層析用試驗工具的製作方法

2023-12-09 10:10:56 2

專利名稱：：層析用試驗工具的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種層析用試驗工具。
背景技術：
：作為用能與被檢目標特異結合的物質檢測試樣中被檢目標的試驗工具有層析用試驗工具等。眾所周知，用層析用試驗工具檢測血液中的被檢目標時，來源於血液紅細胞的顏色會影響檢測結果的正確讀取。因此，用含紅細胞等血細胞的試樣時，使用一種具有從試樣中分離血細胞(特別是紅細胞)的分離膜的層析用試驗工具。作為具有分離血細胞的分離膜的層析用試驗工具，已知有以下用具US6008059上記述了一種具有用於除去紅細胞等細胞成份的多孔分離矩陣(matrix)的層析用試驗工具。據記載，作為多孔分離矩陣可以使用膜內孔隙尺寸漸減的有梯度的非對稱膜。US2003032196上記述一種具有用於除去紅細胞等細胞成份的取樣過濾器的層析用試驗工具。W09734148上記述了一種具有根據液體成份展開速度比紅細胞等細胞成份快的特性進行分離的多孔膜的層析用試驗工具。據記載，在此多孔膜上，紅細胞不是被從全血中過濾掉，而是由於紅細胞展開速度慢，從血漿中分離出來。在此，在上述US6008059和US2003032196的層析用試驗工具中均使用分離膜來捕捉試樣中紅細胞等血細胞成份並讓液體成份通過，以此分離血細胞成份。這種層析用試驗工具當血樣添加到分離膜時，血樣中的血細胞成份會被分離膜捕捉。此時，分離膜可能引起網眼堵塞，出現血液中的液體成份(比如血漿等)通過分離膜花費時間的情況。從而帶來檢測費時的問題。上述W09734148上記述的層析用試驗工具使用的是一種根據試樣中液體成份展開速度比紅細胞等血細胞成份快的特性分離血細胞成份的分離膜。這種層析用試驗工具並非在分離膜上捕捉血細胞成份。因此，隨著檢測後時間一長，紅細胞等會從分離膜滲漏出，侵蝕層析載體。從而帶來檢查結果讀取困難的問題。
發明內容本發明的範圍只由後附權利要求書所規定，在任何程度上都不受這一節
發明內容的陳述所限。鑑於上述情況本發，提供一種層析用試驗工具可快速檢測，且過多長時間，血液中的紅細胞等血細胞都不會侵蝕層析載體。本發明提供一種用於檢測含有紅細胞和液體成份的試樣中的被檢目標的層析用試驗工具，包括-分離所述紅細胞和所述液體成份的第一血細胞分離部件，該第一血細胞分離部件可以使所述液體成份比所述紅細胞更快地展開；分離所述紅細胞和所述液體成份的第二血細胞分離部件，該第二血細胞分離部件可以捕捉所述紅細胞並讓所述液體成份通過；以及承載與所述被檢目標特異性結合的捕捉物質的層析載體；其中，所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上遊依次按所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件、所述層析載體的順序配置。所述第一血細胞分離部件將所述試樣向試樣展開方向分離；所述第二血細胞分離部件將所述試樣向與試樣展開方向垂直方向分離。所述層析用試驗工具，還包括在所述第二血細胞分離部件的試樣展開方向上遊頂端的密封部件，用於防止所述試樣從所述第一血細胞分離部件進入所述第二血細胞分離部件。所述第二血細胞分離部件由多孔材料製成，該多孔材料中的細孔尺寸從該多孔材料上面向下逐漸變小。所述第一血細胞分離部件在未與所述第二血細胞分離部件重疊的區域有加樣區。所述第一血細胞分離部件的至少一部分從所述第二血細胞分離部件的試樣展開方向上遊與所述第二血細胞分離部件重疊，所述第二血細胞分離部件的至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上遊起與所述層析載體重疊。所述第二血細胞分離部件在試樣展開方向下遊有未與所述第一血細胞分離部件重疊的區域。所述層析用試驗工具，還包括具有與所述被檢目標特異性結合且被標記的標記物質的標記保持部件；該標記保持部件配置在所述第二血細胞分離部件和所述層析載體之間。所述標記保持部件至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上遊與所述層析載體重疊。所述標記物質用有色粒子標記。