一種藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法

2023-12-05 22:49:11 2

一種藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法
【專利摘要】本發明公開一種藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法，所述方法為：以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷，取人參皂苷Rg1對照品加甲醇溶解製成對照品溶液製備；繪製標準曲線；將藥物組合物注射液注入固相萃取柱，洗脫，蒸乾，溶解製成供試品溶液；依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rg1的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每1ml含總皂苷以人參皂苷Rg1（C42H72O14）計，不得少於0.30mg。本發明為藥物注射液總皂苷的含量測定方法提供了快速、準確的方法。
【專利說明】一種藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種注射液的含量測定方法，特別涉及本發明藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法。
【背景技術】
[0002]本發明藥物組合物注射液是由黃芪、人參、苦參素3味藥物組成、採用現代提取分離技術精製而成的中藥注射劑，具有益氣扶正，增強機體免疫功能的功效，在臨床上用於原發性肝癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科腫瘤以及各種原因引起的白細胞低下及減少症和慢性B型肝炎的治療。
[0003]紫外--可見分光光度法是根據物質分子對波長為200_760nm這一範圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法；操作簡單、準確度高、重現性好；波長長(頻率小)的光線能量小，波長短(頻率大)的光線能量大；分光光度測量是關於物質分子對不同波長和特定波長處的輻射吸收程度的測量。香草醛-高氯酸-冰醋酸方法利用高氯酸將化學成分的羥基氧化為羧基，增加I個雙鍵結構，再經雙鍵位移，雙分子縮合等反應生成共軛雙鍵系統，又在酸的作用下形成陽碳離子鹽而顯色。

【發明內容】

[0004]本發明目的在於提供一種注射液的含量測定方法。
[0005]本發明目的是通過如下技術方案實現:
[0006]本發明藥物組合物注射液的含量測定方法，包括如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷 含量的方法:
[0007]A.以人參皂苷Rg1測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg10.5-2mg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入3%-7%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.4ml、高氯酸0.6-1.0ml，混勻，50-70°C水浴加熱10-20分鐘，取出，加入冰醋酸3_7ml，混勻，置冰浴冷卻1-2分鐘，以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄
VA)，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸懼水衝洗C_18, 500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次採用水7-13ml，0.5%-2% 乙酸溶液 10-20ml，水 10_20ml，5%-20% 甲醇溶液 7_13ml，75%-85% 甲醇溶液10-20ml，洗脫，取75%-85%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200μ1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rg1 (C42H72O14)計，不得少於 0.30mg ；[0008]B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.9-1.0mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水8_12ml，
0.8%-1.2% 乙酸-水 13-18ml,水 13-18ml, 8%-12% 甲醇-水 8_12ml，75%_85% 甲醇-水13-18ml，洗脫；將75%-85%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、100、150、20(^1^，置於試管中，氮氣吹乾，加入4.5%-5.5%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.3ml，高氯酸0.6-1.0ml混勻，於60°C進行顯色反應12-17min，加入冰醋酸3_7ml，混勻，冰浴冷卻，0.5-1.5min ;以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於0.30mg。
[0009]本發明藥物組合物注射液的含量測定方法，優選如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法: [0010]A.以人參皂苷Rg1測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg1L Omg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200 μ I,置試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混勻，60°C水浴加熱15分鐘，取出，加入冰醋酸5ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘，以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄V A)，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C_18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次採用水10ml，1%乙酸溶液15ml，水15ml，10%甲醇溶液10ml，80%甲醇溶液15ml，洗脫，取80%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200 μ 1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷RgI的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rgi(C42H72O14)計，不得少於 0.30mg ；
[0011]B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.95mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml,注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水10ml，1%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水IOml，80%甲醇-水15ml，洗脫；將80%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、100、150、200yL，置於試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸
0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml，混勻，冰浴冷卻Imin ;以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於0.30mg。[0012]本發明藥物組合物注射液的含量測定方法，優選如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法:
[0013]A.以人參皂苷Rg1測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg10.6mg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200 μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入6%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml、高氯酸0.9ml,混勻，55°C水浴加熱18分鐘，取出，加入冰醋酸4ml，混勻，置冰浴冷卻2分鐘，以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄V A)，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C_18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次採用水8ml，1.8%乙酸溶液12ml，水18ml，6%甲醇溶液12ml，76%甲醇溶液18ml，洗脫，取76%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200μ 1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rgi(C42H72O14)計，不得少於 0.30mg ；
[0014]B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.9mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水9ml，1.1%乙酸-水14ml，水17ml，9%甲醇-水11ml，76%甲醇-水17ml，洗脫；將77%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、100、150、200μ L，置於試管中，氮氣吹乾，加入4.6%的香草醛冰醋酸溶液0.25ml，高氯酸0.7ml混勻，於60°C進行顯色反應16min，加入冰醋酸4ml，混勻，冰浴冷卻，1.2min ；以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於0.30mgo
[0015]本發明藥物組合物注射液的含量測定方法，優選如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法:
[0016]A.以人參皂苷Rg1測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg1L 5mg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200 μ I,置試管中，氮氣吹乾，加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml，混勻，65°C水浴加熱12分鐘，取出，加入冰醋酸6ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘，以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄V A)，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C_18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次採用水12ml，0.6%乙酸溶液18ml，水12ml，15%甲醇溶液8ml，82%甲醇溶液12ml，洗脫，取82%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200μ 1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rg1 (C42H72O14)計，不得少於0.30mg ；
[0017]B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.0mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水Ilml，0.9%乙酸-水17ml,水14ml, 11%甲醇-水9ml, 83%甲醇-水14ml,洗脫；將83%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、100、150、200yL，置於試管中，氮氣吹乾，加入5.2%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml，高氯酸0.9ml混勻，於60°C進行顯色反應13min，加入冰醋酸6ml，混勻，冰浴冷卻，0.6min ；以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於
0.30mgo
[0018]上述本發明藥物組合物注射液的原料藥組成為:黃芪25?35重量份、人參8?12重量份、苦參素0.5?1.5重量份；本發明藥物組合物注射液的製備方法為:以上三味藥，人參用60?80%的乙醇，回流提取I?3次，每次I?2小時，合併提取液，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10?1.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮I?3次，每次I?3小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10?1.20的清膏，與人參清膏合併，加乙醇使含醇量達75%，用氫氧化鈉調PH值至6?7，靜置10?18小時，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10?1.15的清膏；再加乙醇使含醇量達85%，用氫氧化鈉調值PH至6?7，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味,加注射用水到40體積份,用氫氧化鈉調PH值至6?7，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調PH值至6?7，加活性炭，攪勻，煮沸15分鐘，濾過，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調PH值至6?7，100?120°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭後的藥液合併，混勻，加注射用水至規定量，濾過，灌裝，即得。
[0019]上述本發明藥物組合物注射液的原料藥組成為:黃芪30重量份、人參10重量份、苦參素I重量份；本發明藥物組合物注射液的製備方法為:以上三味藥，人參用75%的乙醇，回流提取3次，每次2小時，合併提取液，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10?1.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮2次，每次2小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為650C 1.10?1.20的清膏，與人參清膏合併，加乙醇使含醇量達75%，用氫氧化鈉調PH值至6?7，靜置12小時，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10?1.15的清膏；再加乙醇使含醇量達85%，用氫氧化鈉調值PH至6?7，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加注射用水到40體積份，用氫氧化鈉調PH值至6?7，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾；用氫氧化鈉調PH值至6?7，加活性炭，攪勻，煮沸15分鐘，濾過，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調PH值至6?7，100°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭後的藥液合併，混勻，加注射用水至規定量，濾過，灌裝，即得。[0020]上述重量份與體積份的關係為克與暈升的關係。
