一種嗜硫性磁性複合微球的製備方法和用此複合微球分離免疫球蛋白g的方法

2023-05-01 08:39:21

專利名稱：一種嗜硫性磁性複合微球的製備方法和用此複合微球分離免疫球蛋白g的方法
一種嗜硫性磁性複合微球的製備方法和用此複合微球分離免疫球蛋白G的方法技術領域本專利涉及一種嗜疏性磁性複合微球的製備方法和一種使用嗜硫性磁 性複合微球分離免疫球蛋白G ( IgG)的方法。背景4支術納米技術的興起，為生物材料的研究和製備開拓了一片嶄新的領域。磁 性微球技術具備的高效、快速、高靈敏度、工藝簡單的特點，作為一種極 具潛力的檢測、分離手段在生物分離、生物檢測方面得到了廣泛的應用。 納米磁球可檢測到1(T18M的濃度範圍，遠高於普通色譜技術的極限檢測濃度 (10,)。挪威Dynal公司已開發了 Dynabeads系列商品化產品，已經成為 生物學領域中重要的檢測工具，但其粒徑較大，主要使用50nm以上的磁 性微球，而且其主要採用生物配基作為功能化配基。但生物配基易於酶解， 容易洩露，成較高，使用和存儲條件比較苛刻，導致磁性微球的功能化比 較困難，因此，選擇恰當的配基成為磁性微球技術的關鍵環節。免疫球蛋白G是血清中的主要抗體，不僅其自身可以中和、抑制病毒和 毒素，還可以特異性的識別抗原，並激活補體或通過親細胞作用，有效抵 抗病原的侵擾，對於維持人體內免疫環境的平衡，保證臟器的正常生理功 能等方面都有重要的意義。在蛋白質分離領域，T凝膠以其高選擇性，高再生性、高穩定性的分離 特性引起了各國學者廣泛關注。T凝膠中的嗜硫基團是產生如此高性能的核 心所在，在擔體上固載嗜硫基團，可特異性親和免疫球蛋白G，從而實現球 蛋白的分離，但分離時間較長，成本較高，特別利用T凝膠分離時，需要 在高鹽濃度的緩沖液環境，導致免疫球蛋白G容易產生沉澱，生物活性損 失較大。而且利用色i普技術，設備複雜，步驟繁瑣，樣品處理量較少，導 致最終產品成本較高。因此，開發一種操作簡易的高活性、高純度免疫球蛋白G分離方法，成為現代分子免疫學的 一個重要方向。 發明內容本發明的目的是提供一種可以用於在血清中直接分離免疫球蛋白G的 嗜硫性磁性複合微球的製造方法。本發明的另 一 目的是提供一種使用所述嗜硫性磁性複合微球分離免疫 球蛋白G的方法。本發明提供了 一種嗜硫性磁性複合微球的製備方法1)在FeCh和FeCh反應溶液，90。C時加入氨水，再加入酒石酸鈉或油 酸作為表面活性劑,得到粒徑小於20nm的FeA;2 )加入二乙烯基苯單體對Fe304分子進行包裹，再加入乙酸乙烯酯單體 進行二次包裹，然後在6(TC下聚合44h;3)將得到的磁球用Na2S04破乳、在磁場作用下實現分離；4 )將分離得到的磁球進行醇解反應，向磁球加入HC1溶液酸化24h;5 )把二乙烯基碸NaOH溶液加入上述納米磁球的化2(:03溶液中進行碸化 反應；6) 取已碸化納米磁球，在NaOH溶液中加入含硫分子反應得到；7) 抽除上清夜後，用蒸餾水反覆洗滌磁球至中性後，用MFeB永磁體 分離磁球得到。本發明提供了 一種嗜硫性磁性複合微球製備方法，具體步驟如下1) 將FeCh完全溶解於水中，加入FeCh, 9(TC時加入氨水，油^應， 全程氮氣保護；冷卻至室溫後，用蒸餾水不斷清洗至中性，用環己烷配置 成磁流體；2) 將磁流體加入十六烷中，再將此溶液加入表面活性劑的水溶液中， 超聲波作用下，形成細乳液，通入氮氣，在氮氣保護下，使環己烷完全蒸發；3) 將二乙烯基苯加入十六烷中，完全溶解後，將此溶液加入0. 25%表 面活性劑的水溶液，超聲波作用下，形成細乳液；4) 乙酸乙烯酯加入0. 