動物飼料組合物和飼料添加劑的製作方法

2023-12-05 09:07:11 2

相關的申請本申請要求於2014年7月29日提交的臨時申請ussn62/030,460和於2014年12月11日提交的臨時申請ussn62/090,756的優先權，其內容通過引用以其整體併入本文。發明領域本發明涉及動物飼料組合物和飼料添加劑，其包含益生元、益生菌和益生菌代謝物(post-biotic)材料的混合物，及其在促進動物生長、健康和營養中的應用。技術實現要素：益生元、益生菌和益生菌代謝物是相對新的術語，其用於描述一系列已證實在動物健康和營養中的益處的材料。通常地，術語益生元是指刺激動物消化系統中的細菌的生長和/或活性的材料，其產生有益的健康效果。益生元可以是選擇性發酵的成分，其允許胃腸道微生物群落的組成和/或活性二者中的特異性變化，這賦予宿主健康益處。益生菌通常是指有助於腸道微生物平衡的微生物，其進而在維持健康中發揮作用。很多種類的乳酸菌(lab)例如乳桿菌屬(lactobacillus)和雙歧桿菌屬(bifidobacterium)通常被視為益生菌，但還發現一些芽孢桿菌屬(bacillus)的物種，以及一些酵母為適合的候選者。益生菌代謝物是指來自在宿主中具有生物活性的益生菌生物的非活細菌產物或代謝副產物。益生菌用於改善動物健康和營養的用途詳實記載於文獻中。此外，益生元和益生菌代謝物提供了活微生物應用的潛在替代或輔助治療。人們愈發了解益生元、益生菌和益生菌代謝物對免疫反應調節的影響，更具體地，它們在調節細胞因子的表達中的作用，所述細胞因子調控在局部和全身水平上的炎症反應。益生菌的攝取，例如，可以潛在地通過減少局部促炎性細胞因子的生成而穩定腸黏膜中的免疫屏障。通過益生菌治療改變固有微生物群落的性質顯示逆轉人的克羅恩病，食物過敏和特應性溼疹的特徵中的一些免疫紊亂[4,7-10]。多種益生菌物種或其後益生產物在健康人類患者，具有炎性腸病的人類患者和小鼠模型中誘導保護性細胞因子，包括il-10和tgf-β，並且抑制促炎性細胞因子，例如tnf[1,2,11]。假設在動物中可實現相當的益處。儘管對這些主張的每一條都有提示性證據，但這些機制後的分子細節仍幾乎完全未確定。不希望受到理論束縛，認為這些機制允許使用包含益生元、益生菌和益生菌代謝物的飼料飼養動物，以將用於保持強大的免疫系統的能量轉移，並將其重新導向用於生長和發育。因此，有相當大的興趣使動物飼料包含含益生元、益生菌和後益生材料。例如，俄羅斯專利2018313公開了粉狀噴霧乾燥的動物飼料，其基於乳並且包含某些雙歧桿菌和鏈球菌。儘管其提及飼料可飼餵給寵物，但所述動物飼料的主要目標是牲畜。儘管對各種「益生」治療的益處的興趣不斷增長，組合的益生元、益生菌和後益生治療對動物健康和營養的有益作用並沒有多少記載。對於將這些治療組合以提供在商業牲畜和伴侶寵物護理行業二者中的一些列益處的組合物，仍有機會。
發明內容包含益生元、益生菌和益生菌代謝物的混合物的動物飼料組合物，及其製備方法，如通過特定生化標記物(例如，血糖水平、脂質化學、肝功能、全血計數、甲狀腺功能和炎症標記物如esr和c反應蛋白)，總生理指標(例如體重增加，死亡率百分比)和/或飼料轉化率所示，其在整體健康和營養中有用。在多個方面，本發明提供了動物飼料組合物，其包含可用於促進動物生長、健康和營養的微生物的混合物。所述動物飼料組合物包含益生元；益生菌(其包含由固相基質和深層液體發酵生產的乳桿菌屬微生物的混合物)；芽孢桿菌屬益生菌（其通過深層液體發酵生產）；源自乳桿菌屬物種的液體發酵培養基的益生菌代謝物；和填料材料的混合物。