所述層析用試驗工具還包括吸收所述層析載體排出的所述液體成份的吸收部件；其中，該吸收部件配置在所述層析載體試樣展開方向下遊。所述層析載體的至少一部分從所述吸收部件的試樣展開方向上遊與所述吸收部件重疊。所述層析載體將所述捕捉物質承載到判斷部分。本發明另提供一種用於檢測含紅細胞和液體成份的試樣中的被檢目標的層析用試驗工具，包括由有等於或大於所述紅細胞大小的細孔的多孔材料構成的第一血細胞分離部件；由有小於所述紅細胞大小的細孔的多孔材料構成的第二血細胞分離部件；及承載與被檢目標特異性結合的捕捉物質的層析載體；其中，所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上遊依次按所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件、所述層析載體的順序配置。所述第一血細胞分離部件和所述第二血細胞分離部件為膜狀。所述第二血細胞分離部件是過濾膜。所述第二血細胞分離部件的細孔從上向下逐漸變小。所述層析用試驗工具，還包括具有能與所述被檢目標特異性結合且被標記的標記物質的標記保持部件；其中，該標記保持部件配置於所述第二血細胞分離部件和所述層析載體之間。本發明再提供一種運用層析用試驗工具檢測含紅細胞和液體成份的試樣中的被檢目標的方法，包括以下步驟第一分離步驟，通過比所述紅細胞更快地展開所述液體成份，分離所述紅細胞和所述液體成份；第二分離步驟，通過捕捉所述紅細胞並讓所述液體成份通過，分離所述紅細胞和所述液體成份；以及捕捉步驟，將所述被檢目標捕捉到承載有能與所述被檢目標特異性結合的捕捉物質的判斷部分。所述方法，還包括一個步驟，即在所述第二分離步驟之後，用有與所述被檢目標特異性結合且被標記的標記物質的標記保持部件形成被檢目標和標記物質的複合物。[圖l]為本發明一實施方式的層析用試驗工具結構的截面圖。[圖2]為圖1所示層析用試驗工具的變形例的截面圖。[圖3]為本發明實施例1的層析用試驗工具結構的截面圖。[圖4]為比較例1的層析用試驗工具結構的截面圖。[圖5]為本發明實施例2的層析用試驗工具結構的截面圖。[圖6]為比較例2的層析用試驗工具結構的截面圖。[圖7]為向本發明實施例1和比較例l的層析用試驗工具加樣後隨時間的推移試樣展開情況的照片。[圖8]為向本發明實施例2和比較例2的層析用試驗工具加試樣後隨時間的推移試樣展開情況的照片。具體實施例方式下面將參照本發明的優選實施方案。附圖和以下敘述中所示內容均為例示，本發明的範圍不受附圖及以下敘述中所示內容的限制。1.層析用試驗工具的結構圖l為本發明一實施方式的層析用試驗工具(以下也稱試驗工具)結構的截面圖。如圖1所示，試驗工具l從含血細胞成份和液體成份的試樣S的展開方向(箭頭A方向)上遊依次配置有第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件5和層析載體7。第一血細胞分離部件3根據液體成份在第一血細胞分離部件3的展開速度比血細胞成份快的原理，分離血細胞成份和液體成份。第二血細胞分離部件5用捕捉血細胞成份且讓液體成份通過的方法分離血細胞成份和液體成份。層析載體7將能與被檢目標特異性結合的捕捉物質承載於判斷區9。第一血細胞分離部件3向試樣展開方向分離試樣S。第二血細胞分離部件5向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S。第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件5部分重疊。第一血細胞分離部件3在未與第二血細胞分離部件5重疊的區域有加樣區4。一般層析用試驗工具當加樣於一定區域(比如圖l的加樣區4)時，試樣會向檢測結果顯示部分(比如圖1的判斷區9)展開(移動)。本說明書中所謂"試樣展開方向"指試樣向檢測結果顯示部分展開(移動)的方向。第二血細胞分離部件5的試樣展開方向上遊起點處配置有密封部件IO，用於防止試樣S從第一血細胞分離部件3進入第二血細胞分離部件5。第二血細胞分離部件5和層析載體7之間配置有標記保持部件11。第二血細胞分離部件5和標記保持部件11接觸配置。標記保持部件11和層析載體7之間接觸配置。標記保持部件ll有與被檢目標特異性結合且被標記的標記物質。層析載體7下遊配置有吸收部件13，與層析載體7接觸。