06%表面活性劑的水溶液溶解，超聲波作用下， 形成細乳液；5) 將二乙烯基苯細乳液和磁流體細乳液混合後，再加入乙酸乙烯酯細 乳液，而後加入過氧化硫酸鉀，60。C時引發聚合，反應44h，全程氮氣保護；6) 把得到的乳液倒入燒杯中，加入4倍的水，並加入Na2S04進行破乳， 在磁場作用下實現分離，不斷抽除上清夜，並有蒸餾水反覆清洗至中性；7) 把磁球加入10y。NaOH/乙醇溶液進行醇解反應後，水洗至中性，在外 磁場作用下，實現;茲分離，抽除清夜；8) 向磁球加入0. 5M HC1溶液進行酸化24h後，磁分離，用蒸餾水清 洗至中性；9) 取納米磁球加入0. 5MNa2C03溶液，調pH值為11-13;另取二乙烯基 碸加入lMNaOH溶液，搖動混勻，調pH值為13-14;把二乙烯基碸NaOH溶 液加入上述納米f茲球Na2C03溶液中反應3h,充分水洗後用0. 5MNa2C03溶液 保護；10) 取所述分散在0. 5MNa2C03溶液中的已碸化納米》茲球，調pH為11. 4; 另取含硫分子溶於lMNaOH溶液，調pH值為13. 5，加入所述已規z化納米石茲 球Na2C03溶液，反應24h;11) 抽除上清夜後，用蒸餾水反覆洗滌磁球至中性後，用NdFeB永磁 體分離磁球得到。所述表面活性劑可以是十二烷基磺酸鈉，十二烷基苯磺酸鈉。所述含硫分子可以是脂肪族含硫分子或雜環類含硫分子的 一種或幾種。所述含硫分子優選為巰基乙醇、巰基丁醇、巰基煙酸、巰基嘧咬、巰 基。米哇或統^基p比。定中的一種或幾種。 所述含硫分子更優選為巰基煙酸。本發明進一步提供了一種使用嗜硫性磁性複合微球分離免疫球蛋白G 的方法，取所述嗜硫性磁性複合微球加入磷酸鹽緩衝液中，充分分散後加 入血清吸附，吸附液經洗滌後加入解吸附液，在》茲場作用下分離得到免疫 球蛋白G。所述解吸附劑可以是鹼金屬氫氧化物的水溶液或鹼金屬氫氧化物/氯 化鈉溶液。所述解吸附劑可以是NaOH、 NaOH/NaCl溶液。所述解吸附液的PH值範圍為12. 5-13. 1。所述磷酸緩衝液的PH值範圍為6. 0-7, 0。 本發明採用自由基共聚合技術製備高磁響應性、超順》茲性的微球，選擇 性設計合成納米^ 茲球的表面層結構，偶聯適當的嗜石克性配基，實現納米;茲 性微球對免疫球蛋白G的特異性識別和親和；優化最佳分離條件，通過磁 分離的手段，直接在血清中高效、批量製備高純度、高活性的免疫球蛋白G。在製備超順磁的納米磁球過程中，必須保證納米Fe^的粒徑小於臨界 值(20-30nm)，否則會引起剩磁現象，導致納米磁球本身帶磁，容易相互 團聚，極大的影響了磁性微球的磁分離效果。本發明採用共沉澱法製備相 應的順磁粒子，在製備過程中，加入酒石酸鈉、油酸等調控Fe304微粒的粒 徑尺寸小於20nm,並在Fe304粒子熟化階段，加入表面活性劑，實現磁粒子 的表面修飾，保證納米顆粒的穩定分散，避免團聚，製備親油性、超順磁 性的/f茲流體。較高的磁含量是納米微球產生較高磁相應強度的基礎，針對目前磁性 微球磁含量較低的問題，以及血清純化過程中，磁性微球應無毒、無洩漏 的問題，我們採用細乳液聚合技術製備高磁含量，表面潔淨的納米磁球。 首先在將親油性的磁流體分散在環己烷中，在超聲波作用下充分分散，進 一步在十二烷基磺酸鈉的水溶液中形成磁流體細乳液。二乙基烯苯和乙酸 乙烯酯兩種聚合單體，分別利用超聲波的分散作用，在十二烷基磺酸鈉的 水溶液中形成二乙基烯苯和乙酸乙烯酯的細乳液，並且控制單體液滴中憎 水劑的濃度遠小於磁流體中憎水劑的濃度。