所述益生元是菊粉、低聚果糖或低聚葡糖。所述乳桿菌屬的混合物包含乳酸片球菌(pediococcusacidilactici)、戊糖片球菌(pediococcuspentosaceus)和植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)。在一些方面，所述乳桿菌屬的混合物是通過將固相基質發酵的乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳桿菌混合製備；並且通過深層液體發酵生產單個乳桿菌屬物種，其中所述乳桿菌屬細菌的每一種單獨地厭氧發酵，收穫，乾燥並研磨，以產生具有295微米的平均粒徑的粉末，所述混合物的60%的大小範圍在175-900微米之間。優選地，將來自固相基質和液體發酵的乳桿菌屬以相等的重量比例混合。在一些方面，枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)具有seqidno:l的16s核酸序列。通過從單獨厭氧發酵的乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳桿菌的每一種的離心收集上清；將從步驟(a)獲得的上清組合；將混合的上清冷凍乾燥至小於約5重量%的含水量；並將乾燥的混合上清研磨至295微米的平均粒徑，並且所述混合物的60%的大小範圍在175-900微米之間，從而製備益生菌代謝物。所述填料是例如米糠、大豆麩或麥麩，米粉、大豆粉或小麥粉，玉米粉，黑麥，大麥，高粱，葡萄糖，蔗糖，果糖，麥芽糖糊精，澱粉，或其任意組合。將益生元，乳桿菌屬益生菌和益生菌代謝物組分以相等的重量比例組合。在其他方面，將芽孢桿菌屬益生菌與益生元、乳桿菌屬益生菌和益生菌代謝物混合物以1:1至1:20的比例混合。益生元、益生菌和益生菌代謝物組分與穀物顆粒填料的比例在約1:1至約3:1的範圍。最終細菌濃度在約106和1011菌落形成單位(cfu)/克之間。本發明還包括動物飼料組合物，其包被0.01至0.5%的本發明的組合物。在一些方面，使用蠟、脂肪、糖或多糖粘合劑將所述益生元、益生菌和益生菌代謝物混合物包被到飼料顆粒上。可選地，將所述益生元、益生菌和益生菌代謝物混合物整合到飼料顆粒，漿飼料中，或溶解到動物的飲用水供應中。例如，將所述益生元、益生菌和益生菌代謝物混合物以約0.1至1kg/1000升，供料到水供應中。本發明進一步提供了通過向動物施用根據本發明的動物飼料、飼料添加劑或補充劑，改善動物的健康和疾病抗性的方法。所述方法通過提高增重、減少廢氣或增加飼料蛋白的利用，來改善動物的健康。所述動物是例如蝦、魚類（finfish）、家禽、豬、反芻動物或伴侶寵物。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的一位普通技術人員通常所理解的相同含義。儘管下文描述了適合的方法和材料，但與本文所述那些相似或等效的方法和材料也可以用於本發明的實踐。本文中提及的所有出版物、專利申請、專利和其他文獻均通過引用以其整體明確併入。在矛盾的情況下，以本說明書(包括定義)為準。此外，本文描述的材料、方法及實例僅為說明性的且無意限制。本發明的其他特徵和優點將體現並涵蓋在以下具體說明和權利要求書中。附圖說明圖1顯示了每種處理的平均生長的結果。圖2顯示了每種處理的平均重量變化。圖3顯示了fcr改善%與劑量的比較。