純種野豬鑑定試劑盒的製作方法
2023-12-01 03:30:11
專利名稱：純種野豬鑑定試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種純種野豬鑑定試劑盒。
背景技術：
從上個世紀九十年代開始，全國各地都開展了利用野豬雜交改良現有家豬品種的養殖與育種工作。但因為野豬難以捕獲和養殖，現市場上出現了許多名為純種野豬，其實為野豬與家豬雜交後代的個體，養殖者購買時因缺少檢測設備只能人為從體型外貌、毛色以及生活習性等方面區分，但二者上述特點非常類似根本無法檢測和區分，一旦購買後將其作為父本進口繁殖，其後代會出現明顯的性狀分離，造成巨大的經濟損失。實用新型內容本實用新型的目的是針對上述存在的問題提供一種純種野豬鑑定試劑盒，能夠準確檢測和區分野豬與其他家豬品種。上述的目的通過以下的技術方案實現純種野豬鑑定試劑盒，其組成包括盒體,所述的盒體包括並排的圓口盛樣槽及方口盛樣槽，所述的圓口盛樣槽旁邊有標籤，所述的圓口盛樣槽和所述的方口盛樣槽底部為尖嘴狀，所述的盛樣槽底部有小孔，所述的盒體內部有密閉的樣品反應槽，所述的樣品反應槽底面是傾斜的，所述的樣品反應槽外壁底部有加熱裝置，所述的盛樣槽尖嘴伸入到樣品反應槽內，所述的盒體內有暗箱，所述的暗箱內裝有加樣吸管。所述的純種野豬鑑定試劑盒，所述的圓口盛樣槽順次連接，所述的圓口盛樣槽連接所述的方口盛樣槽，所述的方口盛樣槽連接所述的樣品反應槽，所述的樣品反應槽連接電泳槽，所述的電泳槽連接紫外凝膠成像儀，所述的盒體內有電泳槽，所述的電泳槽內裝有瓊脂糖，所述的方口盛樣槽內裝有引物，所述的圓口盛樣槽為一組，順次盛裝去離子水，內切酶緩衝液，Acc II內切酶，PCR擴增產物。有益效果I.本實用新型採用密閉的樣品反應槽使判斷結果更客觀。帶有紫外凝膠成像儀，使人肉眼即可見酶切片段，達到判定的目的。本實用新型特設了一個加熱裝置，對於去離子水，內切酶緩衝液，Acc II內切酶，PCR擴增產物混合時所需的溫度可有效控制。黑素皮質素受體I基因(MClR)是一個人工馴化基因，與毛色相關，野豬與家豬之間存在著明顯不同的進化方式。可以通過對該基因的檢測，快速、有效的鑑定和區分純種野豬與家豬和野家雜交豬。在DNA模板、引物、4種dNTP和Taq DNA聚合酶存在的條件下，特異擴增位於兩段已知序列之間的DNA區段。每一循環包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應。每一循環的產物作為下一個循環的模板，如此循環30次，介於兩個引物之間的新生DNA片段理論上達到230拷貝(約為109個分子)。用特異設計的PCR引物擴增結束後，由於擴增片段內特定位點的鹼基突變而導致了內切酶酶切位點的改變(從有到無或從無到有)，以至出現多態現象。將擴增產物進行相應的內切酶酶切，酶切後的產物進行電泳，經染色後，在紫外燈照射下，肉眼可見到酶切片段。
附圖I是本產品打開的結構示意圖。附圖2是盒體盛樣槽部剖面圖。
具體實施方式
實施例I :所述的純種野豬鑑定試劑盒，其組成包括盒體(1)，其特徵是所述的盒體包括並排的圓口盛樣槽(2)及方口盛樣槽(3)，所述的圓口盛樣槽旁邊貼有標籤(4)，所述的圓 口盛樣槽和所述的方口盛樣槽底部為尖嘴狀，所述的盛樣槽底部有小孔(5)，所述的盒體內部有密閉的樣品反應槽(6)，所述的樣品反應槽底面是傾斜的，所述的樣品反應槽外壁底部有加熱裝置(7)，所述的盛樣槽尖嘴伸入到樣品反應槽內，所述的盒體內有暗箱(8)，所述的暗箱內裝有加樣吸管(9 )，所述的盒體內有電泳槽(10 )。實施例2 所述的純種野豬鑑定試劑盒，所述的圓口盛樣槽順次連接，所述的圓口盛樣槽最後連接所述的方口盛樣槽，所述的方口盛樣槽連接所述的樣品反應槽，所述的樣品反應槽連接電泳槽，所述的電泳槽連接紫外凝膠成像儀(U)。實施例3 所述的純種野豬鑑定試劑盒，所述的電泳槽內裝有瓊脂糖，所述的方口盛樣槽內裝有引物，所述的圓口盛樣槽分別盛裝去離子水，內切酶緩衝液，Acc II內切酶，PCR擴增產物。擴增以血液或組織樣(一般為耳組織)中提取的DNA為模板，進行PCR擴增，每份總體積25 μ L，取23. 8 μ L PCR反應液(用前混勻)，O. 2 μ L Taq DNA聚合酶，I μ L模板DNA(濃度彡50ng/yL)。在PCR擴增儀上進行以下程序94 V 5 min ；94 V 30 S，58 V30 s，72 V 30 s，30 個循環；72 °C延伸 7 min ；4 °C保存。