將以上三種細乳液逐次混合(磁 流體細乳液先與二乙基烯苯細乳液混合，最後加入乙酸乙烯酯細乳液，使 三種細乳液混合均勻)，利用單體和^f茲流體中憎水劑的濃度差，實現了對 Fe304微粒的充分包裹，使Fe30,納米微粒外包覆聚二乙烯基苯分子層，其外 再包覆聚乙酸乙烯酯分子層，同時也極大的提高了微球的磁含量，磁含量 高達64%,而且保證具有順磁特性。利用過硫酸鉀引發以上的單體聚合， 在6(TC聚合44小時，可製得相應的聚合物複合微球。磁球表面的活性官能團，是實現進一步修飾的基礎，因此選擇加入乙 酸乙烯酯，利用共聚合技術在磁球表面層引入活性官能團-0C0CH3，利用醇 解反應，在磁球表面產生豐富的羥基，保證納米磁球表面活化後，具有較小的非特異性吸附。得到的磁性微球，用鹽酸溶液浸泡24h,除去未包裹的 Fe304粒子，形成純淨的磁性微球。為了保證磁性微球的充分分散，將磁性 微球分散在蒸餾水中，形成懸浮液。在NaOH溶液中(pH>13),加入磁性復 合微球和二乙烯基碸，反應3h後，得到活化的磁性微球，然後再加入含硫 分子，常溫反應24h，使磁球的聚乙酸乙烯酯分子層醇解後與含硫分子的嗜 疏基團偶聯。利用NdFeB永磁體分離磁球，抽除上清夜後，用蒸餾水反覆 洗滌》茲球至中性，最後利用NdFeB 7Ja茲體分離磁球後，將未反應的含闢u分 子洗淨後，得到嗜硫性磁性複合微球。由於含硫分子化學性質穩定，重複使用性好，而且成本較低，在分離 批量球蛋白工藝中非常合適使用。含硫分子可選擇脂肪族含硫分子和雜環 類含硫分子。脂肪族含硫分子結構簡單，如巰基乙醇，巰基丁醇等，吸附 免疫球蛋白G的容量較大。雜環類含硫分子包括巰基煙酸，巰基嘧啶，巰 基咪唑等，結構複雜，吸附量較小，但識別球蛋白的特異性程度很高，分 離球蛋白純度很高，而且對離子溶液依賴性較小，有利於保持抗體較高的 生物活性。本發明中所述嗜疏性磁性複合微球可以直接從血清/磷酸鹽緩衝溶液 中分離免疫球蛋白G，所需設備簡單，分離條件溫和，產品純度高，是批量 分離免疫球蛋白G的有效方法。適宜的吸附液PH範圍6.0-7.0。解吸附 液的PH範圍12.5-13.1。所分離出的免疫球蛋白G純度超過95%以上， 生物活性高於99%。
具體實施方式
下述實施例只是為了更好地說明本發明，但本發明的保護範圍不限於此。實施例1. i茲流體的製備將48. 6g FeCl3 6H20完全溶解於400ml水中，保持攪拌速度不變 (300RPM),在溶液中通入氮氣lh後，加入27. 84 g FeCl2 4H20,繼續攪 拌lh後，放入9(TC的水浴中，迅速加入120ml氨水，8g油酸，反應4小 時，全程氮氣保護。冷卻至室溫後，用蒸餾水不斷清洗至中性，用環己烷配置成溶液(固含量， 一般為50-80ml環己烷，10-15% )。2. 磁流體的分散取25ml》茲流體加入50ml的錐形瓶中，再加入3g十六烷，在超聲波作 用下MlOmin，使其均勻分散，沒有沉澱；另在500ml的三口燒瓶中，用 240ml的水溶解7g十二烷基磺酸鈉(SDS),超聲10min,加速溶解。之後， 把磁流體倒入三口燒瓶中，通氮氣攪拌2小時，在室溫中超聲20min。再放 入7(TC水浴中，在氮氣保護下，直至溫度上升到8(TC後，計時2小時，使 環己烷完全蒸發，整個過程應該不斷攪拌(固含量， 一般為50-80ml環己 烷，10-15%)。取出，冷卻至室溫。3. 單體細乳液的製備I)稱取31. 2g的二乙烯基苯(DVB)單體於錐形瓶中，加入1. 20g十 六烷，在20。C超聲5min，完全溶解；往三口頸瓶中，加入120g 0. 25 %的十 二烷基磺酸鈉(SDS )水溶液，把二乙烯基苯單體加入三口頸瓶中，攪拌1 小時，在20。C中超聲5min。II )稱取5. 16g的乙酸乙烯酯單體於錐形瓶中；往三口燒瓶中，加入100g 0. 