吉祥草藥材的質量檢測方法

2023-12-03 08:36:06

專利名稱：：吉祥草藥材的質量檢測方法
技術領域：
：本發明涉及一種吉祥草藥材的質量檢測方法，屬於對藥材進行質量控制的
技術領域：
。
背景技術：
：我國傳統的中藥及其製劑大多缺乏嚴密的質量標準和科學的檢測手段，難以有效的控制其內在質量，不能保證用藥的安全、有效，也不符合國際醫藥市場的要求，嚴重製約了我國中藥行業的發展。加強中藥材質量控制研究是中藥規範化、標準化的關鍵問題。只有對中藥材進行科學的質量控制，才能保證中藥質量，實現中藥的"安全、有效、穩定、可控"。吉祥草為百合科吉祥草屬植物吉祥草Reineckiacarnea(Andr.)Kunth的乾燥全草；喜溫暖、溼潤、半陰的環境，對土壤要求不嚴格，以排水良好肥沃壤土為宜；原產於中國長江流域以南各省及西南地區，日本也有分布。全年可採，洗淨，鮮用或切段曬乾。別名小青膽、小葉萬年青、玉帶草、觀音草等。吉祥草為常用中藥材，也是常用苗藥。性味功能與主治甘，平；潤肺止咳，祛風，接骨。用於肺結核，咳嗽咯血，慢性支氣管炎，哮喘，風溼性關節炎；外用治跌打損傷，骨折等。以吉祥草作為君藥的各種藥劑在臨床上已取得較好療效。吉祥草藥材成分複雜，主要包括以下幾類糖類、皂苷、生物鹼、木脂素、留類化合物、揮髮油和有機酸類。近年來國內外有關于吉祥草化學成分研究的報導，但有關于吉祥草質量標準的研究文獻報導很少，僅在《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版中以吉祥草對照藥材為對照進行了薄層色譜鑑別研究，另有其氯仿提取部位的薄層鑑別研究報導。因此，為了使吉祥草的臨床應用更加安全、有效、科學、合理，必須加強其質量控制。
發明內容本發明的目的在於提供一種吉祥草藥材的質量檢測方法。本發明建立了以凱提皂苷元和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個有效成分為對照的吉祥草薄層色譜鑑別方法和總皂苷的含量測定方法，完善了吉祥草藥材的質量檢測標準，彌補了現有質量檢測技術的不足，使吉祥草藥材的質量檢測技術更為科學、合理。本發明所述質量檢測方法包括性狀、鑑別、含量測定項目中的部分或全部，所述鑑別是對凱提皂苷元和/或剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄層色譜鑑別，含量測定是用紫外分光光度法對藥材中所含總皂苷的含量測定。其中，凱提皂苷元的鑑別方法是以凱提皂苷元對照品為對照、以氯仿乙酸乙酯甲醇:水=12:35:2.53.o:o.8i.2為展開劑的薄層色譜法；剴提s-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷的鑑別方法是以剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品為對照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:ii.5的下層為展開劑的薄層色譜法。具體的鑑別方法為(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2040mL水溶解後，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加25mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2060mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加l5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.51.Omg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點。總皂苷的含量測定方法是以凱提皂苷元對照品為對照的紫外分光光度法。具體的總皂苷含量測定方法為照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合併提取液，濾過，揮幹；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，於608(TC水浴恆溫加熱1030分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。本發明所述質量檢測方法包括以下項目性狀乾燥全草呈黃褐色，根莖細長，節明顯，節上有殘留的膜質鱗葉，並有少數彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑑別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次O.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2040mL水溶解後，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加25mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和io30min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2060mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加l5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.51.Omg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾9，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點；含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合併提取液，濾過，揮幹；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，於608(TC水浴恆溫加熱1030分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。優選的質量檢測方法包括以下項目性狀乾燥全草呈黃褐色，根莖細長，節明顯，節上有殘留的膜質鱗葉，並有少數彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑑別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用40mL水溶解後，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.8mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和15min後，以氯仿:乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i為展開劑，上行展開，展距iocm;取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用40mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.8mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和i5min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下層為展開劑，上行展開，展距10cm;取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點；含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過40目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合併提取液，濾過，揮幹；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至25mL，即得供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.13mg/mL的溶液，即得；測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，於7(TC水浴恆溫加熱15分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在453nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。