一種從植物中提取雷公藤紅素的方法
2023-12-05 15:24:36 1
一種從植物中提取雷公藤紅素的方法
【專利摘要】一種自雷公藤屬及南蛇藤屬植物根皮或根莖中提取雷公藤紅素的方法，以雷公藤屬及南蛇藤屬植物根皮或根莖為原料，包括酶解、超聲提取、分離、純化和重結晶等步驟。所述的提取首先以酶進行酶解後超聲提取，提取液濃縮後得到浸膏狀初提物，然後初提物用水懸浮後以乙酸乙酯萃取，萃取劑濃縮得到稠膏狀提取物；所述純化是粗提物用硅藻土或矽膠拌樣後以矽膠柱色譜分離純化，收集洗脫液，濃縮乾燥後得到粉末狀粗晶體，最後用甲醇-水或乙醇-水混合溶劑重結晶。本法分離、純化工藝簡單，得到純度達98%的雷公藤紅素，提取收率高於90%。
【專利說明】一種從植物中提取雷公藤紅素的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於醫藥【技術領域】，具體涉及一種從植物中提取雷公藤紅素的方法。
【背景技術】
[0002]雷公藤紅素(celastrol)，又名南蛇藤素，是一種從衛矛科雷公藤屬及南蛇藤屬植物中分離出的五環三萜類物質，外觀呈紅色針狀結晶體，具有抗炎、免疫抑制、抗病毒及抗腫瘤等多種藥理活性。雷公藤紅素的抗腫瘤新機制的發現，又掀起了研究其抗癌活性的新熱潮，同時其經濟價值也逐漸走高。
[0003]根據雷公藤紅素的溶解性，利用有機溶劑從雷公藤紅素含量較高的植物中提取雷公藤紅素，是生產雷公藤紅素普遍採用的一種方法。截至目前，文獻報導的雷公藤紅素提取工藝只有有機溶劑提取和超臨界C02萃取。有機溶劑提取法因其對設備要求低、操作簡單、成本低廉，是目前最常用的一種方法。
[0004]但是，植物細胞由細胞壁及原生質體組成，細胞壁是由纖維素、半纖維素、果膠質、木質素等物質構成的緻密結構。在提取過程中，位於細胞原生質體中的雷公藤紅素向提取介質擴散時，必須克服細胞壁及細胞間質的雙重阻力，導致提取時間延長，提取效率降低。
【發明內容】
[0005]本發明為克服現有方法中提取雷公藤紅素收率較低問題，發明一種新的、改進的提取雷公藤紅素的方法。
[0006]本發明提供了一種提取雷公藤紅素的方法，其中，該方法包括將含有雷公藤紅素的植物原料乾燥，粉碎，經酶解後有機溶劑對其進行超聲提取，提取液濃縮後萃取、柱層析分離，重結晶。具體步驟包括:
(l)原料乾燥、粉碎、過20-60目篩，按料液比1:5~20 (kg/L)加入去離子水，調整pH在6、範圍內，加入酶酶解，酶量為原料質量的0.1- 10%，酶解溫度25-60°C，酶解時間0.5^2h。所述酶為纖維素酶、果膠酶中的一種或兩者的混合物；
(2)反應液過濾，收集濾渣，按料液比1:5~15(kg/L)加入甲醇或乙醇，在20-45°C內超聲波提取1(T45 min，過濾，重複提取2~3次，合併提取液，減壓濃縮至無餾分蒸出；
(3)將濃縮的提取物以2飛倍體積水懸浮後，加入等體積乙酸乙酯萃取，重複萃取3次，合併萃取液，減壓濃縮；
(4)萃取液濃縮後得到的產物以硅藻土或矽膠拌樣並乾燥，將得到的產物置於矽膠柱分離。其中，用於拌樣的硅藻土或矽膠的用量為萃取液濃縮後所得產物重量的5~10%，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，梯度洗脫，洗脫過程中採用薄層色譜法進行監控；
(5)收集含雷公藤紅素的洗脫液，濃縮至幹後進行重結晶並乾燥，所得即為雷公藤紅素。
[0007]本發明的優勢為:利用酶對原料的細胞壁成分進行有效的分解破壞，從而降低提取過程中的傳質阻力，加快雷公藤紅素溶出細胞速率，縮短提取時間，提高提取效率；同時在原工藝條件上僅增加了一個操作單元，反應條件溫和易獲得，對反應設備的要求較低，操作簡單。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008]圖1為雷公藤紅素的結構式。