[0021]與現有技術相比，本發明具有以下有益效果:
[0022]本發明藥物組合物注射液含量測定方法，更加明確了產品的有效成分及其含量測定方法，能更好的控制產品質量，保證產品更安全、有效。實驗結果表明該方法線性關係良好，精密度、穩定性、重複性良好。
[0023]附圖:
[0024]圖1為檢測波長；
[0025]圖2為Rg1標準曲線圖；
[0026]圖3為黃芪甲苷標準曲線圖。
[0027]下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明；本發明實驗例中藥物組合物注射液均由實施例1方法製備。
[0028]實驗例I本發明藥物注射液測定實驗
[0029]I儀器與藥品
[0030]日立U-3310紫外可見分光光度計
[0031]標準品:人參皂苷Rg1 (含量大於98%)，超純水，甲醇為色譜純，高氯酸，其他試劑為分析純。
[0032]2方法與結果
[0033]2.1溶液製備
[0034]2.1.1對照品溶液製備
[0035]取人參皂苷Rgl對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg1L Omg的溶液，搖勻，即得。
[0036]2.1.2供試品溶液
[0037]精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱(C_18，500mg。活化步驟:使用前先用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗)，依次採用水10ml，1%乙酸溶液15ml，水15ml，10%甲醇溶液10ml，80%甲醇溶液15ml，洗脫。取80%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液。
[0038]2.2本發明藥物注射液測定
[0039]2.2.1檢測波長的確立
[0040]吸取對照品溶液適量，置試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混勻，60°C水浴加熱15分鐘，取出，加入冰醋酸5ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘。以空白溶液作參比，顯色體系在400?700nm波長範圍內掃描，確定最大吸收波長為552nm (見附圖1)。
[0041]2.2.2本發明藥物注射液測定
[0042]精密量取供試品溶液200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混勻，60°C水浴加熱15分鐘，取出，加入冰醋酸5ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘。以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄
VA)，在552nm波長處測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得。
[0043]實驗例2線性關係考察[0044]精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混勻，60°C水浴加熱15分鐘，取出，加入冰醋酸5ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘。以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版一部附錄V A)，在552nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rg1含量為橫坐標，繪製標準曲線為y=4.4231x-0.0286，在(29.7 μ g-198 μ g)範圍內，與吸光度具有良好的線性關係(r=0.9996)(見附圖2)。
[0045]實驗例3精密度實驗
[0046]取「2.1.1」項下的對照品溶液適量，氮氣吹乾，在上述條件下測定吸光度，連續測定6次，結果見表1。
[0047]表1精密度結果
[0048]
【權利要求】
1.一種藥物組合物注射液的含量測定方法，其特徵在於該方法包括如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法: A.以人參皂苷1?&測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg10.5-2mg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入3%-7%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.4ml、高氯酸0.6-1.0ml，混勻，50-70°C水浴加熱10-20分鐘，取出，加入冰醋酸3-7ml，混勻，置冰浴冷卻1_2分鐘，以相應的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml，注入固相萃取柱，依次採用水7-13ml，0.5%-2%乙酸溶液10_20ml，水10_20ml，5%_20%甲醇溶液7-13ml，75%-85%甲醇溶液10_20ml，洗脫，取75%_85%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200 μ 1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷 Rg1C42H72O14 計，不得少於 0.30mg ； B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.9-1.0mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水8_12ml，.0.8%-1.2% 乙酸-水 13-18ml,水 13-18ml, 8%-12% 甲醇-水 8_12ml，75%_85% 甲醇-水13-18ml，洗脫；將75%-85%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、100、150、20(^1^，置於試管中，氮氣吹乾，加入4.5%-5.5%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.3ml，高氯酸0.6-1.0ml混勻，於60°C進行顯色反應12-17min，加入冰醋酸3_7ml，混勻，冰浴冷卻，0.5-1.5min ;以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於0.30mg ； 藥物組合物注射液由如下方法製成:黃苗25~35重量份、人參8~12重量份、苦參素0.5~1.5重量份；以上三味藥，人參用60~80%的乙醇，回流提取I~3次，每次I~2小時，合併提取液，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10~1.20的清膏，備用；黃芪加水煎煮I~3次，每次I~3小時，濾過，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10~1.20的清膏，與人參清膏合併，加乙醇使含醇量達75%，用氫氧化鈉調PH值至6~7，靜置10~18小時，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為65°C 1.10~1.15的清膏；再加乙醇使含醇量達85%，用氫氧化鈉調值PH至6~7，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加注射用水到40體積份,用氫氧化鈉調PH值至6~7,100°C滅菌30分鐘,冷藏,抽濾；用氫氧化鈉調PH值至6~7，加活性炭，攪勻，煮沸15分鐘，濾過，濾液備用；另取苦參素溶解，用稀鹽酸調PH值至6~7，100~120°C滅菌30分鐘，冷藏，抽濾，與脫炭後的藥液合併，混勻，加注射用水至規定量，濾過，灌裝，即得。