酶切使用引物I擴增的反應液,取7. 8 μ L去離子水，2 μ L內切酶緩衝液，O. 2 μ LAcc II內切酶，10 uL PCR擴增產物，混勻，37 °C水浴鍋3 h ;使用引物2擴增的反應液，取7.8 μ L去離子水，2 μ L內切酶緩衝液，O. 2 μ L BspH I內切酶，10 μ L PCR擴增產物，混勻，37 °C水浴鍋3 h。結果判定 (I)電泳稱4 g瓊脂糖放於100 mL錐形瓶中，加入I X TAE電泳緩衝液100 mL(取2 mL 50X TAE電泳緩衝液，用雙蒸水稀釋至100 mL)，於微波爐中熔解，再加入2 μ L EB替代物混勻。在電泳槽內放好梳子，倒入瓊脂糖凝膠，待凝固後將酶切產物10 μ L點樣於瓊脂糖凝膠孔中，以150 180 V電壓於IXTAE電泳緩衝液中電泳，紫外燈下觀察結果。(2)基因型判定被檢樣品(引物I)出現380 bp為ΑΑ，出現194 bp、186bp為BB、出現380 bp、194bp、186 bp為AB;同一被檢樣品(引物2)出現694 bp為AA，出現286 bp,408 bp為BB，出現694 bp、286 bp、408 bp 為 AB。[0034](3)結果判定同一個體Acc II / BspH I基因型組合為BB/AA型為純種野豬個體，其餘均含有家豬血統。XTAE 電泳緩衝液242 g Tris溶於800 mL水中，加入 100 mL 的 0. 5 mol/L EDTA(pH 8.0)和57. I mL冰醋酸，定容至1000 mL，高壓滅菌，貯 存於室溫。上樣緩衝液0. 25%溴酚藍、0. 25% 二甲苯青、40% (W/V)蔗糖水溶液PCR反應液17.3 UL去離子水，2. 5 ii L PCR緩衝液，2 U L dNTP，上下遊引物各I UL (# IOu mol),按此比例混合引物I :上遊引物 5 』 - AGCACCCTCTTCATCGCCTACTACC _3 』、下遊引物 5 』 - CTGCGGAAGGCGTAGATGAGG _3』 ；引物 2 :上遊引物 5』 -CGCCAACCAGACCAACCAGACGG-3』，下遊引物5， -TGCCCAGCAGAGGAGGAAGACGC-3，dNTP :dATP、dCTP、dGTP、dTTP 的等摩爾數混合物(各 3. 2 u mol)內切酶AccII 和 BspH IMarker DL2000 DNA Marker,由 DNA片段2000 bp、1000bp、750 bp>500 bp、250 bp以及100 bp組成,共6條帶。
權利要求1.一種純種野豬鑑定試劑盒，其組成包括盒體，其特徵是所述的盒體包括並排的圓口盛樣槽及方口盛樣槽，所述的圓口盛樣槽旁邊有標籤，所述的圓口盛樣槽和所述的方口盛樣槽底部為尖嘴狀，所述的盛樣槽底部有小孔，所述的盒體內部有密閉的樣品反應槽，所述的樣品反應槽底面是傾斜的，所述的樣品反應槽外壁底部有加熱裝置，所述的盛樣槽尖嘴伸入到樣品反應槽內，所述的盒體內有暗箱，所述的暗箱內裝有加樣吸管。
2.根據權利要求I所述的純種野豬鑑定試劑盒，其特徵是所述的圓口盛樣槽順次連接，所述的圓口盛樣槽連接所述的方口盛樣槽，所述的方口盛樣槽連接所述的樣品反應槽，所述的樣品反應槽連接電泳槽，所述的電泳槽連接紫外凝膠成像儀，所述的盒體內有電泳槽，所述的電泳槽內裝有瓊脂糖，所述的方口盛樣槽內裝有引物，所述的圓口盛樣槽為一組，順次盛裝去離子水，內切酶緩衝液，Acc II內切酶，PCR擴增產物。
專利摘要本實用新型涉及一種純種野豬鑑定試劑盒。現市場上出現了許多名為純種野豬，其實為野豬與家豬雜交後代的個體，養殖者購買時因缺少檢測設備。本實用新型組成包括本產品組成包括盒體(1)，盒體包括並排的圓口盛樣槽(2)及方口盛樣槽(3)，圓口盛樣槽旁邊貼有標籤(4)，圓口盛樣槽和方口盛樣槽底部為尖嘴狀，盛樣槽底部有小孔(5)，盒體內部有密閉的樣品反應槽(6)，樣品反應槽底面是傾斜的，樣品反應槽外壁底部有加熱裝置(7)，盛樣槽尖嘴伸入到樣品反應槽內，盒體內有暗箱(8)，暗箱內裝有加樣吸管。本產品用於檢測和區分野豬與其他家豬品種。
文檔編號C12M1/34GK202558866SQ20122007847
公開日2012年11月28日 申請日期2012年3月5日 優先權日2012年3月5日
發明者張冬傑, 劉娣, 汪亮, 王文濤 申請人:黑龍江省農業科學院畜牧研究所