發明詳述本發明提供了由特定益生元、益生菌和益生菌代謝物的混合物組成的組合物，其用作動物飼料、飼料添加劑或飼料補充劑。除非另有說明，否則本文中提及的所有百分比均為基於組合物的總重量的重量百分比。所述組合物的益生菌組分包含益生菌枯草芽孢桿菌、乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳桿菌的混合物。在優選的實施方式中，本發明的組合物包含10-20重量%之間的乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳桿菌的每一種，和1至約5wt%的枯草芽孢桿菌。在優選的實施方式中，所述枯草芽孢桿菌具有以下的16s序列：根據本發明，待使用的益生細菌的水平將取決於其類型。優選本產品包含105至1011菌落形成單位(cfu)/克之間的量的益生細菌。在本發明的特別優選的組合物中，乳桿菌屬和芽孢桿菌屬生物體以至少1x108cfu/g的水平存在。如本文使用的術語「益生細菌」或「益生菌」是指在以足夠的量施用時賦予健康或營養益處的微生物。根據本發明的益生菌可以是活的或非活的。在益生菌是非活的情況下，它們必須是在結構上基本完整的，這意味著這些非活的微生物仍足夠完整以避免或延遲在遠端腸道中的分解，從而使得所述非活的微生物(的保守結構)能夠與免疫系統，特別是面膜免疫系統相互作用。所述非活的益生菌在代謝上是有活性的。所述「在代謝上是有活性的」是指它們展現出對該類型的益生菌為特徵性的至少一些殘餘酶活性。如本文使用的術語「非活的」是指在任何已知條件下不能複製的細菌的群體。然而應理解，由於群體中正常的生物變化，小比例的群體(即5%或更少)可仍然是活的，並且因此能夠在其他情況下定義為非活的群體中，在適合的生長條件下複製。如本文使用的術語「活細菌」是在可以複製的適合條件下，能夠複製的細菌的群體。不滿足「非活的」定義(如上文給出的)細菌的群體被認為是「活的」。如本文使用的術語「生物活性組分」是指在以足夠的量服用時，具有對動物的生理作用的組分。在本發明的一些實施方式中，所採用的益生細菌是活益生細菌。活益生細菌的應用提供了以下優點，即這些益生細菌可成為腸道微生物群落的一部分，從而提供額外的健康益處。根據本發明的益生細菌可使用本領域中已知的任何標準發酵方法生產。例如，固態或深層液體發酵。發酵的培養物可以是混合的培養物或單獨的分離物。益生菌代謝物組分組分源自在乳桿菌屬生物體離心後剩餘的發酵上清，並且包含5至約20重量%的所述組合物。所述益生元組分包含葡糖-和/或果糖-低聚糖(例如蔗果三糖、蔗果四糖、果糖基蔗果四糖、bifurcose、菊粉二糖、菊粉三糖、菊粉四糖)，包括來自菊粉代謝的發酵產物。在優選的實施方式中，所述後益生組分佔所述配方的0.1至10wt%。此外，所述製劑可包含高至約50重量%的穀物顆粒填料，例如nutri-sure™，葡萄糖，或其他適合的填料材料。本發明的組合物經配製用於在動物飼料中施用，包括漿劑和顆粒，但也可送給飲用水供應遞送。在一個優選的實施方式中，將所述組合物配製到飼料漿中。在另一個優選的實施方式中，將所述組合物配製到飼料顆粒中。在又另一個優選的實施方式中，將所述組合物直接配製到動物的飲用水供應中。這些組合物改善動物的健康，包括提高增重、減少廢氣或增加飼料蛋白的利用。在配製用於動物飼料時，所述組合物通常以0.1至1kg/公噸飼料之間供料。優選地，所述飼料組合物以50、100、200、300、400、500、600、700、800、900或更多克/公噸飼料供料。