據文獻報導，吉祥草的留體皂苷及留體皂苷元對環腺苷酸磷酸二酯酶的活性有抑制作用。因此，本發明人經過一系列的試驗研究，採用凱提皂苷元和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個有效成分作為指標，首次建立了以有效成分進行吉祥草薄層色譜鑑別的方法，並對io批來自不同產地的吉祥草藥材進行了鑑別，具有很好的實際意義，為其質量標準的提升奠定了基礎。以下是吉祥草薄層色譜鑑別的實驗研究過程1.儀器與材料1.1儀器GF254自製矽膠板；賽多利斯BP211型電子天平(德國)；雙巢展開缸1.2材料凱提皂苷元和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷(自製)通過波譜解析技術(IR、4-NMR、13C-NMR、MS)分析，鑑定其結構；吉祥草藥材(產地貴州扎佐、貴陽、平鎮、六枝、孟關、牛郎關；廣西；雲南澤通；雲南昆明)經貴州師範大學天然藥物質量控制研究中心的陳華國老師鑑定為吉祥草(Reineckiacarnea(Andr.)kunth)的全草；氯仿、甲醇、乙酸乙酯為分析純；水為蒸溜水；自製5%硫酸乙醇溶液。2.方法與結果2.1凱提皂苷元的鑑別將陰乾後的吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次(各lh)，濾過，合併濾液，將濾液濃縮近幹，用40mL水溶解後，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取3次(各20ml)，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液。精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.8mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)實驗，吸取上述兩種溶液各2UL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和15min後，以氯仿-乙酸乙酉g-甲醇-水(1.5:4:2.7:1)為展開劑，上行展開，展距約10cm。取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試液和凱提皂苷元呈現相同顏色的斑點。2.2剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷的鑑別將陰乾後的吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，和並濾液，將濾液濃縮近幹，用40mL水溶解，轉移置分液漏鬥中，用石油醚萃取3次(20mL，10mL，10mL)，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次(各20ml)，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液。精密稱取剴提5-0-6-D-吡口南葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.8mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)實驗，吸取上述兩種溶液各2yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和15min後，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2.4:1.2)的下層為展開劑，上行展開，展距約10cm。取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試液和剴提5-o-e-D-吡口南葡萄糖皂苷呈現相同顏色的斑點。3.討論3.1由于吉祥草中皂苷類化合物結構十分相似，在進行對照品薄層鑑別時，很難將所需化合物與其他雜質分開，幹擾成分多，且硫酸顯色的背景幹擾大。因此對其薄層鑑別帶來了很大的困難，本實驗通過大量的薄層條件和樣品的前處理方法的摸索試驗，得出了薄層效果較好，重複性好的薄層條件，S卩樣品的前處理方法分別考察了三種不同的提取條件(1)甲醇水浴回流提取後，先後用石油醚，水飽和的正丁醇萃取；(2)先用氯仿回流提取後，再用水飽和的正丁醇提取；(3)先用乙醇回流提取後，再先後用石油醚、水飽和的正丁醇萃取；試驗結果表明方法(1)效果最佳。但由于吉祥草藥材的色素較重，在考察凱提皂苷元的薄層鑑別時，幹擾嚴重，所以在方法(1)的基礎上，甲醇水浴回流提取，濾液揮幹，用蒸餾水溶解後加入3%的活性碳脫色，其效果較好。同時考察了多種展開系統，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(2:4:2.4:1.2)下層和氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(i.5:4:2.7:i)為展開系統，分別鑑別吉祥草中的剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷和凱提皂苷元，薄層效果較好3.2實驗對10批不同產地的吉祥草樣品進行了鑑別，結果表明吉祥草藥材因不同產地和不同時間採集導致其質量有所不同。3.3本法操作簡便，方法穩定，專屬性強，薄層色譜鑑別斑點清晰，可有效鑑別吉祥草藥材並可作為其質量控制標準之一。為了驗證吉祥草藥材中總皂苷含量測定方法的合理性，發明人對該方法也進行了試驗研究和篩選，具體如下1、對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，甲醇溶解製成濃度為0.13mg/mL的凱提皂苷元溶液，即得。2、檢測波長的選擇準確量取凱提皂苷元對照品溶液，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，於7(TC水浴恆溫加熱15分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比，按照分光光度法在400800nm波長內測定吸收光譜，由於其在453nm處有最大吸收，空白溶液無幹擾，故選擇453nm作為測定波長。3、供試品溶液的製備3.1提取方法的選擇方法一取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流2h，濾過，揮幹。