一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法

2023-12-10 10:24:52

專利名稱：一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法
技術領域：
本發明屬於益生菌飲品技術領域，涉及一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法。
背景技術：
經過眾多專家學者的不斷探索實驗，已確認雙歧桿菌是腸內最有益的菌群，雙歧桿菌數量的減少乃消失是「不健康」狀態的標誌，雙歧桿菌是人體健康的晴雨表。雖然雙歧桿菌作為食品中最受關注、最安全、也是使用最多的一種益生菌，對人越來越多的保健作用被證實。但是雙歧桿菌是一種專性厭氧菌，它對營養條件要求高，對氧極為敏感，對低pH的抵抗力差，活性保持較困難，因而目前市場上銷售的雙歧桿菌產品液體或粉體製劑活菌數下降很快，產品的貯存穩定性極差，保健功效損失快。另外，雙歧桿菌要對人體產生有益作用，首先它必須通過胃環境、十二指腸以大量的存活菌到達腸道病定殖於腸黏膜上。但由於雙歧桿菌耐酸、耐膽鹽能力差，雙歧桿菌的活菌數在此過程中也會大幅度下降。再者，在雙歧桿菌微膠囊的製備過程中也會受到氧氣的影響而導致其活菌數大量下降。因此利用微膠囊技術最大限度的提高雙歧桿菌在腸道內的數量的研究成為研究的熱點，但是大多數研究忽略了氧氣對雙岐桿菌的毒害。除氧劑(FreshPac)又稱為脫氧劑，可用在食品、製藥或其他產品中。通過使用除氧劑它可以使包裝內的含氧量少於O. 1%,並繼續維持在該水平上。常見的除氧劑有抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉、半胱氨酸鹽酸鹽。

