一種治療骨關節病的藥物組合物的製備方法
2023-04-30 20:17:11
一種治療骨關節病的藥物組合物的製備方法
【專利摘要】本發明屬於中藥製劑領域，具體涉及一種用於治療骨關節病的藥物組合物的製備方法。本發明所述製備方法：以狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、續斷、桑寄生、雞血藤、熟地黃、木香、以及乳香揮髮油、沒藥揮髮油和補骨脂炮製品入藥進行製備。所述方法製備得到的藥物組合物不僅有效治療肝腎不足、氣滯血瘀、脈絡痺阻所致的骨性關節炎和腰肌勞損，並且有效減少了原產品的肝毒性副作用，具有更好的臨床治療效果。
【專利說明】一種治療骨關節病的藥物組合物的製備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於中藥製劑領域，具體涉及一種用於治療骨關節病的藥物組合物的製備 方法。
【背景技術】
[0002] 骨性關節炎（osteoarthritis, 0A)是一種常見的慢性關節疾病，其主要病變是關 節軟骨的退行性變和繼發性骨質增生。退行性骨關節病是指人體出現的一系列退行性病 變，如關節疼痛、僵硬及活動受限等，是一種綜合性疾病。其在50歲以上的人群中，發病率 僅次於心臟病，在65歲以上人群中的發病率高達60-90%，特別是給中老年人的生活帶來 了極大的痛苦及不便。
[0003] 腰肌勞損也是腰疼病中最常見的一種疼痛，常被用作沒有器質性改變的慢性腰背 疼痛的總稱。腰肌勞損是由很多原因引起的，其疼痛長期反覆發作，腰部酸痛或脹痛。臨床 表現為，活動過度、彎腰過久則疼痛加重，直腰困難，陰冷、潮溼的天氣會加重病症。
[0004] 對於上述骨性關節炎及腰肌勞損症狀，中國專利CN1931277A公開了一種治療骨 關節病的藥物組合物。所述藥物組合物由狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、續斷、補骨脂、桑寄 生、雞血藤、熟地黃、木香、乳香、沒藥十二味中藥組成，具有補益肝腎，養血活血，舒筋活絡， 理氣止痛等功能，主要用於肝腎不足，血瘀氣滯，經絡痺阻所致的骨性關節炎、腰肌勞損等 症。且動物及臨床試驗顯示，該藥物對骨性關節炎、腰肌勞損具有確切的療效，並獲得廣大 患者的青睞。
[0005] 然而，上述藥物在臨床使用過程中發現存在一定的肝損傷，為此，在保證藥效的前 提下，通過工藝改進對其進行降低肝損傷研究是迫切需要解決的問題。
【發明內容】
[0006] 為此，本發明所要解決的技術問題在於現有技術中治療骨關節病的藥物存在一定 的肝損傷不良反應的問題，進而開發一種肝毒性損傷較低的、可有效治療骨關節病的藥物 組合物的製備方法。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明所述的治療骨關節病的藥物組合物的製備方法，包 括如下步驟：
[0008] (1)取乳香154-520重量份、沒藥154-520重量份混合，加水進行水蒸氣蒸餾提取， 收集揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用；
[0009] (2)取補骨脂154-520重量份，加水提取，棄去水提液後收集藥渣，得到補骨脂炮 製品，備用；
[0010] (3)取狗脊290-864重量份、淫羊藿154-520重量份、獨活154-520重量份、骨碎補 224-692重量份、續斷290-864重量份、桑寄生290-864重量份、雞血藤154-520重量份、熟 地黃692-2076重量份、木香154-520重量份，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加 所述備用的揮髮油包合物和常規輔料，按照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
[0011] 進一步的,所述的藥物組合物的製備方法,包括如下步驟：
[0012] (1)取乳香346. 1重量份、沒藥346. 1重量份混合，加水進行水蒸氣蒸餾提取，收集 揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用；
[0013] (2)取補骨脂346. 1重量份，加水提取，棄去水提液後收集藥渣，得到補骨脂炮製 品》備用；
[0014] (3)取狗脊576. 8重量份、淫羊藿346. 1重量份、獨活346. 1重量份、骨碎補462. 0 重量份、續斷576. 8重量份、桑寄生576. 8重量份、雞血藤346. 1重量份、熟地黃1384. 2重 量份、木香346. 1重量份，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加所述備用的揮髮油 包合物和常規輔料，按照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
[0015] 優選的，所述的藥物組合物的製備方法，包括如下步驟：