加水20mL溶解，用石油醚萃取3次(15mL/次)，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液一。方法二取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入正丁醇40mL水浴回流2h，濾過，揮幹，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液二。方法三取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入甲醇40mL水浴回流2h，濾過，揮幹。加水20mL溶解，用石油醚萃取3次(15mL/次)，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液三。方法四取吉祥草藥材粉末約1.0g，置100mL具塞三角瓶中，加入甲醇40mL水浴回流2h，濾過，揮幹。用2mol/L鹽酸水溶液20mL溶解殘渣，水浴回流4小時後，水層再用水飽和正丁醇萃取4次(15mL/次)，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至25mL，搖勻，即得供試品溶液四。分別精密吸取上述供試品溶液一、二、三、四及參比溶液各50uL，分別置於10ml具塞反應瓶中，置水浴中揮幹溶劑，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，於7(TC水浴恆溫加熱15分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻。在453nm最大吸收處測定含量，結果見表l:表l各種提取方法試驗結果表tableseeoriginaldocumentpage14由表1可知，採用80%乙醇作為提取溶劑(即方法一)的效果最好。3.2提取次數考察按4.l項下的方法一，取吉祥草藥材3份(批號20040301)，每份lg，進行水浴回流提取，分別提取1次、2次、3次，每次2小時，結果見表2:表2提取次數考察結果表tableseeoriginaldocumentpage14由上表可知，提取3次便可完全提取出樣品中的總皂苷。3.3提取時間考察按4.l項下的方法一，取吉祥草藥材3份(批號20040301)，每份lg，進行水浴回流提取，提取時間分別為0.5小時、2小時、3小時，結果見表3:表3提取時間考察結果表tableseeoriginaldocumentpage14由上表可知，提取2小時即可完全提取出吉祥草藥材中的總皂苷，故提取時間確定為2/、時。4、顯色反應條件的選擇4.l反應原理番草瞎~CH0+HO"4.2顯色反應試劑的選擇本實驗對常用顯色劑香草醛冰醋酸-硫酸、高氯酸和香草醛冰醋酸-高氯酸-冰醋酸進行了考察，發現高氯酸不能對其顯色，只有加入香草醛的顯色劑才能使其在波長400800nm範圍內有吸收光譜。其中以香草醛冰醋酸-高氯酸-冰醋酸顯色法測定吸光度時比色穩定性較好4.3顯色反應條件(濃度、溫度、時間)的選擇吸光度隨香草醛的濃度增加而增加，5%以下變化幅度較大，考慮到香草醛在空氣中易被氧化，濃度不宜過大，故選5%作為合適濃度。高氯酸用量在O.lmL0.3mL之間較穩定，而後吸光度隨高氯酸用量的增加而下降，高氯酸用量過多反而對顯色反應不利，所以本實驗選擇高氯酸的用量為O.lmL。加熱溫度在607(TC間變化較小，加熱到9(TC時吸光度突然降低，對照品結構在此溫度下可能被破壞，從而導致其吸光度降低，所以選取加熱溫度為607(TC。吸光度隨加熱時間的增加而增加，在1525min間較穩定，所以選取加熱時間為15min。5、線性關係考察精密吸取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、lml於具塞試管中，揮幹溶劑，精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lml，密塞，於7(TC水浴恆溫加熱15分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，以甲醇同法製備空白，按照分光光度法在453nm波長內測定吸收光譜。以凱提皂苷元的質量為橫坐標，吸收值為縱坐標，繪製標準曲線。經回歸分析，標準曲線的方程Y4.0027+0.0078x相關係數^0.9996，結果表明凱提皂苷元對照品在26136ug範圍內與吸光度呈良好的線性關係。6、精密度試驗6.1儀器精密度試驗取濃度為O.13mg/mL的對照品溶液，按上述方法顯色，於453nm波長處重複測定5次，吸光度平均值為O.574，RSD為0.3"/。，表明儀器精密度良好，結果如下表4精密度試驗結果表tableseeoriginaldocumentpage15結果表明凱提皂苷元對照品的吸光度相對標準偏差小於2%，說明本試驗精密度良好6.2重複性試驗分別精密稱取吉祥草樣品6份，按前法處理，製得供試品溶液，測定樣品中總皂苷含量。平均總皂苷含量28.91mgg—、RSD=1.3%(n=6)，表明方法的重複性良好。測定結果如下表5重複性試驗結果表取樣量m/g1.0021.0021.0011.0021.0011.002平均值rr/呢RSD(%)總皂苷含量m/mg29.22428.6628.哪29.2441.3百分含量％2.9172.9112.8632.8832.m2.9192.咖結果表明吉祥草中總皂苷的含量相對標準偏差小於2%，說明本試驗重現性良好。7、準確度試驗準確稱取一定量已知總皂苷含量的吉祥草樣品6份，每份0.5g，加入一定量的凱提皂苷元對照品，按供試品溶液的製備和測定步驟進行，計算得回收率，求相對標準偏差。結果表明，此方法具有較好的加樣回收率，準確度良好，結果見表6:表6回收率實驗結果序號藥材量藥材中總皂苷含量加入量總測得量回收率平均值RSDm/gm/mgm/mgm/mg(%)(%)(%)10.則14.1417.00020.862100.120.則14.1417.00020.832犯.630.50214.1757.,20.83597.31.640.50214.17514.00027.66250.50314.18614.00027.87195.260.50014.m14.00027.35296.370.50114.14116.00030.62897.880.50014.m16.00030.32796.590.50014.m16.00030.51297.58、穩定性試驗被測溶液的穩定性考察精密吸取供試品溶液50uL，按上述方法顯色，於453nm波長處每隔5min測定其吸光度，結果表明樣品溶液的RSD為1.2X，樣品溶液顯色後在30min內穩定性良好。測定結果如下表7溶液穩定性試驗結果表顯色吋間5min10min15min20min25min30minA0.4590.4570.4530.4520.柳0.4451.2結果表明吉祥草藥材總皂苷吸光度相對偏差小於2%，說明顯色後在室溫下30分鐘內測定具有良好的穩定性。與現有技術相比，本發明建立了以凱提皂苷元和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個有效成分為對照的吉祥草薄層色譜鑑別方法和總皂苷的含量測定方法，完善了吉祥草藥材的質16量檢測標準，彌補了現有質量檢測技術的不足，使吉祥草藥材的質量檢測技術更為科學、合理；本發明所述鑑別項目的可操作性強，簡便易行，方法穩定，專屬性強，薄層色譜斑點清晰；所述含量測定方法的精密度高，重現性好，穩定性好，測量結果準確；採用這些檢測方法可有效控制吉祥草藥材的質量，從而確保其臨床應用的安全性和有效性。具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。本發明的實施例l:吉祥草藥材的質量檢測方法包括以下項目性狀乾燥全草呈黃褐色，根莖細長，節明顯，節上有殘留的膜質鱗葉，並有少數彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮。鑑別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用40mL水溶解後，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.8mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和15min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i為展開劑，上行展開，展距iocm;取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點。(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用40mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.8mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和i5min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下層為展開劑，上行展開，展距10cm;取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點。含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過40目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合併提取液，濾過，揮幹；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至25mL，即得供試品溶液。對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.13mg/mL的溶液，即得。測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入5。/。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，於7(TC水浴恆溫加熱15分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在453nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量。吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。本發明的實施例2:吉祥草藥材的質量檢測方法可以僅含以下項目鑑別將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇50mL水浴回流3次，每次O.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用30mL水溶解後，加入活性炭0.5g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取2次，每次25ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加4mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各5uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和25min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4.5:3:i為展開劑，上行展開，展距8cm;取出，晾乾，噴以3%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點。含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過50目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入70X乙醇50mL水浴回流4次，每次l.5h，合併提取液，濾過，揮幹；加水25mL溶解，用石油醚萃取4次，每次20mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取5次，每次20mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至50mL，即得供試品溶液。對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.20mg/mL的溶液，即得。測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入7。/。香草醛冰醋酸溶液0.40ml，高氯酸0.40mL，密塞，於75。C水浴恆溫加熱20分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸7mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在460nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量。吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。本發明的實施例3:吉祥草藥材的質量檢測方法可以僅含以下項目鑑別將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇50mL水浴回流3次，每次O.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用30mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取4次，第l、2次各15mL，第3、4次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取2次，每次15ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加2mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各5yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和20min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1:3:2:i的下層為展開劑，上行展開，展距8cm;取出，晾乾，噴以3%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點。含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過30目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入90X乙醇30mL水浴回流5次，每次lh，合併提取液，濾過，揮幹；加水15mL溶解，用石油醚萃取5次，每次10mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取3次，每次25mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至40mL，即得供試品溶液。