α-4-β-7異二聚體特異性拮抗劑抗體的製作方法

2023-05-01 02:30:16

專利名稱：α-4-β-7異二聚體特異性拮抗劑抗體的製作方法
技術領域：
本申請提供有關α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白的組合物和方法。背景整聯蛋白是異二聚體的I型跨膜蛋白，由兩個亞基(一個是α亞基，一個是β亞基)形成，並且介導許多不同的細胞-細胞間和細胞-胞外基質間的相互作用。從功能上看，已證實整聯蛋白參與多種生物進程，包括白細胞遷移和再循環以及免疫應答。哺乳動物中，有18種已知的α亞基和8種已知的β亞基，其組合形成M種截然不同的整聯蛋白。 配體特異性大多取決於所表達的α亞基和β亞基的特定組合，而配體的親和力受整聯蛋白構象變化調節，並且是二價陽離子依賴性的。整聯蛋白的配體形成結構上不同的組別，包括胞外基質蛋白，例如膠原、纖連蛋白、玻連蛋白和層粘連蛋白；反受體，例如細胞黏著分子(例如血管細胞黏著分子或VCAM) 和血漿蛋白。許多致病微生物亦利用整聯蛋白發起感染或作為毒素結合的部位。結構上不同的配體共有暴露的穀氨酸或天冬氨酸殘基，通常存在於延伸的柔性環上，這對於被整聯蛋白識別是重要的。α 4整聯蛋白(α4與β 或β 7亞基搭配)在免疫系統中起重要作用。Α4 β 1在淋巴細胞和髓樣細胞上表達；它似乎是血管細胞黏著分子(VCAM)的主要結合配偶體。VCAM 在血管內皮上遍在表達，在炎症期間增量調節，並且結合α4β7以及α4β 1 (但與α4β7 弱結合)。雖然在外周T細胞、B細胞、NK細胞和嗜伊紅粒細胞上也檢測到α4β7，但是 α 4β 7在⑶4+⑶45RA記憶T細胞亞群中的表達最高，該亞群已被證實優先歸巢至腸中。 α 4 β 7異二聚體的主要配體是在腸內皮中表達的黏膜地址素細胞黏著分子1 (MAdCAM-I或 MAdCAM)。除了與α 4鏈配對外，β 7亞基還與α E搭配形成α E β 7，其主要在在腸、肺和生殖泌尿道的上皮內淋巴細胞(IEL)中表達。α Εβ 7還在腸的樹突細胞上表達。αΕβ7異二聚體與在上皮細胞上表達的E-鈣黏著蛋白結合。一般認為IEL細胞在上皮區室內提供免疫監視機制。結合α 4並抑制α 4β 1與VCAM-I和纖連蛋白結合的抗體定位在介於殘基152 和 203 之間的 α4 的 52 個胺基酸區域(Schiffer 等，J. Biol. Chem. 270 :14270 ； 1995)。 Tidswell等人(J. Immuno 159 :1497 ； 1997)在小鼠/人嵌合β 7亞基方法中，利用一組結合β 7的抗體，鑑定出對與MAdCAM-I結合重要的β 7結構域。他們發現抑制與MAdCAM-I和 E-鈣黏著蛋白結合的7種抗體中，有6種定位在包含胺基酸176-250的區域中，該區域似乎與其它整聯蛋白亞基的金屬離子依賴性黏著位點(metal-ion dependent adhesion site,MIDAS)具有同源性。Tidswell等人使用的抗體之一是稱為ACT-I的α 4β 7異二聚體特異性抗體。Lazarovitz 等人(J. Immunol. 133 :1857 ； 1984)最初將 ACT-I 抗體描述為用得自 PBMC的人破傷風類毒素特異性T淋巴細胞系給小鼠免疫接種而產生的抗體。後來，研究表明 ACT-I 與 α 4β 7 異二聚體特異性結合(Schweighoffer 等，J. Immunol. 151 :717，1993)。 雖然ACT-I不結合鼠α 4β 7，但卻結合來源於最少一些非人類靈長類動物物種的α4β7， 而且研究表明在關養的裸面#中減輕自發性結腸炎(Hesterberg等，Gastroenterology 1111373 ； 1996)。已將ACT-I人源化，並對在潰瘍性結腸炎O^eagan等，N Engl J Med. 352 :2499 ； 2005)以及最近在克羅恩病(Crohn，s disease) (Feagan 等，Clinical Gastroenterology and Hepatology 6 :1370,2008)中作為人用治療藥進行了評價。人源化ACT-1，亦稱為 vedolizumab，披露於 WO 98/06248 和美國專利 7，147，85 以及 WO 07/061679 和 US 2007-0122404.另一種人源化抗體即那他珠單抗(Tysabri )已被用於治療克羅恩病。那他珠單抗是α 4特異性鼠抗體的人源化形式。已經證實在部分患者中Vedolizumab中和抗人源化抗體應答，而那他珠單抗與進行性多灶性白質腦病(PML)有關，PML是一種在無免疫應答的個體中與用JC病毒感染前的再活化有關的神經障礙。因此，需要改正這些缺點同時破壞α 4 β 7/MAdCAM-l途徑的治療藥物。發明概述一方面，本發明提供與人α 4β 7特異性結合的分離的抗原結合蛋白(即α4β7 異二聚體特異性抗原結合蛋白)。在本發明的另一個方面，抗原結合蛋白與以下動物的 α 4β 7特異性結合非人類靈長類動物、食蟹猴(cynomologous monkey)、黑猩猩、非靈長類哺乳動物、齧齒動物、小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、貓或狗。在另一個實施方案中，分離的抗原結合蛋白包括以下抗體人抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、重組抗體、抗原結合抗體片段、 單鏈抗體、雙鏈抗體(diabody)、三鏈抗體(triabody)、四鏈抗體(tetrabody)、Fab片段、 F(ab，)2片段、結構域抗體、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgGl抗體、IgG2抗體、IgG3抗體、IgG4抗體或在鉸鏈區具有降低形成H鏈內二硫鍵的趨勢的至少一個突變的IgG4抗體。 另一方面，分離的抗原結合蛋白包含前述抗體之一的重鏈恆定區；另一方面，恆定區是包含 SEQ ID NO 72的多肽；與SEQ ID NO 72有至少90%同一性的多肽；具有其中剔除了 1、2、 3、4或5個N端和/或C端胺基酸的SEQ ID NO :72所示胺基酸序列的多肽；或者加入一種或多種翻譯後修飾的前述多肽之一。在一個實施方案中，分離的抗原結合蛋白包含κ輕鏈恆定區，在另一個實施方案中，它包含λ輕鏈區。在一個實施方案中，輕鏈恆定區是包含 SEQ ID NO 70的多肽；與SEQ ID NO 70有至少90%同一性的多肽；具有其中剔除了 1、2、 3、4或5個N端和/或C端胺基酸的SEQ ID NO :70所示胺基酸序列的多肽；或加入一種或多種翻譯後修飾的前述多肽之一。本發明的一個實施方案提供具有重鏈和輕鏈的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，每條重鏈和輕鏈都包含一個或多個互補決定區，即⑶R。在本發明的另一個方面，重鏈可變區包含⑶R1、⑶R2和⑶R3，而輕鏈可變區包含⑶R1、⑶R2和⑶R3，其中各個相應⑶R 選自 SEQ ID NO 55 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO 58 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；SEQ ID NO 56 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO 59 的重鏈 CDRl、CDR2 和CDR3;以及 SEQ ID NO :57 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :60 的重鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3。在本發明的另一個方面，重鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(FR)，輕鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(FR)。一方面，FR 選自與⑶R相同的SEQID NO ；另一方面，FR選自不同的SEQ ID NO。在又一個實施方案中， 本發明提供α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中輕鏈可變區包含SEQ ID Ν0:55，重鏈可變區包含SEQ ID NO 58 ；輕鏈可變區包含SEQ ID NO 56，重鏈可變區包含SEQ ID NO: 59 ；或者輕鏈可變區包含SEQ ID NO :57，重鏈可變區包含SEQ ID NO :60。在本發明的另一個方面，本發明提供具有重鏈和輕鏈的分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，每條重鏈和輕鏈都包含一個或多個互補決定區，即CDR。在本發明的另一個方面，重鏈可變區包含⑶R1、⑶R2和⑶R3，輕鏈可變區包含⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一個實施方案中，輕鏈⑶R選自分別與SEQ ID NO :3的⑶R1、⑶R2和⑶R3有至少90%同一性的CDRUCDR2和CDR3 ；分別與SEQ ID NO 5的CDRUCDR2和CDR3有至少90%同一性的 CDRUCDR2 和 CDR3 ；分別與 SEQ ID NO 7 的 CDRUCDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、 CDR2 和 CDR3 ；分別與 SEQ ID NO 22 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；分別與 SEQ ID NO 24 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；並且重鏈可變 CDR1、CDR2 和 CDR3 來自 SEQ ID NO :58。在本發明的另一個方面，重鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(FR)，輕鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(FR)。一方面，FR 選自與⑶R相同的SEQ ID NO ；另一方面，FR選自不同的SEQ ID NO。在又一個實施方案中， 本發明提供α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中輕鏈可變區選自與SEQ ID Ν0:3有至少90%同一性的輕鏈可變區、與SEQ ID NO :5有至少90%同一性的輕鏈可變區、與SEQ ID NO :7有至少90%同一性的輕鏈可變區、與SEQ ID NO :22有至少90%同一性的輕鏈可變區以及與SEQ ID NO 有至少90%同一性的輕鏈可變區；並且重鏈可變區包含SEQ ID NO :58。本發明的另一個方面提供分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重鏈可變區及包含CDR1、⑶R2和⑶R3的輕鏈可變區，其中輕鏈 CDRU CDR2和CDR3選自分別與SEQ ID NO 12的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；分別與 SEQ ID NO 25 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRUCDR2和CDR3 ；以及分別與SEQ ID NO 26的CDRUCDR2和CDR3有至少90%同一性的 CDRU CDR2 和 CDR3 ；而且重鏈 CDRU CDR2 和 CDR3 選自分別與 SEQ ID NO 41 的 CDR1、CDR2 和CDR3有至少90%同一性的CDRUCDR2和CDR3 ；以及分別與SEQ ID NO 54的CDRUCDR2 和⑶R3有至少90%同一性的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一個實施方案中，輕鏈可變區選自與 SEQ ID NO :12、25和沈中的任一個有至少90%同一性的可變區，重鏈可變區選自與SEQ ID NO 41和M中的任一個有至少90%同一性的可變區。在本發明的另一個方面，重鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(FR)，輕鏈可變區還包含命名為FRl、FR2、 FR3和FR4的4個框架區(FR)。一方面，FR選自與⑶R相同的SEQ ID NO;另一方面，FR選自不同的SEQ ID NO。在一個實施方案中，本發明提供分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重鏈可變區及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的輕鏈可變區，其中各個相應的⑶R與選自以下的⑶R有至少90%同一性SEQ ID NO :10的輕鏈⑶Rl、⑶R2