[0009]圖2為雷公藤紅素的提取流程圖。
【具體實施方式】
[0010]此處所描述的具體實施方法僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。
[0011]實施例1
稱取Ikg南蛇藤屬植物苦皮藤的乾燥根皮，粉碎至40目，IOL去離子水和20g的3%的纖維素酶和果膠酶複合劑，在恆溫40°C和pH值6.0的狀態下酶解2h，過濾，向濾渣中加入甲醇IOL進行超聲波提取，提取時間30min，過濾，重複提取2次，合併濾液，減壓濃縮，將濃縮後的提取物用4倍體積的水懸浮後加入等體積的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合併萃取液並減壓濃縮，濃縮後的產物以其質量5%的娃藻土拌樣並乾燥,上200-300目的矽膠柱，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，洗脫梯度為1:0 (2V)，5:1 (2V)，1:1 (IOV) (V為柱體積)，收集含雷公藤紅素的洗脫液，減壓濃縮並乾燥，得紅色粉末狀提取物，將該提取物以熱乙醇溶解成飽和 溶液後,緩慢加入水,有紅色晶體析出，乾燥後乾燥後得7.37g純度為98.1%的雷公藤紅素，收率為90.3%。
[0012]實施例2
稱取Ikg雷公藤的根,粉碎至60目，15L去離子水和250g的3%的纖維素酶和果膠酶複合劑，在恆溫40°C和pH值6.0的狀態下酶解2h，過濾，向濾渣中加入乙醇15L進行超聲波提取，提取時間lh，過濾，重複提取2次，合併濾液，減壓濃縮，將濃縮後的提取物用4倍體積的水懸浮後加入等體積的乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合併萃取液並減壓濃縮，濃縮後的產物以其質量5%的矽膠拌樣並乾燥，上200-300目的矽膠柱，梯度洗脫，洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，洗脫梯度為1:0 (2V)，5:1 (2V)，1:1 (IOV) (V為柱體積)，收集含雷公藤紅素的洗脫液，減壓濃縮並乾燥，得紅色粉末狀提取物，將該提取物以熱乙醇溶解成飽和溶液後，緩慢加入冷水，有紅色晶體析出，乾燥後得6.19g純度為98.3%的雷公藤紅素，收率為90.2%。
【權利要求】
1.一種雷公藤紅素的提取工藝，其特徵是以含雷公藤紅素的植物根皮或根莖原料乾燥、粉碎過篩，加入適量去離子水並調整PH後加酶進行酶解，過濾後向濾渣中加入甲醇或乙醇超聲提取3~4次，提取液濃縮後加水懸浮並以乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮後以矽膠柱色譜分離純化，收集洗脫液，濃縮乾燥得到粉末狀粗晶體，以甲醇-水或乙醇-水混合溶劑重結晶。
2.如權利要求1所述的方法，其中所用酶為纖維素酶、果膠酶中的單一或者混合物，加入量為原料質量的0.f 10%，溫度為25~6℃，酶解時間0.5~2 h。
3.如權利要求1所述的方法，採用有機溶劑甲醇或乙醇超聲提取，提取時間l0~45min，重複2~3次。
4.如權利要求1所述的方法，採用柱層析分離純化，其中洗脫劑為石油醚-乙酸乙酯，再以甲醇-水或乙醇-水混合溶劑重結晶洗脫液，最終所得雷公藤紅素純度達98%，提取收率聞於90%。
【文檔編號】C07J63/00GK103880912SQ201410116127
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月27日 優先權日:2014年3月27日
【發明者】張梅, 彭學東, 趙金召, 邱潔 申請人:江蘇斯威森生物醫藥工程研究中心有限公司