一種馬屬動物精子體外培養液的製作方法

2023-12-08 18:37:21 1

一種馬屬動物精子體外培養液的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種馬屬動物精子體外培養液，其中，培養液包括A液和脫脂奶，A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。培養液的配製方法為：稱取A液的各種組分放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解後，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液，向A液加入等量的脫脂奶混合均勻後再加入青黴素和雙氫鏈黴素即可得到培養液，其適用於馬屬動物精液體外培養。本發明的有益效果是：配製簡單，使用方便，馬屬動物精液的培養效果好，並且省時省力，適於規模化生產和應用。
【專利說明】一種馬屬動物精子體外培養液
【技術領域】
[0001]本發明涉及動物精液保存的【技術領域】，特別涉及一種馬屬動物精子體外培養液。【背景技術】
[0002]體外受精是指哺乳動物的精子和卵子在體外人工控制的環境中完成受精過程的技術。而精子的體外培養與這一技術密不可分。精子體外培養能夠解決具有優秀遺傳基因的公馬因繁殖障礙性疾病不能繁衍後代的問題。
[0003]近年來，家畜精液體外培養不斷取得可喜的成果，尤其是在牛、羊等反芻動物方面。馬業已成為世界經濟產業最新支柱，各國對馬業的科研力度也日益強化。因此開發出體外培養效果好，成本低，受胎率高的精液體外培養液對馬屬動物人工授精而言有重要的經濟效益。

【發明內容】

[0004]為了解決傳統的精液體外培養液對精子培養效果差、受胎率低等問題，本發明提供了一種馬屬動物精液體外培養液。
[0005]為了實現上述發明目的，本發明提供了一種馬屬動物精液體外培養液，所述培養液包括A液和脫脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。
[0006]其中，所述A液和所述脫脂奶的混合體積比例優選為1:1。
[0007]每500ml的所述A液中，各組分的含量為:葡萄糖22~26g、棉子糖1.5^1.7g、D_乳糖單水合物1.5~1.7g、檸檬`酸三鈉Na3C6H5O7.2Η20 0.2~0.25g、檸檬酸鉀0.35~0.45g、HEPES
4.6~4.8g0
[0008]所述葡萄糖為無水葡萄糖，其分子式為C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式為C18H32O6.5H20 ;所述D-乳糖單水合物的分子式為C12H22O11.H2O ;所述檸檬酸鉀的分子式為K3C6H5O7.H2O ;所述 HEPES 的分子式為 C8H18N2O4S15
[0009]本發明實施例提供的技術方案帶來的有益效果是:使用本發明馬屬動物精液體外培養液進行精液的體外保存，效果明顯優於傳統的培養液，馬屬動物精液的體外培養效果良好，精子體外培養後的活率和精子頂體完整率較高，增強受精能力，充分提高了精液的利用率和優良公畜配種的效率；本發明的培養液配製簡單，使用方便，可置於0-5°C保存，隨用隨取，省時省力，適於規模化生產和應用。
【具體實施方式】
[0010]下面結合實施例對本發明做進一步描述。
[0011]實施例1
稱取葡萄糖24g、棉子糖1.6g、D-乳糖單水合物1.6g、檸檬酸三鈉Na3C6H5O7.2H200.24g、檸檬酸鉀0.4g和HEPES 4.7g，放入無菌燒杯中，加雙蒸水溶解後，定容、過濾、分裝、滅菌、密封，即得A液；將經過嚴格滅菌、密封的A液標記配製時間，置於(T5°C保存，隨用隨取；取適量的A液加入等量體積的脫脂奶，分別按1000單位/ml的量添加青黴素和1000ug/ml的量添加雙氫鏈黴素混合均勻後，得到本實施例1的培養液。
[0012]對比試驗I
將傳統的培養液葡萄糖-卵黃稀釋液(對照組I)和牛奶稀釋液(對照組2)，與實施例1的稀釋液(實施例組I)分別進行馬精液的體外培養。其中，將實施例1的稀釋液置於37°C恆溫水浴鍋中I小時後，按體積比1:5對馬的新鮮精液(活率> 0.8)進行稀釋，然後將稀釋後的精液置於培養箱內培養。在0-48小時內觀察對照組1、對照組2和實施例組I的精子活力，每隔12個小時測定精子的活率，結果如表1所示。
[0013]表1:不同培養液對馬精子體外培養的效果比較
【權利要求】
1.一種馬屬動物精子體外培養液，其特徵在於，所述培養液包括A液和脫脂奶，所述A液包括葡萄糖、棉子糖、D-乳糖單水合物、檸檬酸三鈉、檸檬酸鉀和HEPES。
2.根據權利要求1所述的馬屬動物精子體外培養液，其特徵在於，所述A液和所述脫脂奶的混合體積比例為1:1。
3.根據權利要求1所述的馬屬動物精子體外培養液，其特徵在於，每500ml的所述A液中，各組分的含量為:葡萄糖22~26g、棉子糖1.5^1.7g、D-乳糖單水合物1.5^1.7g、檸檬酸三鈉 Na3C6H5O7.2H20 0.2~0.25g、檸檬酸鉀 0.35~0.45g、HEPES 4.6~4.8g。
4.根據權利要求1-3任意一項所述的馬屬動物精子體外培養液，其特徵在於，所述葡萄糖為無水葡萄糖，其分子式為C6H12O6 ;所述棉子糖的分子式為C18H32O6.5Η20 ;所述0_乳糖單水合物的分子式為C12H22O11.H2O ;所述檸檬酸鉀的分子式為K3C6H5O7.H2O ;所述HEPES的分子式為C8H18N2O4S0`
【文檔編號】C12N5/076GK103756958SQ201310586725
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】鄒敬清, 張志鵬, 李成修 申請人:青島德瑞駿發生物科技有限公司, 伊犁德瑞駿發生物科技有限公司, 青島德瑞鰲藍馬術有限公司