和 CDR3，以及SEQIDNO38的J■鏈 CDRl、.CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO2的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO30的,I鏈 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 20的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO51的,I鏈 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 11的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO39的,I鏈 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 13的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO42的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 17的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO46的J■鏈 CDRl、,CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO8的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO36的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 19的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO49的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 18的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO47的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 21的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO52的J■鏈 CDRl、,CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO3的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO31的J■鏈 CDRl、,CDR2和 CDR3；SEQIDNO7的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO35的J■鏈 CDRl、,CDR2和 CDR3；SEQIDNO6的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO34的J■鏈 CDRl、,CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO1的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO29的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 22的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO50的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 24的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO40的J■鏈 CDRl、,CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO9的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO37的J■鏈 CDRl、,CDR2和 CDR3；SEQIDNO4的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO32的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 28的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO53的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 16的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO45的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 15的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO44的,I鏈 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 14的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO43的,I鏈 CDRl、CDR2和 CDR3；SEQIDNO 27的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO43的J■鏈 CDRl、.CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO5的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO33的,I鏈 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 12的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO41的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 23的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO48的,I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 25的輕鏈CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO54的1I鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；以及 SEQ ID NO 26 的輕鏈 CDRU
⑶R2和⑶R3，以及SEQ ID NO 54的重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3。另一方面，重鏈和輕鏈⑶R 與所述SEQ ID NO相應的⑶R相同。在本發明的一個實施方案中，重鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4的4個框架區(FR)，輕鏈可變區還包含命名為FR1、FR2、FR3和FR4 的4個框架區(FR)。一方面，FR選自與⑶R相同的SEQ ID NO ；另一方面，FR選自不同的 SEQ ID NO。 在另一個實施方案中，α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白包含輕鏈可變區和重鏈可變區，其中輕鏈可變區與SEQ ID NO :10有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO: 38有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO 2有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :30有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :20有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :51有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :11有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :39有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID N0:13有至少90% 同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :42有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ IDNO :17有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :46有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :8有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :36有至少90%同一性；輕鏈可變區與 SEQ ID NO :19有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :49有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO 18有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID N0:47有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :21有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :52有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :3有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO: 31有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :7有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :35有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :6有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :；34有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :1有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO : 有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID N0:22有至少90% 同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :50有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID N0J4有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :40有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :9有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :37有至少90%同一性；輕鏈可變區與 SEQ ID NO :4有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :32有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO J8有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :53有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO 16有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO 45有至少 90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :15有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO: 44有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQID NO 14有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :43有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :27有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :43有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :5有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :33有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID N0:12有至少90% 同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO 41有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO 23有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO :48有至少90%同一性；輕鏈可變區與SEQ ID NO :25有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO力4有至少90%同一性；或者輕鏈可變區與SEQ ID NO J6有至少90%同一性，重鏈可變區與SEQ ID NO M有至少90%同一性。 另一方面，重鏈和輕鏈可變區與所述SEQ ID NO的相應可變區相同。本發明的一個方面提供分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在⑶4+ 記憶T細胞結合測定法中具有小於35ng/ml的EC50 ；另一個方面提供分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在CD4+記憶T細胞結合測定法中具有小於lOng/ml的EC50。在另一個實施方案中，本發明提供分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在MAdCAM 競爭測定法中具有小於30ng/m的IC50 ；在另一個實施方案中提供分離的α 4 β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在MAdCAM競爭測定法中具有小於lOng/ml的IC50。本發明的一個方面提供分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其結合0 40 7的325(^突變體。在本發明的一個方面，本發明提供編碼上述多肽的核酸。在本發明的另一個方面， 所述核酸為載體。在本發明的另一個實施方案中，本發明提供用本發明的核酸轉化或轉染的宿主細胞。在本發明的另一個方面，提供製備多肽的方法，所述方法包括在促進多肽表達的條件下培育宿主細胞，並收穫所述多肽。
