蟲草菌絲髮酵生產工藝的製作方法

2023-12-08 18:11:21

專利名稱：蟲草菌絲髮酵生產工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種採用人工分離培養方法得到的冬蟲夏草菌絲進行深層發酵培養的生產工藝，具體指蝙蝠蛾擬青黴新種Paecilomyces Hepiai Chen et Dai，sp.nov.的深層發酵工藝。
冬蟲夏草為名貴中藥材，性味甘溫，具有滋肺補腎功能。因為它生長在高塞地區，受到氣候、地理位置的限制，產量低，採集困難，資源奇缺，價格昂貴，不便於推廣應用。近年國內對冬蟲夏草菌絲髮酵工藝進行了大量的研究，並以發酵工程方法生產蟲草菌絲代替天然蟲草。從1985年開始廣東省微生物研究所、青海省畜牧獸醫科學院、浙江省中藥研究所先後就冬蟲夏草人工培養方法及發酵工藝申請了專利，如中國專利CN85102231A，CN85101971A，CN1031393A。以上專利的不足之處在於藥理活性不夠廣泛，療效欠佳。
本發明的目的在於提供一種冬蟲夏草菌絲深層發酵培養的生產工藝，為研製新藥提供一種新的原料藥，解決冬蟲夏草資源不足問題。
本工藝方法為1.將新鮮的蟲草清洗乾淨後用抗菌素消毒，在滅菌條件下切取薄片置斜面或平板培養基上，在適宜溫度下培養，獲得菌絲後經多次純化培養，直到獲得純菌種。將分離得到的純菌種在冰箱內保存備用。為擴大菌種供液體培養使用，採用滅菌操作將菌種接入茄子瓶斜面培養基上，置培養箱內培養。斜面培養基配方重量百分比為葡萄糖1～3%，蛋白腖0.5～2%，蠶蛹0.5～2%，奶粉0.5～2%，磷酸氫二鉀0.1～0.2%，磷酸氫二鈉0.05～0.15%，瓊脂2～4%，水85～95%。
2.一級發酵或一級種子製備將菌種接入三角瓶內豐富液體培養基中，置往返式搖床振蕩培養，培養基成分為葡萄糖、蠶蛹、蛋白腖、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉。
3.二級發酵或二級種子製備一級種子經質檢合格後，將其接入種子罐內培養，培養基同上。
4.三級發酵或深層發酵二級種子經質量檢查合格後，將其接入三級發酵罐內發酵，接種量5～10%，培養基同上。
5.發酵終止，放罐。當三級發酵到達發酵時間時取樣檢查，符合發酵終止標準後放罐，過濾將菌絲切片烘乾貯存備用。
本發明的特點是1.使用的菌種為蝙蝠蛾擬青黴新種。2.發酵產品的藥理活性廣泛，藥理實驗證明使用本工藝生產的菌絲原料藥製成口服液經臨床實驗證明對慢性B型肝炎、愛滋病等均有較好的療效。3.培養基中加入蠶蛹，菌絲生長茂盛，不加蠶蛹則不長。
實施例本發明發酵工藝為三級發酵工藝，其流程是1.斜面菌種製備取葡萄糖20克，蠶蛹10克，蛋白腖10克、奶粉10克，瓊脂20克，水1000毫升，配製成斜面培養基再接入菌種，在培養箱內於26℃下培養15天製成斜面菌種。
2.搖床培養按上述培養基配方(除牛奶、瓊脂外)，製成液體培養基裝入500ml三角瓶內，接入菌種，在搖床上振蕩培養。
3.發酵培養培養基同搖床，接種量8%，發酵條件溫度26℃，罐壓0.4kg/cm，空氣流量1∶0.5～1，攪拌速度220轉/分。發酵時間種子罐50小時，深層發酵罐84小時，經檢查達到終止發酵標準時出罐。
4.發酵物的處理將出罐的菌絲體發酵液通過板框過濾，將濾出的菌絲塊切片烘乾。經檢查合格後的幹菌絲可作天然蟲草代用品。這種發酵蟲草菌絲可作營養保健品及藥品的原料。
成品的主要化學成分與天然早草基本一致，菌絲為灰褐色或棕褐色乾燥薄片，味微苦有香味，PH值4.5～5.5，含水量不超過6.5%，灰分不超過6%，水溶性浸出物不低於30%，尿苷不低於0.06%，腺嘌呤不低於0.003%，尿嘧啶不低於0.02%，甘露醇不低於5%。
權利要求
1.一種採用人工培養的冬蟲夏草菌絲蝙蝠蛾擬青黴新種深層發酵的生產工藝，其特徵在於菌種發酵培養基中加入了蠶蛹0.5～2%，經搖床培養、種子罐、大罐共三級發酵完成，二、三級發酵接種量為5～10%，質量控制指標為PH值、水分、灰分、尿苷、腺嘌呤、尿嘧啶、甘露醇、水溶性浸出物。
2.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特徵在於菌種培養的培養基配方重量百分比為葡萄糖1～3%，蛋白腖0.5～2%，蠶蛹0.5～2%，奶粉0.5～2%，Na2HPO40.05～0.15%，K2HPO40.1～0.2%，瓊脂2～4%，水85～95%。
3.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特徵在於一級發酵搖床培養溫度為24～28℃，培養時間為60～72小時，搖床轉速為110～250轉/分。
4.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特徵在於罐溫為24～28℃，罐壓為0.5～1kg/cm，空氣流量為1∶0.5～1，攪拌速度為200～220轉/分，二級發酵時間為48～60小時，三級發酵時間為72～96小時。
5.根據權利要求1所述的發酵工藝，其特徵在於發酵菌絲主要化學成分與天然蟲草一致，PH值4.5～5.5，含水量小於6.5%，灰分小於6%，水溶性浸出物含量大於30%，尿苷含量大於0.6%，腺嘌呤大於0.003%，尿嘧啶大於0.02%，甘露醇大於5%。
全文摘要
本發明是一種採用人工培養方法對冬蟲夏草菌絲進行深層三級發酵的生產工藝。它使用的菌種為蝙蝠娥擬青黴新種Paecilomyees hepiai Chen etDai，sp.nov.發酵工藝為從蟲草蝙蝠娥幼蟲體上分離得到擬青黴新種的菌絲進行斜面培養→搖床培養(一級發酵)→種子罐培養(二級培養)→大罐三級發酵。發酵條件為罐壓0.3～0.5kg/cm
文檔編號C12N1/14GK1095103SQ93104709
公開日1994年11月16日 申請日期1993年5月7日 優先權日1993年5月7日
發明者戴如琴, 蘭江麗, 李曉明, 邵愛娟, 陳敏, 吳志剛 申請人:中國中醫研究院