2.如權利要求1所述的藥物組合物注射液的含量測定方法，其特徵在於該方法包括如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法: A.以人參皂苷1?&測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg1L Omg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，混勻，60°C水浴加熱15分鐘，取出，加入冰醋酸5ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘，以相應的試劑作空白，照中國藥典2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱，依次採用水10ml，1%乙酸溶液15ml，水15ml，10%甲醇溶液10ml，80%甲醇溶液15ml，洗脫，取80%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200μ1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rg1C42H72O14計，不得少於.0.30mg ； B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.95mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水10ml，1%乙酸-水15ml，水15ml，10%甲醇-水10ml，80%甲醇-水15ml，洗脫；將80%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、100、150、200yL，置於試管中，氮氣吹乾，加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml混勻，於60°C進行顯色反應15min，加入冰醋酸5ml，混勻，冰浴冷卻Imin ；以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標， 繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於0.30mg。
3.如權利要求1所述的藥物組合物注射液的含量測定方法，其特徵在於該方法包括如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法: A.以人參皂苷1?&測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg10.6mg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入6%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml、高氯酸0.9ml，混勻，55°C水浴加熱18分鐘，取出，加入冰醋酸4ml，混勻，置冰浴冷卻2分鐘，以相應的試劑作空白，照中國藥典2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱，依次採用水8ml，1.8%乙酸溶液12ml，水18ml，6%甲醇溶液12ml，76%甲醇溶液18ml，洗脫，取76%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200μ 1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rg1C42H72O14計，不得少於0.30mg ； B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成0.9mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水9ml，1.1%乙酸-水14ml，水17ml，9%甲醇-水11ml，76%甲醇-水17ml，洗脫；將77%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、.100,150,200 μ L，置於試管中，氮氣吹乾，加入4.6%的香草醛冰醋酸溶液0.25ml，高氯酸0.7ml混勻，於60°C進行顯色反應16min，加入冰醋酸4ml，混勻，冰浴冷卻，1.2min ；以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於0.30mgo
4.如權利要求1所述的藥物組合物注射液的含量測定方法，其特徵在於該方法包括如下以人參皂苷Rg1和/或黃芪甲苷測定注射液總皂苷含量的方法: A.以人參皂苷1?&測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:對照品溶液製備，取人參皂苷Rg1對照品，精密稱定，加甲醇溶解製成每Iml含人參皂苷Rg1L 5mg的溶液，搖勻，即得；標準曲線的製備，精密量取對照品溶液30μ 1、50μ 1、100μ 1、150μ 1、200μ 1，置試管中，氮氣吹乾，加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml，混勻，65°C水浴加熱12分鐘，取出，加入冰醋酸6ml，混勻，置冰浴冷卻I分鐘，以相應的試劑作空白，照中國藥典2010年版一部附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，人參皂苷Rgl含量為橫坐標，繪製標準曲線；供試品溶液製備，用無水甲醇5ml衝洗、再用5ml蒸餾水衝洗C-18，500mg固相萃取柱，精密量取本發明藥物組合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱，依次採用水12ml，0.6%乙酸溶液18ml，水12ml，15%甲醇溶液8ml，82%甲醇溶液12ml，洗脫，取82%甲醇洗脫部分的溶液水浴蒸乾，用甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；測定法，精密量取供試品溶液200μ 1，置試管中，照標準曲線製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rgl的濃度，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以人參皂苷Rg1C42H72O14計，不得少於0.30mg ； B.以黃芪甲苷測定藥物組合物注射液總皂苷的含量測定方法為:精密稱取黃芪甲苷標準品，置於容量瓶中，甲醇溶解並定容，配製成1.0mg/ml的黃芪甲苷儲備溶液；精密量取藥物組合物注射液2.5ml，注入C-18，500mg固相萃取柱，依次採用水11ml，0.9%乙酸-水17ml,水14ml, 11%甲醇-水9ml, 83%甲醇-水14ml,洗脫；將83%甲醇-水洗脫部分水浴蒸乾，取甲醇溶解，定容於2ml量瓶中，製成供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液30、50、.100、150、200yL，置於試管中，氮氣吹乾，加入5.2%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml，高氯酸0.9ml混勻，於60°C進行顯色反應13min，加入冰醋酸6ml，混勻，冰浴冷卻，0.6min ；以相應試劑作空白，按照附錄V A紫外-可見分光光度法，在552nm波長處測定吸光度；以吸光度為縱坐標，總皂苷含量為橫坐標，繪製標準曲線；分別吸取供試品溶液200 μ L，置於試管中，按照標準曲線的製備項下的方法，自「氮氣吹乾」起，依法測定吸光度；代入標準曲線方程，計算，即得；藥物組合物注射液每Iml含總皂苷以黃芪甲苷C41H68O14計，不得少於.0.30mgo
【文檔編號】G01N1/34GK103575667SQ201210256952
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月24日 優先權日:2012年7月24日
【發明者】段宏泉, 翁紅, 米廣明, 張子安, 唐雪松, 鐵芳 申請人:長白山製藥股份有限公司