細胞粘附性光控制基材的製作方法

2023-12-02 08:41:46 7

細胞粘附性光控制基材的製作方法
【專利摘要】本發明的目的是在活細胞的狀態下進行解析、區分、培養時，可以更簡便地進行實時操作，可以在使不要細胞從培養細胞除去並純化的同時進行培養，此外，從培養細胞解析所希望的細胞，進行區分，提高該細胞的純度、回收率、生存力。通過使用細胞粘附性光控制基材，從而可以對細胞圖像進行檢測、解析，獲得所希望的細胞的位置信息，所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而包含香豆素基甲基骨架的光解離性基結合解離，細胞粘附性材料脫離，殘留細胞非粘附性材料。此外，基於這樣獲得的位置信息，能夠在活細胞的狀態下進行解析、區分。
【專利說明】細胞粘附性光控制基材
【技術領域】
[0001]本發明涉及再生醫療、幹細胞研究領域，特別是涉及細胞的解析區分、培養技術。【背景技術】
[0002]在再生醫療領域中，進行下述操作:對體細胞中所含的極少的成體幹細胞、前體細胞進行鑑定、離析，對成體幹細胞、前體細胞進行培養並分化誘導而製作體細胞。此外，嘗試將iPS細胞、ES細胞等多能性幹細胞分化誘導成成體幹細胞、體細胞。然而，這些iPS細胞、ES細胞不是均一的，此外，由其分化誘導而得的細胞也不是均一的，產生出各種細胞。此外，多能性幹細胞往往與通常被稱為飼養細胞的細胞共培養，因此有在培養的結果所得的產物中，不僅混入多能性幹細胞、由其分化誘導出的細胞，而且混入飼養細胞的可能性。在供於再生醫療的細胞或組織中，要求作為體細胞的均一性，包含成體幹細胞，而且不含癌細胞、癌幹細胞、iPS細胞、ES細胞等多能性幹細胞、以及飼養細胞。
[0003]這樣，在再生醫療領域中，對細胞進行解析、區分、培養的技術的重要性日益增加。為了區分包含多個種類的細胞群，識別它們的解析技術是必要的。此外，需要由識別出的包含多個種類的細胞群區分成單一種類的細胞。只有可以區分成單一種類的細胞，才能夠解析其分子生物學的性質、細胞生物學的性質。此外，只有可以進行單一種類的細胞的區分、解析，才能夠開發嚴密地控制分化誘導的技術。在研究開發的中途階段，只要可以除去不要的細胞，則可高純度地獲得單一種類的細胞，因此可以達到100%的分化誘導效率和構建等效的實驗體系，對於加速研究開發是極其有效的。
[0004]作為在活細胞的狀態下進行解析的裝置，光學顯微鏡、對進行了螢光標識的細胞進行觀察的螢光顯微鏡、螢光成像裝置等是周知的，但這些裝置不能區分細胞。另一方面，作為在活細胞的狀態下進行區分的裝置，有通過細胞表面的抗原與對磁珠賦與的抗體的抗原抗體反應而區分收集目的的細胞的裝置，但該裝置不能解析細胞，此外，在純度、回收率等方面存在課題。作為區分細胞的裝置，也有雷射顯微切割裝置，但其主要用於從進行了石蠟包埋的組織切片離析死細胞。
[0005]作為在活細胞的狀態下進行解析、區分的裝置，應用了流式細胞光度術的原理的分選裝置是周知的。該裝置是使乘載於鞘流的樣品流中的細胞I個I個地接觸雷射，通過觀察散射光、螢光來對細胞進行解析、識別，基於該信息，使包含一個一個細胞的液滴帶電荷，施加電場而進行區分的裝置。可以通過照射多色的雷射來解析多個螢光標記，但螢光校正、光軸調整、液滴的穩定形成、帶電荷的時機的調整複雜。為了對在培養基材上進行了培養的細胞應用流式細胞光度術，必須暫時從培養基材取出細胞。此外需要將細胞預先分離成各個細胞。如果為此而進行胰蛋白酶處理等，則會對細胞帶來不小破壞。此外由於通過胰蛋白酶處理來分解細胞表面的蛋白質，因此可能會在解析細胞表面抗原之後帶來障礙。進一步存在分選出的細胞由於分選時的衝擊而生存力降低等課題。
