用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法
2023-12-05 04:25:36 2
專利名稱：用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法
用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法
技術領域：
本發明涉及一種生物培育方法，尤其涉及一種用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法。
背景技術：
農作物的枯萎病是一種毀滅性的真菌土傳病害，而尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum Schl)是其主要的病原菌。該病危害範圍廣泛，包括(1)經濟作物棉花、油桐、 蓖麻、亞麻等；(2)茄科作物番茄、胡椒、茄子、菸草、馬鈴薯等；(3)瓜類作物黃瓜、節瓜、 冬瓜、西瓜、南瓜、西葫蘆、甜瓜、絲瓜、白瓜、越瓜、苦瓜、葫蘆瓜、哈密瓜等；(4)豆科作物 大豆、四季豆、豇豆、豬屎豆、豌豆等；( 花卉植物康乃馨、鬱金香、魚尾菊、非洲菊、鳶尾、 水仙、翠菊、合歡、百合、仙人掌、穿心蓮、一品紅、草坪草等；(6)林果植物松樹、相思樹、柑桔、沙棘、水杉、鐵線蓮屬植物、梨樹等；(7)其它植物萵苣、小麥、大蒜、荸薺、蘆筍、姜、香蕉等。在我國南方，作物枯萎病中以瓜類枯萎病發生最為嚴重；在我國北方，以棉花枯萎病發生最為嚴重。枯萎病在植株的全生育期均可發生，一旦發病就難以根除，隨著連作年份的增加，發病率越發嚴重。20世紀90年代以來，我國設施蔬菜瓜類作物面積不斷增加， 由於在相對封閉的設施內形成的特殊小氣候既有利於蔬菜生長，也成為各種病蟲害滋生的溫床，加之長年連作，使土壤中病原菌的數量不斷增加，設施栽培蔬菜的枯萎病發生越來越重。有關研究結果顯示作物枯萎病一般導致減產20-30%，嚴重田塊可達50-80%，甚至絕產，已成為限制著我國作物生產發展重要因素。選用抗病品種是防治作物枯萎病最常用的方法之一，而抗病鑑定工作是進行抗枯萎病育種的重要環節。在枯萎病菌的致病性測定中，黃瓜苗是一種最常用的材料之一，不但所需量大，而且對幼苗的要求甚為嚴格。以往大多採用大田土壤育苗、栽培，採用這種方法育出的苗，接種後植株的感病情況難以準確判斷或確定，因為大田土壤成份複雜，土壤結構及微生物群系易發生變化，難以確保每次試驗的一致性，而且土壤中的微生物也可能參與致病菌的致病作用，導致生物測定實驗失敗，影響抗病育種工作的進程，另外，傳統的育苗方法所需的時間較長，一般不少於30天，因此，尋找一種相對無菌且快速的育苗手段是必需的。
發明內容本發明所要解決的技術問題在於提供一種用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法，不僅可縮短育苗時間、出苗率高，而且採用基質培育能夠不受土壤微生物及土壤結構等因素的影響，使得幼苗生長均勻一致。本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的一種用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法，其包括如下步驟先把備好的黃瓜種子浸於盛有無菌水的容器中，並將該容器置於恆溫搖床上進行振蕩培養，溫度設定為25°C，轉速90r/min，待容器中的黃瓜種子發芽且芽長至0. 4-0. 6cm後停止振蕩，接著將發芽的黃瓜種子播入盛有消過毒的培育基質的育苗盤中，然後將該育苗盤置於25°C的人工氣候箱中培養，培養過程中的光周期為 12h光照、1 黑暗，以營養液澆灌，培養20-22天後即可將幼苗用於枯萎病生物測定。進一步地，所述培育基質是由珍珠巖與泥炭按1 3的體積比組成。進一步地，所述營養液為市售普通花卉的營養液，其組分為過磷酸鈣800mg/L、 硝酸鉀700mg/L、硝酸鈣700mg/L、硫酸鎂^Omg/L、硫酸鐵120mg/L、硼酸0. 6mg/L、硫酸錳 0. 6mg/L、硫酸鋅0. 6mg/L、硫酸銅0. 6mg/L、硫酸銨0. 6mg/L,以水配製。本發明的有益效果在於相比傳統大田土壤育苗，不僅可縮短育苗時間、出苗率高，而且採用基質培育能夠不受土壤微生物及土壤結構等因素的影響，使得幼苗生長均勻一致，進而提高後續枯萎病生物測定的可靠性和準確性。