上述各部件均貼在由塑料、紙或玻璃等構成的基材15上。2.層析用試驗工具的使用方法等下面根據圖l說明試驗工具l的使用方法。使用試驗工具l可以快速檢查，且檢查後過一段時間，層析載體7也難以被紅細胞等血細胞成份侵蝕。以下也對此加以說明。檢査時試驗工具l的配置方向無特別限定。試驗工具l既可平放狀態使用，也可豎立狀態使用。下面以平放狀態下使用試驗工具l為例進行說明。(1)試樣S的添加首先向第一血細胞分離部件3的加樣區4添加含血細胞成份和液體成份的試樣S。此時，不知道試樣S中是否含被檢目標。以下假設試樣S中含有被檢目標進行說明。試樣S只要是含血細胞成份和液體成份的標本，無論是血液本身、還是稀釋在展開溶劑等中的血液、還是經過從血液中除去部分成份等前處理的標本均可。血細胞成份由紅細胞等血細胞構成。液體成份當試樣S為血液中添加展開溶劑的試樣時由血漿和展開溶劑構成。加樣區4是在試驗工具1添加試樣的部分。所謂加樣區4指使用說明書、試驗工具l本身或裝試驗工具l的容器等上指定為可添加試樣部位的部位。加樣區4最好設置在儘可能遠離第二血細胞分離部件5的位置。特別是加樣區4最好設置在試驗工具1上遊起點。比如，第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件5未重疊的區域等。這樣，通過將加樣區4設置在儘可能遠離第二血細胞分離部件5的位置，可以拉長試樣S在第一血細胞分離部件3中移動的距離。從而使含在試樣s中的血細胞成份和液體成份的分離更適當。另外，分離距離的長度對於試樣量來說過長，也可能使到達第二血細胞分離部件的液體成份量達不到檢測被檢目標所需要的量。因此，分離距離的長度應根據試樣量適當選擇。添加到加樣區4的試樣S滲入第一血細胞分離部件3中，因毛管現象而依次沿第一血細胞分離部件3、第二血細胞分離部件5、標記保持部件ll、層析載體7和吸收部件13移動。因此，這些部件可以使用能利用無紡布或多孔材料等的毛管現象使試樣S展開的材料。'(2)用第一血細胞分離部件進行的分離試樣S中的液體成份和血細胞成份在第一血細胞分離部件3內因展開速度不同而分離。即，試樣S中的液體成份最先從第一血細胞分離部件3排出。試樣S中的血細胞成份比液體成份後從第一血細胞分離部件3排出。最先排出的液體成份中可能含有若干血細胞成份，但不會對本實施方式的作用效果產生很大影響。因此，以最先排出的液體成份中實際上不含血細胞成份為例進行說明。第一血細胞分離部件3的結構無特別限定，只要能根據液體成份在第一血細胞分離部件3內展開速度比血細胞成份快的原理分離血細胞成份和液體成份即可。作為使液體成份的展開速度比血細胞成份加快的因素，比如可以通過血細胞成份與第一血細胞分離部件3產生某種相互作用(靜電的相互作用、立體的相互作用)使血細胞成份在第一血細胞分離部件3的展開速度放緩。作為一例，當第一血細胞分離部件3為多孔材料、其孔隙和血細胞差不多或略大一點點時，液體成份可以順暢地從孔隙移過，而血細胞成份卻不能順暢地從孔隙移過，因此，血細胞成份在第一血細胞分離部件3的展開速度變慢，而液體成份的展開速度比血細胞成份加快。血液中所含血細胞因種類不同而大小各異。因此，試樣s中可能含有各種各樣大小不同的血細胞成份。比如，當試樣S是由人的血液製備而成時，試樣S中所含血細胞及其大小如下白細胞中淋巴細胞為615iim，單核細胞為1218pm，中性細胞為1012pm，嗜鹼性細胞為1015)im，嗜酸性細胞為1015pm，紅細胞為78pm，血小板為l4pm。象這樣試樣S中可能含有的血小板等較小血細胞成份比紅細胞等較大血細胞成份在第一血細胞分離部件3中的展開速度可能更快，有時，有可能展開速度與液體成份基本上相同。然而，大小比紅細胞等血細胞成份小的血細胞成份對檢測結果產生影響的可能性很低，因此，即使它在第一血細胞分離部件3中的展開速度快，也不會給本實施方式的作用效果造成很大影響。第一血細胞分離部件3可以使用紙色譜法和薄層色譜法中使用的膜。比如，可以使用硝化纖維素、尼龍(比如導入了可以用羧基和烷基置換的氨基的修飾尼龍)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纖維等各種材料的膜。具體而言，可以使用MF1(橫向流動，Whatman公司)、LF1(橫向流動，Whatman公司)、FUSION5(Whatman公司)等市場銷售品，也可以使用W09734148上記述的部件。