在飲用水中供料時，所述組合物通常以0.1至1kg/1000升之間供料。對於水生應用，即蝦或魚類，所述組合物通常以0.1至10ppm供料。例如，對於水生應用，所述飼料組合物以0.1、0.2、0.25、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5ppm供料。優選地，所述飼料組合物以0.25或2.5ppm供料。在一些方面，將所述飼料組合物以約0.05%至5%添加到飲食上面。優選以0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、2.0、3.0、4.0或5.0%。所述組合物的益生元、益生菌和益生菌代謝物組分優選為粉末、乾燥形式，特別是對於形成孢子的那些益生菌微生物，為孢子形式。根據本發明的組合物已經冷凍乾燥至水分含量小於20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。優選地，根據本發明的組合物已經冷凍乾燥至水分含量小於5%。在一些實施方式中，將冷乾粉研磨以降低粒徑。例如，所述粒徑是小於1000、900、800、700、600、500、400、300、200微米或更小。優選地，將所述冷乾粉研磨以降低粒徑，從而使所述粒徑小於800微米。在各個實施方式中，將所述凍乾粉均質化。進一步地，如果需要，可將組合物包封或結塊以進一步提高存活的可能性；例如，在蠟基質、糖基質、脂肪基質或多糖基質中。本發明的組合物用於生產動物飼料產品和補充劑，或作為動物飼料添加劑使用。儘管可以通過將所述益生元、益生菌和後益生組合物與動物飼料簡單混合，或通過將所述組合物作為飼料補充劑使用，而達到本發明的益處，但本發明的目標是提供包含均衡飲食配給和本發明組合物二者的即食型飼料產品。可將所述飼料補充劑作為乾燥粉末或液體提供。或者，可將本發明的組合物配製成「舔塊」。可以通過使用益生元、益生菌和後益生混合物包被預生產的即食型動物飼料產品，而生產所述飼料產品。可以通過本領域中已知的方法完成動物飼料產品的包被。例如，可將本發明的乾燥組合物分散在添加動物飼料產品的低熔點油脂或蠟中，或可選地，將包含益生元、益生菌和後益生混合物的熔融油脂或蠟噴到動物飼料產品上。此外，可通過將益生元、益生菌和後益生混合物與任何適合的成分，例如常用於動物飼料產物中的那些，來製備包含本發明組合物的飼料產物。隨後，根據需要，可以很多不同的方式生產動物飼料。然而，用於生產本發明的飼料產品的特別適合的方式是通過擠壓蒸煮。這可以通過本領域中熟知的方法完成。例如，在一個適合的方法中，將飼料混合物送入預處理器中。所述飼料混合物由澱粉源和其他成分，例如糖、鹽、香料、調味劑、維生素、礦物質、調味劑、著色劑、抗氧化劑、蛋白質源、酵母提取物、脂肪等構成。適合的澱粉源是例如玉米、水稻、小麥、甜菜、大麥、藻類、大豆和燕麥。所述澱粉源可以是穀物、膳食、谷蛋白或麵粉。適合的蛋白質源可選自任何適合的動物或植物蛋白質源；例如肉粉、骨粉、魚粉、大豆蛋白濃縮物、乳蛋白、谷蛋白、酵母提取物，乳清等。蛋白質源的選擇可以在很大程度上由營養需求、適口性考慮以及所生產的飼料產品的類型決定。當然，澱粉源也可以是蛋白質源。如果需要，也可包括不溶纖維源，例如麥麩、玉米糠、米糠、黑麥麩等。如果需要，也可包括可溶纖維源，例如菊苣纖維、燕麥麩濃縮物、瓜爾膠、角豆膠、黃原膠等。取決於飼料產品的期望形式，飼料混合物的澱粉含量可以改變。例如，對於膨化穀物產品，飼料混合物優選包括高至約40重量%的澱粉。