[0006]作為在活細胞的狀態下進行解析、區分、培養的技術，有專利文獻I所記載的方法(以下第I現有例)。該技術涉及使用將通過光照射而其物性變化的光響應性材料成膜而成的細胞培養基材，在細胞粘附性表面粘附細胞。通過監測器識別進行了培養的細胞，特定所希望的細胞的位置，對所希望的細胞位置進行光圖案照射，用於將所希望的細胞從培養基材剝離的裝置。這裡記載的「通過光照射而其物性變化的光響應性材料」，可舉出具有通過光照射而結構異構化，其極化率、親水一疏水性變化，從而將細胞從培養基材剝離的功能的材料，特別優選這些物性變化是可逆的。
[0007]作為在細胞培養下能夠進行細胞粘附圖案的形成和尺寸變更的、將細胞固定化了的基板的製成方法，有專利文獻5所記載的方法(以下第2現有例)。該技術的第I形態是，將通過光分解性保護基而保護了末端官能團的化合物在基板上固定化，通過光照射將光分解性保護基的一部分脫離而使末端官能團露出，使細胞吸附於露出的末端官能團。第2形態與第I形態類似，但使細胞粘附抑制物質吸附於光解離性保護基，通過光照射將細胞粘附抑制物質吸附了的光分解性保護基的一部分脫離而使末端官能團露出，使細胞吸附於露出的末端官能團。第3形態與第2形態類似，但使細胞粘附促進物質吸附於露出的末端官能團，使細胞吸附於細胞粘附促進物質。
[0008]第2現有例中的通過光分解性保護基而保護了末端官能團的化合物是，通過光照射而光分解性保護基脫離，末端官能團露出的化合物。光分解性保護基被認為是細胞不吸附、或細胞粘附促進物質不吸附的保護基，作為那樣的保護基的例子，言及了親水性高的保護基、具有帶有氫結合受體的基團的中性化合物。作為細胞粘附抑制物質的具體例，例示了血清白蛋白等。末端官能團被認為是易於吸附細胞的官能團，作為具體例，例示了羧基、氨基等帶電了的官能團。作為細胞粘附促進物質的具體例，例示了纖連蛋白等。
[0009]第2現有例中的任一形態，都為了在固定於基板上的化合物上粘附細胞而需要2~3小時左右的時間。
[0010]現有技術文獻
[0011]專利文獻
[0012]專利文獻1:日本專利第3975266號公報
[0013]專利文獻2:日本專利第3472723號公報
[0014]專利文獻3:日本特開2004 - 170930號公報
[0015]專利文獻4:日本特開2008 - 167695號公報
[0016]專利文獻5:日本特開2006 - 6214號公報
[0017]非專利文獻
[0018]非專利文獻1:石原一彥，生體材料，18 (I)、33 (2000).[0019]非專利文獻2:Y.Arima et al., J.Meter.Chem.，17，4079 (2007).[0020]非專利文獻3:Y.Arima et al., Biomaterials28, 3074 (2007).[0021]非專利文獻4:Μ.N.Yousaf et al.，PNAS98 (11)、5992 (2001).[0022]非專利文獻5:古田壽昭，光學，34 (4)、213 (2005).[0023]非專利文獻6:J.Eahiro et al., Biomacromolecules, 6 (2) >970 (2005).[0024]非專利文獻7:J.Nakanishi et al., Analytical Sciences, 24,67 (2008).