另一方面，本發明提供分泌結合α4β7的抗原結合蛋白的分離細胞。在另一個實施方案中，所述細胞是雜交瘤。在另一個實施方案中，本發明提供製備特異性結合 α4β7(即人α4β7)的抗原結合蛋白的方法，所述方法包括在允許表達所述抗原結合蛋白的條件下培育所述分離細胞。一方面，本發明提供與α 4β 7異二聚體特異性結合的分離的抗原結合蛋白。在另一個實施方案中，分離的抗原結合蛋白當與人α 4β 7結合時，抑制α 4 β 7與MAdCAM-I結合。因此，本發明的一個實施方案提供抑制α 4β 7的至少一種活性的方法，所述方法包括使表達α 4β 7的細胞與α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白接觸，使得活性被部分或全部抑制。一方面，這種方法在體內進行。在本發明的一個方面，分離的抗原結合蛋白抑制表達α 4β 7的細胞與表達MAdCAM-I的細胞粘附。在本發明的又一個方面，分離的抗原結合蛋白抑制表達α 4 β 7的細胞運輸至表達MAdCAM-I的細胞所定居的區域或組織中；在這類實施方案的一個實例中，分離的抗原結合蛋白抑制淋巴細胞運輸至腸中。另一方面，本發明提供包含抗原結合蛋白的藥物組合物。在一個實施方案中，本發明提供治療受試者的病況的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者，其中可通過降低受試者的α4β7活性(部分或全部)治療所述病況。在另一個實施方案中，受試者是人類。在另一個實施方案中，所述病況是胃腸系統的炎性疾病。因此，提供治療患有以下病況的個體的方法，所述病況的特徵在於表達α 4β 7的細胞不恰當地運輸到包含表達MAdCAM 的細胞的組織中，所述方法包括以足以抑制(部分或全部)表達α 4β 7的細胞運輸到包含表達MAdCAM的細胞的組織中的量，將α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白給予所述個體。 在一個實施方案中，所述病況是炎性腸病，例如潰瘍性結腸炎、克羅恩病、乳糜瀉(非熱帶性口炎性腹瀉)、腸病伴發血清反應陰性關節病、顯微鏡下結腸炎(microscopic colitis) 或膠原性結腸炎、嗜酸性胃腸炎或直腸與結腸切除術和迴腸肛管吻合術後所致的迴腸囊袋炎(pouchitis)。在另一個實施方案中，所述病況是胰腺炎、胰島素依賴性糖尿病、乳腺炎、 膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘或移植物抗宿主病。在另一個實施方案中，所述方法還包括給予受試者第二種治療。在另一個實施方案中，在將藥物組合物給予受試者之前和/或與之同時和/或之後給予受試者第二種治療。 在另一個實施方案中，第二種治療包括抗炎藥。在另一個實施方案中，第二藥物組合物包含選自非留體抗炎藥、類固醇和免疫調節劑的物質。在另一個實施方案中，所述方法包括給予受試者第三種治療。另一方面，本發明提供延長受試者壽命的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者。另一方面，本發明提供在有需要的受試者中降低α 4β 7活性的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者。另一方面，本發明提供在有需要的受試者中降低α4β7介導的運輸(例如0 40 7介導的腸歸巢)的方法，所述方法包括將藥物組合物給予受試者。發明詳述本發明提供涉及結合整聯蛋白α 4β 7(「 α 4β 7」)的分子的組合物、藥盒和方法， 所述分子包括激動或拮抗α 4β 7的分子，例如抗α 4β 7抗體、抗體片段和抗體衍生物，例如拮抗性抗α 4β 7抗體、抗體片段或抗體衍生物。還提供核酸及其衍生物和片段，其包含編碼與α4β7結合的多肽的全部或部分的核苷酸序列，例如編碼抗α4β7抗體、抗體片段或抗體衍生物的全部或部分的核酸、包含這類核酸的質粒和載體以及包含這類核酸和/或載體和質粒的細胞或細胞系。所提供的方法包括例如製備、鑑定或分離與α 4β 7結合的分子(例如抗α4β7抗體)的方法、確定分子是否與α 4β 7結合的方法、確定分子是否刺激或拮抗α 4β 7的方法、製備包含與α 4β 7結合的分子的組合物(例如藥物組合物)的方法以及將與α 4β 7結合的分子給予受試者的方法，例如用於治療α 4β 7介導的病況的方法，以及用於體內或體外刺激或拮抗α 4β 7的生物活性的方法。多核苷酸和多肽序列使用標準一字母或三字母縮寫詞表示。除非另有說明，否則每個多肽序列在左邊具有氨基端，在右邊具有羧基端；各單鏈核酸序列和每個雙鏈核酸序列的上鏈在左邊具有5』端，在右邊具有3』端。還可通過解釋多肽或多核苷酸序列如何不同於參比序列來描述具體的多肽或多核苷酸序列。除非本文另外定義，否則與本發明聯用的科技術語應具有本領域普通技術人員通常理解的含義。此外，除非文中另有要求，否則單數術語應包括複數，而複數術語應包括單數。一般地講，所使用的與本文所描述的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、 遺傳學及蛋白質與核酸化學和雜交有關的命名以及關聯技術是本領域眾所周知和通用的。 通常按照本領域眾所周知的常規方法以及如本說明書全文所引用和討論的各種一般性的和更為具體的參考文獻所述實施本發明的方法和技術，除非另有說明。參見例如Sambrook 等，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，第 2 片反，Cold Spring Harbor Laboratory PressiCold Spring Harbor,N. Y. (1989)禾口Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992)，以及 Harlow 禾口 Lane Antibodies A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press， Cold Spring Harbor， N. Y. (1990)，所述文獻通過引用結合到本文中。按照生產商的說明書、按照本領域常規實施方法或按照本文所述方法進行酶促反應和純化技術。所使用的與本文描述的分析化學、合成有機化學和醫學與藥物化學有關的術語以及關聯實驗室規程和技術是本領域眾所周知和通用的。標準技術可用於化學合成、化學分析、藥物製備、製劑和遞藥以及患者治療。除非另有說明，否則下列術語應理解為具有以下含義術語「分離的分子」(其中所述分子為例如多肽、多核苷酸或抗體)是以下分子，根據其起源或衍生源，其(1)不與在其天然狀態與之相伴的天然締合的組分締合，(2)基本不含來自同一物種的其它分子，C3)由不同物種的細胞表達，或(4)實質上無人幹預時不會出現。因此，化學合成的分子，或在與其天然起源細胞不同的細胞系統中合成的分子，為與其天然締合的組分「分離的」。還可採用本領域眾所周知的純化技術，通過分離使分子基本上不含天然締合的組分。可通過本領域眾所周知的多種方法測定分子純度或均質性。例如， 可採用聚丙烯醯胺凝膠電泳並採用本領域眾所周知的技術使凝膠染色以呈現多肽，來測定多肽樣品的純度。出於某些目的，可通過採用HPLC或本領域眾所周知的其它純化方法來提供更高的解析度。術語「 α 4 β 7抑制劑」和「 α 4 β 7拮抗劑」可互換使用。各為可檢測地抑制α 4 β 7 的至少一種功能的分子。相反地，「 α 4 β 7激動劑」是可檢測地增強α 4 β 7的至少一種功能的分子。由α 4β 7抑制劑引起的抑制不必是完全的，只要通過例如採用測定法可檢出即可。可採用α4β7功能的任何測定法，本文提供了有關實例。可被α4β7抑制劑抑制(或被α 4 β 7激動劑增強)的α 4 β 7的功能的實例包括配體結合(即與MAdCAM-I結合)、與表達配體的細胞粘附、運輸至特定區室(例如腸)、細胞因子、趨化因子和其它介質的釋放、炎症反應和組織損傷加重或惡化等。α 4 β 7抑制劑和α 4 β 7激動劑的類型的實例包括但不限於α4β7結合多肽，例如抗原結合蛋白(例如α 4β 7抗原結合蛋白)、抗體、抗體片段和抗體衍生物。術語「肽」、「多肽」和「蛋白質」分別是指包含通過肽鍵彼此連接的兩個或更多個胺基酸殘基的分子。這些術語包括例如天然和人工蛋白質、蛋白質序列的蛋白質片段和多肽類似物(例如突變蛋白、變體和融合蛋白)以及翻譯後修飾的蛋白質或者其它共價或非共價修飾的蛋白質。肽、多肽或蛋白質可以是單體的或是多聚體的。本文使用的術語「多肽片段」是指與相應的全長蛋白質相比，具有氨基端和/或羧基端缺失的多肽。片段的長度可為例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、 90、100、150或200個胺基酸。片段的長度也可為例如至多1，000、750、500、250、200、175、 150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11 或 10 個胺基酸。片段還可由蛋白酶水解(或其它)加工產生，所述加工例如導致在1-5個胺基酸的氨基端和/或羧基端方面偏離所預測的。片段還可在其末端的任一端或兩端包含一個或多個其它胺基酸，例如得自不同的天然存在的蛋白質(例如Fc或亮氨酸拉鏈結構域)或人工胺基酸序列(例如人工接頭序列或標籤蛋白)的胺基酸序列。本發明的多肽包括以任何方式和出於以下任何理由被修飾的多肽，例如以(1) 降低對蛋白酶解的敏感性，O)降低對氧化的敏感性，( 改變對形成蛋白質複合體的結合親和力，(4)改變結合親和力，和(4)提供或改變其它物理化學性質或功能性質。類似物包括多肽的突變蛋白。例如，可以在天然存在的序列上進行單個或多個胺基酸取代(例如保守胺基酸取代)(例如在一個或多個形成分子間接觸的結構域外的多肽部分上)。可以使用共有序列選擇用於取代的胺基酸殘基；本領域技術人員認可的是，還可取代其它胺基酸殘基。「保守胺基酸取代」是基本上不改變親本序列的結構特徵的取代(例如置換胺基酸應不會破壞親本序列中出現的螺旋，或者破壞作為親本序列特徵或者對其功能性必需的其它二級結構類型)。公認的多肽二級結構和三級結構的實例可參見I^roteins， Structures and Molecular Principles (Creighton 編著，W. H. Freeman and Company,New York (1984)) ； Introduction to Protein Structure (C. Branden 禾口 J. Tooze 編著，Garland Publishing,New York,N. Y. (1991))；以及 Thornton 等，Nature ；354 :105 (1991)，所述文獻各自通過引用結合到本文中。本發明還提供α 4β 7結合多肽的非肽類似物。作為具有與模板肽類似的特性的藥物，非肽類似物常用於製藥工業。非肽化合物的這些類型稱為「肽模擬物」或「模擬肽(peptidomimetics)，，，參見例如 Fauchere，J. Adv. Drug Res. 15 :29(1986) ；Veber 禾口 Freidinger TINS 第 392 頁(1985)；以及 Evans 等，J. Med. Chem. 30 1229 (1987)，所述文獻通過引用結合到本文中。可使用在結構上類似於治療上有益的肽的肽模擬物以產生等同的治療或預防效果。總的來講，模擬肽在結構上類似於範例多肽(即具有所需要的生化性質或藥理活性的多肽)，例如人抗體，但卻具有一個或多個通過本領域眾所周知的方法用選自以下的鍵任選置換的肽鍵一CH2NH—、-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH = CH-(順式和反式)、一C0CH2--、-CH(OH)CH2-和一CH2SO--。用相同類型的D-胺基酸對共有序列的一個或多個胺基酸的系統取代(例如D-賴氨酸替換L-賴氨酸)也可用來產生更穩定的肽。另外，可通過本領域已知的方法產生包含共有序列或基本相同的共有序列變化的約束肽(Rizo和Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61 :387 (1992)，通過引用結合到本文中)，例如通過加入能夠形成使肽環化的分子內二硫鍵的內部半胱氨酸殘基。多肽(例如抗體)的「變體^^含這樣的胺基酸序列，其中與另一個多肽序列相比， 一個或多個胺基酸殘基插入、從中缺失和/或取代入所述胺基酸序列。本發明的變體包括融合蛋白。多肽的「衍生物」是例如通過與另一個化學部分(例如聚乙二醇或白蛋白，例如人血清白蛋白)綴合、磷酸化和/或糖基化而被化學修飾的多肽(例如抗體)。