發明內容
本發明解決的問題在於提供一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，通過除氧劑技術對雙歧桿菌進行保護，其活菌數顯著高於不加除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。本發明是通過以下技術方案來實現一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟I)將雙歧桿菌的菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :5 20的質量比例混合，並加入除氧劑至其質量分數為O. 03 O. 09%，充分混均後得到雙歧桿菌膠液；所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以I. OX IO11Cfumr1的濃度懸浮在質量濃度為O. 85 O. 9%的無菌生理鹽水中；所述的海藻酸鈉溶液中海藻酸鈉的質量濃度為I 3% ；2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液擠壓入含有乳化劑體積分數為O. 2 I. 0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7,充分攪拌,乳化5 20min,然後加入質量濃度為I 5%的氯化鋇溶液，靜置20min以上；3)待靜置分層後，傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊並用生理鹽水充分洗滌，得到含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。
所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。所述的除氧劑為半胱氨酸鹽酸鹽、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉中的兩種或兩種以上。所述海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質量濃度為O. 85 O. 9%。所述的雙歧桿菌為接種於MRS培養基經過增殖培養所獲得的。所述的乳化劑為吐溫-80。所述的除氧劑預先配成濃溶液，並過濾除菌。 與現有技術相比，本發明具有以下有益的技術效果本發明提供的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，通過加入了除氧劑，解決了在製備微膠囊過程中因為雙歧桿菌與氧氣的接觸所受到的毒害，加入了除氧劑後其每克膠囊活菌數明顯提高可達到IOltl IO11 ;其活菌數顯著高於不加除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。本發明提供的含益生元的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，在製備雙歧桿菌微膠囊的的過程中將乳化法和擠壓法結合，採用壓力噴嘴將含有除氧劑的菌膠液霧化成小液滴噴入大豆油中，比傳統的注射器擠壓法省時省力。
具體實施例方式下面結合具體的實施例對本發明做進一步的詳細說明，所述是對本發明的解釋而不是限定。實施例I含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉接(兩歧雙歧桿菌)種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度1%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。所述的除氧劑為半胱氨酸
鹽酸鹽、抗壞血酸的混合。(3)製備除氧劑，配製除氧劑的濃溶液，過濾除菌以備使用。(4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 03%的添加量加入，然後在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然後快速加入濃度為1%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。實施例2含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(長雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度I. 5%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。(3)製備除氧劑，配製除氧劑的濃溶液，過濾除菌以備使用。所述的除氧劑為抗壞血酸、異抗壞血酸的混合。 (4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :12的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 05%的添加量加入，然後在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然後快速加入濃度為2%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。實施例3含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(乳雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為I. OX IO10CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度2%的海藻酸鈉溶液，11 (TC，滅菌15min。(3)製備除氧劑，配製除氧劑的濃溶液，過濾除菌以備使用。所述的除氧劑為半胱氨酸鹽酸鹽、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸鈉中的兩種或三種。(4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 07%的添加量加入，然後在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然後快速加入濃度為3%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。實施例4含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，包括以下步驟(I)將O. 4g雙歧桿菌凍幹菌粉(長雙歧桿菌)接種於18mL MRS液體培養基(購買於青島高科園海博生物技術有限公司)中，在MRS液體培養基中添加佔培養基體積O. 05%的半胱氨酸鹽酸鹽，在37°C培養條件下採用此MRS液體培養基活化三次，每次以5%的接種量轉接，其中前兩次均在37°C培養條件下培養20 24h，第三次在37°C培養條件下培養18h，然後離心(4000r，15min)棄去上清液得菌泥，將菌泥洗兩次滌後與O. 85 O. 9%無菌生理鹽水混合配製成濃度為I. OX IO11CfumL-1菌懸液以備使用。(2)配製濃度2. 5%的海藻酸鈉溶液，110°C，滅菌15min。(3)製備除氧劑，配製除氧劑的濃溶液，過濾除菌以備使用。所述的除氧劑為抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉中的兩種或兩種以上。(4)將菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I :10的比例混合，除氧劑按照菌膠液總量的O. 09%的添加量加入，然後在旋渦混合儀上混合均勻得菌膠液。(5)使 用壓力噴嘴，將上述混合液以噴霧的方式噴入大豆油中(含O. 4%的吐溫80),同時用磁力攪拌器攪拌800rpm,乳化IOmin,然後快速加入濃度為3%的氯化鋇溶液,靜置40min,傾去上層大豆油，離心得到溼 膠囊(500rpm, IOmin),用生理鹽水洗漆3次。
權利要求
1.一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟 1)將雙歧桿菌的菌懸液和海藻酸鈉溶液按照I:5 20的質量比例混合，並加入除氧劑至其質量分數為O. 03 O. 09%,充分混均後得到雙歧桿菌膠液； 所述的雙歧桿菌的菌懸液是將雙歧桿菌以O. I 5. OX IO11CfumL-1的濃度懸浮在質量濃度為O. 85 O. 9%的無菌生理鹽水中； 所述的海藻酸鈉溶液中海藻酸鈉的質量濃度為I 3% ； 2)用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液擠壓入含有乳化劑體積分數為O.2 I. 0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為I :4 7，充分攪拌，乳化5 20min，然後加入質量濃度為I 5%的氯化鋇溶液，靜置20min以上； 3)待靜置分層後，傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊並用生理鹽水充分洗滌，得到含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。
2.如權利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的雙歧桿菌為兩歧雙歧桿菌、長雙歧桿菌或乳雙歧桿菌中的一種。
3.如權利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的除氧劑為半胱氨酸鹽酸鹽、抗壞血酸、抗壞血酸鈉、異抗壞血酸、異抗壞血酸鈉中的兩種或兩 種以上。
4.如權利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述海藻酸鈉溶液中還含有氯化鈉，其質量濃度為O. 85 O. 9%。
5.如權利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的雙歧桿菌為接種於MRS培養基經過增殖培養所獲得的。
6.如權利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的乳化劑為吐溫-80。
7.如權利要求I所述的含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，其特徵在於，所述的除氧劑預先配成濃溶液，並過濾除菌。
全文摘要
本發明公開了一種含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊的製備方法，用壓力噴嘴將雙歧桿菌膠液擠壓入含有乳化劑體積分數為0.2～1.0%的大豆油中，雙歧桿菌膠液與大豆油的體積比為1∶4～7，充分攪拌，乳化5～20min，然後加入質量濃度為1～5%的氯化鋇溶液，靜置20min以上；待靜置分層後，傾去上層大豆油，離心得到溼膠囊並用生理鹽水充分洗滌，得到含除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。本發明通過加入了除氧劑，解決了在製備微膠囊過程中因為雙歧桿菌與氧氣的接觸所受到的毒害，加入了除氧劑後其每克膠囊活菌數明顯提高可達到1010～1011cfug-1；其活菌數顯著高於不加除氧劑的雙歧桿菌微膠囊。
文檔編號A23L1/29GK102960721SQ20121047049
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月19日 優先權日2012年11月19日
發明者陳合, 王野, 舒國偉 申請人:陝西科技大學