【發明內容】

[0025]發明所要解決的課題[0026]作為上述的第I現有例(日本專利第3975266號公報)所記載的通過光照射而其物性變化的光響應性材料，通過光而可逆地結構變化的材料難以100%保持為2個異構體中的一個，這導致細胞粘附性的選擇性降低。此外，實施例中那樣的通過長波長的光而反應的材料，例如，進行螢光觀察時與激發光反應，粘附性變化，因此不能兼有螢光觀察和粘附性維持。此外，該技術中，未考慮到即使可以將細胞從培養基材剝離，也會剝離細胞間的粘附。因此，存在將培養基材中存在的孤立的細胞或細胞塊整個剝離，而不能將粘附的包含多個種類的細胞的細胞塊區分成單一細胞這樣的課題。
[0027]此外第I現有例的說明書中，用於使細胞粘附於材料的具體條件沒有記載。此外在實施例中使細胞粘附於材料的實驗本身沒有記載。即該技術中並未考慮與細胞粘附有關的具體情況。
[0028]上述的第2現有例(日本特開2006 — 6214號公報)，在第I形態中，光分解性保護基完全不吸附細胞，需要其脫離而露出的末端官能團極其良好地吸附細胞。細胞粘附性象那樣地顯示戲劇性變化的光分解性保護基是未知的，實際上，並未記載與該第I形態對應的實施例。因此存在實施該第I形態是困難的這樣的課題。第2形態中需要使細胞粘附抑制物質吸附於光解離性保護基的工序。此外需要細胞極其良好地吸附於光分解性保護基脫離而露出的末端官能團。細胞粘附性象那樣地極其高的末端官能團是未知的，實際上，也並未記載與該第2形態對應的實施例。因此存在該第2形態的工序非常複雜，實施也困難這樣的課題。第3形態中，需要使細胞粘附抑制物質吸附於光解離性保護基的工序和使細胞粘附促進物質吸附於露出的末端官能團的工序。此外細胞粘附抑制物質由於是僅吸附於光解離性保護基的不穩定的結構，因此在使細胞粘附促進物質吸附時，有根據條件而吸附於光解離性保護基的細胞粘附抑制物質脫附，發生置換成細胞粘附促進物質這樣的目的外的副反應的可能性。如果發生該副反應，則目的外的區域變化為細胞粘附性區域，細胞粘附的選擇性可能會降低。因此存在該第3形態的工序非常複雜，根據條件而細胞粘附的選擇性低這樣的課題。此外在任一形態中，都會為了在固定於基板上的化合物上粘附細胞而花費2~3小時左右的時間。一般而言，本領域技術人員認為為了使細胞粘附於基材而需要該程度的時間。然而在為了解析而對細胞區分、離析的用途中，需要迅速簡便地進行不過是工序的一部分的細胞粘附，不能容許花費2~3小時。換言之，存在現有例的細胞粘附時間過長這樣的課題。
[0029]本發明是鑑於以上的現有技術，而提供用於在活細胞的狀態下進行解析、區分、培養的細胞粘附性光控制基材。
[0030]本發明所要解決的課題是，在活細胞的狀態下進行解析、區分、培養時，可以更簡便地進行實時操作，可以在從培養細胞除去不要細胞並純化的同時進行培養，此外，從培養細胞解析區分所希望的細胞，將該細胞的純度、回收率、生存力提高到以往以上。
[0031]此外本發明所要解決的第2課題是，在活細胞的狀態下進行解析、區分、培養時，確實並且短時間地進行細胞粘附。
[0032]用於解決課題的方法
[0033]本發明中為了解決上述以往技術的課題而採取以下的方法。
[0034]即，本發明的細胞粘附性光控制基材是將細胞粘附性光控制材料在基材上成膜而成的，所述細胞粘附性光控制材料是從基材側順次地在細胞非粘附性材料上介由光解離性基而結合細胞粘附性材料而成的。
[0035]此外，本發明的細胞粘附性光控制基材，通過光照射而光解離性基結合解離，細胞粘附性材料脫離，殘留細胞非粘附性材料。
[0036]此外，本發明的細胞粘附性光控制基材，通過光照射而光解離性基結合解離，被照射後的部分的表面從細胞粘附性材料向細胞非粘附性材料不可逆地變化。
[0037]此外，本發明的細胞粘附性光控制基材，是將細胞結合性光控制材料在基材上成膜而成的，所述細胞結合性光控制材料是從基材側順次地在細胞非粘附性材料上介由光解離性基而結合細胞結合性材料而成的。這裡所謂細胞結合性材料，是通過共價結合等而與細胞牢固地結合的材料，或對動物種特異性的抗體。
[0038]此外，使用了本發明的細胞粘附性光控制基材的細胞的解析區分方法包含以下的工序。
[0039]對細胞粘附性光控制基材接種細胞，進行培養的工序，所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，是將細胞粘附性光控制材料在基材上成膜而成的，所述細胞粘附性光控制材料是從基材側順次地在細胞非粘附性材料上介由光解離性基而結合細胞粘附性材料或細胞結合性材料而成的，或者所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而光解離性基結合解離，細胞粘附性材料脫離，殘留細胞非粘附性材料，或者所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而光解離性基結合解離，被照射後的部分的表面從細胞粘附性材料向細胞非粘附性材料不可逆地變化。
[0040]通過對所希望的細胞區域的第I光照射而將所希望的細胞從基材剝離回收的工序。
[0041]此外，使用了本發明的細胞粘附性光控制基材的細胞的解析區分方法包含以下的工序。