然而，對於片狀產品，不必在飼料混合物中使用大量的澱粉，誒，可以將非膨化產品壓片。在預處理器，將水或蒸汽或二者混合到飼料混合物中。將足夠的水或蒸汽混合到飼料混合物中，以潤溼所述飼料混合物。如果需要，可在預處理器中將飼料混合物的溫度提高至約60-90℃。不必對飼料混合物進行預處理，但進行預處理是有利的。隨後，將離開預處理器的潤溼飼料與益生元、益生菌和後益生組合物一起進料至擠出機。擠出機可以是任何適合的單螺杆或雙螺杆蒸煮擠出機。適合的擠出機可以得自wengermanufacturinginc,clextralsa,buhlerag等。在通過擠出機期間，潤溼的飼料通過蒸煮區，在此對其進行機械剪切和加熱，例如高達最高至約150℃的最高溫度，和成形區。根據需要，成形區的表壓為約300kpa至約10mpa。如果需要，可將水或蒸汽或二者引入到蒸煮區中。如果需要，可將少量的食用油與潤溼的飼料一起進料至擠出機中，以促進擠出過程或作為油溶性添加劑的載體。可以使用任何適合的油，例如植物油，如向日葵油、紅花油、玉米油等。如果使用油，則特別優選單不飽和物高的油。還優選氫化油或脂肪。優選所使用的油的量保持低於約1重量%。用力使離開擠出機的食品基質通過適合的模具。具有對應於模具孔的橫截面形狀的成形的擠出物離開模具。如果要生產片狀產品，隨後可將小塊轉移到壓片裝置。適合的裝置是熟知的並且廣泛用於穀物工業中，並且可以購自例如瑞士的buhlerag。如果需要，可以在壓片前，將小塊部分乾燥。隨後，將小塊乾燥至低於約10重量%的含水量。如常規地，這在熱風乾燥劑中方便地進行。乾燥的即食型產品包含約105至約1011個菌落形成單位(cfu)/克(g)的乾燥飼料產品；優選約106至約109cfu/g。乾燥的飼料產品可包含0.01至0.5重量%的益生元、益生菌和益生菌代謝物的混合物。可對上述實施方式進行多種改變。例如，不必通過擠出蒸煮生產穀物產品。相反，穀物產品可以通過生產乾燥的即食型穀物小塊的任何適合方法生產。例如，可以用水蒸煮飼料材料以提供蒸煮的糊。隨後，將所述糊輥式乾燥以生產乾燥的片，通常厚度為約0.6至約1mm。以下實施例給出了對本發明的更好的理解，所描述的實施例是用於說明性的但不應被解釋為限定本發明。實施例實施例1：組合物的製備本發明的組合物通過深層液體發酵和固相基質發酵的組合而製備。預混物a：乳桿菌屬的固相基質發酵：使用標準厭氧深層液體發酵方案，在分離的發酵罐中培養乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳桿菌的單獨的純化分離物。通過離心從發酵罐回收單獨的生物體，以基於重量的相等比例混合在一起，隨後添加至以下混合物：1份菊粉、2.2份分離的大豆蛋白、8份大米粉和0.25%w/w氯化鈉、0.045%w/w碳酸鈣、0.025%w/w硫酸鎂、0.025%w/w磷酸鈉、0.012%w/w硫酸亞鐵和29.6％水。允許這種混合在30ºc下發酵達5天。在發酵完成後，將整個混合物冷凍乾燥至含水量小於5%，研磨至295微米的平均粒徑，且60%的產物粒徑範圍在175-840微米之間，並均質化。粉末化產品的最終微生物濃度在109和1011cfu/g之間。預混物b：乳桿菌屬的深層發酵：使用標準厭氧深層液體發酵方案，在菊粉的存在下，在分離的發酵罐中培養乳酸片球菌、戊糖片球菌和植物乳桿菌的單獨的純化分離物。發酵後，將單獨的培養物過濾、離心並冷凍乾燥至含水水平小於約5%，隨後研磨至295微米的平均粒徑，且60%的產物粒徑範圍在175-840微米之間，並均質化。