具有抗癌及抑制NO釋放活性的新的螺環化合物bulbophyllispiradienone及其衍生物的製作方法
2023-12-03 02:20:06 1
專利名稱：具有抗癌及抑制NO釋放活性的新的螺環化合物bulbophyllispiradienone及其衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及從蘭科石豆蘭屬植物(Bulbophyllum)中提取分離的新化合物bulbophyllispiradienone及其衍生物，這些化合物在體外實驗中對腫瘤細胞示有一定的抑制活性，對巨噬細胞釋放NO也有明顯的抑制活性，提示可能用於防治腫瘤以及防治因NO在體內過度釋放誘發的種種疾病。
背景技術：
生物體中NO由NO合成酶(NOS)調控產生。目前為止已經確定了三種同工酶神經型NOS(又叫nNOS)，血管內皮型NOS(eNOS)和誘導型NOS(iNOS)。通常狀態下，人體中nNOS和eNOS都在正常生理條件下通過調控NO的釋放起到正常的生理作用。iNOS的表達與疾病，尤其是炎症和癌症有著密切的關聯。由iNOS誘發的NO過多的釋放，會非選擇性地對細胞組織造成損傷，引發各種疾病。NO釋放抑制劑可用於治療細胞中由病理濃度的NO誘發或加重的各種疾病[1]。
蘭科石豆蘭屬植物(Bulbophyllum)主要分布於中國南方各省，到目前為止，尚未見到有關從石豆蘭屬植物中提取分離得到bulbophyllispiradienone這類骨架化合物的報導。
谷口直之、鈴木敬一朗，NOの生理作用と疾患，羊土社，2000。
發明內容
式I中的化合物 R1，R2，R3，R4，相互獨立地代表a)氫，b)羥基，c)甲氧基，
R1和R2，或R2和R3，或R3和R4被亞甲二氧基取代並和與其相聯的碳原子形成五元環化合物。
R5，R6相互獨立地代表a)氫，b)羥基，c)甲氧基。
本發明涉及4，5-二羥基-2，3-二氫茚螺3′-甲氧基-4′，5′-亞甲二氧基-3′，5′-二烯-環己-2′-酮，俗名為bulbophyllispiradienone及其取代基不同的新的螺環類化合物。本發明還涉及這些新的螺環類化合物對腫瘤細胞生長的抑制活性以及對巨噬細胞釋放NO的抑制活性，以及它們在防治腫瘤及防治因體內NO過度釋放誘發的神經性疾病，炎性疾病，自體免疫性疾病，心血管疾病等中的應用。
所述疾病可以是腦缺血、缺氧和其他與炎症相關的神經性疾病。如多發性硬化、肌萎縮性側索硬化、帕金森氏病、癲癇、精神分裂症，或者因心血管系統疾病以及自身免疫和/或炎症引起的疾病，如高血壓，膿毒症，類風溼性關節炎，骨關節炎，胰島素依賴性糖尿病，骨盆/腸的炎性疾病，軟膜蛛網膜炎，腎小球性腎炎，急性和慢性肝病，或炎性皮膚病如牛皮癬等。
具體實施方案實施例1新的螺環化合物Bulbophyllispiradienone的具體分離製備方法如下本發明原料來自於中國廣西省，經香港嘉道理農場蕭麗萍博士鑑定為蘭科石豆蘭屬植物密花石豆蘭(Bulbophyllum odoratissimum Lindl.)。
新鮮採集的原料室溫乾燥，粉碎，用10倍量的10％-100％乙醇回流提取2次，合併提取液，減壓回收至幹。該提取物用水分散後，用乙酸乙酯等劑量萃取3次，回收溶劑至幹。將乙酸乙酯提取物進行矽膠柱層析，以氯仿-甲醇(98∶2至97∶3)為洗脫劑，收集含石豆蘭素G的餾分，重結晶即得，收率為十萬分之三。
Bulbophyllispiradienone，白色柱狀結晶(氯仿-甲醇)，mp.171-173℃，[α]D30+9.2°。ESI-MS(positive)給出m/z325[M+Na]+和303[M+H]+。ESI-MS(negative)給出m/z301[M-H]-。通過ESI-MS圖譜的綜合分析，可以確定該化合物的分子量為302。HR-EI-MS給出m/z[M]+302.078，計算值為302.0791，確定分子式為C16H14O6。UV圖譜(CH3OH)λmaxnm239.2，272.0，333.2(logε3.82，3.75，2.72)]顯示了典型苯的紫外吸收。IR中νmaxKBrcm-11670為羰基的吸收峰；1612，1488證明結構中有苯環存在。採用核磁共振儀(400MHz)測定了該化合物的1H-NMR，13C-NMR，DEPT，HMQC，HMBC等，確定了該化合物的碳原子和氫原子歸屬。