除非另有說明，否則術語「抗體」除包含2條全長重鏈和2條全長輕鏈的抗體外，還包括其衍生物、變體、 片段和突變蛋白，下面描述了有關實例。「抗原結合蛋白」是包含與抗原結合的部分和任選支架或框架部分的蛋白質，所述支架或框架部分允許抗原結合部分呈促進抗原結合蛋白與抗原結合的構象。抗原結合蛋白的實例包括抗體、抗體片段(例如抗體的抗原結合部分)、抗體衍生物和抗體類似物。抗原結合蛋白可包含例如具有移植CDR或CDR衍生物的備選蛋白質支架或人工支架。這類支架包括但不限於抗體衍生的支架，其包含引入以例如穩定抗原結合蛋白的三維結構的突變以及包含例如生物相容性聚合物的完全合成支架。參見例如Korndorfer等，2003 Jroteins Structure, Function, and Bioinformatics,第 53 卷，第 1 期121-129 ；Roque 等，2004, Biotechnol. Prog. 20 :639-654.另外，可以使用肽抗體模擬物(「PAM」)，以及以利用纖連蛋白組分作為支架的抗體模擬物為基礎的支架。抗原結合蛋白可具有例如天然存在的免疫球蛋白的結構。「免疫球蛋白」是四聚體分子。在天然存在的免疫球蛋白中，各種四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，每對具有一條 「輕」鏈(約25kDa)和一條「重」鏈(約50-70kDa)。每條鏈的氨基端部分包括約100-110 個或更多個胺基酸的可變區，主要負責抗原識別。每條鏈的羧基端部分界定了主要負責效應子功能的恆定區。人輕鏈分為κ或λ輕鏈。重鏈分為μ、δ、Υ、α或ε，並將抗體同種型分別定義為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內，可變區和恆定區通過約12 個或更多個胺基酸的「J」區連接，其中重鏈還包括約10個以上胺基酸的「D」區。一般參見 Fundamental Immunology 第 7 章(Paul, W.主編,第 2 版.Raven Press, N. Y. (1989))(通過引用以其整體結合用於所有目的)。每個輕鏈/重鏈對的可變區形成抗體結合部位，使得完整的免疫球蛋白具有兩個結合部位。天然存在的免疫球蛋白鏈的可變區具有相同的通用結構，其相對保守的框架區 (FR)被3個超變區(亦稱互補決定區或CDR)連接。輕鏈和重鏈兩者從N端到C端包含結構域？1 1、0)1 141 2、0)1 241 3、0)1 3和FR4。各結構域的胺基酸的分配與Kabat等人的定義(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版,美國衛生與公眾月艮務部(US Dept. of Health and Human Services), PHS, NIH, NIH 出版號91_3242，1991) 一致。免疫球蛋白鏈中胺基酸的其它編號系統包括IMGT』 (國際ImMunoGeneTics信息系統； Lefranc Dev. Comp. Immunol. 29 185—203 ；2005)禾口 AHo (Honegger 禾口 Pluckthun，J. Mol. Biol. 309(3) :657-670 ；2001)。可從含有具有不同抗原特異性的免疫球蛋白的來源(例如血清或血漿)獲得抗體。如果對這類抗體進行親和純化，則它們可富集特定的抗原特異性。通常由小於約10%
19對具體抗原具有特定結合活性的抗體製備抗體的這類富集製備物。對這些製備物進行若干輪親和純化可提高對抗原具有特異性結合活性的抗體的比例。按這種方式製備的抗體通常稱為「單特異性的」。單特異性抗體製備物可由約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、 75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%或99. 9%的對具體抗原具有特異性結合活性的抗體組成。「抗體」是指完整免疫球蛋白或其與完整抗體競爭特異性結合的抗原結合部分，除非另有說明。可通過重組DNA技術或者通過酶促切割或化學裂解完整抗體來產生抗原結合部分。抗原結合部分尤其包括Fab、Fab'、F(ab' )2、Fv、結構域抗體(dAb)和互補決定區 (CDR)片段、可變區片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和含有足以賦予多肽特異性抗原結合的免疫球蛋白的至少一部分的多肽。Fab片段是具有八、VH、(^結構域的一價片段；F(ab' )2片段是具有在鉸鏈區通過二硫鍵連接的2個Fab片段的二價片段；Fd片段具有Vh和ChI結構域；Fv片段具有抗體單臂的\和Vh結構域；而dAb片段具有Vh結構域、Vl結構域或者Vh或\結構域的抗原結合片段(美國專利號6，846，634,6, 696，245 ；美國申請公布號05/0202512,04/0202995, 04/0038291,04/0009507,03/0039958 ；Ward 等，Nature 341 :544-546,1989)。單鏈抗體(SCFv)是其中Vl和Vh區通過接頭(例如胺基酸殘基的合成序列)連接形成連續的蛋白質鏈的抗體，其中接頭足夠長，以允許蛋白質鏈在自身上摺疊起來並形成一價抗原結合部位(參見例如Bird等，1988，Science 242 :423-26以及Huston等，1988， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 =5879-83)。雙鏈抗體是包含2條多肽鏈的二價抗體，其中每條多肽鏈包含通過接頭連接的Vh和\結構域，所述接頭太短以至於不允許在同一鏈上的兩個結構域間配對，因而只允許每個結構域與另一多肽鏈上的互補結構域配對(參見例如 Holliger 等，1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444-48 以及 Poljak 等，1994, Structure 2 :1121-23)。如果雙鏈抗體的兩條多肽鏈相同，則由其配對產生的雙鏈抗體會具有兩個相同的抗原結合部位。可使用具有不同序列的多肽鏈來製備具有兩個不同抗原結合部位的雙鏈抗體。同樣，三鏈抗體和四鏈抗體是分別包含3條和4條多肽鏈的抗體，分別形成3個和 4個可以是相同或不同的抗原結合部位。可採用Kabat等人(同上)、Lefranc等人(同上)和/或Honegger和 Pluckthim (同上)描述的系統鑑定給定抗體的互補決定區(CDR)和框架區(FR)。可將一個或多個CDR共價或非共價地加入分子中使之成為抗原結合蛋白。抗原結合蛋白可加入一個或多個CDR作為較長的多肽鏈的部分，可使一個或多個CDR與另一條多肽鏈共價連接，或者可非共價地加入一個或多個CDR。CDR允許抗原結合蛋白與特定的目標抗原特異性結合。抗原結合蛋白可具有一個或多個結合部位。如果有超過一個結合部位，則結合部位彼此可相同或不同。例如，天然存在的人免疫球蛋白通常具有2個相同的結合部位，而 「雙特異性」或「雙功能」抗體則具有2個不同的結合部位。術語「人抗體」包括具有一個或多個來源於人免疫球蛋白序列的可變區和恆定區的所有抗體。在一個實施方案中，所有的可變結構域和恆定結構域都來源於人免疫球蛋白序列(完全人抗體)。可以多種方法製備這些抗體，下面描述這些方法的實例，包括用目標抗原給小鼠免疫接種，該小鼠經遺傳修飾成表達來源於人重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體。
人源化抗體具有因一個或多個胺基酸取代、缺失和/或添加而不同於來源於非人類物種的抗體序列的序列，使得將其給予人受試者時，與非人類物種抗體相比，人源化抗體較小可能誘導免疫應答，和/或誘導較不嚴重的免疫應答。在一個實施方案中，使非人類物種抗體重鏈和/或輕鏈框架和恆定結構域的某些胺基酸突變以產生人源化抗體。在另一個實施方案中，使得自人抗體的恆定結構域與非人類物種的可變結構域融合。在另一個實施方案中，改變非人類抗體的一個或多個CDR序列中的一個或多個胺基酸殘基，以在將其給予人受試者時降低非人類抗體可能的免疫原性，其中改變的胺基酸殘基對於抗體與其抗原的免疫特異性結合不是關鍵的，或者所進行的胺基酸序列的改變是保守改變，使得人源化抗體與抗原的結合不比非人類抗體與抗原的結合明顯更差。如果製備人源化抗體的實例可參見美國專利號 6，054, 297,5, 886，152 和 5，877，293。術語「嵌合抗體」是指含有來自一種抗體的一個或多個區和來自一種或多種其它抗體的一個或多個區的抗體。在一個實施方案中，一個或多個CDR來源於人抗α 4β 7抗體。 在另一個實施方案中，所有CDR都來源於人抗α4β7抗體。在另一個實施方案中，將得自不止一種人抗α 4β 7抗體的⑶R混合併匹配於嵌合抗體中。例如，嵌合抗體可包含第一人抗α 4 β 7抗體輕鏈的⑶Rl、第二人抗α 4 β 7抗體輕鏈的⑶R2和⑶R3和第三抗α 4 β 7抗體重鏈的CDR。其它組合是可行的，也包括本發明的實施方案中。此外，框架區可來源於一種相同的抗α 4β 7抗體、來源於一種或多種不同的抗體 (例如人抗體)，或來源於人源化抗體。在嵌合抗體的一個實例中，重鏈和/或輕鏈的一部分與特定物種的抗體或屬於特定抗體類別或亞類的抗體相同、同源或者來源於所述抗體， 而鏈的剩餘部分與另一種物種的抗體或屬於另一種抗體類別或亞類的抗體相同、同源或者來源於所述抗體。還包括具有所需生物活性(即特異性結合α 4β 7的能力)的這類抗體的片段。參見例如美國專利號 4，816，567 和 Morrison, 1985，Science 229 1202-07。「中和抗體」或「抑制抗體」是抑制α 4β 7與MAdCAM-I相互作用的抗體，當採用某種測定法(例如本文實施例中描述的測定法)測定時，過量的抗α 4β 7抗體降低相互作用的量達至少約20%。在不同的實施方案中，抗原結合蛋白降低α 4β 7與MAdCAM-I α 4β 7 的相互作用達至少 30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99% 和 99. 9%。按照本說明書的教導以及採用本領域眾所周知的技術，本領域的普通技術人員可容易地製備抗體的片段或類似物。片段或類似物的氨基端和羧基端出現在功能結構域的邊界附近。可通過將核苷酸和/或胺基酸序列數據與公共或專有序列資料庫進行比較來鑑定結構和功能結構域。可應用計算機化比較方法鑑定存在於已知結構和/或功能的其它蛋白質中的序列基序或預測的蛋白質構象結構域。鑑定摺疊成已知三維結構的蛋白質序列的方法是已知的。參見例如Bowie等，1991，kience 253:164。"CDR移植抗體」是包含一個或多個來源於特定物種或同種型的抗體的CDR和相同或不同物種或同種型的另一抗體框架的抗體。「多特異性抗體」是識別一種或多種抗原上多於一個的表位的抗體。該抗體類型的亞類是「雙特異性抗體」，該抗體識別相同或不同抗原上的2個截然不同的表位。如果抗原結合蛋白與抗原結合的解離常數為1納摩爾或更少，則抗原結合蛋白與抗原(例如人α4β7) 「特異性結合」。如本文中所用，如果抗原結合蛋白結合第一異二聚體整聯蛋白但不結合與第一整聯蛋白具有共同的一條鏈的其它整聯蛋白，則所述抗原結合蛋白是「異二聚體特異性的」。例如，α 4β 7異二聚體特異性的抗體可結合α 4β 7但不結合 α4β 1 或 αΕβ70已知整聯蛋白呈不同構象，這取決於表達整聯蛋白的細胞的活化狀態和某些金屬離子存在與否。呈「活性」構象的整聯蛋白以比呈「無活性」構象的同一整聯蛋白高的親和力結合其同源配體。抗原結合蛋白可與呈僅其活性構象、呈僅其無活性構象或者呈兩種構象或任一種構象的整聯蛋白結合。例如，α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白可在存在或缺乏二價陽離子錳2+(Mn2+)時結合α 4β 7，這就表明了抗原結合蛋白既結合活性的α4β7 又結合無活性的α4β7。「抗原結合結構域」、「抗原結合區」或「抗原結合部位」是含有與抗原相互作用並有利於抗原結合蛋白對抗原的特異性和親和力的胺基酸殘基(或其它部分)的抗原結合蛋白的一部分。對於與其抗原特異性結合的抗體，這可包括至少一個其⑶R結構域的至少部分。「表位」是被抗原結合蛋白(例如被抗體)結合的分子的部分。表位可包含分子的非鄰接部分(例如多肽中，在多肽的一級序列中不鄰接，但在多肽的三級和四級結構的情況下彼此足夠靠近以被抗原結合蛋白結合的胺基酸殘基)。應用GAP電腦程式(GCG Wisconsin軟體包，10. 3版的一部分(Accelrys，San Diego, CA))，採用其默認參數，通過比較序列來確定2個多核苷酸序列或2個多肽序列的 「百分比同一性」。術語「多核苷酸」、「寡核苷酸」和「核酸」始終可互換使用，其包括DNA分子(例如 cDNA或基因組DNA) ,RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸類似物(例如肽核酸和非天然存在的核苷酸類似物)產生的DNA或RNA的類似物，及其雜合體。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的。在一個實施方案中，本發明的核酸分子包含編碼本發明的抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的連續可讀框。如果2個單鏈多核苷酸的序列可以反平行方向排列使得一個多核苷酸中的每個核苷酸與另一個多核苷酸的互補核苷酸相對，而又不引入空位，而且在任一序列的5』端或 3』端又無未配對核苷酸，則2個單鏈多核苷酸的序列彼此是「互補序列」。如果兩個多核苷酸在中等嚴格條件下可彼此雜交，則一個多核苷酸與另一多核苷酸「互補」。因此，多核苷酸可與另一多核苷酸互補而又不是其互補序列。「載體」是可用來將與之連接的另一種核酸導入細胞的核酸。載體的一種類型是 「質粒」，它是指其中可連接其它核酸區段的線性或環狀雙鏈DNA分子。載體的另一種類型是病毒載體(例如複製缺陷型反轉錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)，其中可將其它的DNA區段引入病毒基因組。