粉末化產品的最終微生物濃度在109和1011cfu/g之間。預混物c：發酵上清：收集從上文預混物b的深層發酵物生產的，生物體離心後剩餘的上清，混合在一起，冷凍乾燥至含水水平小於約5%，隨後研磨至295微米的平均粒徑，且60%的產物粒徑範圍在175-840微米之間，並均質化。預混物d：芽孢桿菌屬的深層發酵：將枯草芽孢桿菌(34klb)的樣品添加到250ml錐形燒瓶，其還包含100ml蒸餾的去離子水、2克營養肉湯、2克amberferm(酵母提取物)和4克麥芽糖糊精的無菌溶液。將燒瓶密封並放置在30ºc的軌道搖床上。允許培養物生長3-5天。通過向具有900ml蒸餾的去離子水的1升燒瓶添加18克營養肉湯、18克amberferm和36克麥芽糖糊精製備更大的培養物。將燒瓶密封並滅菌，如上文所述。冷卻後，添加100ml的來自所述250ml錐形燒瓶的微生物培養物。將所述1升燒瓶密封，放置在定軌搖床上，並允許在30ºc生長另外的3-5天。在引入到發酵罐之前的最終培養期中，將來自1升燒瓶的培養物在無菌條件下轉移到無菌的6升容器，並在30ºc持續通氣發酵直到達到穩定期。將所述6升培養燒瓶的內容物轉移到發酵罐中，其還裝有由1份酵母提取物和2份葡萄糖製成的無菌生長培養基。所述發酵罐在ph7.0和35ºc的有氧條件下運行，直到細胞密度達到1011cfu/ml。對於乾燥的產物，通過濾器清空所述發酵罐，離心並回收細胞團塊。將細胞團真空乾燥直至含水水平降至低於約5%。乾燥產品的最終微生物活性通常在約108和1011cfu/g之間。通過將預混物a、b和c以相同的重量比例組合，並混合至均勻，隨後在預混物d和填料中混合來製備最終的組合物。通常，最終的益生元、益生菌和後益生組合物包含50重量%的組合的預混物a、b和c，3.33重量%的預混物d，和46.67重量%的nutri-sure™。在此製劑中的乳桿菌屬的最終活性是6.9x109cfu/g，並且芽孢桿菌屬的最終活性是3.7x108cfu/g。實施例2：動物飼料產品的配製——包被通過以下方法，將來自實施例1的混合物配製到動物飼料顆粒(蝦、家禽、豬和牛)上：a.將1千克的低熔點油脂(例如，具有47-48oc熔點的氫化大豆油)加熱至稍高於所述熔點(50oc)。一旦所有的油脂都熔化，在快速攪拌下，將來自實施例1的1千克的乾燥粉末化組合物分散至所述熔化物中。隨後，快速地向此熔化物添加999千克的動物飼料顆粒，並快速攪拌以獲得均勻的包衣。允許所述顆粒在室溫下風乾過夜。包衣顆粒的最終微生物活性在107和109cfu/g之間。b.可選地，將低熔點油脂(例如，具有47-48oc熔點的氫化大豆油)添加至罐中，並在攪拌下加熱至50oc。將熔化的油脂噴到由增壓空氣加熱至約45oc的飼料顆粒的攪拌床上。油脂的最終重量在1至5%w/w的範圍。將來自實施例的乾燥組合物以0.01和1%w/w的重量添加至包被飼料，關閉加熱氣流，並允許所述床混合和乾燥，直到其達到室溫。c.在劇烈攪拌下，將來自實施例1的1千克的乾燥粉末組合物分散到10千克的沙丁魚油中。在持續攪拌下，以1kg/分鐘的速率將此混合物噴灑到飼料顆粒的床上，在以60赫茲操作的帶式摻合器中混合，以達到1%w/w的最終裝載。實施例3：動物飼料產品的配製——擠出製備以下的乾燥混合組合物：成分乾燥混合物中的水平(%)經研磨的玉米(200微米)64.0經研磨的大豆粉(200微米)29.5與足夠的水混合，以製備100%組合物，並在高溫(120-150oc)下，混合20分鐘。在此過程期間，可向此混合物添加脂肪(2.6%w/w)。