[0042]對細胞粘附性光控制基材進行第I光照射，而設置細胞粘附區域和細胞非粘附區域的工序，所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，是使介由光解離性基而從基材側順次在細胞非粘附性材料上結合有細胞粘附性材料或細胞結合性材料的細胞粘附性光控制材料在基材上成膜而成的，或者所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而光解離性基結合解離，細胞粘附性材料脫離，殘留細胞非粘附性材料，或者所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而光解離性基結合解離，被照射後的部分的表面從細胞粘附性材料向細胞非粘附性材料不可逆地變化。
[0043]此外，使用了本發明的細胞粘附性光控制基材的細胞的解析區分方法包含以下的工序。
[0044]在上述解析區分方法的工序中，在細胞粘附性光控制基材上接種細胞後，在細胞粘附性光控制基材的方向，特別優選為相對於該基材表面垂直地使離心力作用的工序。
[0045]此外，使用了本發明的細胞粘附性光控制基材的細胞的解析區分裝置具備第I光照射單元，所述第I光照射單元用於使細胞粘附性光控制基材與基材上的細胞粘附性光控制材料進行光反應，所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，是將細胞粘附性光控制材料在基材上成膜而成的，所述細胞粘附性光控制材料是從基材側順次地在細胞非粘附性材料上介由光解離性基而結合細胞粘附性材料或結合細胞結合性材料而成的，或者，所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而光解離性基結合解離，細胞粘附性材料脫離，殘留細胞非粘附性材料，或者，所述細胞粘附性光控制基材的特徵在於，通過光照射而光解離性基結合解離，被照射後的部分的表面從細胞粘附性材料向細胞非粘附性材料不可逆地變化。
[0046]本說明書包含作為本申請的優先權的基礎的日本專利申請2011 — 087647號的說明書和/或附圖所記載的內容。
[0047]發明的效果
[0048]在活細胞的狀態下進行解析、區分、培養時，可以更簡便地進行實時操作，可以在從培養細胞除去不要細胞並進行純化的同時進行培養。此外，可以從培養細胞解析區分所希望的細胞，提高該細胞的純度、回收率、生存力。此外可以更確實並且短時間地進行解析。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0049]圖1是顯示對培養中的細胞進行解析，區分所希望的細胞的方法(實施例1、2)的概要的圖。
[0050]圖2是顯示對各個分離出的細胞進行解析，區分所希望的細胞的方法(實施例3、
5、6、7)的概要的圖。
[0051]圖3是顯示對各個分離出的細胞進行解析，區分所希望的細胞的方法(實施例4)的概要的圖。
【具體實施方式】
[0052]以下，顯示用於實施本發明的方式，但本發明不限定於此。
[0053]本發明的一實施方式是，將細胞粘附性光控制材料在基材上成膜而成的細胞粘附性光控制基材，所述細胞粘附性光控制材料是從基材側順次地在細胞非粘附性材料上介由光解離性基而結合細胞粘附性材料而成的。該細胞粘附性光控制材料，通過光照射而光解離性基結合解離，可以使細胞粘附性材料從基材脫離。光結合解離可以是細胞非粘附性材料與光解離性基之間或光解離性基與細胞粘附性材料之間的任一種。通過光照射，在基材上殘留細胞非粘附性材料。光反應了的光解離性基的殘餘部分作為細胞非粘附性基而起作用。通過該不可逆的光解離反應而從細胞粘附性向細胞非粘附性高效率地並且確實地變化，可以使粘附選擇性良好。這裡，細胞粘附性材料也包含通過共價結合等而與細胞牢固地結合的材料、或包含對動物種特異性的抗體等的細胞結合性材料。在本發明中，在稱為細胞粘附性材料的情況下，既包含通過共價結合等而與細胞牢固地結合的材料，也包含與抗體等細胞結合的細胞結合性材料。
[0054]通過使用上述的細胞粘附性光控制基材，可以進行特定的細胞的解析區分。這裡，所謂解析區分，是指對細胞進行解析，與其它細胞區分。
[0055]作為細胞非粘附性材料，可舉出具有與細胞膜類似的結構，具有具生物適應性的磷酸膽鹼基的材料。細胞非粘附性材料是，例如，下述通式(I)所示的具有磷酸膽鹼基的(甲基)丙烯酸酯聚合物。
[0056]
【權利要求】
1.一種細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，通過光照射而包含香豆素基甲基骨架的光解離性基結合解離，細胞粘附性材料脫離，細胞非粘附性材料殘留在基材上。
2.一種細胞粘附性光控制基材，是將細胞粘附性光控制材料在基材上成膜而成的，所述細胞粘附性光控制材料是從基材側順次地在細胞非粘附性材料上介由包含香豆素基甲基骨架的光解離性基而結合細胞粘附性材料而成的。
3.一種細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，通過光照射而包含香豆素基甲基骨架的光解離性基結合解離，被照射後的部分的表面從細胞粘附性材料向細胞非粘附性材料不可逆地變化。