[0016] (1)按照選定的重量份取所述乳香和沒藥混合，加8-12倍量水進行水蒸氣蒸餾提 取8-15小時，收集揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用；
[0017] (2)按照選定的重量份取所述補骨脂，加6-10倍量水提取1-3次，每次0. 5-2小 時，棄去水提液後收集藥渣，乾燥即得補骨脂炮製品，備用；
[0018] (3)按照選定的重量份取狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、續斷、桑寄生、雞血藤、熟地 黃、木香，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加所述備用的揮髮油包合物和常規輔 料，按照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
[0019] 更優的，所述的藥物組合物的製備方法，包括如下步驟：
[0020] (1)按照選定的重量份取所述乳香和沒藥混合，加10倍量水進行水蒸氣蒸餾提取 12小時，收集揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用；
[0021] (2)按照選定的重量份取所述補骨脂，加8倍量水提取2次，每次1小時，棄去水提 液後收集藥渣，乾燥即得補骨脂炮製品，備用；
[0022] (3)按照選定的重量份取狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、續斷、桑寄生、雞血藤、熟地 黃、木香，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加所述備用的揮髮油包合物和常規輔 料，按照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
[0023] 所述步驟（1)中，製備所述揮髮油包合物的常規輔料包括環糊精、水和乙醇。
[0024] 所述步驟⑴中，所述揮髮油、β_環糊精、水和乙醇的質量比為I :8-12 :16-24 : 1-2。
[0025] 所述揮髮油、環糊精、水和乙醇的質量比為1 :10 :20 :1。
[0026] 所述乳香和/或沒藥為醋炙。
[0027] 本發明還公開了由所述製備方法製備得到的藥物組合物，以及由上述藥物組合物 添加常規輔料，按照常規工藝製成的臨床可接受的口服製劑。
[0028] 本發明所述製備方法在現有產品的基礎上進行改進，所述治療骨關節病的藥物組 合物由補骨脂、骨碎補、續斷、淫羊藿、獨活、木香、雞血藤和狗脊等藥材組成，主要用於肝腎 不足、氣滯血瘀、脈絡痺阻所致的骨性關節炎和腰肌勞損等症。本發明所述製備藥物組合物 的方法以乳香和沒藥的揮髮油、以及補骨脂炮製品入藥，在保持原有產品藥效的基礎上，進 一步大大降低了原產品的肝毒性副作用，使得產品具有更好的藥用價值及市場前景。
[0029] 實驗例
[0030] 實驗例1藥效學實驗
[0031] 1 材料
[0032] I. 1 動物
[0033] Hartley豚鼠，普通級，SD大鼠、KM小鼠，SPF級，購自北京華阜康生物科技股份有 限公司，合格證號：SCXK(京）2009-0004 ;飼養於天津中醫藥大學實驗動物中心，保持動物 房安靜，通風，乾燥，室溫18?25°C，溼度40%?70%，自由攝食、飲水。
[0034] 1. 2受試藥
[0035] 實施例1所製備新工藝丸劑；
[0036] 壯骨關節丸，華潤三九醫藥股份有限公司。
[0037] 實驗給藥劑量參考壯骨關節丸的臨床人用劑量：12g/d，實驗中的各給藥劑量都按 照不同種屬動物折合成相應的給藥劑量。
[0038] 1. 3 試劑
[0039] 鹽酸氨基葡萄糖膠囊（浙江誠意藥業有限公司）；
[0040] 木瓜蛋白酶，泊洛沙姆P407 (Sigma公司）；
[0041] 0.5%伊紅染色液，蘇木素染色液（武藤化學株式會社）；
[0042] 基質金屬蛋白酶-I(MMP-I)、基質金屬蛋白酶-1抑制劑（HMP-I)Elisa試劑盒 (Cusabio) ;--ΜΡ-1 和 MMP-3ELISA 試劑盒（武漢優爾生公司）；UNIQ-10column Trizol 總 RNA提取試劑盒（上海生工生物工程股份有限公司）；mProm II Reverse Transcription System 逆轉錄試劑盒（Promega) ;FastStart Universal CYBR Green 試劑盒（Roche) ;BCA 蛋白檢測試劑盒（Beyotime);
[0043] 鹼性磷酸酶（AKP)，南京建成生物工程研究所；
[0044] 苯扎溴銨溶液，江西京東藥業有限公司；
[0045] 注射用青黴素鈉，中諾藥業（石家莊）有限公司；
[0046] 冰醋酸，天津市化學試劑一廠；
[0047] 甲醛，天津市風船化學試劑科技有限公司；
[0048] 二甲苯，天津市津被精細化工有限公司。
