一種腫瘤發病風險評估試劑盒的製作方法

2023-12-09 02:36:01 1

專利名稱：一種腫瘤發病風險評估試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及生物技術領域，具體地，本實用新型涉及一種腫瘤發病風險評估 試齊U盒。
背景技術：
與癌症發生密切相關的三大因素中，遺傳因素佔10% 15%。人的出生不能選 擇，個體的基因一般不會改變，體內攜帶的家族或種族聚性癌症易感基因也不會隨歲月而 脫離。現在醫學已經發展到了基因時代，檢測人體細胞基因信息成為現實。因此開展易感 人群基因多態性分析，可為這類人群的個體進行個性化預防，大大減少癌症發生。隨著物質生活的快速改善，人們生活方式也隨著發生了變化，由此引起致癌因素 升至60% 67%。如由不良生活行為引起的肥胖是多種癌症的誘發因素，可使結腸癌、乳 腺癌等癌症發生機率大大增加。癌症特別「偏愛」那些生活方式不良的富人。因此倡導適 量脂肪飲食、戒菸、適量飲酒、戒除不良個人衛生習慣、適量運動量，遠離癌症。環境、水、食品汙染因素佔癌症發生的4% _6%。因此，預防性基因檢測，改變不良 生活方式和飲食習慣，食用綠色食品保持均衡營養攝入，選擇舒適衛生的居住環境，保持健 康心態，這樣可將癌症拒之千裡，保持健康。個人基因信息服務是一個嶄新的行業，隨著人類基因組計劃的完成和人類基因組 密碼的逐漸破譯，開始在美國興起，因此，可以通過個人基因服務，提供成熟的評估腫瘤發 病風險的試劑盒。
發明內容本實用新型的發明人為了使基因組學、基因技術更方便、快捷地應用於日常生活 提出並完成了本實用新型。本實用新型的目的是提供一種腫瘤發病風險評估試劑盒。根據本實用新型的腫瘤發病風險評估試劑盒包括1)DNA 提取卡；2)基因型分析試劑盒；3)腫瘤發病風險評估卡。根據本實用新型的試劑盒，其中，所述基因型試劑盒為白血病相關基因分析試劑 盒、膀胱癌相關基因分析試劑盒、大腸癌相關基因分析試劑盒、肺癌相關基因分析試劑盒、 肝癌相關基因分析試劑盒、甲狀腺癌相關基因分析試劑盒、食管癌相關基因分析試劑盒、胃 癌相關基因分析試劑盒、胰腺癌相關基因分析試劑盒、宮頸癌相關基因分析試劑盒、卵巢癌 相關基因分析試劑盒、乳腺癌相關基因分析試劑盒、子宮內膜癌相關基因分析試劑盒、腎癌 相關基因分析試劑盒以及鼻咽癌相關基因分析試劑盒。根據本實用新型的試劑盒，其中，所述腫瘤發病風險評估卡為白血病發病風險評 估卡、膀胱癌發病風險評估卡、大腸癌發病風險評估卡、肺癌發病風險評估卡、肝癌發病風險評估卡、甲狀腺癌發病風險評估卡、食管癌發病風險評估卡、胃癌發病風險評估卡、胰腺 癌發病風險評估卡、宮頸癌發病風險評估卡、卵巢癌發病風險評估卡、乳腺癌發病風險評估 卡、子宮內膜癌發病風險評估卡、腎癌發病風險評估卡以及鼻咽癌發病風險評估卡。本實用新型的試劑盒能夠快速評估個體腫瘤發病風險，本實用新型的試劑盒使用 方便、快捷，成本低，且環保。

圖1為據本實用新型的試劑盒的結構圖，1 盒體；2 基因分析試劑盒；3 :DNA提取 卡；4 腫瘤發病風險評估卡；5 拭子。
具體實施方式
實施例1以肺癌為例1.採集檢測標本如圖1所示，按說明用DNA提取卡3採集標本，採集完畢，放入標本採集袋中密封， 保證樣本不會汙染。採用試劑提取標本基因組DNA。 按比例混合PCR預混液、Taq酶、引物\探針和標本DNA模板，進行檢測。1)組裝標本DNA提取卡，每個DNA提取卡包括，檢測袋(盒)、條形碼(3個)、標本 採集說明書\知情同意書、標本採集袋、拭子。2)按標本採集說明書的指示，採集標本。3)應用商用試劑盒提取標本基因組DNA。2.確定候選基因rsl042522, rsl7576, rs2032582, rs2250889, rs664143.3.設計特異性的探針和引物從資料庫獲取上述5個基因的序列，應用生物信息軟體分析技術，針對每個SNP 位點分別設計上遊引物、下遊引物以及特異性的野生型Taqman-MGB、突變型Taqman-MGB探 針，見表1。表1. SNP位點檢測的特異性探針和引物序列。