在蒸煮後，將混合物輸送到wengertx52雙螺杆擠出機中，並將螺杆設置在輸送配置(低剪切，低摩擦)中，並以23.5kg/hr的速率添加水。通過accurate螺杆進料器，以足以達到0.1wt%的最終組合物的速率，將來自實施例1的粉末組合物稱量到擠出機中。將所產生的糊料推過具有3mm開口的模具。使用四刃轉刀將擠出物切成3mm長度。收集所得的顆粒，並輸送通過35oc的加壓氣流，對流乾燥爐，直到含水水平低於10%。最終組合物的微生物活性在106-108cfu/g之間。實施例4：蝦飼養試驗在德克薩斯州阿蘭薩斯港的texasa&magrilife海洋養殖實驗室進行53天的蝦飼養研究。將具有0.005克的平均初始重量的pl10動物平均分在三個處理罐中：•對照(僅蔗糖)•0.25ppm劑量的來自實施例1的組合物•2.5ppm劑量的來自實施例1的組合物。每個罐中的放養密度為3384隻蝦/m2。對所有罐，經過0-5天，以基於降低fcr的40%蛋白質飲食進行飼養。在0-3天，除fcr中所需的飼料之外，每天添加9g的45%蛋白標準參考飲食(srd)。考慮罐中的剩餘飼料，水質和生物絮凝水平，每天評估飼料蛋白率和fcr。每天在早晨餵養期間，添加作為液體(溶解在水中的乾燥組合物)的實施例1組合物。使用軟水交換管道系統。在53天後，研究終止，並測定每個管中的平均蝦重量。(圖1和圖2)。實施例5：家禽飼養研究在環境受控的禽舍進行研究。鳥圈養在畜欄中(17隻雞/m2)。將落地畜欄分配至6種處理：1.對照漿飼料2.對照顆粒飼料3.100g實施例1組合物/噸漿飼料4.1,000g實施例1組合物/噸漿飼料5.100g實施例1組合物/噸顆粒飼料6.1,000g實施例1組合物/噸顆粒飼料。安排實驗畜欄的分布以避免禽舍中位置的任何影響。所述畜欄在它們之間具有雙層絲網，以放置不同畜欄中的鳥之間的物理接觸，並且使芽孢桿菌屬孢子的交叉汙染的風險最小化。鳥可自由獲得飼料和水。每個畜欄裝備將以每天手動填充的料鬥進料器。使用新刨花作為墊物。在前三天，將初始孵化溫度保持在30ºc，並且隨後到實驗結束時，逐漸降低至20ºc。在生活的前兩天，提供24小時的光照，其在隨後的12天減少至22小時，並且在試驗的剩餘時間降低至20小時。根據所提供的指示，在第一天進行艾美球蟲疫苗接種(通過在孵化所中噴灑球蟲活疫苗)。不對雞進行針對其他疾病的疫苗接種。在試驗的1至42天期間，使用沒有抗生素和球蟲抑制劑的基本飲食。成分(g/kg)為：玉米450、大豆粉48％185、全脂大豆135，小麥200和維生素-礦物質起動預混物30。營養分析(g/kg)為：粗蛋白200；醚提取物72；粗纖維41；灰分64；賴氨酸11_5；甲硫氨酸4_6；胱氨酸4_4。以100g/t和1000g/t飼料向漿飼料和顆粒飼料添加實施例1的組合物。在從孵化場到達後，以及在7、14、21、28、35和42天，對所有鳥單獨稱重。以畜欄為基礎記錄飼料消耗，同時作為活重記錄。調整的飼料轉化率(fcr)結果顯示在圖3中。包含實施例1的組合物的顆粒飼料顯示相對於對照fcr的顯著改善。實施例6：家禽飼養研究在具有粘土底板的煤渣塊結構中進行研究。提供持續的光照。將鳥圈養在畜欄(27隻/畜欄)中，其提供0.74ft2/只鳥的放養密度。將落地畜欄分配至6種處理(每個處理10個重複畜欄)：1.對照漿飼料2.對照顆粒飼料3.50克的5%劑量的組合物1/mt漿飼料中4.500克的5%劑量的組合物1/mt漿飼料中5.500克的2%劑量的組合物1/mt顆粒飼料中6.500克的4%劑量的組合物1/mt顆粒飼料中。