某些載體能夠在其導入的宿主細胞中自主複製(例如包含細菌複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其它載體(例如非附加型哺乳動物載體)在導入宿主細胞時整合到宿主細胞的基因組，從而與宿主基因組一起複製。「表達載體」是可指導選定多核苷酸表達的載體類型。如果調節序列影響核苷酸序列的表達(例如表達的水平、時機或位置)，則該核苷酸序列與調節序列「有效連接」。「調節序列」是影響與之有效連接的核酸表達(例如表達的水平、時機或位置)的核酸。例如，調節序列可直接對所調節的核酸發揮其作用，或者通過一個或多個其它分子(例如與調節序列和/或核酸結合的多肽)的作用發揮其作用。調節序列的實例包括啟動子、增強子和其它表達調控元件(例如多腺苷酸化信號)。 調節序列的更多實例可參見例如 Goeddel，1990，Gene Expression Technology =Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 禾口 Baron 等，1995, Nucleic Acids Res.23 :3605-06o「宿主細胞」是可用於表達核酸(例如本發明的核酸)的細胞。宿主細胞可以是原核生物，例如大腸桿菌(E. coli)，或者可以是真核生物，例如單細胞真核生物(例如酵母或其它真菌)、植物細胞(例如菸草或番茄植物細胞)、動物細胞(例如人細胞、猴細胞、倉鼠細胞、大鼠細胞、小鼠細胞或昆蟲細胞)或雜交瘤。宿主細胞的實例包括猴腎細胞C0S-7系 (ATCC CRL 1651)(參見 Gluzman 等，1981，Cell 23 175)、L 細胞、C127 細胞、3T3 細胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或其衍生物，例如在無血清培養基中生長的Veggie CHO 和相關細胞系(參見 Rasmussen 等，1998，Cytotechnology 28 31)或在 DHFR 中為缺陷型的 CHO 品系 DX-B11(參見 Urlaub 等，1980，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 :4216-20)、 HeLa細胞、BHK (ATCC CRL 10)細胞系、來源於非洲綠猴腎細胞系CVl (ATCC CCL 70)的CVl/ EBNA細胞系(參見McMahan等，1991，EMBO J. 10 :2821)、人胚腎細胞例如^3J93EBNA或 MSR四3、人表皮A431細胞、人Colo205細胞、其它轉化的靈長類動物細胞系、正常二倍體細胞、來源於初生組織體外培養物的細胞品系、原代外植體、HL-60、U937、HaK或Jurkat細胞。 宿主細胞通常是可用多肽編碼核酸轉化或轉染的培養細胞，所述多肽編碼核酸然後可在宿主細胞中表達。表述「重組宿主細胞」可用來表示已用待表達的核酸轉化或轉染的宿主細胞。宿主細胞還可以是這樣的細胞，其包含核酸但除非將調節序列導入宿主細胞使得調節序列與核酸有效連接，否則不按所需水平表達所述核酸。要理解的是，術語宿主細胞不僅僅是指特定的受試者細胞，而且還是指這類細胞的子代或潛在子代。因為由於例如突變或環境影響，某些修飾可發生在後代中，這類子代實際上可能與親本細胞不同，但是仍包括在本文使用的該術語的範圍內。抗原結合蛋白一方面，本發明提供與α4β7(例如人α 4 β 7)結合的抗原結合蛋白(例如抗體、 抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白和抗體變體)。本發明的抗原結合蛋白包括抑制α 4β 7的生物活性的抗原結合蛋白。這類生物活性的實例包括α 4 β 7與MAdCAM-I結合、表達α 4 β 7的細胞和表達MAdCAM-I的細胞之間的粘附。其它生物活性包括由α 4β 7體內介導的活性，例如運輸或歸巢；具體地講，α 4β 7 參與淋巴細胞運輸至腸內，在炎性腸中MAdCAM-I表達的提高促進將表達α 4β 7的淋巴細胞募集至腸中，在腸中異常的淋巴細胞活化增加炎症反應和組織損傷。不同的抗原結合蛋白可與α 4β 7的不同結構域或表位結合或通過不同的作用機制發揮作用。實例包括但不限於幹擾α 4β 7結合MAdCAM-I的能力的抗原結合蛋白或抑制細胞相互作用(例如表達α 4β 7的細胞和表達MAdCAM-I的細胞之間的粘附)的抗原結合蛋白。作用部位可以是例如細胞內(例如通過幹擾胞內信號轉導級聯)或細胞外。抗原結合蛋白不必完全抑制α 4β 7誘導的活性以可用於本發明中；相反，還考慮使用降低α4β7 的特定活性的抗原結合蛋白。(本文有關結合α 4β 7的抗原結合蛋白在治療具體疾病中的特定作用機制的論述僅是說明性的，本文提供的方法不局限於此)。本發明範圍內的抗α 4β 7抗體的其它衍生物包括抗α 4β 7抗體或其片段與其它蛋白質或多肽的共價或聚集綴合物，例如通過表達包含與抗α 4 β 7抗體多肽的N端或C 端融合的異源多肽的重組融合蛋白。例如，綴合肽可以是異源信號(或前導序列)多肽，例如酵母α-因子前導序列，或肽例如表位標籤。含有抗原結合蛋白的融合蛋白可包含加入以促進純化或鑑定抗原結合蛋白的肽(例如聚-His)。抗原結合蛋白還可與Hopp等(Bio/ Technology 6 :1204,1988)和美國專利 5，011，912 中描述的 FLAG 肽 Asp-Tyr-Lys-Asp -Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (SEQ ID NO :62)連接。FLAG 肽是高抗原性的，並且提供被特異性單克隆抗體(mAb)可逆結合的表位，使得能夠對所表達的重組蛋白進行快速的測定和簡易的純化。可用於製備其中FLAG 肽與給定多肽融合的融合蛋白的試劑是市售的 (Sigma-Aldrich, St. Louis MO)。含有一個或多個抗原結合蛋白的寡聚體可用作α 4β 7拮抗劑。寡聚體可呈共價連接的或非共價連接的二聚體、三聚體或更高寡聚體的形式。還考慮使用包含兩個或更多個抗原結合蛋白的寡聚體，其中一個實例為同二聚體。其它寡聚體包括異二聚體、同三聚體、異三聚體、同四聚體、異四聚體等。—個實施方案涉及包含多個抗原結合蛋白的寡聚體，所述抗原結合蛋白通過與抗原結合蛋白融合的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接。這類肽可以是肽接頭(間隔基)或具有促進寡聚化性質的肽。亮氨酸拉鏈和來源於抗體的某些多肽也在可促進與之連接的抗原結合蛋白寡聚化的肽之中，下面將更詳細予以描述。在具體的實施方案中，寡聚體包含2-4個抗原結合蛋白。寡聚體的抗原結合蛋白可呈任何形式，例如上述任何形式，例如變體或片段。優選寡聚體包含具有α4β7結合活性的抗原結合蛋白。在一個實施方案中，寡聚體使用來源於免疫球蛋白的多肽製備。包含與抗體衍生多肽的不同部分(包括Fc結構域)融合的某些異源多肽的融合蛋白的製備披露於例如 Ashkenazi 等，1991，PNAS USA 88 :10535 ；Byrn 等，1990，Nature 344 :677 ；以及 Hollenbaugh 等，1992 〃 Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins 「，載於 Current Protocols in Immunology,±曾幹Ij 4,第 10. 19. 1-10. 19. 11 頁。本發明的一個實施方案涉及包含通過使抗α 4β 7抗體的α4β7結合片段與抗體的Fc區融合而產生的2個融合蛋白的二聚體。例如，可如下製備二聚體通過將編碼融合蛋白的基因融合物插入合適的表達載體，在用重組表達載體轉化的宿主細胞中表達基因融合物，並且允許表達的融合蛋白非常像抗體分子地裝配，於是在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵以得到二聚體。本文使用的術語「Fe多肽」包括來源於抗體的Fc區的多肽的天然和突變蛋白形式。還包括含有促進二聚化的鉸鏈區的這類多肽的截短形式。包含Fc部分的融合蛋白(和由其形成的寡聚體)提供在A蛋白或G蛋白柱上通過親和色譜法而易於純化的優勢。一種合適的Fc多肽，參見PCT申請WO 93/10151(通過引用結合到本文中)，是從 N端鉸鏈區延伸到人IgGl抗體Fc區的天然C端的單鏈多肽。另一種有益的Fc多肽是Fc 突變蛋白，參見美國專利5，457，035和Baum等，1994，EMBO J. 13 :3992-4001。這種突變蛋白的胺基酸序列除以下不同之外與WO 93/10151提供的天然Fc序列相同胺基酸19由Leu 變為Ala，胺基酸20由Leu變為Glu，胺基酸22由Gly變為Ala。突變蛋白對Fc受體的親和力降低。
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在其它實施方案中，抗α 4β 7抗體的重鏈和/或輕鏈的可變部分可取代某一抗體重鏈和/或輕鏈的可變部分。或者，寡聚體是含或不含肽接頭(間隔基肽)的包含多個抗原結合蛋白的融合蛋白。合適的肽接頭可參見美國專利4，751，180和4，935，233中的肽接頭。用於製備寡聚體抗原結合蛋白的另一種方法包括使用亮氨酸拉鏈。亮氨酸拉鏈結構域是促進亮氨酸拉鏈結構域存在於其中的蛋白質寡聚化的肽。最初在若干種DNA結合蛋白中鑑定出亮氨酸拉鏈(Landschulz等，1988，Science 240 1759)，此後在多種不同蛋白質中也發現了亮氨酸拉鏈。在已知的亮氨酸拉鏈中的是天然存在的二聚化或三聚化的肽及其衍生物。適於產生可溶性寡聚蛋白的亮氨酸拉鏈結構域的實例參見PCT申請WO 94/10308，來源於肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉鏈參見Hoppe等，1994，FEBS Letters 344:191，所述文獻通過引用結合到本文中。允許與之融合的異源蛋白質穩定三聚化的修飾亮氨酸拉鏈的使用參見Fanslow等，1994，Semin. Immunol. 6 :267-78。在一種方法中，包含與亮氨酸拉鏈肽融合的抗α 4β 7抗體片段或衍生物的重組融合蛋白在合適的宿主細胞中表達，並從培養物上清液中回收形成的可溶性寡聚抗α 4β 7抗體片段或衍生物。一方面，本發明提供幹擾α 4β 7與MAdCAM-I結合的抗原結合蛋白。這類抗原結合蛋白可針對α 4β 7或其片段、變體或衍生物產生，並在幹擾α 4β 7與MAdCAM-I結合的能力的常規測定法中篩選。合適測定法的實例是測定抗原結合蛋白抑制MAdCAM-l(即可溶性MAdCAM-I)與表達α 4β 7的細胞結合的能力的測定法，或者測定抗原結合蛋白減少由 MAdCAM-I禾Π α 4 β 7的相互作用(即表達α 4 β 7的細胞與MAdCAM-I或表達MAdCAM-I的細胞粘附)引起的生物反應或細胞反應的能力的測定法。測定抗原結合蛋白的其它測定法包括對抗原結合蛋白與α 4β 7多肽的結合和已知抗原結合蛋白與α 4β 7多肽的結合進行定性或定量比較的測定法，本文公開了測定法的若干實例。另一方面，本發明提供具有物種選擇性的抗原結合蛋白。在一個實施方案中，抗原結合蛋白與一種或多種哺乳動物α 4β 7結合，例如與人α 4β 7和一種或多種小鼠、大鼠、 豚鼠、倉鼠、沙鼠(gerbil)、貓、兔、狗、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝和非人類靈長類動物α4β7 結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白與一種或多種靈長類動物α 4β 7結合，例如與人α 4β 7和一種或多種食蟹猴、狨猴、恆河猴、絹毛猴和黑猩猩α 4β 7結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白與人、食蟹猴、狨猴、恆河猴、絹毛猴或黑猩猩α 4β 7特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白不與一種或多種小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、沙鼠、貓、兔、狗、 山羊、綿羊、牛、馬、駱駝和非人類靈長類動物α4β7結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白不與新世界猴物種例如狨猴結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白對α 4β 7以外的任何天然存在的蛋白質沒有特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白對哺乳動物α4β7以外的任何天然存在的蛋白質沒有特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白對靈長類動物α4β7 以外的任何天然存在的蛋白質沒有特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白對人 α 4β 7以外的任何天然存在的蛋白質沒有特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白與至少一種非人類靈長類動物(例如食蟹猴)的α4β7和人α 4β 7特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白以相似的結合親和力與非人類靈長類動物、食蟹猴和人 α 4β 7特異性結合。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白阻斷非人類靈長類動物、食蟹猴和人α4β7的活性。在另一個實施方案中，在本文所述測定法中，抗原結合蛋白對於非人類靈長類動物、食蟹猴和人α 4 β 7具有相似的IC5tl或EC5tlt5可採用本領域眾所周知的方法並按照本說明書的教導來測定抗原結合蛋白對 α 4β 7的選擇性。例如，可以採用蛋白質印跡、FACS、ELISA或RIA測定選擇性。