4.合成探針和引物按表1中列出的序列合成探針和引物，其中野生型探針的5'端帶有VIC標記，3' 端帶有NFQ標記，並加MGB修飾；突變型探針的5'端帶有FAM標記，3'端帶有NFQ標記， 並加MGB修飾。5. Real-time PCR 擴增使用基因分析試劑盒2 (Real-time PCR試劑盒)分析基因型，每人份PCR反應體 系(50ul)包括，正、反向引物(10pmol/ul)各l.Oul ；野生型和突變型探針(15pmol/ul)各 1. 5ul ；dNTPS(lOmM) 1. Oul ； 10XPCR 反應緩衝液 5ul ；MgCL2(10mM) 10ul ；ddH2021. 5ul ；DNA 模板 5ul ；Taq 酶(lU/ul)2ul ；UNG 酶(lU/ul)0. 5ul。每份樣本反應兩管中加入5ul樣本DNA模板，混勻、離心，然後在ABI7300型螢光 PCR儀進行檢測，反應參數如下PCR反應參數設置預變性95 °C，10分鐘；變性92 °C，15秒；延伸/退火59 °C，90秒。6.基因型判讀應用基因分型分析軟體，根據設定的螢光閾值判斷基因型當樣本檢測圖譜顯示l)rsl7576有效的擴增曲線的螢光信號為A，則樣本為純合野生型AA ；有效的擴增曲線的螢光信號為G，則樣本為純合突變型GG;有效的擴增曲線的螢光信號為A、G，則樣本為雜合型AG ；[0044]2)rs2032582有效的擴增曲線的螢光信號為G，則樣本為純合野生型GG;有效的擴增曲線的螢光信號為T，則樣本為純合突變型TT ；有效的擴增曲線的螢光信號為G、T，則樣本為雜合型GT ；3)rs2250889有效的擴增曲線的螢光信號為C，則樣本為純合野生型CC ；有效的擴增曲線的螢光信號為G，則樣本為純合突變型GG;有效的擴增曲線的螢光信號為C、G，則樣本為雜合型CG;4)rs664143有效的擴增曲線的螢光信號為C，則樣本為純合野生型CC ；有效的擴增曲線的螢光信號為T，則樣本為純合突變型TT ；有效的擴增曲線的螢光信號為T、C，則樣本為雜合型CT ；7.結果分析使用腫瘤發病風險評估卡分析。樣本的基因分析結果如下rsl7576基因型AG，患肺癌風險0. 88。rs2032582基因型GT，患肺癌風險2. 6rs2250889基因型CG，患肺癌風險0. 971rs6641基因型CT，患肺癌風險0. 843。綜合基因型結果，比普通人患肺癌的風險高2. 05倍。根據人群的肺癌平均風險， 一生中患肺癌的風險14. 94%。實施例2以胰腺癌為例1.採集檢測標本同實施例1。2.確定候選基因rsl03803.設計特異性的探針和引物從資料庫獲取上述2個基因的序列，應用生物信息軟體分析技術，針對每個SNP 位點分別設計上遊引物、下遊引物以及特異性的野生型Taqman-MGB、突變型Taqman-MGB探 針，見表1。表1. SNP位點檢測的特異性探針和引物序列。
6 4.合成探針和引物同實例1。5. Real-time PCR 擴增同實例1。6.基因型判讀應用基因分型分析軟體，根據設定的螢光閾值判斷基因型。當樣本檢測圖譜顯示l)rsl0380有效的擴增曲線的螢光信號為C，則樣本為純合野生型CC ；有效的擴增曲線的螢光信號為T，則樣本為純合突變型TT ；有效的擴增曲線的螢光信號為C、T，則樣本為雜合型CT ；7.結果分析使用腫瘤發病風險評估卡分析。樣本的基因分析結果如下rsl0380基因型CC，患肺癌風險0. 84。綜合基因型結果，比普通人患肺癌的風險高0. 84倍。根據人群的胰腺癌平均風 險，一生中患胰腺癌的風險1.09%。實施例3以乳腺癌為例1.