第一血細胞分離部件3最好為膜狀。第一血細胞分離部件3最好向試樣展開方向移動試樣S，並向試樣展開方向分離試樣S。這是因為易於使試樣S在第一血細胞分離部件3的移動距離(分離距離)拉長。不過，第一血細胞分離部件3的結構和用第一血細胞分離部件3進行試樣分離的方向無特別限定。比如第一血細胞分離部件3也可以是塊狀，也可以向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S。從第一血細胞分離部件3排出的液體成份經過第一血細胞分離部件3與第二血細胞分離部件5的接觸部位移動到第二血細胞分離部件5。雖然在本實施方式中第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件5直接接觸，但也可以在第一血細胞分離部件3和第二血細胞分離部件5之間設置其他不妨礙試樣S從第一血細胞分離部件3移動到第二血細胞分離部件5的部件。試樣S從第一血細胞分離部件3移到第二血細胞分離部件5，既可以從試樣展開方向也可以從與試樣展開方向垂直的方向進入。在本實施方式中，第二血細胞分離部件5為向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S，因此，試樣S最好從與試樣展開方向垂直的方向進入第二血細胞分離部件5。因此，第二血細胞分離部件5的試樣展開方向上遊起點處設有密封部件IO，以防止試樣S從第一血細胞分離部件3進入第二血細胞分離部件5。以此，可以防止試樣S順試樣展開方向進入第二血細胞分離部件5。密封部件10隻要可以防止試樣S進入，對其結構和材料均無特別限定。作為密封部件使用的部件具體而言可以使用ARcare系列(Adhesives公司)等市場銷售產品。密封部件10也可如圖2所示省略。(3)用第二血細胞分離部件5進行的分離移動到第二血細胞分離部件5的液體成份在第二血細胞分離部件5中向與試樣展開方向垂直的方向移動。第二血細胞分離部件5通過捕捉血細胞成份、讓液體成份通過來分離試樣S中的液體成份和血細胞成份。即，紅細胞等血細胞成份被第二血細胞分離部件5捕捉，而液體成份則不被捕捉從第二血細胞分離部件5排出。在本實施方式中，液體成份先通過第二血細胞分離部件5。因此，不會發生在液體成份通過前，血細胞成份堵塞第二血細胞分離部件5的情況，液體成份可以順利地通過。因此，用本實施方式可以快速進行檢查。試樣S中的血細胞成份比液體成份晚從第一血細胞分離部件3排出，晚到達第二血細胞分離部件5。第二血細胞分離部件5捕捉住紅細胞等血細胞成份不讓通過，因此，時間過後也不會出現紅細胞等血細胞成份侵蝕層析載體的情況。因此，時間過後也不會有檢査結果讀取困難的情況發生。雖然此時第二血細胞分離部件5可能會引起堵塞，但液體成份己經通過第二血細胞分離部件5，不會影響檢查時間。第二血細胞分離部件5的結構並無特別限定，至少是以捕捉紅細胞並讓液體成份通過的方式分離紅細胞等血細胞成份和液體成份即可。作為一例，第二血細胞分離部件5由孔隙小於待捕捉的血細胞(比如紅細胞)的多孔材料構成。在這種情況下，作為捕捉對象的血細胞無法通過細孔，被第二血細胞分離部件5捕捉。多孔材料中的孔隙大小也可以從該多孔材料上面向下逐漸變小。這樣，該多孔材料上面孔隙較大，試樣易於擴散，試樣在充分擴散的狀態下到達該多孔材料下面較小的細孔，血細胞成份被細孔捕捉，因此，具有分離效率高的長處。如上所述，試樣S中含有各種大小不一的血細胞成份。試樣S中略小於紅細胞等血細胞成份的血細胞成份有可能在第二血細胞分離部件5中未被捕捉與液體成份一起通過。但是，略小於紅細胞等血細胞成份的血細胞成份影響檢測結果的可能性很小。因此，較小血細胞成份即使與液體成份一起通過第二血細胞分離部件5，也不會對本實施方式的作用效果產生多大影響。因此，這種情況也視為"捕捉血細胞成份'。'紅細胞等血細胞大小因動物種類而各異。比如與人的紅細胞大小相比，狗的紅細胞大小約為80%，貓的紅細胞大小約為50%。因此，比如將待捕捉目標定為紅細胞時，第二血細胞分離部件5可根據作為試樣使用的血液的動物種類的紅細胞大小適當選擇孔隙的大小。第二血細胞分離部件5可以使用市場上出售的過濾膜。