龐民好,張利輝,張金林,川李,董金皋申請人:河北農業大學