另一方面，本發明提供具有一個或多個下列特徵的結合α 4β 7的抗原結合蛋白 (例如抗α4β7抗體)與人和非人類靈長類動物α 4β 7兩者結合、抑制MAdCAM-I與 α 4 β 7的結合、抑制表達α 4 β 7的細胞與MAdCAM-I粘附、抑制表達α 4 β 7的細胞與表達 MAdCAM-I的細胞粘附、抑制表達α 4β 7的細胞運輸至包含表達MAdCAM-I的細胞的組織中， 結合活性和無活性形式的α 4β 7兩者、引起細胞表面表達的α 4β 7相對小地減量調節。本發明的抗原結合蛋白的抗原結合片段可通過常規技術產生。這類片段的實例包括但不限於Fab和F(ab' )2片段。還考慮通過遺傳工程技術產生的抗體片段和衍生物。其它實施方案包括嵌合抗體，例如人源化形式的非人類(例如鼠)單克隆抗體。這類人源化抗體可通過已知技術製備，並且提供在將抗體給予人時免疫原性降低的優勢。在一個實施方案中，人源化單克隆抗體包含鼠抗體的可變結構域(或其所有或部分抗原結合部位)和來源於人抗體的恆定結構域。或者，人源化抗體片段可包含鼠單克隆抗體的抗原結合部位和來源於人抗體的可變結構域片段(缺乏抗原結合部位)。製備嵌合單克隆抗體和其它改造的單克隆抗體的方法包括以下文獻描述的方法Riechmarm 等，1988，Nature 332 :323 ；Liu 等，1987，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84 :3439 ；Larrick 等， 1989, Bio/Technology 7 :934 ；以及 Winter 等，1993，TIPS 14:139。在一個實施方案中， 嵌合抗體是CDR移植抗體。以下列文獻中論述了將抗體人源化的技術例如美國專利申請號 10/194，975(2003 年 2 月 27 公布)；美國專利號 5，869，619,5, 225，539,5, 821，337、 5，859，205 ；Padlan 等，1995，FASEB J. 9 :133-39 ；以及 Tamura 等，2000，J. Immunol. 164 1432-41。已經開發出在非人類動物中產生人或部分人抗體的方法。例如，已製備了其中通過各種方法使一種或多種內源免疫球蛋白基因失活的小鼠。已將人免疫球蛋白基因導入小鼠中以置換失活的小鼠基因。將在動物中產生的抗體摻入由導入該動物的人遺傳物質編碼的人免疫球蛋白多肽鏈中。在一個實施方案中，非人類動物(例如轉基因小鼠)用α4β7 多肽免疫接種，使得在該動物中產生針對α 4β 7多肽的抗體。合適免疫原的一個實例是可溶性人α 4β 7，例如包含部分α 4β 7的多肽，或其它免疫原性片段α 4β 7。合適免疫原的另一個實例是表達高水平α 4β 7的細胞或其細胞膜製備物。用於產生和使用轉基因動物以製備人或部分人抗體的技術的實例參見美國專利 5, 814, 318,5, 569, 825 和 5, 545, 806 ；Davis 等，2003，Production of human antibodies from transgenic mice 載於 Lo 主編白勺 Antibody Engineering :Methods and Protocols, Humana Press, NJ : 191-200 ；Kellermann 等，2002, Curr Opin Biotechnol. 13 593-97 ；Russel 等，2000，Infect Immun. 68 :1820-26 ；Gallo 等，2000，Eur J Immun. 30 534-40 ；Davis 1999, Cancer Metastasis Rev. 18 :421-25 ；Green,1999, J Immunol Methods. 231 :11-23 Jakobovits, 1998, Adv Drug Deliv Rev 31 :33-42 ；Green 等，1998， J Exp Med. 188 :483-95 Jakobovits A, 1998, Exp. Opin. Invest. 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Ag 41、 Sp210-Agl4、F0、NS0/U、MPC-ll、MPCll-X45-GTG 1. 7 和 S194/5XX0 Bul ；可用於大鼠融合的細胞系的實例包括R210. RCY3、Y3-Ag 1. 2. 3、IR983F和4B210。用於細胞融合的其它細胞係為 U-266、GM1500-GRG2、LICR-L0N-HMy2 和 UC729-6。在一個實施方案中，如下產生雜交瘤細胞系通過用α 4β 7免疫原免疫接種動物 (例如具有人免疫球蛋白序列的轉基因動物)；從免疫動物中收穫脾細胞；使收穫的脾細胞與骨髓瘤細胞系融合，從而產生雜交瘤細胞；由雜交瘤細胞建立雜交瘤細胞系，並鑑定產生結合α 4β 7多肽的抗體的雜交瘤細胞系。本發明包括這類雜交瘤細胞系及通過其產生的抗α 4β 7單克隆抗體。通過雜交瘤細胞系分泌的單克隆抗體可採用本領域已知的任何技術純化。可對雜交瘤或mAb進行進一步篩選以鑑定具有特定性質的mAb，例如阻斷α 4β 7誘導的活性的能力。下面的實施例中提供了這類篩選法的實例。還可以採用稱為基因免疫的方法產生單克隆抗體。例如，可將編碼目標抗原的核酸摻入病毒載體(例如腺病毒載體)中。然後使用所得載體在合適的宿主動物(例如非肥胖性糖尿病即NOD小鼠)中產生針對目標抗原的免疫應答。Ritter等人(Biodrugs 16(1) 3-10(2002))相當詳盡充實地描述了該技術，所述文獻的公開內容通過引用結合到本文中。在抗體結合部位中心的互補決定區(CDR)的分子進化也被用於來分離親和力增強的抗體，例如對c-erbB-2的親和力增強的抗體，如Schier等，1996，J. Mol. Biol. 263 :551 所述。因此，這類技術可用於製備抗α 4β 7的抗體。針對α 4β 7的抗原結合蛋白可用於例如體外或體內檢測α 4β 7多肽或表達 α 4β 7的細胞的存在情況的測定法中。抗原結合蛋白還可用於通過免疫親和色譜法來純化α4β7蛋白。另外可阻斷MAdCAM-I和α 4 β 7的相互作用的抗原結合蛋白可用於抑制因這類相互作用而產生的生物活性。阻斷抗原結合蛋白可用於本發明的方法。起α4β7拮抗劑作用的這類抗原結合蛋白可用於治療任何α 4β 7誘導的病況，包括但不限於炎性病況。 在一個實施方案中，通過包括給轉基因小鼠免疫接種的方法而產生的人抗α4β7單克隆抗體可用於治療這類病況。可將抗原結合蛋白用於體外方法，或體內給予以抑制α 4β 7誘導的生物活性。因此，可以治療由α 4β 7及其與MAdCAM-I的相互作用而引起或加重(直接或間接)的病症， 本文提供了所述病症的實例。在一個實施方案中，本發明提供治療方法，所述方法包括以對降低α 4β 7誘導的生物活性有效的量，將α 4β 7阻斷性抗原結合蛋白體內給予有需要的哺乳動物。本發明的抗原結合蛋白包括抑制α 4β 7的生物活性的部分人和完全人單克隆抗體。一個實施方案涉及至少部分阻斷人α 4β 7與MAdCAM-I的相互作用的人單克隆抗體。 在一個實施方案中，抗體通過用α 4β 7免疫原給轉基因小鼠免疫接種來產生。在另一個實施方案中，免疫原是人α 4β 7多肽(例如經轉化或轉染以表達α 4β 7的細胞，或者天然表達α4β7的細胞)。本文還提供來源於這類免疫小鼠的雜交瘤細胞系，其中雜交瘤分泌結合α 4β 7的單克隆抗體。雖然人抗體、部分人抗體或人源化抗體可適於許多應用，特別是包括將抗體給予人受試者的那些應用，但是其它類型的抗原結合蛋白也可適於某些應用。例如，本發明的非人類抗體可以來源於任何產抗體動物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驢或非人類靈長類動物 (例如猴(例如食蟹猴或恆河猴)或類人猿(例如黑猩猩))。本發明的非人類抗體可用於例如體外和基於細胞培養的應用，或者其中對本發明抗體的免疫應答不會發生、不明顯、可被阻止、無需擔心或是所需要的任何其餘應用。在一個實施方案中，將本發明的非人類抗體給予非人類受試者。在另一個實施方案中，非人類抗體不會在非人類受試者中誘導免疫應答。在另一個實施方案中，非人類抗體來自與非人類受試者相同的物種，例如將本發明的小鼠抗體給予小鼠。可如下製備來自特定物種的抗體通過例如用所需免疫原(例如表達 α 4 β 7的細胞，或可溶性α 4 β 7多肽)給該物種的動物免疫接種，或者採用產生該物種的抗體的人工系統(例如用於產生特定物種的抗體的基於細菌或噬菌體展示的系統)，或者通過例如用其它物種的恆定區置換抗體的恆定區，將一種物種的抗體轉化成另一種物種的抗體，或者通過置換抗體的一個或多個胺基酸殘基使得抗體更像其它物種的抗體序列。在一個實施方案中，抗體為包含來源於兩種或更多種不同物種的抗體的胺基酸序列的嵌合抗體。可通過多種常規技術的任一種製備抗原結合蛋白。例如，可採用本領域已知的任何技術，從天然表達抗原結合蛋白的細胞中純化出抗原結合蛋白(例如可從產生抗體的雜交瘤中純化出抗體)，或者在重組表達系統中產生抗原結合蛋白。參見例如Monoclonal Antibodies, Hybridomas :A New Dimension in Biological Analyses, Kennet 等(編輯)，Plenum Press, New York (1980)；以及 Antibodies :A Laboratory Manual, Harlow 禾口 Land (編輯)，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1988)。本領域已知的任何表達系統可用來製備本發明的重組多肽。一般而言，宿主細胞用包含編碼所需多肽的DNA的重組表達載體轉化。在可採用的宿主細胞中的是原核生物、酵母或高等真核細胞。原核生物包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，例如大腸桿菌或桿菌。 高等真核細胞包括昆蟲細胞和哺乳動物源的確立細胞系。合適哺乳動物宿主細胞系的實例包括猴腎細胞的 C0S-7 系(ATCC CRL 1651) (Gluzman 等，1981，Cell 23 :175)、L 細胞、293 細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCC CCL 163)、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、BHK (ATCC CRL 10)細胞系和來源於非洲綠猴腎細胞系CVI的CVI/EBNA細胞系(ATCC CCL 70)(參見 McMahan等，1991，EMBO J. 10 :2821)。用於細菌、真菌、酵母和哺乳動物細胞宿主的合適克隆禾口表達載體參見 Pouwels 等(Cloning Vectors :A Laboratory Manual, Elsevier, New York,1985)。可將轉化細胞在促進多肽表達的條件下培養，並通過常規蛋白質純化方法回收多肽。這類純化方法之一包括例如在具有與之結合的全部或部分(例如胞外結構域)α 4β 7 的基質上應用親和色譜法。本文考慮使用的多肽包括基本均質的重組哺乳動物抗α4β7 抗體多肽，其基本上不含汙染的內源物質。多肽的胺基酸序列可用本領域已知的任何方法證實，並且可與本文序列表中公開的序列相同，或者可因加工所致以一個或多個胺基酸殘基不同於那些序列。例如，在全部或部分的基本均質多肽中，可通過蛋白酶解加工或在培養期間發生的其它加工(例如C端Lys 殘基的加工)，從輕鏈或重鏈(或相關單鏈分子)中剔除C端胺基酸。或者，剔除不止一個 C端胺基酸殘基，例如2個C端胺基酸，或者3、4或5個C端胺基酸。例如，如所公開的一樣，可將C端截短至抗體重鏈的醯胺化脯氨酸。同樣，可缺失N端胺基酸，例如可缺失1、2、 3、4或5個N端胺基酸。備選或另外地，胺基酸殘基可進行翻譯後修飾，例如但不限於可使穀氨醯胺(特別是N端的穀氨醯胺)環化或轉化成焦穀氨酸；另外或備選地，胺基酸可以進行脫醯胺化、 異構化、糖化和/或氧化。本發明的多肽可在本領域眾所周知的位點進行其它的翻譯後修飾，包括糖基化，例如N連接或0連接的糖基化。如前所述，可在多肽胺基酸序列中進行改變以阻止這類變動或使這類變動最小化，或者在這類處理是有益的情況下促進這類變動。基本均質的多肽的製備物可包含約1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%已進行一種或多種特定形式的加工的多肽。基本均質的多肽的製備物可包含一些(小於或等於50% )、大部分(大於50%但小於90% )或基本上全部(大於90% )的特定形式的加工多肽。此外，這類製備物可包含具有不同水平的不止一種加工相關修飾類型的多肽，例如，多肽的一些、大部分或基本上全部的C端賴氨酸可被剔除(例如SEQ ID Ν0:72的C端賴氨酸)，以及一些、大部分或基本上全部的N端胺基酸轉化成焦穀氨酸(例如表1和/或表2或共有序列中所顯示的任何多肽)。可通過多種已知技術的任一種針對所需要的性質製備並篩選抗原結合蛋白。某些技術包括分離編碼目標抗原結合蛋白(例如抗α4β7抗體)的多肽鏈(或其部分)的核酸，和通過重組DNA技術操作核酸。例如，核酸可與另一種目標核酸融合，或者可被改變(例如通過誘變或其它常規技術)以添加、缺失或取代一個或多個胺基酸殘基。一方面，本發明提供本發明的抗α 4β 7抗體的抗原結合片段。這類片段可完全由抗體衍生的序列組成或者可包含其它序列。抗原結合片段的實例包括Fab、F(ab' )2、 單鏈抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和結構域抗體。其它實例參見Limde等，2002， Biochem. Soc. Trans. 30 :500_06o