作為市場銷售的過濾膜，比如有BTSSP100、BTSSP200、BTSSP3OO(VerticalFlowType,PALL公司)等。此外，第二血細胞分離部件5還可以使用US6008059上記述的不對稱膜和US2003032196上記述的取樣過濾器。比如，可以用疏水性聚和物和親水性聚和物組合而成的材料(US5240862，US5076925)製作不對稱膜和取樣過濾器。在此，作為疏水性聚和物有聚碸、聚醚碸、聚醯亞胺和聚醚亞胺。作為親水性聚和物有聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯酯和聚乙二醇。第二血細胞分離部件5最好為膜狀。第二血細胞分離部件5最好向與試樣展開方向垂直的方向移動試樣S，並向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S。一般捕捉血細胞成份讓液體成份通過來分離液體成份和血細胞成份時，分離面積大一些為好。向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S的第二血細胞分離部件5易於擴大分離面積。但是，第二血細胞分離部件5的結構和用第二血細胞分離部件5分離試樣的方向無特別限定。比如第二血細胞分離部件5也可以是塊狀，也可向試樣展開方向分離試樣s。如果分離面積對於試樣量來說過大，也可能到達層析載體7的液體成份數量無法滿足檢出被檢目標所需要的量。因此，分離面積要根據試樣S的量適當選擇。當第二血細胞分離部件5向試樣展開方向的垂直方向分離試樣S時，最好第一血細胞分離部件3的至少一部分從第二血細胞分離部件5試樣展開方向上遊起與第二血細胞分離部件5重疊。第二血細胞分離部件5的至少一部分最好從層析載體7的試樣展開方向上遊與層析載體7重疊配置。這種配置可以在第二血細胞分離部件5上面以更寬的面積接受從第一血細胞分離部件3排出的試樣S。還可以在第二血細胞分離部件5下面以更廣的面積向層析載體7排出試樣S。如果第二血細胞分離部件5的試樣展開方向下遊末端與上述第一血細胞分離部件3重疊，則從第一血細胞分離部件3排出的試樣S有可能不通過第二血細胞分離部件5而直接到達層析載體7。因此，第二血細胞分離部件5最好在其試樣展開方向下遊有一未與第一血細胞分離部件3重疊的區域。從第二血細胞分離部件5排出的液體成份通過第二血細胞分離部件5與標記保持部件11的接觸部分移動到標記保持部件11。在本實施方式中，第二血細胞分離部件5和標記保持部件11接觸，但第二血細胞分離部件5和標記保持部件11之間也可以設置不妨礙試樣S從第二血細胞分離部件5向標記保持部件ll移動的其他部件。(4)複合物的生成移動到標記保持部件ll的液體成份因毛管現象而在標記保持部件ll中移動。標記保持部件ll有能與被檢目標特異性結合且被標記的標記物質。因此，當液體成份中含有被檢目標時，被檢目標與標記物質特異性結合生成複合物。生成的複合物與液體成份一起移動到層析載體7。未形成複合物狀態(即分離狀態)的被檢目標和標記物質也隨液體成份一起移動到層析載體7。對於被檢目標種類無特別限定，只要是含在人等血液中且不會被第二血細胞分離部件5過濾掉的物質均可。舉例來說，作為被檢目標有抗原、抗體、激素、生長激素受體、凝集素、凝集素結合型糖質、藥物或其代謝物、藥物受體、核酸及其片段、變異體和組合等。具體而言，作為被檢目標可以是細菌、原生生物和真菌等細胞、病毒、蛋白質、多糖類等，如除上述流感病毒外，還有副流感病毒、RS病毒、肺炎支原體、輪狀病毒、杯狀病毒、冠狀病毒、腺病毒、腸道病毒、皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、重症急性呼吸器症候群病原病毒、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、三日瘧原蟲、其他消化器官疾病、中樞神經疾病、出血熱等各種疾病的病原體、這些病原體的代謝物、癌胚抗原和CyFRA等腫瘤標記物、激素等。使用狗血時，作為被檢目標還有絲蟲抗原。用貓血時，作為被檢目標還有貓白血病病毒、貓免疫缺陷病毒及其抗體等。標記物質只要能與上述被檢目標特異性結合即可。作為被檢目標和標記物質的特異性結合，比如可以是抗原抗體互相反應的結合及配體受體結合等基於生物學親和性的結合。