06。/。十二烷基磺酸鈉(SDS )水溶液，把乙酸乙烯酯單體加入三口燒瓶中， 攪拌1小時，在2(TC超聲5min。4. 細乳液聚合將二乙烯基苯(DVB)細乳液和磁流體乳液混合，2(TC超聲10min。室 溫攪拌lh,在20。C超聲5min,之後，加入乙酸乙烯酯(VAc)細乳液，在 20。C超聲5min,攪拌lh,在2(TC超聲攪拌10min，先在60。C水浴中，之後 加入過氧化硫酸鉀(其質量為DVB和VAc的總質量的0. 5 % ),聚合44h， 然後升溫到8(TC,繼續反應4h，全程氮氣保護。5. 分離把以上反應得到的乳液倒入燒杯中，加入4倍的水，並加入20gNa2SO4 進行破乳，在磁場作用下，實現分離，不斷抽除上清夜，並有蒸餾水反覆 清洗，至中性。分離完後，將磁性微球倒進三角瓶中備用。6. 醇解和酸化把200ml/f茲球倒入三口燒瓶，加入600ml 10%NaOH/乙醇溶液，開動攪 拌器， 一端裝上冷凝裝置，先通N2半小時，移入80。C的水浴中，進行醇解反應5h。反應完全後，水洗至中性，在外磁場作用下(NdFeB的永磁體)， 實現磁分離，抽除清夜，磁球留在三口瓶中。在三口頸瓶，加入200ml 0. 5M 的HC1溶液，常溫連續攪拌反應24h。酸化完成後，進行磁分離，用蒸餾 水清洗至中性。7. 納米石茲J求的表面^^飾取固含量為2. 34。/。的納米磁球10ml於三口燒瓶中，加入10ml 0. 5MNa2C03 溶液，調pH值為11-13;另取lml的二乙烯基石風(Divinylsulfone, DVS ) 加入0. 5ml的1M NaOH溶液，搖動混勻，調pH值為13-14。把DVS的NaOH 溶液加入上述三口燒並瓦中，室溫下攪拌3h。反應完後，充分水洗，然後再 用10ml 0. 5MNa2C03溶液保護。取15ml所述已石風化的納米i茲球(^t在0. 5MNa2C03溶液，pH為11. 4 ) 加入三口燒瓶中；另取O. 5g 2-巰基煙酸溶於20mllM NaOH溶液，調pH值 為13.5,之後，倒入三口燒瓶中，常溫攪拌24小時。抽除上清夜後，用蒸 餾水反覆洗滌磁球至中性，最後利用NdFeB永磁體分離磁球後，得到嗜硫 性磁性複合微球，與蒸餾水配成10%的懸浮液。8. 嗜硫性磁性複合微球的檢測I)未包裹Fe30J茲性微粒的檢測取0. 5g分離出的嗜闢^性石茲性複合微球，用50ml 0. 5M的HC1溶液浸泡 2h，通過磁分離後，利用原子發射光譜，檢測上清液中是否存在Fe"離子。 如果存在Fe3+離子，需要繼續酸化，使未包覆的Fe3(U效粒充分溶解在鹽酸 溶液中，除去未包覆的Fe304微粒。經檢測，經過酸化處理後，未包覆的FeA微粒的含量為0。II )磁含量的檢測分離出的嗜硫性磁性複合微球，經真空烘箱乾燥後，得到粉末狀磁性 複合微球，通過熱失重法，檢測其磁含量，利用本方法製備的磁性複合微 球的磁含量高於為40% (wt% )。III )飽和磁強度的檢測利用振動樣品磁強計，檢測乾燥的磁性複合微球的飽和磁響應程度及 其順磁性。本發明製備的磁性複合微球的飽和磁響應程度可達到 32. 3emu/g。IV)嗜硫性磁性複合微球的濃度檢測通過元素分析儀，直接檢測樣品中氮含量，再轉換為嗜疏性配基(與 含硫分子偶合的微球)含量。本發明得到的嗜硫性配基(與含疏分子偶合的微球)在磁性複合微球中的含量為0. 232 mmol/g。 試驗例1吸附過程取2g嗜硫性磁性複合微球，加入100ml磷酸鹽緩沖液 (PH=7. 0)作為吸附液，通過超聲波作用，充分分散後，加入10ml血清， 以150r/min的速度振蕩30min。