對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.35mg/mL的溶液，即得。測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入3%香草醛冰醋酸溶液0.30ml，高氯酸O.30mL，密塞，於65。C水浴恆溫加熱25分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸4mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在440nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量。吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。本發明的實施例4:吉祥草藥材的質量檢測方法可以含以下項目性狀乾燥全草呈黃褐色，根莖細長，節明顯，節上有殘留的膜質鱗葉，並有少數彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮。鑑別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇70mL水浴回流1.5h，濾過，濾液濃縮近幹，用20mL水溶解後，加入活性炭0.2g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取4次，每次15ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加2mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含1.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和20min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1:3:2.5:0.8為展開劑，上行展開，展距12cm;取出，晾乾，噴以6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點。(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇70mL水浴回流1.5h，濾過，濾液濃縮近幹，用50mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取2次，每次20mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取4次，每次10ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加4mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含1.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和25min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=3:5:3:i.5的下層為展開劑，上行展開，展距i2cm;取出，晾乾，噴以6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點。20權利要求1.一種吉祥草藥材的質量檢測方法，所述質量檢測方法包括性狀、鑑別、含量測定項目中的部分或全部，其特徵在於所述鑑別是對凱提皂苷元和/或剴提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄層色譜鑑別，含量測定是用紫外分光光度法對藥材中所含總皂苷的含量測定。2.按照權利要求l所述吉祥草藥材的質量檢測方法，其特徵在於凱提皂苷元的鑑別方法是以凱提皂苷元對照品為對照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑的薄層色譜法；剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷的鑑別方法是以剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品為對照、以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:ii.5的下層為展開劑的薄層色譜法。3.按照權利要求1或2所述吉祥草藥材的質量檢測方法，其特徵在於:具體的鑑別方法為(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2040mL水溶解後，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加25mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2060mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加l5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.51.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點。4.按照權利要求l所述吉祥草藥材的質量檢測方法，其特徵在於總皂苷的含量測定方法是以凱提皂苷元對照品為對照的紫外分光光度法。5.按照權利要求1或4所述吉祥草藥材的質量檢測方法，其特徵在於:具體的總皂苷含量測定方法為照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合併提取液，濾過，揮幹；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，於608(TC水浴恆溫加熱1030分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。6.按照權利要求l、2或4所述吉祥草藥材的質量檢測方法，其特徵在於所述質量檢測方法包括以下項目性狀乾燥全草呈黃褐色，根莖細長，節明顯，節上有殘留的膜質鱗葉，並有少數彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑑別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次O.