一種治療TNF-α相關疾病的人抗體製劑的製作方法

2023-12-08 23:32:46 3

一種治療TNF-α相關疾病的人抗體製劑的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，主要為液體含水藥物製劑。所述液體含水藥物製劑可增強含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩定性，延長其在含水製劑中的保存周期。
【專利說明】一種治療TNF- α相關疾病的人抗體製劑
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，主要為液體含水藥物製劑，該製劑包含的一種成份可以為50mg/ml有效量的抗TNF-a人源抗體，58.75mg/ml己六醇,0.125mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，1.25mg/ml乙酸鹽，pH值5.2。該製劑包含的另一種成份也可以為50mg/ml有效量的抗TNF-α人源抗體，12mg/ml己六醇，lmg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，1.3mg/ml2_羥基丙羧酸,0.3mg/ml2_羥基丙燒-1，2，3-三羧酸鈉，1.5mg/ml 二水合磷酸二鈉,0.9mg/ml 二水合磷酸一鈉,6.2mg/ml氯化鈉，pH值5.2。該製劑在經過至少4次凍融循環後保存穩定性。主要保存治療TNF-α相關的人抗體，可用於皮下或者靜脈注射使用。
【背景技術】
[0002]類風溼關節炎(RA)是一種常見的關節炎，在人群中的發病率為0.3%-1%，如不及時治療，可導致骨破壞和關節功能障礙。在RA發病中有多種促炎性細胞因子參與，如腫瘤壞死因子-a (TNF-a)、白介素如IL-1，IL-6，IL_8等。因此，抑制促炎性細胞因子的產生或阻斷其作用，有望改善關節炎症反應。近年來許多新研究開發的生物製劑可通過阻斷或下調炎性細胞因子的活性而達到控制病情的進展，如TNF抑制劑、抗IL-1抗體等，這些生物製劑的主要作用機制有:(I)針對細胞因子或其受體的單克隆抗體；(2)可溶性受體拮抗劑，即不包括跨膜成分和胞內功能區的細胞因子表面受體。該受體拮抗劑可與游離的細胞 因子結合，抑制後者與細胞表面受體結合。可溶性受體拮抗劑的半衰期較短，可通過加人某些整合結構如IgG的Fe受體或聚乙烷基乙二醇(polyethylene glycol, PEG)而延長；(3)受體拮抗蛋白，為無生物活性的蛋白質，可與細胞因子競爭結合細胞表面的膜受體。受體拮抗蛋白必須結合90%以上細胞表面受體方認為有效。
[0003]目前認為，在諸多RA炎症反應的細胞因子中，TNF是最重要的促炎性細胞因子之一，TNF-a在RA病變的持續發展、局部炎症反應和組織損傷中均起著重要作用。RA中TNF- α和TNFR水平在血清、滑膜以及滑液中均顯著升高，特別是病情嚴重和活動期患者。RA患者血清中TNF-α水平與關節損傷評分、紅細胞沉降率(ESR)及貧血呈正相關。TNF-a還與RA患者體重減輕和疾病復發有關。TNF可作用於多種細胞，如促進巨噬細胞分泌炎性細胞因子和趨化因子，促進炎症反應。TNF-a的主要作用是:(1)誘導內皮細胞表達黏附分子和血管內皮生長因子(VEGF)，促進白細胞與血管內皮黏附、滲透，導致局部的炎症反應和血管VEGF生成；⑵作用於肝細胞，產生C反應蛋白(CRP) ; (3)在類風溼關節炎中TNF-a可分別作用於破骨細胞、滑膜細胞和軟骨細胞，導致這些細胞的活化，產生金屬蛋白酶、膠原酶、基膜溶解酶(stiOmelysin)及前列腺素E2 (PGE2)，進一步破壞軟骨引起骨侵蝕、關節炎症和軟骨破壞；(4) TNF-α還可促使滑膜細胞、巨噬細胞、纖維母細胞和軟骨細胞產生IL-l，IL-8&TNF_a本身而加重組織損傷。因此，抑制TNF-α的作用對控制RA的病情和改善預後非常重要。
[0004]目前已被美國FDA批准的TNF-α抑制劑共有3種:可溶性受體拮抗劑-依那西普(Etanercept),人鼠嵌合抗體_英夫利昔單抗(Infliximab)和人源化單抗。Etanercept是重組人II型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白，由II型TNF受體(p75)與IgGl的Fe部分組成二聚體；Infliximab是針對TNF的特異性IgGl單克隆抗體(由人Ig穩定區和鼠Ig可變區組成的嵌合體)；人源化單抗也是特異性針對TNF的IgGl單克隆抗體(Ig的穩定區和可變區均為人源的)。TNF抑制劑的主要不良反應有注射部位反應、感染、腫瘤、淋巴增殖性疾病、神經脫髓鞘病變以及狼瘡樣症候群。

【發明內容】

[0005]本發明提供一種含水液體藥物製劑，所述含水藥物製劑包括重組人抗TNF-α單克隆抗體、緩衝液體系、滲透壓調節劑、表面活性劑。所述重組人抗TNF-α單克隆抗體是通過基因工程手段，在CHO細胞中表達的，並且通過一系列標準的層析步驟純化獲得的。在製備抗體後，製備藥物製劑。