洗滌過程首先在外^F茲場作用下，分離以上吸附溶液中的嗜^琉性^磁性 複合微球，抽除清液，再加入200ml吸附液，以150r/min的速度振蕩15min， 磁分離出嗜硫性磁性複合微球，抽除上清液。重複以上的步驟，洗滌3次。解吸附作用利用磁場作用，把洗塗完的嗜硫性磁性複合微球分離出 來，以lOmM的氫氧化鈉溶液(pH= 13. 1 )作為解吸附液，加入10ml解吸 附液，然後以150r/min的速度振蕩30min完成解吸附作用。進一步通過f茲 場分離作用，回收嗜硫性磁性複合微球，而清液中含有純淨的免疫球蛋白。以上分離過程都在(TC下梯:作。清液在室溫下用二次蒸餾水透析4h，再經冷凍乾燥後，得到純淨的免 疫球蛋白粉末。本試驗通過凝膠色譜，利用shodex公司的血清專用的凝膠 柱，KW-803凝膠柱分析產品純度；利用浙江伊利康生物技術有限公司生產 的免疫球蛋白G檢測試劑盒檢測免疫球蛋白的生物活性。檢測結果在凝 膠色譜中，產品中僅僅在12. 8ndn處，出現一個單峰，表明免疫球蛋白的 純度較高，純度超過95%以上；免疫球蛋白的生物活性高於99%。 試驗例2吸附過程取1.5g嗜硫性磁性複合微球，加入100ml磷酸鹽緩衝液 (PH=6. 0)作為吸附液，通過超聲波作用，充分分散後，加入10ml血清， 以150r/min的速度振蕩30min。洗滌過程首先在外^茲場作用下，分離以上吸附溶液中的嗜碌^性石茲性 複合微球，抽除清液，再加入200ml吸附液，以150r/min的速度振蕩15min, 磁分離出嗜硫性磁性複合微球，抽除上清液。重複以上的步驟，洗滌3次。解吸附作用利用磁場作用，把洗滌完的嗜疏性磁性複合微球分離出 來，以5mM氬氧化鈉/5mM氯化鈉的混合溶液(pH = 12. 5 )作為解吸附液， 加入10ml解吸附液，然後在以150r/min的速度振蕩30min完成解吸附作 用。進一步通過石茲場分離作用，回收嗜硫性i茲性複合孩史球，而清液中含有 純淨的免疫球蛋白。以上分離過程都在G 。C下操作。清液在室溫下用二次蒸餾水透析4h，再經冷凍乾燥後，得到純淨的免 疫球蛋白粉末。本試驗通過凝膠色鐠，利用shodex公司的血清專用的凝膠 柱，KW-803凝膠柱分析產品純度；利用浙江伊利康生物技術有限公司生產 的免疫球蛋白G檢測試劑盒檢測免疫球蛋白的生物活性。檢測結果在凝 膠色語中，產品中僅僅在12. 8min處，出現一個單峰，表明免疫球蛋白的 純度較高，純度超過95%以上；生物活性高於99%。本發明操作無需複雜的血清前處理手段，能直接從血清分離免疫球蛋 白G，通過簡單的操作步驟得到了生物活性大於99%、純度超過95%的免疫 球蛋白G,可大大節約時間和生產成本。以上實施例公布了 一種嗜硫性磁性複合微球及其製備方法和使用所述 嗜硫性磁性複合微球分離免疫球蛋白G的方法，但本發明的保護範圍不限 於此。
權利要求
1、本發明提供了一種嗜硫性複合微球的製備方法其特徵在於1)在FeCl3和FeCl2反應溶液，90℃時加入氨水，再加入酒石酸鈉或油酸作為表面活性劑，得到粒徑小於20nm的Fe3O4；2)加入二乙烯基苯單體對Fe3O4分子進行包裹，再加入乙酸乙烯酯單體進行二次包裹，然後在60℃下聚合44h；3)將得到的磁球用Na2SO4破乳、在磁場作用下實現分離；4)將分離得到的磁球進行醇解反應，向磁球加入HCl溶液酸化24h；5)把二乙烯基碸NaOH溶液加入上述磁球的Na2CO3溶液中進行碸化反應；6)取已碸化納米磁球，在NaOH溶液中加入含硫基團反應得到；7)抽除上清夜後，用蒸餾水反覆洗滌磁球至中性後，用NdFeB永磁體分離磁球得到。
