一種口蹄疫固相競爭elisa檢測方法

2023-12-05 20:17:21 1

專利名稱：一種口蹄疫固相競爭elisa檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種用於口蹄疫固相競爭ELISA的檢測方法，屬於動物疫病血清學診斷技術領域。
背景技術：
口蹄疫是國際獸醫局認定I類病，對疫區經濟有嚴重影響，口蹄疫抗體水平的檢測對疫苗免疫、疫病控制有重要意義，ELISA 是 enzyme linked immuno-sorbent assay 的縮寫，艮flgl連免疫吸附實驗， 是當今口蹄疫抗體檢測的一個重要方法，該方法分為液相阻斷ELISA，即LPB-ELISA(liquid phase block，LPB)，和固相競爭 ELISA，即 SPC-ELISA(soil phase competition，SPC)。其中SPC-ELISA以其高敏感性和高相關性，正逐漸成為主流的口蹄疫抗體檢測方法。但是 SPC-ELISA的弱點是操作比較複雜，即使是有經驗的操作人員也得需要4-5小時才能完成。

發明內容
針對以上情況，本發明的目的，就是要解決口蹄疫固相競爭ELISA中操作複雜的問題。本發明的技術方案是把口蹄疫標準SPC-ELISA操作中必做的抗體包被和抗原結合提前完成。也就是說在進行口蹄疫抗體檢測的SPC-ELISA之前，將包被口蹄疫抗體和連結口蹄疫抗原在ELISA板上提前完成，然後加入穩定劑作用一段時間後控幹，乾燥後形成保護膜， 再該ELISA板真空包裝，然後低溫保存。此板便稱為口蹄疫抗原固定板，即口蹄疫 ASP(antigen-soild-plate, ASP)。當需要進行口蹄疫抗體檢測時，將口蹄疫抗原固定板取出直接進行實驗就行，此方法也就叫口蹄疫ASP SPC-ELISA。和口蹄疫標準SPC-ELISA相比，本發明省去了 4個步驟，S卩，口蹄疫抗體的包被與洗脫，口蹄疫抗原的結合與洗脫。這就使得整個口蹄疫ASP SPC-ELISA的實驗時間縮短到 1-2小時，還可以減少試劑盒內緩衝體系的數量。用口蹄疫ASP SPC-ELISA檢測口蹄疫抗體，與LPB-ELISA和標準中和抗體檢測 (virus neutralizing test, VNT)方法相比較，結果見表一。在口蹄疫中和抗體陽性血清樣品中，用ASP SPC-ELISA與SPC-ELISA、LPB-ELISA檢測口蹄疫抗體相比較，結果見表二。表一口蹄疫 ASP SPC-ELISA 與 LPB-ELISA、VNT 比較
權利要求
1.一種口蹄疫固相競爭ELISA檢測方法，其特徵在於a、口蹄疫抗原通過與口蹄疫抗體結合後固定在ELISA板孔內。b、固定在ELISA板孔內的口蹄疫抗原覆蓋有穩定劑保護膜。c、口蹄疫抗原固定板可以長期保存。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，被檢樣品可直接加入口蹄疫抗原固定板孔內進行檢測。
全文摘要
本發明涉及一種口蹄疫固相競爭ELISA檢測方法，屬於動物疫病血清學診斷技術領域。本發明將口蹄疫抗體通過包被技術結合在ELISA板上，然後通過抗原-抗體結合反應將口蹄疫抗原牢固結合ELISA板孔內，經穩定劑處理和乾燥後進行真空包裝，最後置低溫長期保存。當需要檢測口蹄疫抗體時，可以將該ELISA板直接用於實驗，它可以讓實驗過程變得既簡單又省時。
文檔編號G01N33/543GK102175852SQ201110001730
公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月6日 優先權日2011年1月6日
發明者信愛國, 廖德芳, 李樂, 李華春, 胡騎, 苗海生, 高林 申請人:雲南省畜牧獸醫科學院