[0006]本發明所開發的重組人抗TNF-a單克隆抗體製劑，其中所含的高濃度抗體蛋白更加穩定，更加耐受高溫變化引起的聚集反應，因此本發明的抗體製劑可用於保存治療TNF-a相關的人抗體，增強含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩定性，延長其在含水製劑中的保存周期，對於治療TNF-a相關疾病有重要意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]圖1重組人抗TNF-α單克隆抗體BAT1406兩種製劑的對比研究(OptimlOOO研究
結果)。
[0008]圖2重組人抗TNF- α單克隆抗體BAT1406兩種製劑的影響因素試驗(高溫研究)。
[0009]圖3重組人抗TNF- α單克隆抗體BAT1406兩種製劑的皮下注射與靜脈注射比較。
[0010]圖4A受試藥物1406對實驗小鼠tgl97活體關節炎得分的影響。
[0011]圖4B受試藥物1406對實驗小鼠tgl97活體組織病理學得分的影響。
【具體實施方式】
[0012]具體而言，本發明所提供的製劑為pH4-8的液體含水藥物，該製劑包括20-80mg/ml的抗體濃度，並且具有增強含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩定性作用。本發明的製劑包括以下成分:能以高親和力、低解離速度、高中和能力結合人hTNF-a的抗體；緩衝液，包括乙酸鹽、2-羥基丙羧酸和磷酸鹽緩衝液；滲透壓調節劑，包括己六醇；表面活性劑，包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；調節pH的氫氧化鈉、氯化鈉和注射用水。
[0013]在本發明的一種實施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物製劑中的濃度為大約20-80mg/ml。在另一種實施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物製劑中的濃度為大約50mg/ml。在另一種實施方案中,所述試劑具有高蛋白濃度，所述試劑不是光敏感的。
[0014]本發明還提供了含水的藥用組合物，包括乙酸鹽`緩衝液、己六醇、失水聚氧乙烯
(20)山梨糖醇油酸酯和注射用水，pH為大約4-8。所述多元醇是己六醇，所述表面活性劑是失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。
[0015]本發明提供液體含水抗體製劑，所述製劑包括多元醇，以便調節液體體系的滲透壓，穩定所述抗體。將所述多元醇添加到所述抗體中，其用量可以根據需要的所述製劑的等滲而改變。在本發明製劑的一種優選方案中，被作為滲透壓調節劑用在所述製劑中的是己六醇。在本發明的優選方案中，己六醇的濃度為20-80mg/ml,優選濃度約為60mg/ml,具體為58.75mg/ml。在本發明製劑的另一種優選方案中，被作為滲透壓調節劑用在所述製劑中的是己六醇。在本發明的優選方案中，己六醇的濃度為8-15mg/ml,最優選濃度約為12mg/ml。
[0016]本發明提供液體含水抗體製劑，所述製劑包括表面活性劑。典型的表面活性劑包括非離子表面活性劑，如失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。表面活性劑能減少所述製備的抗體的聚集和/或減少顆粒在所述製劑中的形成和/或減少吸附。在本發明製劑的一種優選實施方案中，所述製劑以失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯為表面活性劑。在一種優選方案中，所述製劑包括大約0.1-0.5mg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯,在另一優選實施方案中，在本發明的製劑中存在大約0.125mg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。在本發明製劑的另一種優選實施方案中，所述製劑以失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯為表面活性劑。在一種優選方案中，所述製劑包括大約0.5-2.0mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯，在另一優選實施方案中，在本發明的製劑中存在大約lmg/ml的失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯。
[0017]本發明提供液 體含水抗體製劑，所述製劑包括緩衝系統，以便將pH保持在大約4-大約8的範圍。在本發明製劑的一種優選方案中，緩衝液系統為乙酸鹽，在另一種實施方案中，pH範圍為大約4.5-6.0，最優選實施方案的pH為5.0-5.2。在本發明製劑的另一種優選實施方案中，緩衝液體系為2-羥基丙羧酸和磷酸鹽，在另一種實施方案中，pH範圍為大約4.5-6.0，最優選實施方案的pH為5.2。