Bulbophyllispiradienone的13C(100MHz)和1H(400MHz)核磁共振數據(in MeOD)*No.13C1H1(1』) 63.5s2 40.3t2.50m，2.13m3 29.5t3.16m，2.96m3a 132.4s4 142.9s5 146.0s6 115.2d 6.55d(8.0)7 115.0d 6.24d(8.0)7a 138.2s2』 200.7s3』 129.9s4』 144.0s5』 152.5s6』 107.1d 5.41sOCH360.2q3.75s-O-CH2-O- 103.9t 5.91d(12)*δin ppm，J(in parentheses)in Hz
具體實施例2體外抗癌實驗結果實驗以體外培養的肝癌HepG2細胞為模型，以順鉑為陽性藥，測定了bulbophyllispiradienone體外抗腫瘤的活性，其IC50為31.6μM。
具體實施例3體外抑制NO釋放實驗結果RAW264.7細胞(源於美國ATCC)，調整細胞濃度到1.2×106/mL，以每孔200μL加入於96孔培養板中，5％CO2，37℃，培養2小時。加入LPS(10μg/mL)2μL，IFN-γ(33ng/mL)2μL，樣品DMSO溶液0.4μL，使LPS終濃度為100ng/mL，IFN-γ終濃度為100ng/mL，溶解樣品的DMSO相對於培養基的含量為0.2％。培養16小時。隨後取上清液100μL，加入事先調好的Griess試藥，用酶聯免疫檢測儀在570nm(對照655nm)測定吸光度。由於文獻報導quercetin有較好的NO產生抑制活性，因此選擇quercetin為陽性對照藥，其抑制NO釋放的IC50是26.8μM。
用此方法測定bulbophyllispiradienone抑制NO釋放的IC50為23μM。
權利要求
1.式I的化合物。 R1，R2，R3，R4，相互獨立地代表氫、羥基、甲氧基，或者R1和R2，或R2和R3，或R3和R4被亞甲二氧基取代並和與其相連的碳原子形成五元環化合物。R5，R6相互獨立地代表氫、羥基、甲氧基。
2.如權利要求1所述的化合物，其是4，5-二羥基-2，3-二氫茚螺3′-甲氧基-4′，5′-亞甲二氧基-3′，5′-二烯-環己-2′-酮，俗名為bulbophyllispiradienone。
3.權利要求1-2之一所述的新的螺環化合物對腫瘤細胞的抑制作用，以及作為癌症防治藥物的應用。
4.權利要求1-2之一所述的新的螺環化合物對巨噬細胞釋放NO活性的抑制作用，以及它們用於因NO過度釋放誘發的種種疾病的治療藥物。
5.權利要求1-2之一所述的新的螺環化合物組成的藥物製劑。
全文摘要
本發明涉及具有抑制腫瘤細胞活性及抑制巨噬細胞釋放NO活性的新的螺環類化合物。本發明從蘭科石豆蘭屬植物密花石豆蘭Bulbophyllum odoratissimum Lindl.中分離得到1個新的螺環化合物bulbophyllispiradienone。該化合物在體外可以顯著抑制巨噬細胞中NO的釋放，同時對一些腫瘤細胞也有一定的抑制作用。本發明涉及的這些化合物可考慮用於防治腫瘤以及因NO在體內過度釋放誘發的種種疾病。
文檔編號A61P29/00GK1594311SQ200410027820
公開日2005年3月16日 申請日期2004年6月29日 優先權日2004年6月29日
發明者姚新生, 王乃利, 北中進, 劉岱琳 申請人:深圳中藥及天然藥物研究中心