[0049] 1. 4 儀器
[0050] JJ3000電子天平、JJ2000精密電子天平（常熟雙傑測試儀器廠）；
[0051] YLS-Q4耳腫打孔器（濟南益延科技發展有限公司）；
[0052] HSS-I (B)恆溫浴槽（成都儀器廠）；
[0053] MEK-6318K型血細胞分析儀（日本光電工業株式會社）；
[0054] 核酸蛋白分析儀-DU800，Allegra 64R High-Speed Centrifuge (Beckman Coulter) ;Real_time RT-PCR System, Prism7500(Applied Biosystem) ;PCR_C1000 型 PCR 儀，ClOOOTouch Thermal Cycler(Bio-Rad) ;FlexStation3 多功能酶標儀（Molecular Devices) ;M0DEL 1012型雜交箱（SHEL LAB) ;ASP300S全自動封閉脫水機，RM2135切片機 (Leica) 生物組織包埋機（天津航空機電公司）；照相顯微鏡（OLYMPUS);超聲破碎 儀（UIBRA) ;MEK-7222K全自動血細胞分析儀（日本光電工業株式公社）；
[0055] IKA/T18勻漿機（IKA) ;KJ-201A型振蕩器（江蘇康健醫療用品有限公司）；
[0056] QL-901型渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器製造有限公司）；
[0057] MilliQ 純水系統（Millipore 公司）。
[0058] 2 方法
[0059] 2· 1骨關節炎治療作用研究
[0060] 2. I. 1對hareley豚鼠自發性骨關節炎的治療作用
[0061] 取hartley豚鼠，雌性，隨機分為模型組（對照組），壯骨關節丸組（0. 96g/kg)及 本發明組合物高劑量（I. 92g/kg)、中劑量（0. 96g/kg)、低劑量（0. 48g/kg) 5個劑量組，每組 10隻。待5月齡豚鼠自發骨性關節炎模型形成後，開始給藥，模型組給予相應體積蒸餾水， 連續給藥4周。每天觀察動物一般狀態，每周一稱動物體重及食量，末次給藥後腹主動脈取 血，檢測血清中MMP-I、--ΜΡ-1的含量。動物處死後切取脛骨到股骨之間的關節軟骨進行組 織病理學檢查。
[0062] 2. 1. 2對木瓜蛋白酶誘導的大鼠骨關節炎慢性期的治療
[0063] 選健康雄性SD大鼠，按0. 3g/kg體重腹腔注射10 %的水合氯醛麻醉，以35 %泊洛 沙姆載藥體加載4%木瓜蛋白酶製成溫敏型原位凝膠控釋劑（?冊.7)，按照0.051^(1.6扔/ 關節劑量，雙側膝關節注射，將造模動物膝關節及以下肢體置於特製的保溫箱中，50°C環境 下保溫作用2小時，即可造成軟骨的損傷。隨機抽取3/10隻大鼠進行病理組織學檢查，復 核模型的可靠性及成功率。
[0064] 選擇造模成功的骨關節炎模型大鼠40隻，隨機分為模型組、壯骨關節丸組、本發 明組合物2. 20g/kg、I. 10g/kg和0. 55g/kg劑量組，每組8隻。另選健康雄性SD大鼠8隻， 作為對照組。壯骨關節丸和本發明組合物按照設定劑量灌胃給藥，連續治療4周，對照組和 模型組灌胃等體積蒸餾水。
[0065] 治療結束後，按0. 3mL/100g體重腹腔注射10%的水合氯醛進行麻醉，腹主動脈取 血。打開左膝關節腔，用ImL生理鹽水反覆衝洗3次，收集關節液，3000r/min離心10分鐘， 取上清液，_20°C保存備用。用小刀刮取大鼠股骨關節面和脛骨關節面的表面軟骨，稱重， 放入400 μ I Trizol中，-80°C存放備用，採用實時定量RT-PCR法測定大鼠關節軟骨iNOS、 Aggrecan和Collegan IImRNA表達。取完整右膝關節10%福馬林固定。用ELISA法測 定關節液MMP-3和TIMP-I的含量，引物設計見表1。
[0066] 常規Trizol法提取總RNA，根據0D260/0D280的值估計核酸的純度。採用 Real-time RT-PCR 法測定大鼠關節軟骨 Aggrecan 和Collegan- II mRNA 表達。取 2_AACT 值進行數據統計。
[0067] 表 I Real-time RT-PCR 引物序列
[0068]
【權利要求】
1. 一種治療骨關節病的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟： (1) 取乳香154-520重量份、沒藥154-520重量份混合，加水進行水蒸氣蒸餾提取，收集 揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用； (2) 取補骨脂154-520重量份，加水提取，棄去水提液後收集藥渣，得到補骨脂炮製品， 備用； (3) 取狗脊290-864重量份、淫羊藿154-520重量份、獨活154-520重量份、骨碎補 224-692重量份、續斷290-864重量份、桑寄生290-864重量份、雞血藤154-520重量份、熟 地黃692-2076重量份、木香154-520重量份，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加 所述備用的揮髮油包合物和常規輔料，按照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