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2040mL水溶解後，加入活性炭O.20.7g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取24次，每次1530mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加25mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.51.0mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=12:35:2.53.0:0.81.2為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以2%8%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇4080mL水浴回流l3次，每次0.51.5h，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用2060mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取25次，每次1020mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取25次，每次1020mL，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加l5mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-{3-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.51.Omg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各25yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和1030min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=13:35:23:11.5的下層為展開劑，上行展開，展距812cm;取出，晾乾，噴以3%6%硫酸乙醇溶液，105'C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-0-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點；含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過2060目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入6090X乙醇2060mL水浴回流35次，每次l3h，合併提取液，濾過，揮幹；加水1030mL溶解，用石油醚萃取35次，每次1030mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取36次，每次1030mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至2550mL，即得供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.100.50mg/mL的溶液，即得；測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入3%8%香草醛冰醋酸溶液0.100.50ml，高氯酸O.100.50ml，密塞，於608(TC水浴恆溫加熱1030分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸48mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在440460nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。7.按照權利要求6所述吉祥草藥材的質量檢測方法，其特徵在於所述質量檢測方法包括以下項目性狀乾燥全草呈黃褐色，根莖細長，節明顯，節上有殘留的膜質鱗葉，並有少數彎曲巻縮的須狀根，葉皺縮；鑑別(1)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用40mL水溶解後，加入活性炭0.3g，加熱，濾過，濾液轉移至分液漏鬥中，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取凱提皂苷元對照品適量，加甲醇製成每lmL含O.8mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2uL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和15min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=1.5:4:2.7:i為展開劑，上行展開，展距iocm;取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和凱提皂苷元對照品呈現相同顏色的斑點；(2)將吉祥草粉碎成粗粉，取藥材粉末2g，加入甲醇60mL水浴回流2次，每次lh，濾過，合併濾液，濃縮近幹，用40mL水溶解，轉移至分液漏鬥中，用石油醚萃取3次，第l次20mL，第2、3次各10mL，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取3次，每次20ml，分取正丁醇萃取液，揮去溶劑，殘渣加3mL甲醇溶解，作為供試品溶液；精密稱取剴提5-0-6-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品適量，加甲醇製成每lmL含0.8mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典一部附錄VIB薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各2yL點樣於預製矽膠GF254層析板上，將薄層板置展開缸中預飽和i5min後，以氯仿乙酸乙酯甲醇水=2:4:2.4:i.2的下層為展開劑，上行展開，展距10cm;取出，晾乾，噴以5%硫酸乙醇溶液，105。C加熱至斑點顯色清晰，於可見光下觀察，在相同的比移值處吉祥草供試品溶液和剴提5-o-e-D-吡喃葡萄糖皂苷對照品呈現相同顏色的斑點；含量測定照《中國藥典》一部附錄VIE紫外分光光度法測定供試品溶液的製備取吉祥草藥材，粉碎，過40目篩，精密稱取lg，置100ml具塞三角瓶中，加入80X乙醇40mL水浴回流3次，每次2h，合併提取液，濾過，揮幹；加水20mL溶解，用石油醚萃取3次，每次15mL，棄去石油醚液，水層再用水飽和正丁醇萃取4次，每次15mL，回收正丁醇液，揮幹，用甲醇定容至25mL，即得供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取經五氧化二磷乾燥至恆重的凱提皂苷元對照品適量，用甲醇溶解製成濃度為O.13mg/mL的溶液，即得；測定法分別精密量取凱提皂苷元對照品溶液O.5mL與供試品溶液5mL，置水浴中揮幹溶劑，精密加入5y。香草醛冰醋酸溶液0.20ml，高氯酸O.lmL，密塞，於7(TC水浴恆溫加熱15分鐘，取出後立即用冰水冷卻5min，加冰醋酸5mL，搖勻，以甲醇同法製備空白作參比；按照分光光度法在453nm波長處測定吸收光譜，空白溶液無幹擾；用標準曲線法計算含量；吉祥草藥材中總皂苷提取物的含量應不低於2%。全文摘要本發明公開了一種吉祥草藥材的質量檢測方法，所述質量檢測方法包括性狀、鑑別、含量測定項目中的部分或全部，所述鑑別是對凱提皂苷元和/或剴提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷的薄層色譜鑑別，含量測定是用紫外分光光度法對藥材中所含總皂苷的含量測定。與現有技術相比，本發明建立了以凱提皂苷元和剴提5-O-β-D-吡喃葡萄糖皂苷兩個有效成分為對照的吉祥草薄層色譜鑑別方法和總皂苷的含量測定方法，完善了吉祥草藥材的質量檢測標準，彌補了現有質量檢測技術的不足，使吉祥草藥材的質量檢測技術更為科學、合理；採用本發明所述檢測方法可有效控制吉祥草藥材的質量，從而確保其臨床應用的安全性和有效性。文檔編號A61P11/06GK101549084SQ20091030286公開日2009年10月7日申請日期2009年6月3日優先權日2009年6月3日發明者海劉,欣周,周嬋媛,陳華國申請人:貴州師範大學