[0018]本發明還提供了含水的藥用組合物，包括有效量的抗體成分；乙酸鹽或者2-羥基丙羧酸和磷酸鹽；包括己六醇；包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；和注射用水，pH為大約4-8。所述抗體成分在液體狀態下保質期為36個月。
[0019]本發明還提供了含水的藥用組合物，包括有效量的抗體成分；乙酸鹽或者2-羥基丙羧酸和磷酸鹽；包括己六醇；包括失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯；和注射用水，pH為大約4-8。所述製劑在室溫下可保存二個月，在2-8°C下保質期為36個月。冷凍本發明的製劑還可以用於進一步延長它的保質期。
[0020]本發明提供液體含水藥物製劑，包括適合治療用途的抗體，這種藥物製劑便於施用，並且含有高蛋白濃度，主要用於治療由TNF-α引起的病症。在一種實施方案中，所述藥物製劑具有增強了的穩定性。在另一種實施方案中，本發明的製劑在經過至少4次凍融循環後是穩定的。在另一種實施方案中，所述抗體針對人TNF-α。在另一種實施方案中,所述抗體是重組人抗TNF-α單克隆抗體BAT1406。
[0021]在本發明的另一種實施方案中，所述液體含水藥物製劑包括抗體或其抗原結合部分，它是重組抗體或其抗原結合部分，它能抑制人TNF-α誘導的ELAM-1在人靜脈內皮細胞上的表達。在另一種實施方案中，所述要求保護的製劑包括重組人抗TNF-a單克隆抗體BAT1406 ο
[0022]本發明提供含水的藥用製劑，包括有效量的抗體成分，緩衝液體系乙酸鹽或者2-羥基丙羧酸和磷酸鹽，滲透壓穩定劑己六醇，表面活性劑失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯和注射用水，PH為大約4-8。在本發明的一種實施方案中，所述製劑是適合於進行單次皮下注射的，在另一種實施方案中，所述製劑是適合進行靜脈注射，兩者的藥代基本保持一致。在本發明的一種實施方案中，所述抗體在所述液體含水藥物製劑中的濃度為大約I -100mg/ml。
[0023]在本發明的優選實施方案中，所制試劑是裝在管形瓶中的含有表I所示成分的
0.8ml的溶液。其中製劑包含的一種成份可以為40mg有效量的hTNF-α抗體、47mg己六醇、0.1mg失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯、Img乙酸鹽，用於調節pH的氫氧化鈉和注射用水。其中製劑包含的另一種成份可以為40mg有效量的hTNF-α抗體、9.6mg己六醇、0.8mg失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯、1.04mg 2-羥基丙羧酸、0.24mg 2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉、1.2mg二水合磷酸二鈉、0.72mg二水合磷酸一鈉、4.96mg氯化鈉，用於調節pH的氫氧化鈉和注射用水。
[0024]表I A.重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406的A製劑成份列表
[0025]
【權利要求】
1.一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於: 一種液體含水藥物製劑，其包含 (1)20-80mg/ml有效量的抗TNF_a人源抗體， (2)20 -80mg/ml 己六醇， (3)0.1-0.5mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)0.5 -2.5mg/ml 乙酸鹽， (5)注射用水， (6)pH約為4-8, 其中抗TNF-a人源抗體為重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406。
2.權利要求1中，抗TNF-a人源抗體濃度為40-60mg/ml,優選為50mg/ml。
3.權利要求1中，己六醇濃度為55-65mg/ml,優選為58.75mg/ml。
4.權利要求1中，失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯濃度為0.1-0.2mg/ml，優選為0.125mg/ml。
5.權利要求1中，乙酸鹽濃度為1.0-2.0mg/ml，優選為1.25mg/ml。
6.權利要求1中，pH值為5.0-5.4，優選為5.2。
7.一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於: 一種液體含水藥物製劑，其包含 (1)50mg/ml有效量的抗TNF_a人源抗體， (2)58.75mg/ml 己六醇， (3)0.125mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)1.25mg/ml 乙酸鹽， (5)注射用水，
