一種抗三聚氰胺單克隆抗體及檢測三聚氰胺的試劑盒的製作方法

2023-11-30 00:11:46 3

專利名稱：一種抗三聚氰胺單克隆抗體及檢測三聚氰胺的試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，具體涉及抗三聚氰胺單克隆抗體及其應用。
背景技術：
三聚氰胺(Melamine)簡稱三胺，又叫2，4，6_三氨基-1，3，5_三嗪、1，3，5_三嗪-2，4，6-三胺、2，4，6_三氨基脲、蜜胺、三聚氰醯胺或氰脲三醯胺，分子式C3N6H6或 C3N3(NH2)3。三聚氰胺是一種重要的化工原料，廣泛運用於木材、塑料、塗料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫藥等行業。
權利要求
1.一種產生抗三聚氰胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其保藏號為CGMCCNo. 4303，分類命名為三聚氰胺特異性淋巴細胞雜交瘤株B-4B5-F10-B11。
2.一種製備權利要求1所述產生抗三聚氰胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株的方法，其特徵在於包括如下步驟(1)製備6碳三聚氰胺-載體蛋白藕聯物，所述載體蛋白為鑰孔嘁血藍蛋白、牛血清蛋白或卵清蛋白，所述6碳三聚氰胺的結構如下
3.一種由權利要求1所述雜交瘤細胞株分泌的抗三聚氰胺單克隆抗體。
4.一種權利要求3所述雜交瘤細胞株分泌的抗三聚氰胺單克隆抗體的製備方法，包括如下步驟(1)腹水的製備將所述雜交瘤細胞株注入baleb/c雌性小鼠腹腔，5-7後天產生腹水； 取腹水上清；(2)抗三聚氰胺單克隆抗體的純化初步純化所述腹水上清經飽和硫酸胺沉澱，取沉澱溶解後透析，獲得抗三聚氰胺單克隆抗體粗品；Protein G親和層析純化將抗三聚氰胺單克隆抗體粗品經ftOtein G親和層析柱進行純化，收集吸收峰，即為抗三聚氰胺單克隆抗體。
5.一種權利要求3所述抗三聚氰胺單克隆抗體應用於三聚氰胺的定性或定量檢測。
6.一種利用權利要求3所述抗三聚氰胺單克隆抗體檢測三聚氰胺的試劑盒，其特徵在於該試劑盒的組成如下(1)用6碳三聚氰胺-OVA藕聯物的碳酸鹽緩衝液包被過的酶標板；(2)HRP標記的抗三聚氰胺單克隆抗體溶液；(3)TMB顯色劑TMB濃度是0. 3g/L ；(4)終止液濃度為2M的H2SO4；(5)三聚氰胺標準液濃度分別為0,0.5，1. 5,4. 5，13. 5，40· 5μ g/L的三聚氰胺標準液；(6)20倍濃縮洗液濃度為0. 2M，pH為7. 4的PBST。
全文摘要
本發明提供一種抗三聚氰胺單克隆抗體的製備方法及檢測三聚氰胺的試劑盒。將三聚氰胺特異性淋巴細胞雜交瘤細胞株注入小鼠腹腔，取腹水，經飽和硫酸胺獲沉澱，沉澱溶解後透析，最後經Protein G親和層析純化，收集吸收峰而得抗三聚氰胺單克隆抗體。本方法製得的抗三聚氰胺單克隆抗體能夠用於建立快速檢測食品中三聚氰胺殘留的競爭法酶聯免疫試劑盒與膠體金試紙條，滿足大批量樣品的快速檢測需要。
文檔編號C07K16/18GK102168071SQ20101059588
公開日2011年8月31日 申請日期2010年12月20日 優先權日2010年12月20日
發明者劉秀梵, 吳豔濤, 張小榮, 張睿, 李旭輝, 蔣原, 薛峰, 趙紅霞, 陶宏錦, 高海崗 申請人:揚州大學, 江蘇中測檢測服務有限公司, 江蘇出入境檢驗檢疫局動植物與食品檢測中心, 蘇州艾瑞德生物科技有限公司