可通過經由胺基酸橋(短肽接頭)連接重鏈和輕鏈可變結構域(Fv區)片段得到單條多肽鏈，來形成單鏈抗體。通過使編碼肽接頭的DNA在編碼2個可變結構域多肽隊和Vh)的DNA之間融合來製備這類單鏈Fv(SCFV)。所得多肽可在自身上摺疊起來形成抗原結合單體，或者可以形成多聚體(例如二聚體、三聚體或四聚體)，這取決於2個可變結構域間的柔性接頭的長度(Kortt 等，1997，Prot. Eng. 10 :423 ；Kortt 等，2001，Biomol. Eng. 18 :95-108)。可通過使不同的包含八和Vh的多肽組合，形成結合不同表位的多聚體 scFv (Kriangkum等，2001，Biomol. Eng. 18 :31-40)。開發用於產生單鏈抗體的技術包括以下文獻中所述的這些技術美國專利號4，946，778 ；Bird, 1988，Science 242 :423 ；Huston 等，1988，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879 ；Ward 等，1989，Nature 334 :544, de Graaf 等，2002，Methods Mol Biol. 178 :379_87。本發明的抗原結合蛋白(例如抗體、抗體片段和抗體衍生物)可包含本領域已知的任何恆定區。輕鏈恆定區可以是例如K型或λ型輕鏈恆定區，例如人K型或λ型輕鏈恆定區。重鏈恆定區可以是例如α型、δ型、ε型、Υ型或μ型重鏈恆定區，例如人α 型、δ型、ε型、Υ型或μ型重鏈恆定區。在一個實施方案中，輕鏈或重鏈恆定區是天然存在的恆定區的片段、衍生物、變體或突變蛋白。已知從目標抗體得到不同亞類或同種型的抗體的技術，即亞類轉換(subclass switching)。因此，例如可由IgM抗體得到IgG抗體，反之亦然。這類技術允許製備具有既定抗體(親本抗體)的抗原結合性質，但亦顯示與親本抗體性質不同的抗體同種型或亞類有關的生物性質的新抗體。可以應用重組DNA技術。編碼特定抗體多肽的克隆DNA可應用於這類方法，例如編碼所需同種型抗體恆定結構域的DNA。另參見Lantto等，2002， Methods Mol. Biol. 178 :303_16。此外，如果需要IgG4，則同樣可能需要在鉸鏈區中引入點突變(CPSCP- > CPPCP)(參見 Bloom 等，1997，Protein Science 6 :407，通過引用結合到本文中)，以降低形成可在IgG4抗體中導致異質性的H鏈內二硫鍵的趨勢。此外，用來得到具有不同性質(即對其結合的抗原具有變化的親和力)的抗原結合蛋白的技術也是已知的。這類技術之一稱為鏈改組，包括在絲狀噬菌體表面展示免疫球蛋白可變結構域基因庫，通常稱為噬菌體展示。鏈改組已被用來製備抗半抗原2-苯基Pf 唑-5-酮的高親和力抗體，參見Marks等，1992，BioTechnology, 10 :779。在另一個實施方案中，本發明提供具有自α 4β 7解離的低解離常數的抗原結合蛋白。在一個實施方案中，抗原結合蛋白的Kd為IOOpM或更低。在另一個實施方案中，&為 IOpM或更低；在另一個實施方案中，Kd為5ρΜ或更低，或者為IpM或更低。在另一個實施方案中，Kd與本文實施例所述抗體的基本相同。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白以與本文實施例所述抗體基本相同的Kd與α 4 β 7結合。另一方面，本發明提供抑制α 4β 7活性的抗原結合蛋白，所述活性為例如與 MAdCAM-I結合(或粘附)、與表達MAdCAM-I的細胞結合或者表達α 4β 7的細胞和表達 MAdCAM-I的細胞之間的粘附。在一個實施方案中，抗原結合蛋白的IC5tl為IOOOpM或更低。 在另一個實施方案中，IC5tl為500ρΜ或更低；在另一個實施方案中，IC5tl為IOOpM或更低。在另一個實施方案中，IC5tl與本文實施例所述抗體的IC5tl基本相同。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白以與本文實施例所述抗體基本相同的IC5tl抑制α 4β 7的活性。在一個實施方案中，本發明的抗原結合蛋白對α4β7(或表達^40 7的細胞)的表觀親和力為IOOOpM或更低。在其它實施方案中，抗原結合蛋白的表觀親和力為500pM或更低、200pM或更低、IOOpM或更低、80pM或更低、40pM或更低或者15pM或更低。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白的表觀親和力與本文實施例所述抗體的基本相同。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白的表觀親和力與本文實施例所述抗體的基本相同。另一方面，本發明提供結合活性和無活性形式的α 4β 7兩者的抗原結合蛋白。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白只結合α 4β 7的一種形式，或優先結合一種形式。例如， 抗原結合蛋白可在Mn2+存在或不存在時結合α4β7(即結合活性和無活性形式兩者)。或者，抗原結合蛋白只可在Mn2+存在或只在缺乏Mn2+時結合α 4 β 7，或其可在這一種條件下以比在另一種條件下更高的親和力結合，這就表明了優先與特定的α 4β 7形式結合。在另一個實施方案中，本發明提供與本文公開的抗體競爭結合α 4β 7的抗原結合蛋白。這種競爭能力可通過本領域眾所周知的方法測定，例如通過採用螢光激活細胞分選(FACS)技術或其它類似測定法觀察到的競爭結合表達α 4β 7的細胞、通過在測定法例如粘附測定法(即表達α 4β 7的細胞和表達MAdCAM-I的細胞之間粘附)中的競爭，或者通過在本文所述另一種測定法中的競爭。一方面，與本文公開的抗體競爭結合α 4β 7的抗原結合蛋白結合與所述抗體相同的表位或重疊(或鄰接)表位。另一方面，與本文公開的抗體競爭結合α 4β 7的抗原結合蛋白抑制α 4β 7的活性。另一方面，本發明提供以下抗原結合蛋白，其與在細胞表面上表達的人α4β7結合，並且當如此結合時，抑制α 4β 7與MAdCAM-I的相互作用而不引起細胞表面上α4β7 的量的顯著減少。可以採用測定或估算細胞表面上和/或細胞內α 4β 7的量的任何方法。在一個實施方案中，本發明提供以下抗原結合蛋白，其與在細胞表面上表達的α4β7 結合，並且當如此結合時，抑制α 4 β 7與MAdCAM-I的相互作用而又不顯著提高細胞表面上 α4β7的內化率。在其它實施方案中，抗原結合蛋白與表達α 4β 7的細胞的結合引起小於約 75%、50%、40%、30%、20%、15%、10%、5%、1% 或 0. 的細胞表面 α4β7 被內化。另一方面，本發明提供具有至少1天體外或體內(例如給予人受試者時)半壽期的抗原結合蛋白。在一個實施方案中，抗原結合蛋白的半壽期至少為3天。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白的半壽期為4天或更長。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白的半壽期為8天或更長。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白是衍生化或修飾的，使得與未衍生化或未修飾的抗原結合蛋白相比，其具有較長的半壽期。在另一個實施方案中，抗原結合蛋白含有延長血清半壽期的一個或多個點突變，例如參見2000年2月M日公布的WO 00/09560， 通過引用予以結合。本發明還提供多特異性抗原結合蛋白，例如雙特異性抗原結合蛋白，例如通過兩個不同的抗原結合部位或區域與α 4β 7的兩個不同表位結合或者與α 4β 7的一個表位和另一種分子的一個表位結合的抗原結合蛋白。此外，本文公開的雙特異性抗原結合蛋白可包含一種本文所述抗體的α 4β 7結合部位和另一種本文所述抗體(包括本文通過參照其它出版物描述的抗體)的第二 α 4β 7結合區。或者，雙特異性抗原結合蛋白可包含本文所述抗體之一的抗原結合部位和本領域已知的另一種α 4β 7抗體或者通過已知方法或本文所述方法製備的抗體的第二抗原結合部位。製備雙特異性抗體的多種方法是本領域已知的，可參見2001年4月20日提交的美國專利申請09/839，632 (通過引用結合到本文中)。這類方法包括使用雜種雜交瘤(參見Milstein等，1983，Nature 305 :537)和其它雜交瘤(美國專利4，474，893、美國專利 6，106，833)以及抗體片段的化學偶聯(Brennan 等，1985，Science 229 :81 ；Glennie 等，1987，J. Immunol. 139 :2367 ；美國專利6，010，902)。此外，雙特異性抗體可通過重組方法產生，例如通過使用亮氨酸拉鏈部分(即得自Fos和Jim蛋白，其優先形成異二聚體； Kostelny等，1992，J. Immnol. 148 1547)或其它鎖鑰相互作用結構域結構(參見美國專利 5，582，996)。其它有益的技術包括以下文獻中描述的技術=Kortt等，1997，同上；美國專利 5，959，083 ；以及美國專利 5，807，706。另一方面，本發明的抗原結合蛋白包含抗體的衍生物。衍生化抗體可包含賦予抗體所需性質(例如在具體應用中延長的半壽期)的任何分子或物質。衍生化抗體可包含例如可檢測(或標記)部分(例如放射性分子、比色分子、抗原分子或酶分子、可檢測珠粒(例如磁珠或電子緻密珠粒(例如金珠))或與其它分子(例如生物素或鏈黴抗生物素)結合的分子)、治療或診斷部分(例如放射性部分、細胞毒部分或藥用活性部分)或者提高用於特定用途(例如給予受試者例如人受試者，或者其它體內或體外用途)的抗體適宜性的分子。可用於衍化抗體的分子的實例包括白蛋白(例如人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。 可採用本領域眾所周知的技術製備抗體的白蛋白連接的衍生物和聚乙二醇化衍生物。在一個實施方案中，抗體與運甲狀腺素蛋白(TTR)或TTR變體綴合或以其它方式連接。TTR或 TTR變體可用例如選自以下的化學物質進行化學修飾葡聚糖、聚(η-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚丙二醇(propropylene glycol)均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。美國專利申請號20030195154。另一方面，本發明提供使用本發明的抗原結合蛋白篩選與α 4β 7結合的分子的方法。可採用任何合適的篩選技術。在一個實施方案中，將α4β7分子或其片段(本發明的抗原結合蛋白與之結合)與本發明的抗原結合蛋白和另一種分子接觸，其中如果所述另一種分子降低抗原結合蛋白與α 4β 7的結合，則該分子與α4β7結合。可採用任何合適的方法(例如ELISA)檢測抗原結合蛋白的結合。可如上所述通過對抗原結合蛋白進行可檢測標記來簡化抗原結合蛋白與α 4β 7結合的檢測。在另一個實施方案中，對α4β7結合分子進行進一步分析，以確定它是否抑制α 4β 7活化和/或信號轉導。一方面，本發明提供分離的核酸分子。所述核酸包含例如編碼全部或部分抗原結合蛋白(例如本發明抗體的一條或兩條鏈)或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的多核苷酸、足以用作雜交探針的多核苷酸、用於鑑定、分析、突變或擴增編碼多肽的多核苷酸的PCR 引物或測序引物、抑制多核苷酸的表達的反義核酸，以及前述多核苷酸的互補序列。核酸可為任何長度。其長度可為例如 5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、 250、300、350、400、450、500、750、1，000,1, 500,3, 000,5, 000 個或更多個核苷酸，和 / 或可包含一個或多個其它序列例如調節序列，和/或為較大核酸(例如載體)的部分。核酸可為單鏈或雙鏈，並且可包含RNA和/或DNA核苷酸及其人工變體(例如肽核酸)。可從用α 4β 7免疫接種的小鼠的B細胞中分離出編碼抗體多肽(例如重鏈或輕鏈、僅可變結構域或全長多肽)的核酸。核酸可通過常規方法分離，例如聚合酶鏈式反應 (PCR)。本發明還提供在特定雜交條件下與其它核酸雜交的核酸。用於核酸雜交的方法是本領域眾所周知的。參見例如 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989),6.3. 1-6.3.6。本文定義的中等嚴格雜交條件使用含有5X氧化鈉/檸檬酸鈉(SSC),0. 5% SDSU.OmM EDTA (pH 8.0)的預洗溶液、約50%甲醯胺、6X SSC、雜交緩衝液並且雜交溫度為55°C (或其它類似的雜交溶液，例如一種雜交溶液含有約50%甲醯胺，雜交溫度為42°C )，以及60°C、在0. 5XSSC、0. 1% SDS中的洗滌條件。嚴格雜交條件在6X SSC中於45°C雜交，接著在0. IX SSC、0. 2% SDS中於68°C—次或多次洗滌。此外， 本領域技術人員可操控雜交和/或洗滌條件以提高或降低雜交的嚴格性，使得包含彼此有至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%同一性的核苷酸序列的核酸通常保持彼此雜交。影響雜交條件的選擇的基礎參數和設計合適條件的指導可參見例如 Sambrook、Fritsch 禾口 Maniatis (1989，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor,N. Y.，第 9禾口 11 章；以及Current Protocols in Molecular Biology，1995 ;Ausubel 等主編，John Wiley & Sons，Inc.，第 2. 10和6. 3-6. 4節)，本領域的普通技術人員可根據例如DNA的長度和/或鹼基組成容易地確定。通過核酸突變可引入改變，從而導致其編碼的多肽(例如抗原結合蛋白)的胺基酸序列發生改變。可採用本領域已知的任何技術引入突變。在一個實施方案中，採用例如位點定向誘變方案，改變一個或多個特定的胺基酸殘基。在另一個實施方案中，採用例如隨機誘變方案改變一個或多個隨機選擇的殘基。