採集檢測標本如圖1所示，按說明用DNA提取卡3採集標本，採集完畢，放入標本採集袋中密封， 保證樣本不會汙染。採用試劑提取標本基因組DNA。按比例混合PCR預混液、Taq酶、引物\探針和標本DNA模板，進行檢測。1)組裝標本DNA提取卡，每個DNA提取卡包括，檢測袋(盒)、條形碼(3個)、標本 採集說明書\知情同意書、標本採集袋、FTA血卡。2)按標本採集說明書的指示，採集標本。3)應用商用試劑盒提取標本基因組DNA。2.確定候選基因rsl219648、rs38036623.設計特異性的探針和引物從資料庫獲取上述2個基因的序列，應用生物信息軟體分析技術，針對每個SNP位點分別設計上遊引物、下遊引物以及特異性的野生型Taqman-MGB、突變型Taqman-MGB探 針，見表1。表1. SNP位點檢測的特異性探針和引物序列。 4.合成探針和引物同實例1。5. Real-time PCR 擴增同實例1。6.基因型判讀應用基因分型分析軟體，根據設定的螢光閾值判斷基因型。當樣本檢測圖譜顯示l)rsl219648有效的擴增曲線的螢光信號為A，則樣本為純合野生型AA ；有效的擴增曲線的螢光信號為G，則樣本為純合突變型GG;有效的擴增曲線的螢光信號為A、G，則樣本為雜合型AG ；2)rs3803662有效的擴增曲線的螢光信號為C，則樣本為純合野生型CC ；有效的擴增曲線的螢光信號為T，則樣本為純合突變型TT;有效的擴增曲線的螢光信號為C、T，則樣本為雜合型CT;7.結果分析使用腫瘤發病風險評估卡分析樣本的基因分析結果如下rsl219648基因型AG，患肺癌風險1. 20。rs3803662基因型TT，患肺癌風險1. 64。綜合基因型結果，比普通人患肺癌的風險高1. 97倍。根據人群的乳腺癌平均風 險，一生中患肺癌的風險11.62%。
權利要求一種腫瘤發病風險評估試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒包括1)DNA提取卡；2)基因型分析試劑盒；3)腫瘤發病風險評估卡。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於，所述基因型試劑盒為白血病相關基因 分析試劑盒、膀胱癌相關基因分析試劑盒、大腸癌相關基因分析試劑盒、肺癌相關基因分析 試劑盒、肝癌相關基因分析試劑盒、甲狀腺癌相關基因分析試劑盒、食管癌相關基因分析試 劑盒、胃癌相關基因分析試劑盒、胰腺癌相關基因分析試劑盒、宮頸癌相關基因分析試劑 盒、卵巢癌相關基因分析試劑盒、乳腺癌相關基因分析試劑盒、子宮內膜癌相關基因分析試 劑盒、腎癌相關基因分析試劑盒以及鼻咽癌相關基因分析試劑盒。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於，所述腫瘤發病風險評估卡為白血病發 病風險評估卡、膀胱癌發病風險評估卡、大腸癌發病風險評估卡、肺癌發病風險評估卡、肝 癌發病風險評估卡、甲狀腺癌發病風險評估卡、食管癌發病風險評估卡、胃癌發病風險評估 卡、胰腺癌發病風險評估卡、宮頸癌發病風險評估卡、卵巢癌發病風險評估卡、乳腺癌發病 風險評估卡、子宮內膜癌發病風險評估卡、腎癌發病風險評估卡以及鼻咽癌發病風險評估 卡。
專利摘要本實用新型涉及生物技術領域，具體地，本實用新型涉及一種腫瘤發病風險評估試劑盒。本實用新型的人體健康指標判斷試劑盒包括1)DNA提取卡；2)基因型分析試劑盒；3)腫瘤發病風險評估卡。本實用新型的試劑盒能夠快速評估個體腫瘤發病風險，本實用新型的試劑盒使用方便、快捷，成本低，且環保。
文檔編號G01N33/574GK201600370SQ20092027775
公開日2010年10月6日 申請日期2009年12月8日 優先權日2009年12月8日
發明者周慧君, 蘇莉 申請人:益基宏(北京)生物科技有限公司