4.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述光解離性基包含下述通式(5)所示的2價的香豆素基甲基骨架，
5.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料包含將通式(4)所示的細胞粘附性基與通式(5)所示的光解離性基在苯骨架的R6的位置或R7的位置、或香豆素基甲基的R9的位置直接或間接地結合而成的結構， -X(4) 式中，X表示選自由羧酸、單或多羧酸烷基、氨基、單或多氨基烷基、醯胺基、單或多醯胺烷基、醯肼基、單或多醯肼基烷基、胺基酸基、多肽基和核酸基所組成的組中的基團，
6.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料包含下述通式(6)所示的光解離性基與細胞粘附性基在苯骨架上介由二價的連接基Rltl結合而成的結構、或下述通式(7)所示的光解離性基與細胞粘附性基在苯骨架上介由二價的連接基R11結合而成的結構、或下述通式(8)所示的光解離性基與細胞粘附性基在香豆素基甲基的位置介由二價的連接基R12結合而成的結構中的任一種，
7.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料包含下述通式(9)所示的光解離性基與細胞粘附性基在香豆素基甲基骨架的R4的位置介由二價的連接基R13結合而成的結構，.......R7 這裡，式中X表示選自由羧酸、單或多羧酸烷基、氨基、單或多氨基烷基、醯胺基、單或多醯胺烷基、醯肼基、單或多醯肼基烷基、胺基酸基、多肽基和核酸基所組成的組中的基團；R4 為 2 價且表示選自由 O、CO、CO2、0C0、OCO2、0C0NH、0C0NR、NHCO2、NH、SO3 和(0Ρ0 (OH) ι ~30P02所組成的組中的基團；R5表不選自由氧、齒基和烷氧基所組成的組中的基團；R6表不選自由氫、羥基、烷氧基和二烷基氨基所組成的組中的基團，或不存在；R7表示氫或滷基，或不存在；R8表示氫或滷基；R9表示氫，或不存在；2價的連接基R13表示(CH2CH2O)m(CH2)m，、或(CH2)m(C2HN3) (CH2)m,的基團，m、m』 為 O ~20 的整數。
8.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料包含:將通式(4)所示的細胞粘附性基與通式(5)所示的光解離性基在苯骨架的R6或R7的位置或香豆素基甲基位的R9的位置、或在R4的位置直接或間接地結合而成的所述結構，直接或間接地與所述細胞非粘附性材料結合而成的結構，
9.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材 料包含下述通式(10)、(11)或(12)的任一通式所示的(甲基)丙烯酸酯聚合物結構，
10.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料包含下述通式(13)、(14)和(15)所示的(甲基)丙烯酸酯聚合物結構，
11.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料包含下述通式⑴或⑵和(10);下述通式⑴或⑵和(11);下述通式(I)或(2)和(12);下述通式(I)或(2)和(13);下述通式(I)或(2)和(14);下述通式⑴或(2)和(15);下述通式(I)、(10)和(2);下述通式(I)、(11)和(2);下述通式(I)、(12)和(2);下述通式(I)、(13)和(2);下述通式(I)、(14)和(2);下述通式(I)、(15)和(2)所示的(甲基)丙烯酸酯的共聚物中的任一種，
12.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料是將側鏈包含烷氧基矽烷的(甲基)丙烯酸酯共聚而成的。
13.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，對於所述細胞粘附性光控制材料，在將下述通式(16)、(17)或(18)所示的烷氧基矽烷在基材上成膜後，通過與下述通式(57)所示的包含細胞粘附性基X的疊氮基化合物的反應，在末端形成細胞粘附性基X，.R+ ^SiiOR3),
14.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性光控制材料為下述通式(24)、(25)、(26)、或(27)所示的烷氧基矽烷，
15.一種所述細胞粘附性光控制材料的中間體材料，其以下述通式(22)和(23)表示，並用於權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，
16.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性材料是，使促進與細胞的粘附的細胞外基質、或與細胞的表面抗原結合的抗體、或用於使該抗體結合的蛋白質結合或粘附於所述細胞粘附性基而得的材料。