標記物質可以用各種方法標記。標記物質比如可以用有色粒子標記。此時，可目測確認檢査結果。有色粒子比如有染色的膠乳粒子、金等金屬膠體等。標記保持部件ll可以使用玻璃纖維、纖維素纖維等各種材料的東西。標記保持部件ll也可省略。此時，標記物質可預先添加到試樣S中，或保存在第一或第二血細胞分離部件3、5等其他部件中。標記保持部件ll排出的液體成份通過標記保持部件ll與層析載體7的接觸部分移動到層析載體7。在本實施方式中，標記保持部件11與層析載體7直接接觸，也可以在標記保持部件ll與層析載體7之間設置不妨礙試樣S從標記保持部件11移動到層析載體7的其他部件。(5)檢查結果的判斷移動到層析載體7的液體成份因毛管現象在層析載體7中移動。層析載體7將與被檢目標特異性結合的捕捉物質承載至判斷區9。當液體成份到達判斷區9時，液體成份中的被檢目標與捕捉物質特異性結合。結果，被檢目標在判斷區9被捕捉。當標記物質結合到被在判斷區9捕捉到的被檢目標時，標記物質上的標記顯現在判斷區9。比如，當標記物質用有色粒子標記時，該粒子顏色出現在判斷區9，可以確認試樣S中存在被檢目標。有可能以二種方式結合一種是被檢目標與標記物質結合後再與捕捉物質結合，另一種是被檢目標與捕捉物質結合後再與標記物質結合。捕捉物質只要是能與被檢目標特異性結合的物質即可。作為此被檢目標與捕捉物質的特異性結合，比如可以有抗原抗體互相反應的結合及配體受體結合等基於生物學親和性的結合。例如當被檢目標為抗原時，可以用與抗原相對的抗體作為標記物質和捕捉物質。此時，作為標記物質使用的抗體和作為捕捉物質使用的抗體最好分別識別抗原不同的部位(抗原決定基)。例如當被檢目標為抗體時，可以用與抗體相對的抗原作為捕捉物質，可以用能與抗體特異性結合的物質(抗體)作為標記物質。通過判斷區9的液體成份從層析載體7排出，被吸收部件13吸收。通過吸收部件13吸收液體成份，促進液體成份的移動。吸收部件13也可以省略。此時，比如也可以通過延長層析載體7等辦法來促進液體成份移動。層析載體7可以使用硝化纖維素、尼龍(比如導入了可以用羧基和烷基置換的氨基的修飾尼龍)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纖維等各種材料。吸收部件13可以使用纖維素和玻璃纖維等各種材料的製品。根據檢查時的情況，有時將試樣S添加到試驗工具1的加樣區4後，需要將試驗工具l靜放一會兒後，再確認檢查結果。在這種情況下，可能會擔心比液體成份晚從第一血細胞分離部件排出的血細胞成份會到達判斷區9，從而影響判斷區9的判斷結果。比如，擔心紅細胞到達判斷區9，使判斷區9變紅，從而難以分辨作為被檢目標檢測結果出現在判斷區9的顏色。然而，以本實施方式，從第一血細胞分離部件排出的MM成份被第二血Wfi分離部件5捕捉，血細胞成份不會到達判斷區9，檢查後放置一段時間，判斷區9也不會受到血細胞成份的影響。舉例1.實施例l的試驗工具的製作如圖3所示，製作實施例l的試驗工具。部件的規格如表l所示。部件之間的重疊見圖3。在實施例l的試驗工具中，保護膜17與第一血細胞分離部件3的重疊很少，因此，添加的試樣的展開速度比較快。刺實施例1的試驗工具的結構tableseeoriginaldocumentpage222.比較例l的試驗工具的製作下面如圖4所示製作比較例1的試驗工具。比較例l的試驗工具除沒有設第二血細胞分離部件5和密封部件10外，其餘結構均與實施例l的試驗工具相同。部件的規格如表2。部件之間的重疊如圖4所示。[表2]tableseeoriginaldocumentpage233.實施例2的試驗工具的製作如圖5所示，製作實施例2的試驗工具。實施例2的試驗工具類似實施例l的試驗工具，但是保護膜17長、保護膜17與第一血細胞分離部件3的重疊多這二點與實施例1不同。因此，實施例2的試驗工具所加試樣的展開速度比較慢。4.比較例2的試驗工具的製作如圖6所示，製作比較例2的試驗工具。比較例2的試驗工具類似比較例l的試驗工具，但是保護膜17長、保護膜17與第一血細胞分離部件3的重疊多這二點與比較例1不同。另外，比較例2的試驗工具比實施例2的試驗工具少了第二血細胞分離部件5和密封部件10。5.效果確認試驗下面用以下方法進行試驗，來證明本發明的效果。5—1.