(6)pH 約為 5.2， 其中抗TNF-a人源抗體為重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406。
8.一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於: 一種液體含水藥物製劑，其包含 (1)20-80mg/ml有效量的抗TNF- α人源抗體， (2)8-15mg/ml己六醇， (3)0.5-2.0mg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)0.8-2.0mg/ml2-羥基丙羧酸， (5)0.1-0.5mg/ml2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉， (6)1.0-2.0mg/ml 二水合磷酸二鈉， (7)0.5-1.5mg/ml 二水合磷酸一鈉， (8)5.0 -8.0mg/ml 氯化鈉， (9)注射用水，
(10)pH 約為 4.0 -6.0, 其中抗TNF-α人源抗體為重組人抗TNF-α單克隆抗體BAT1406。
9.權利要求8中，抗TNF-α人源抗體濃度為40-60mg/ml,優選為50mg/ml。
10.權利要求8中，己六醇濃度為11-13mg/ml,優選為12mg/ml。
11.權利要求8中，失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯濃度為0.8-1.2mg/ml，優選為 1.0mg/ml ο
12.權利要求8中，2-羥基丙羧酸濃度為1.0-1.5mg/ml,優選為1.3mg/ml。
13.權利要求8中，2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉濃度為0.2-0.4mg/ml,優選為0.3mg/ml。
14.權利要求8中，二水合磷酸二鈉濃度為1.2-1.8mg/ml,優選為1.5mg/ml。
15.權利要求8中，二水合磷酸一鈉濃度為0.8-1.0mg/ml,優選為0.9mg/ml。
16.權利要求8中，氯化鈉濃度為6.0-6.5mg/ml,優選為6.2mg/ml。
17.權利要求8中，pH值為4.8-5.5，優選為5.2。
18.一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於: 一種液體含水藥物製劑，其包含
(1)50mg/ml有效量的抗TNF- α人源抗體，
(2)12mg/ml 己六醇， (3)lmg/ml失水聚氧乙烯(20)山梨糖醇油酸酯， (4)1.3mg/ml2-羥基丙羧酸， (5)0.3mg/ml2-羥基丙烷-1，2，3-三羧酸鈉， (6)1.5mg/ml 二水合磷酸二鈉， (7)0.9mg/ml 二水合磷酸一鈉，
(8)6.2mg/ml 氯化鈉， (9)注射用水，
(10)pH 約為 5.2， 其中抗TNF-a人源抗體為重組人抗TNF- α單克隆抗體ΒΑΤ1406。
19.一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，所述抗體針對TNF- α。
20.一種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，所述抗體或其抗原結合部分，能結合人TNF- a，並且是重組人抗TNF- α單克隆抗體或其抗原結合部分。
21.一種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，主要用於製備治療其中由TNF-a引起的病症的藥物。
22.—種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，不僅適合於進行皮下注射，還適合進行靜脈注射，藥代基本保持一致。
23.一種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，該製劑能夠增強含重組人抗TNF-α單克隆抗體等TNF-α拮抗劑抗體藥物的穩定性，延長其在含水製劑中的保存周期。
24.一種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，該製劑能夠並且在室溫下保存二個月。
25.一種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，該製劑在2-8 °C下保存36個月。
26.一種治療TNF-a相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，該製劑在冷凍條件下延長保質期。
27.一種治療TNF-α相關疾病的人抗體的製劑，其特徵在於如權利要求1-18中，該製劑在至少4次凍 融循環後保存穩定性。
【文檔編號】A61P29/00GK103446583SQ201310093009
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年3月21日 優先權日:2013年3月21日
【發明者】林鍵, 包財, 裴樹軍, 章淑妹, 朱煒, 李勝峰 申請人:百奧泰生物科技(廣州)有限公司