一種製備脂肪酶的方法

2023-12-10 02:26:11 1

一種製備脂肪酶的方法
【專利摘要】本發明實施例提供一種工業規模的通過微生物製備脂肪酶的方法。在該方法中，攜帶脂肪酶，優選耐熱脂肪酶的大腸桿菌微生物在批式或批式補料條件下，在補充有檸檬酸、(NH4)2SO4、Na2HPO4.12H2O、MgCl2、NH4Cl和葡萄糖的Luria?Bertani(LB)肉湯培養基中發酵，使用含有鹽酸、FeSO4.7H2O、ZnSO4.7H2O、CaCl2.H2O、MnSO4.5H2O、CuSO4.5H2O、AlCl.6H2O和H3BO3的微量金屬溶液，以及含有葡萄糖、酵母抽提物、MgSO4.H2O、KH2PO4、檸檬酸、(NH4)2SO4、Na2HPO4.12H2O、MgCl2和NH4Cl的進料營養液，在30-50％的溶氧量，30-40℃的溫度下，同時控制pH介於6與8之間，葡萄糖含量為15-25g/L，並具有異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)。本發明的實施例的製備方法可以提高生產率。
【專利說明】一種製備脂肪酶的方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種工業規模的通過微生物製備脂肪酶的方法。

【背景技術】
[0002]脂肪酶或三醯基甘油醯基水解酶EC3.1.1.3是一類對不溶於水的三醯基甘油向二醯基甘油和單醯基甘油、游離脂肪酸和甘油的水解起催化作用的酶。這種水解表面上平衡，然而，通過改變反應條件，該反應的方向可以變為酯的合成。

【權利要求】
1.一種工業規模的通過微生物製備脂肪酶的方法，其中，攜帶脂肪酶優選攜帶耐熱脂肪酶的大腸桿菌微生物，在批式或批式補料條件下，在具有檸檬酸、(nh4)2so4、Na2HPO4.12H20、MgCl2、NH4Cl 和葡萄糖的 Luria Bertani (LB)肉湯培養基中發酵， 同時使用含有鹽酸、FeSO4.7H20、ZnSO4.7H20、CaCl2.H2O, MnSO4.5H20、CuSO4.5H20、AlCl3.6H20和H3BO3的痕量金屬溶液， 以及含有葡萄糖、酵母抽提物、MgSO4.H2O、KH2P04、檸檬酸、(NH4)2SCV Na2HPO4.12H20、MgCl2和NH4Cl的進料營養液， 溶氧量為30-50%，溫度為30-40°C，同時控制pH介於6與8之間，葡萄糖含量為15-25g/L，具有異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)。
2.如權利要求1所述的方法，其中，所述溶氧量為40%。
3.如權利要求1所述的方法，其中，所述溫度為37°C。
4.如權利要求1所述的方法，其中，所述pH為6.5-7.5。
5.如權利要求1所述的方法，其中，所述葡萄糖含量為20g/L。
6.如權利要求1所述的方法，其中，使用0.1mM的異丙基硫代半乳糖苷。
7.如權利要求1所述的方法，其中，培養基的組成為:LB肉湯20.00g/L、檸檬酸3.0Og/L、(NH4) 2S046.75g/L,N a2HPO4.12Η205.00g/L、MgCl23.0Og/L,NH4Cl0.lOg/L 和葡萄糖 20.0Og/L以及蒸餾水。
8.如權利要求1所述的方法，其中，所述痕量金屬溶液的組成為:鹽酸5mmol/ml、FeSO4.7H2010.00mg/ml、ZnSO4.7H202.25mg/ml、CaCl2.H2Ol.35mg/ml、MnSO4.5H200.50mg/ml、CuSO4.5H201.00mg/ml、AlCl3.6H200.30mg/ml 和 H3BO30.20mg/ml 以及蒸餾水。
9.如權利要求1所述的方法，其中，所述進料營養液包含葡萄糖7.50g/L、酵母抽提物 50.00g/L、MgSO4.Η2020.00g/L、ΚΗ2Ρ046.75g/L、檸檬酸 3.00g/L、(NH4) 2S046.75g/L、Na2HPO4.12H205.00g/L、MgCl23.0Og/L 和 NH4Cl0.lOg/L 以及蒸餾水。
【文檔編號】C12R1/19GK104178470SQ201410213666
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年5月20日 優先權日:2013年5月20日
【發明者】拉賈·努爾·扎莉哈·拉賈·阿卜杜勒·拉赫曼, 阿布·巴卡爾·薩利赫, 馬希拉恩·巴斯裡, 哈菲扎爾·穆赫德·尼扎爾 申請人:馬來西亞博特拉大學