2、 根據權利要求1中所述的嗜硫性複合微球的製備方法，其特徵在於1) 將FeCh完全溶解於水中，加入FeCh， 90。C時加入氨水，油酸反應， 全程氮氣保護；冷卻至室溫後，用蒸餾水不斷清洗至中性，用環己烷配置 成磁流體；2) 將磁流體加入十六烷中，再將此溶液加入表面活性劑的水溶液中， 超聲波作用下，形成細乳液，通入氮氣，在氮氣保護下，使環己烷完全蒸發；3) 將二乙烯基苯加入十六烷中，完全溶解後，將此溶液加入0. 25%表 面活性劑的水溶液，超聲波作用下，形成細乳液；4) 乙酸乙烯酯加入0. 06%表面活性劑的水溶液溶解，超聲波作用下， 形成細乳液；5) 將二乙烯基苯細乳液和磁流體細乳液混合後，再加入乙酸乙烯酯細 乳液，而後加入過氧化石危酸鉀，60。C時引發聚合，反應44h，全程氮氣保護；6) 把得到的乳液倒入燒杯中，加入4倍的水，並加入Na2S04進行破乳， 在磁場作用下實現分離，不斷抽除上清夜，並有蒸餾水反覆清洗至中性；7) 把石茲球加入10WaOH/乙醇溶液進行醇解反應後，水洗至中性，在外 磁場作用下，實現磁分離，抽除清夜；8)向磁球加入0. 5M HC1溶液進行酸化24h後，磁分離，用蒸餾水清洗至中性；9 )取納米磁球加入0. 5MNa2COr溶液，調pH值為11-13;另取二乙烯基 碸加入lMNaOH溶液，搖動混勻，調pH值為13-14;把二乙烯基石風NaOH溶 液加入上述納米磁球Na2C0r溶液中反應3h，充分水洗後用0. 5MNa2C03溶液 保護；10) 取所述分散在0. 5MNa2C03溶液中的已碸化納米磁球，調pH為11. 4; 另取含硫分子溶於lMNaOH溶液，調pH值為13. 5,加入所述已碸化納米磁 球Na2C03溶液，反應24h;11) 抽除上清夜後，用蒸餾水反覆洗滌磁球至中性後，用NdFeB永磁 體分離磁球得到。
3、 根據權利要求1、 2中所述的嗜硫性複合微球製備方法，其特徵在 於所述含硫分子是巰基乙醇、巰基丁醇、巰基煙酸、巰基嘧啶、巰基咪 唑或巰基吡咬中的一種或幾種。
4、 根據權利要求1、 2中所述的嗜硫性複合微球製備方法，其特徵在 於所述含硫分子是巰基煙酸。
5、 一種分離免疫球蛋白G的方法，其特徵在於取權利要求l中所述 的嗜硫性複合微球加入磷酸鹽緩衝液中，充分分散後加入血清吸附，吸附 液經洗滌後加入解吸附液，在磁場作用下分離得到免疫球蛋白G。
6、 根據權利要求5所述的分離免疫球蛋白G的方法，其特徵在於所 述解吸附劑可以是鹼金屬氫氧化物水溶液或鹼金屬氫氧化物/氯化鈉水溶 液。
7、 根據權利要求5、 6所述的分離免疫球蛋白G的方法，其特徵在於 所述解吸附液的PH值範圍為12. 5-13.1。
8、 根據權利要求5、 6所述的分離免疫球蛋白G的方法，其特徵在於 所述磷酸緩衝液的PH值範圍為6. 0-7. 0。
全文摘要
本發明提供了一種嗜硫性複合微球的製備方法。本發明還提供了一種操作簡便、能批量分離提純高純度、高活性血清免疫球蛋白G(IgG)的新方法。本發明採用氧化還原反應製備超順磁性的四氧化三鐵粒子，用細乳液聚合技術製備磁性微球，利用憎水劑濃度差，實現二乙烯基苯單體對磁粒子的充分、完整的包覆，進而加入乙酸乙烯酯進行二次包裹，通過自由基聚合，形成磁性微球。在充分的醇解反應後，磁球表面出現大量活性官能團，利用Michael加成反應，接枝巰基煙酸等嗜硫性配基，形成嗜硫性磁性複合微球，從而實現對人體免疫球蛋白的特異性識別與分離。
文檔編號B01J13/02GK101279246SQ200710144149
公開日2008年10月8日 申請日期2007年12月28日 優先權日2007年12月28日
發明者徐華明, 林志勇, 浩 錢 申請人:華僑大學