具體實施方式本發明用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法包括如下步驟先把備好的黃瓜種子浸於盛有無菌水的容器中，並將該容器置於恆溫搖床上進行振蕩培養，溫度設定為 25°C，轉速90r/min，待容器中的黃瓜種子發芽且芽長至0. 4-0. 6cm (約振蕩培養Mh)後停止振蕩，接著將發芽的黃瓜種子播入盛有消過毒的培育基質的育苗盤中，然後將該育苗盤置於25°C的人工氣候箱中培養，培養過程中的光周期為1 光照、1 黑暗，以營養液澆灌， 培養20-22天後即可將幼苗用於枯萎病生物測定。其中，所述培育基質是由珍珠巖與泥炭按1 3的體積比組成；所述營養液為市售普通花卉的營養液，其組分為過磷酸鈣800mg/L、硝酸鉀700mg/L、硝酸鈣700mg/L、硫酸鎂 ^Omg/L、硫酸鐵 120mg/L、硼酸 0. 6mg/L、硫酸錳 0. 6mg/L、硫酸鋅 0. 6mg/L、硫酸銅 0. 6mg/L、 硫酸銨0. 6mg/L,以水配製。以下是本發明的一個實施例及利用該實施例培育得到的黃瓜幼苗進行枯萎病的生物測定。1.用於枯萎病生物生物測定的黃瓜幼苗的培育(1)材料黃瓜種子，培育基質，營養液(2)培育方法的具體步驟先把備好的黃瓜種子浸於盛有20ml無菌水的150ml三角瓶中，並將三角瓶置於恆溫搖床上進行振蕩培養，以促進種子發芽及提高種子萌發率，且溫度設定為25°C，轉速 90r/min，待容器中的黃瓜種子發芽且芽長至約0. 5cm(約振蕩培養Mh)後停止振蕩，接著將發芽的黃瓜種子播入盛有消過毒的培育基質的育苗盤中，然後將該育苗盤置於25°C的人工氣候箱中培養，培養過程中的光周期為1 光照、1 黑暗，並以市售普通花卉的營養液澆灌，22天後即可培育出可用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗，相比傳統的大田土壤育苗方法，本發明不僅在培育時間上縮短了 1/3左右，且獲得的黃瓜幼苗苗狀一致，易於挑選。2.枯萎病的生物測定(1)供試枯萎病病原菌孢子懸浮液的製備先把供試枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum)置於PS液體培養基(馬鈴薯200g，蔗糖20g)中，且將該培養基置於搖床上培養7天，培養溫度設定為，轉速170r/min，接著把培養後所得的菌液用雙層紗布濾去菌絲，最後將濾液配製成lX107CFU/ml的孢子懸浮液備用。
(2)枯萎病的生物測定一般採取以下兩種接種方法a.澆灌接菌法挑選長勢均一的黃瓜幼苗，輕輕拔出後將其主根及2根鬚根截斷後移栽入塑料缽頭，且每株根部澆入 IOml枯萎病病原菌孢子懸浮液；b.浸根接菌法挑選長勢均一的黃瓜幼苗，輕輕拔出後用無菌水洗淨根部，接著將其主根及2根鬚根截斷後浸入孢子懸浮液中，池後移栽入盛有已澆清水的無菌基質的塑料缽頭中。每一種接種方法均同時設置對照組和實驗組，實驗組採用1中所得成活後的黃瓜幼苗，而對照組採用傳統大田育苗所獲得的黃瓜幼苗，且實驗組及對照組的苗期管理措施相同。逐日觀察兩組中黃瓜幼苗的生長與感染情況，並比較30天後各組中黃瓜幼苗的感病情況。結果表明，接種病原菌30天後，兩對照組中黃瓜幼苗的枯萎病發病率均在60%以下，並且發病表現相當不一致，難以給出統一評價；而實驗組無論是採用澆灌接種法還是浸根接種法，其黃瓜幼苗的枯萎病發病率均達到100 %，不僅高度感病，而且感病表現一致，進而表明按照本發明方法獲得的黃瓜幼苗能完全滿足生物測定和抗病育種的要求。
權利要求
1.一種用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法，其特徵在於包括如下步驟先把備好的黃瓜種子浸於盛有無菌水的容器中，並將該容器置於恆溫搖床上進行振蕩培養， 溫度設定為25°c，轉速90r/min，待容器中的黃瓜種子發芽且芽長至0. 4-0. 6cm後停止振蕩，接著將發芽的黃瓜種子播入盛有消過毒的培育基質的育苗盤中，然後將該育苗盤置於 25°C的人工氣候箱中培養，培養過程中的光周期為1 光照、1 黑暗，以營養液澆灌，培養 20-22天後即可將幼苗用於枯萎病生物測定。
2.如權利要求1所述的用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法，其特徵在於所述培育基質是由珍珠巖與泥炭按13的體積比組成。
3.如權利要求1所述的用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法，其特徵在於所述營養液為市售普通花卉的營養液，其組分為過磷酸鈣800mg/L、硝酸鉀700mg/L、硝酸鈣 700mg/L、硫酸鎂 ^Omg/L、硫酸鐵 120mg/L、硼酸 0. 6mg/L、硫酸錳 0. 6mg/L、硫酸鋅 0. 6mg/L、 硫酸銅0. 6mg/L、硫酸銨0. 6mg/L,以水配製。
全文摘要
本發明提供一種用於枯萎病生物測定的黃瓜幼苗的培育方法，其具體步驟先把備好的黃瓜種子浸於盛有無菌水的容器中，並將該容器置於恆溫搖床上進行振蕩培養，溫度設定為25℃，轉速90r/min，待容器中的黃瓜種子發芽且芽長至約0.5cm後停止振蕩，接著將發芽的黃瓜種子播入盛有消過毒的培育基質的育苗盤中，然後將該育苗盤置於25℃的人工氣候箱中培養，培養過程中的光周期為12h光照、12h黑暗，以營養液澆灌，約20天後即可將幼苗用於枯萎病生物測定。本發明的優點在於不僅可縮短育苗時間、出苗率高，而且採用基質培育能夠不受土壤微生物及結構等因素的影響，使得幼苗生長均勻一致。
文檔編號A01C1/00GK102165914SQ20111000775
公開日2011年8月31日 申請日期2011年1月14日 優先權日2011年1月14日
發明者劉波, 唐建陽, 朱育菁, 肖榮鳳, 車建美, 鄭雪芳 申請人:福建省農業科學院農業生物資源研究所