在第0天使用新刨花，並在第4天以每個畜欄相等的量(4lb./畜欄)引入使用過的墊物。在放置之前，將第4天添加的墊物均一化，並且包含足夠水平的大腸桿菌(e.coli)、沙門氏菌和梭菌，以允許對未經治療的雞的適度攻擊。在試驗開始之前，對所有畜欄仔細檢查以確保沒有允許肉雞在畜欄之間移動的開口。鳥可自由獲得飼料和水。在第0天放置和稱重之前，使用coccivac®-b對鳥進行針對球蟲病的噴霧疫苗接種。在研究期間，每天檢查所有畜欄。觀察包括飼料和水的可得性，以及孵化器控制，以達到期望的溫度。以0-14、15-28和29-42天分別為起始、生長和終止飼料的方案投放漿形式的飼料。如附件a中所示，從大基礎飲食製備每種飼料類型，並分成等分試樣，並隨後與測試物混合，此後如上文所述將三份的飲食粒化。附件a–飼料配方如上文所述，向漿飲食和顆粒飲食添加實施例1的組合物。按照畜欄，在第0、35和42天對所有鳥稱重，並且在第14、28和42天稱量所有畜欄飼料。下文顯示了第42天的體重(bw)和調整的飼料轉化率(fcr)結果。包含實施例1的組合物的顆粒飼料顯示超過對照飲食的5.44%的增重改善，和3.2%的fcr改善。對飼料轉化率(fcr)進行重量調整。實施例7：豬飼養研究–美國方案從伊利諾伊大學進口豬研究實驗室獲得總計144隻斷奶仔豬(72隻閹公豬、72隻小母豬；18-21日齡)。每個畜欄兩隻閹公豬和兩隻小母豬，並且在整個試驗中，豬隨意獲得飼料和水。根據隨機完全分隔設計，在斷奶時，根據體重和世系分隔豬。採用標準的三期飼養方案：項目，%1期2期3期經研磨的玉米31.2647.3457.90幹乳清25.0020.005.00大豆粉20.2423.6931.18乳糖10.00--appetein7.503.00-choicewhite油脂3.003.003.00石灰石1.141.090.90磷酸二鈣0.630.851.35氯化鈉0.100.10-礦物預混物0.350.350.35維生素預混物0.200.200.20l-賴氨酸hcl0.040.050.02d,l-甲硫氨酸0.140.070.02氧化鋅0.400.26-硫酸銅--0.08以0、0.05或0.5%將實施例1的組合物添加到各期飲食的上部，以產生三種實驗飲食處理。1期和2期各飼餵1周，並且在研究的最後兩周飼餵3期飲食。對3種處理的每一種有12個重複的畜欄，並且每個畜欄包含4隻豬。配製飲食以滿足或超出基於nrc(2012)的生長期的營養需求。在4周的時期中每周記錄豬和飼料重量以測定體重(bw)、平均日增重(adg)和平均日採食量(adfi)，由此計算每周和整體的f:g。相對於對照腿的飼料轉化改善百分比顯示在圖3中。實施例8：豬飼養研究–泰國在90天的生長實驗中，使用養殖棚中的8個畜欄，每個畜欄安置45隻豬(總計360隻，8周齡，初始平均bw=19.5kg)。在試驗過程中，以典型的漿飲食飼養豬，其包含實施例1的組合物。根據完全隨機的設計分配豬，每個畜欄45隻豬，並且有4個重複。處理為：1.對照(無添加的biology)2.實施例1的組合物，200克/噸漿飼料。在90天後，平均每天體重增重為15%，並且相對對照的飼料轉化改善百分比為6.3%。實施例9：奶牛飼養研究對1200頭奶牛，以5%的成品飼料配給的當量，向液體飼料添加劑添加實施例1的組合物。以這種飲食飼餵奶牛30天的時期。在這段時間記錄奶生產，並與前一月比較。觀察到與前一月相比奶生產增加1.9%且奶油含量提高3.8%。當前第1頁12