實施例l的試驗工具與比較例l的試驗工具比較在實施例l的試驗工具和比較例1的試驗工具的加樣區4分別添加全血100pL並展開，觀察並測定隨著時間推移血細胞滲漏長度。其結果如表3和圖7所示。圖7是顯示實施例1和比較例1的試驗工具在每個時間段試樣的展開狀況的照片。圖7的照片中用箭頭表示標記保持部件ll的試樣展開方向下遊末端。此箭頭右邊部分的長度即為血細胞滲漏的長度。將血細胞滲漏的長度在層析載體7中標記保持部件11和吸收部件13均未重疊的部分的長度中所佔比例作為佔有率表示如表3。刺tableseeoriginaldocumentpage24根據表3得知，實施例1的試驗工具經過20分鐘也完全沒有血細胞滲漏，而比較例1的試驗工具則在經過30秒時就已經發生滲漏，在經過15分鐘時己經到達判斷區9，並染色判斷區9，使檢查結果難以判斷。由此證實，使用本發明實施例的試驗工具，檢查後過一段時間血液中的血細胞也不會侵蝕層析載體7。5—2.實施例2的試驗工具與比較例2的試驗工具比較在實施例2的試驗工具和比較例2的試驗工具的加樣區4分別添加全血100pL並展開，觀察並測定隨著時間推移血細胞滲漏長度。其結果如表4和圖8所示。圖8是顯示實施例2和比較例2的試驗工具在每個時間段試樣的展開狀況的照片。圖8的照片中用箭頭表示標記保持部件ll的試樣展開方向下遊末端。此箭頭右邊部分的長度即為血細胞滲漏的長度。將血細胞滲漏長度在層析載體7中標記保持部件H和吸收部件13均未重疊的部分的長度中所佔比例作為佔有率表示如表4。[表4]tableseeoriginaldocumentpage25根據表4得知，實施例2的試驗工具經過30分鐘也完全沒有血細胞滲漏，而比較例2的試驗工具則在經過30分鐘時就己經發生滲漏。實施例2的試驗工具和比較例2的試驗工具與實施例1的試驗工具和比較例l的試驗工具比較，試樣展開速度慢，但實驗證明，儘管如此，使用本發明實施例的試驗工具，檢查後過一段時間血液中的血細胞也不會侵蝕層析載體7。前述的詳細說明及附圖是通過文字解釋和圖示來進行的，其目的不在於限定權利要求的保護範圍。本說明書中的具體實施方式的各個變種對於普通技術人員來說顯而易見，並處於權利要求及其等同技術的保護範圍內。權利要求1.一種用於檢測含有紅細胞和液體成份的試樣中的被檢目標的層析用試驗工具，包括分離所述紅細胞和所述液體成份的第一血細胞分離部件，該第一血細胞分離部件可以使所述液體成份比所述紅細胞更快地展開；分離所述紅細胞和所述液體成份的第二血細胞分離部件，該第二血細胞分離部件可以捕捉所述紅細胞並讓所述液體成份通過；以及承載與所述被檢目標特異性結合的捕捉物質的層析載體；其中，所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上遊依次按所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件、所述層析載體的順序配置。2.如權利要求l所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第一血細胞分離部件將所述試樣向試樣展開方向分離；所述第二血細胞分離部件將所述試樣向與試樣展開方向垂直方向分離。3.如權利要求2所述的層析用試驗工具，其特徵在於還包括在所述第二血細胞分離部件的試樣展開方向上遊頂端的密封部件，用於防止所述試樣從所述第一血細胞分離部件進入所述第二血細胞分離部件。4.如權利要求l-3中任一所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第二血細胞分離部件由多孔材料製成，該多孔材料中的細孔尺寸從該多孔材料上面向下逐漸變小。5.如權利要求l-3中任一所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第一血細胞分離部件在未與所述第二血細胞分離部件重疊的區域有加樣區。6.如權利要求l-3中任一所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第一血細胞分離部件的至少一部分從所述第二血細胞分離部件的試樣展開方向上遊與所述第二血細胞分離部件重疊，所述第二血細胞分離部件的至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上遊起與所述層析載體重疊。