2. 根據權利要求1所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟： (1) 取乳香346. 1重量份、沒藥346. 1重量份混合，加水進行水蒸氣蒸餾提取，收集揮發 油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用； (2) 取補骨脂346. 1重量份，加水提取，棄去水提液後收集藥渣，得到補骨脂炮製品，備 用； (3) 取狗脊576. 8重量份、淫羊藿346. 1重量份、獨活346. 1重量份、骨碎補462. 0重量 份、續斷576. 8重量份、桑寄生576. 8重量份、雞血藤346. 1重量份、熟地黃1384. 2重量份、 木香346. 1重量份，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加所述備用的揮髮油包合物 和常規輔料，按照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
3. 根據權利要求1或2所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟： (1) 按照選定的重量份取所述乳香和沒藥混合，加8-12倍量水進行水蒸氣蒸餾提取 8-15小時，收集揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用； (2) 按照選定的重量份取所述補骨脂，加6-10倍量水提取1-3次，每次0. 5-2小時，棄 去水提液後收集藥渣，乾燥即得補骨脂炮製品，備用； (3) 按照選定的重量份取狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、續斷、桑寄生、雞血藤、熟地黃、木 香，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加所述備用的揮髮油包合物和常規輔料，按 照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
4. 根據權利要求3所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟： (1) 按照選定的重量份取所述乳香和沒藥混合，加10倍量水進行水蒸氣蒸餾提取12小 時，收集揮髮油，加入常規輔料製成揮髮油包合物，備用； (2) 按照選定的重量份取所述補骨脂，加8倍量水提取2次，每次1小時，棄去水提液後 收集藥渣，乾燥即得補骨脂炮製品，備用； (3) 按照選定的重量份取狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、續斷、桑寄生、雞血藤、熟地黃、木 香，與所述備用的補骨脂炮製品混合、粉碎，添加所述備用的揮髮油包合物和常規輔料，按 照常規工藝製成臨床可接受的口服製劑。
5. 根據權利要求1-4任一所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，所述步驟（1) 中，製備所述揮髮油包合物的常規輔料包括3 -環糊精、水和乙醇。
6. 根據權利要求5所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，所述步驟（1)中，所述 揮髮油、P _環糊精、水和乙醇的質量比為1 :8-12 :16_24 :1_2。
7. 根據權利要求5或6所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，所述步驟（1)中， 所述揮髮油、￠-環糊精、水和乙醇的質量比為1 :10 :20 :1。
8. 根據權利要求1-7任一所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於，所述乳香和/或 沒藥為醋炙。
9. 由權利要求1-8任一所述製備方法製備得到的藥物組合物。
10. 由權利要求9所述藥物組合物添加常規輔料，按照常規工藝製成的臨床可接受的 口服製劑。
【文檔編號】A61P19/02GK104352633SQ201410649898
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月14日 優先權日:2014年11月14日
【發明者】馬鵬崗, 代志, 劉志剛, 徐冰, 王勇, 王躍飛, 李瓊婭, 趙楓林, 王靜, 周昆, 李霞 申請人:華潤三九醫藥股份有限公司