17.根據權利要求16所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞外基質為選自由膠原類；包含纖連蛋白、玻連蛋白、層粘連蛋白、巢蛋白、腱生蛋白、血小板反應蛋白、馮維勒布蘭德氏因子、骨橋蛋白和血纖蛋白原的非膠原性糖蛋白類；彈性蛋白類；蛋白聚糖類所組成的組中的材料。
18.根據權利要求16所述的細胞粘附性光控制基材，所述使抗體結合的蛋白質為選自由抗生物素蛋白/生物素、蛋白質A和蛋白質G所組成的組中的材料。
19.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述基材為玻璃制培養容器。
20.根據權利要求1~3的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述細胞粘附性材料包含下述通式(4)所示的細胞粘附性基，式中X包含共價官能團，該共價官能團為具有進行共價結合反應的特性的官能團， -X⑷。
21.根據權利要求20所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述共價官能團為具有相對於氨基、羥基、醛基或酮基進行共價結合反應的特性的官能團。
22.根據權利要求21所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述共價官能團為下述官能團，所述官能團包含羧酸的活性酯基；活化了的羧酸；變形大的三元環官能團；與羥基反應的官能團；或與醛基、酮基反應的官能團。
23.根據權利要求22所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，羧酸的活性酯基包含N —羥基琥珀醯亞胺酯和N —羥基磺基琥珀醯亞胺酯；活化了的羧酸包含羧酸滷化物、羧酸酐和羧酸疊氮基；變形大的三元環官能團包含環氧化物基、氮丙啶基、吖丙啶?基和環鋶儀基;與羥基進行反應的官能團包含對甲苯磺醯基；與醛基、酮基進行反應的官能團包含1，3 —二醇、肼和羥基胺醚。
24.根據權利要求20~23的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述共價官能團為具有相對於作為細胞表面所存在的化合物的構成要素的細胞表面官能團進行共價結合反應的特性的官能團。
25.根據權利要求20~23的任一項所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述共價官能團為相對於細胞外基質、與細胞表面抗原結合的抗體或用於使抗體結合的蛋白質進行共價結合反應的特性的官能團 。
26.根據權利要求16或25所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述抗體是針對包含主要組織相容性基因複合體(MHC)、人白血球型抗原(HLA)、上皮細胞粘附分子(EpCAM)、ρ24 (⑶9)的細胞表面抗原的抗體。
27.根據權利要求26所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述抗體是針對包含作為人MHC類Ia分子的HLA-A、B、C分子、小鼠H-雙分子或CD9分子的動物種特異性的細胞表面抗原的抗體。
28.根據權利要求27所述的細胞粘附性光控制基材，其特徵在於，所述抗體為克隆W6/32、克隆Β9.12.1、克隆ΜΖ3、克隆Μ1/42或克隆hrk29的抗體。
29.一種動物種特異性的細胞粘附性基材，在將細胞粘附性材料與基材結合而成的細胞粘附性基材中，作為所述細胞粘附性材料，使用針對包含作為人MHC類Ia分子的HLA-A、B、C分子、小鼠H-雙分子、CD9分子的動物種特異性的細胞表面抗原的抗體。
30.一種細胞粘附裝置，其特徵在於，在權利要求1~14、16~29的任一項所述的細胞粘附性光控制基材中，通過具備將所述任一基材固定於旋轉體的構件，旋轉所述旋轉體，從而具有在相對於所述任一基材的面大致垂直的方向使離心力作用的功能，並具有通過所述離心力而在所述任一基材的面上使細胞沉降並且或壓接的功能。
31.一種細胞粘附方法，其特徵在於，在權利要求1~14、16~29的任一項所述的細胞粘附性光控制基材中，通過在相對於所述任一基材的面為大致垂直的方向使離心力作用，在所述任一基材的面上使細胞沉降並且或壓接。
32.一種細胞處置方法，其特徵在於，在使用權利要求1~29的任一項所述的細胞粘附性光控制基材對細胞進行處置的工序中，作為緩衝液，使用不含氨基的緩衝液，特別優選使用不含氨基並且包含Ca2+、M g2+的HBSS⑴。
【文檔編號】C12N1/02GK103502425SQ201280017709
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2012年4月11日 優先權日:2011年4月11日
【發明者】古田壽昭, 鈴木商信, 杉山壽, 小澤理, 多田博子 申請人:學校法人東邦大學, 株式會社日立高新技術