7.如權利要求6所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第二血細胞分離部件在試樣展開方向下遊有未與所述第一血細胞分離部件重疊的區域。8.如權利要求l-3中任一所述的層析用試驗工具，其特徵在於還包括具有與所述被檢目標特異性結合且被標記的標記物質的標記保持部件；該標記保持部件配置在所述第二血細胞分離部件和所述層析載體之間。9.如權利要求8所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述標記保持部件至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上遊與所述層析載體重疊。10.權利要求8所述層析用試驗工具，其特徵在於所述標記物質用有色粒子標記。11.如權利要求i-3中任一所述的層析用試驗工具，其特徵在於還包括吸收所述層析載體排出的所述液體成份的吸收部件；其中，該吸收部件配置在所述層析載體試樣展開方向下遊。12.如權利要求11所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述層析載體的至少一部分從所述吸收部件的試樣展開方向上遊與所述吸收部件重疊。13.如權利要求l-3中任一所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述層析載體將所述捕捉物質承載到判斷部分。14.一種用於檢測含紅細胞和液體成份的試樣中的被檢目標的層析用試驗工具，包括-由有等於或大於所述紅細胞大小的細孔的多孔材料構成的第一血細胞分離部件；由有小於所述紅細胞大小的細孔的多孔材料構成的第二血細胞分離部件；及承載與被檢目標特異性結合的捕捉物質的層析載體；其中，所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上遊依次按所述第一血細胞分離部件、所述第二血細胞分離部件、所述層析載體的順序配置。15.如權利要求14所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第一血細胞分離部件和所述第二血細胞分離部件為膜狀。16.如權利要求14或15所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第二血細胞分離部件是過濾膜。17.如權利要求14或15所述的層析用試驗工具，其特徵在於所述第二血細胞分離部件的細孔從上向下逐漸變小。18.如權利要求14或15所述的層析用試驗工具，其特徵在於還包括具有能與所述被檢目標特異性結合且被標記的標記物質的標記保持部件；其中，該標記保持部件配置於所述第二血細胞分離部件和所述層析載體之間。19.一種運用層析用試驗工具檢測含紅細胞和液體成份的試樣中的被檢目標的方法，包括以下步驟第一分離步驟，通過比所述紅細胞更快地展開所述液體成份，分離所述紅細胞和所述液體成份；第二分離步驟，通過捕捉所述紅細胞並讓所述液體成份通過，分離所述紅細胞和所述液體成份；以及捕捉步驟，將所述被檢目標捕捉到承載有能與所述被檢目標特異性結合的捕捉物質的判斷部分。20.如權利要求19所述的方法，其特徵在於還包括一個步驟，即在所述第二分離步驟之後，用有與所述被檢目標特異性結合且被標記的標記物質的標記保持部件形成被檢目標和標記物質的複合物。全文摘要本發明提供一種可快速檢查並過一段時間血管中的血細胞也不會侵蝕層析載體的層析用試驗工具。該試驗工具從含血細胞成份和液體成份的試樣展開方向的上遊依次配置有第一血細胞分離部件、第二血細胞分離部件和層析載體。第一血細胞分離部件根據其可以上述液體成份在第一血細胞分離部件中的展開速度比上述血細胞成份更快的結構原理，分離上述血細胞成份和上述液體成份；第二血細胞分離部件根據其可以捕捉上述血細胞成份並讓上述液體成份通過的結構原理，分離上述血細胞成份和上述液體成份；上述層析載體承載可與被檢目標特異性結合的捕捉物質。文檔編號G01N33/48GK101275942SQ20081008489公開日2008年10月1日申請日期2008年3月28日優先權日2007年3月30日發明者堀坂加奈子,真鍋智子申請人:希森美康株式會社