無論如何進行，突變體多肽均可表達並針對所需要的性質(例如與α 4 β 7結合或阻斷α 4 β 7與地址素(例如MAdCAM)的結合)篩選。可將突變引入核酸而又不顯著改變其編碼的多肽的生物活性。例如，可以進行核苷酸取代，導致在非必需胺基酸殘基上的胺基酸取代。在一個實施方案中，使核苷酸序列或其所需片段、變體或衍生物突變，使得其編碼包含一個或多個胺基酸殘基缺失或取代的胺基酸序列。在另一個實施方案中，誘變將胺基酸插入一個或多個胺基酸殘基附近。或者，可將一個或多個突變引入核酸，這選擇性地改變其編碼的多肽的生物活性(例如α4β7的結合、抑制α 4 β 7與地址素(例如MAdCAM)的結合等)。例如，突變可定量或定性地改變生物活性。定量改變的實例包括提高、降低或消除活性。定性改變的實例包括改變抗原結合蛋白的抗原特異性。另一方面，本發明提供適宜用作引物或雜交探針以檢測本發明的核酸序列的核酸分子。本發明的核酸分子可只包含編碼本發明全長多肽的核酸序列的一部分，例如可用作探針或引物的片段或者編碼本發明多肽的活性部分(例如α 4β 7結合部分)的片段。基於本發明的核酸序列的探針可用來檢測所述核酸或類似核酸，例如編碼本發明多肽的轉錄物。探針可包含標記基團，例如放射性同位素、螢光化合物、酶或酶輔因子。這類探針可用來鑑定表達所述多肽的細胞。另一方面，本發明提供包含編碼本發明多肽或其部分的核酸的載體。載體的實例包括但不限於質粒、病毒載體、非附加型哺乳動物載體和表達載體，例如重組表達載體。本發明的重組表達載體可包含本發明的核酸，其形式適於在宿主細胞中表達核酸。重組表達載體包括在用於表達的宿主細胞基礎上選出的一個或多個調節序列，其與待表達的核酸序列有效連接。調節序列包括在許多類型的宿主細胞中指導核苷酸序列的組成型表達的調節序列(例如SV40早期基因增強子、勞斯肉瘤病毒啟動子和巨細胞病毒啟動子)、只在某些宿主細胞中指導核苷酸序列表達的調節序列(例如組織特異性調節序列，參見 Voss 等，1986，Trends Biochem. Sci. 11 :287 ；Maniatis 等，1987，kience 236 :1237, 過引用以其整體結合到本文中)、以及響應於特定處理或條件而指導核苷酸序列誘導型表達的調節序列(例如哺乳動物細胞的金屬硫蛋白(metallothionin)啟動子以及在原核和真核系統兩者中的tet-反應性(tet-responsive)和/或鏈黴素反應性啟動子，見上文)。 本領域技術人員應了解的是，表達載體的設計可取決於待轉化宿主細胞的選擇、所需蛋白質的表達水平等這類因素。可將本發明的表達載體導入宿主細胞從而產生蛋白質或肽，包括由本文所述核酸編碼的融合蛋白或肽。另一方面，本發明提供向其中導入本發明的重組表達載體的宿主細胞。宿主細胞可以是任何原核細胞(例如大腸桿菌)或真核細胞(例如酵母、昆蟲或哺乳動物細胞(例如CHO細胞))。可通過常規轉化或轉染技術將載體DNA導入原核或真核細胞。對於哺乳動物細胞的穩定轉染，已知的是取決於所採用的表達載體和轉染技術，僅一小部分的細胞可將外源DNA整合到其基因組中。為了鑑定和選擇這些整合子(integrant)，一般將編碼選擇標記(例如抗生素抗性)的基因與目標基因一起導入宿主細胞中。優選的選擇標記包括賦予抗藥性(例如G418、潮黴素和甲氨蝶呤抗性)的選擇標記。除其它方法之外，可通過藥物選擇(例如已摻入選擇標記基因的細胞可存活而其它細胞死亡)鑑定用導入的核酸穩定轉染的細胞。適應症一方面，本發明提供治療受試者的方法。該方法對受試者可具有例如整體有益作用，例如可延長受試者的預期壽命。或者，該方法可例如治療、預防、治癒、減輕或改善(「治療」)疾病、病症、病況或病(「病況」)。在待按照本發明治療的病況中的是，特徵是α4β7 不當表達或活性的病況。這類病況包括與細胞不當運輸，例如白細胞(例如淋巴細胞或單核細胞)運輸至胃腸道或包含表達MAdCAM-I的細胞的其它組織中(由於白細胞與表達 MAdCAM-I的細胞結合所致)有關的病況。可以治療的疾病因此包括炎性腸病，例如潰瘍性結腸炎、克羅恩病、乳糜瀉(非熱帶性口炎性腹瀉)、腸病伴發血清反應陰性關節病、顯微鏡下結腸炎或膠原性結腸炎、嗜酸性胃腸炎或直腸與結腸切除術和迴腸肛管吻合術後所致的迴腸囊袋炎。可按照本發明治療的其它病況包括胰腺炎、胰島素依賴性糖尿病、乳腺炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘和移植物抗宿主病。治療方法和抗原結合蛋白的給予本文提供的某些方法包括將α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白給予受試者， 從而降低在特定病況中起作用的α4β7誘導的生物應答。在具體的實施方案中，本發明的方法包括例如通過給予受試者或在離體方法中，使內源α4β7與α 4β 7抗原結合蛋白接觸。術語「治療」包括減輕或預防病況的至少一種症狀或其它方面，或者減輕疾病的嚴重程度等。抗原結合蛋白不必實現完全治癒或者根除疾病的每種症狀或表現就可構成可行的治療劑。正如相關領域所公認的一樣，用作治療劑的藥物可減輕既定疾病狀態的嚴重程度，但是不必消除疾病的每種表現就可被視為有益的治療劑。同樣，預防性給予的治療在預防病況發作時不必完全有效就可構成可行的預防劑。僅僅是減輕疾病的影響(例如通過減輕其症狀數目或嚴重程度，或者通過提高另一種治療的療效，或者通過產生另一種有益的效果)，或者降低受試者中疾病將發生或惡化的可能性便足夠。本發明的一個實施方案涉及一種方法，所述方法包括以以下量給予患者α 4β 7拮抗劑達以下時間，所述量和時間足以在反映特定病症的嚴重程度的指示物的基線方面誘導持續改善。如相關領域所了解的一樣，以與適應症相適應的方式將包含本發明的分子的藥物組合物給予受試者。藥物組合物可通過任何合適的技術給予，包括但不限於胃腸外、局部或通過吸入。如要注射，則可通過例如關節內、靜脈內、肌內、病灶內、腹膜內或皮下途徑、通過推注或連續輸注給予藥物組合物。考慮局部給藥，例如在疾病或損害部位，透皮遞送和從植入物持續釋放亦是如此。通過吸入遞送包括例如經鼻或經口吸入、使用噴霧器、吸入氣霧劑形式的拮抗劑等。其它備選包括眼藥水；口服製劑包括丸劑、糖漿劑、錠劑或口香糖；以及局部製劑，例如洗劑、凝膠劑、噴霧劑和軟膏劑。還考慮在離體方法中使用抗原結合蛋白。例如，可使患者血液或其它體液與離體結合α 4β 7的抗原結合蛋白接觸。抗原結合蛋白可與合適的不溶性基質或固體支持材料
糹口口。有利的是，以組合物的形式給予抗原結合蛋白，所述組合物包含一種或多種其它組分，例如生理上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。任選組合物另包含一種或多種生理活性劑，例如第二炎症抑制物質或免疫抑制物質、抗血管生成物質、鎮痛物質等，本文提供了其非排他性實例。在各種具體的實施方案中，除α 4β 7結合性抗原結合蛋白以外，組合物還包含1、2、3、4、5或6種生理活性劑。在一個實施方案中，藥物組合物包含本發明的抗原結合蛋白以及一種或多種選自以下的物質緩衝劑、抗氧化劑(例如抗壞血酸)、低分子量多肽(例如小於10個胺基酸的多肽)、蛋白質、胺基酸、糖(例如葡萄糖、蔗糖或糊精)、螯合劑(例如EDTA)、穀胱甘肽、穩定劑和賦形劑。中性緩衝鹽水或與同種血清白蛋白混合的鹽水是合適稀釋劑的實例。根據適當的工業標準，還可加入防腐劑，例如苯甲醇。可使用合適的賦形劑溶液(例如蔗糖)作為稀釋劑將組合物配製成凍乾物。所採用的劑量和濃度下合適組分對接受者是無毒的。可用於藥物製劑的組分的更多實例可參見Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版 (1980)和第 20 版(2000)，Mack Publishing Company, Easton, PA。醫療從業人員使用的藥盒包括本發明的α 4β 7抑制物質和用於治療本文所述任何病況的標籤或其它用法說明。在一個實施方案中，藥盒包括一種或多種α 4β 7結合性抗原結合蛋白的無菌製劑，其可呈上述組合物的形式，並且可裝入一個或多個小瓶。劑量和給藥頻率可隨例如給藥途徑、所採用的具體抗原結合蛋白、待治療疾病的性質和嚴重程度、病況是急性還是慢性以及受試者的身材和一般情況等因素而改變。合適的劑量可通過相關領域已知方法確定，例如在可包括劑量遞增研究的臨床試驗中。例如，可在一段時間內以固定間隔給予本發明的α 4β 7抑制物質例如一次或不止一次。在具體的實施方案中，抗原結合蛋白在至少一個月或更多個月的時間內給予，例如 1、2或3個月，甚至無限期。對於治療慢性病況，長期治療一般最有效。然而，對於治療急性病況，給予較短時間(例如1-6周)便可足夠。一般而言，給予抗原結合蛋白直到患者在所選擇的一種或多種指示物的基線上表現出醫學上相關的改善程度。本發明的具體實施方案包括以約Ing抗原結合蛋白/kg受試者體重/天(「lng/ kg/天」)-約10mg/kg/天、更優選約500ng/kg/天-約5mg/kg/天、最優選約5 μ g/kg/天-約ang/kg/天的劑量，將抗原結合蛋白給予受試者。在其它實施方案中，每周一次、每周二次或者每周三次或更多次將抗原結合蛋白給予成人，以治療α 4β 7介導的疾病、病況或病症，例如本文公開的醫學病症。如要注射，每位成人劑量的有效量的抗原結合蛋白的範圍可為l-20mg/m2，優選為約5-12mg/m2。或者，可以給予平頂劑量(flat dose)；該量的範圍可為5-100mg/劑。平頂劑量的一種範圍為約20-30mg/劑。在本發明的一個實施方案中，通過注射重複給予25mg/劑的平頂劑量。如果採用注射以外的給藥途徑，則按照標準醫療實踐適當調整劑量。治療方案的一個實例包括在至少三周的時間內每周1-3次注射約20-30mg 抗原結合蛋白的劑量，但可能需要較長期的治療以引起所需要的改善程度。對於兒科受試者(4-17歲)，一個示例性的合適方案包括每周2-3次給予皮下注射0. 4mg/kg直到25mg抗原結合蛋白的最大劑量。本文所提供的方法的具體實施方案包括每周一次或兩次皮下注射0. 5mg-10mg、優選3-5mg的抗原結合蛋白。另一個實施方案涉及一周一次經肺給予(例如通過噴霧器)3mg 以上的抗原結合蛋白。本文提供的治療方案的實例包括一周一次以1. 5-3mg的劑量皮下注射抗原結合蛋白，以治療其中α 4β 7起作用的病況。本文提供了這類病況的實例，包括例如前述風溼性病況和其中過量或不當運輸表達α 4β 7的細胞起作用的其它病況(本文所述的例如炎性腸病、胰腺炎等)。持續每周給予抗原結合蛋白直到達到所需效果，例如受試者的症狀減輕。可按需要恢復治療，或者可以給予維持劑量。本文所提供的治療方案的其它實例包括皮下或靜脈內給予1、3、5、6、7、8、9、10、 11、12、15或20毫克本發明的α 4β 7抑制劑/千克受試者體重(mg/kg)的劑量。可將劑量一次給予受試者，或以某一間隔不止一次給予，例如一天一次、一周三次、一周兩次、一周一次、一月三次、一月兩次、一月一次、每兩月一次、每三月一次、每六月一次或一年一次。在療程內，可更改或變動治療持續時間及治療劑量和/或治療頻率的任何變化以滿足受試者的特殊需要。在另一個實施方案中，以足以引起至少一種反映待治療病症的嚴重程度的指示物得到改善(優選持續改善)的量和時間，將抗原結合蛋白給予受試者。可以評價反映受試者病症、疾病或病況的程度的各種指示物，以確定治療的量和時間是否足夠。這類指示物包括例如臨床公認的所述病症的疾病嚴重程度、症狀或表現的指示物。在一個實施方案中，如果受試者在相隔2-4周的至少兩個時間內都得到改善，則這種改善被視為是持續的。改善程度一般通過由醫生確定，醫生可根據體徵、症狀、活組織檢查或其它試驗結果加以確定， 而且醫生還可應用給予受試者的問卷，例如已開發的用於既疾病的生命質量問卷。0 437表達和/或α 4β 7活化和/或其結合配偶體MAdCAM-I的改變與許多病症有關，包括例如胃腸系統炎症性病況。可對患有既定病症的受試者進行篩選，以鑑定 α 4 β 7或MAdCAM-I表達和/或活化發生改變的那些個體，從而鑑定出可從α 4 β 7結合性抗原結合蛋白治療中獲益最大的受試者。因此，本文提供的治療方法任選包括測定受試者的α 4 β 7或MAdCAM-I活化或表達水平的第一個步驟。可將抗原結合蛋白給予其中α 4 β 7 和/或MAdCAM-I表達和/或活化超出正常的受試者。可在用抗原結合蛋白治療之前、期間和/或之後監測受試者的α 4β 7或MAdCAM-I 活性水平，以檢測α 4 β 7或MAdCAM-I活性的改變(如有任何改變的話)。對於某些病症，0 43 7和/或嫩沉々11-1活性升高的發生率可隨病期或疾病的特殊形式等這類因素而改變。 例如，可應用已知技術測定受試者血液或組織樣品中的這類活性。可應用任何合適的技術測定A4 β 7或MAdCAMl活性。本發明的方法和組合物的具體實施方案包括使用抗原結合蛋白和一種或多種其它的α 4 β 7拮抗劑，例如，兩種或更多種本發明的抗原結合蛋白，或者本發明的抗原結合蛋白和一種或多種其它的α 4β 7拮抗劑。在進一步的實施方案中，抗原結合蛋白單獨給予或與用於治療患者所患病況的其它物質組合給予。這類物質的實例同時包括蛋白質性和非蛋白質性藥物兩者。當共同給予多種治療藥時，可因此按照相關領域公認的方法調整劑量。 「共同給予」和組合療法不限於同時給藥，而且還包括這樣的治療方案，其中在包括給予患者至少一種其它治療劑的療程期間至少一次給予抗原結合蛋白。可與抗原結合蛋白共同給予的其它物質的實例為根據待治療的具體病況所選擇的其它抗原結合蛋白或治療性多肽。或者，可用於治療一種上述特定病況的非蛋白質性藥物可與α 4β 7拮抗劑共同給予。組合療法另一方面，本發明提供用抑制α 4β 7的抗原結合蛋白和一種或多種其它治療治療受試者的方法。在一個實施方案中，這類組合療法通過例如攻擊腫瘤的多個部位或分子靶標而實現協同或相加效應。可與本發明聯用的組合療法類型包括抑制或激活(適當時) 單一疾病相關途徑的多個節點、靶細胞和靶組織內多種細胞類型中的多個途徑。在另一個實施方案中，組合療法包括給予受試者2、3、4、5、6種或更多種本文所述的α4β7激動劑或拮抗劑。在另一個實施方案中，所述方法包括給予受試者兩種或更多種共同抑制或激活(直接或間接)α 4β 7介導的信號轉導的治療。這類方法的實例包括使用兩種或更多種抑制α 4β 7的抗原結合蛋白的組合、抑制α 4β 7的抗原結合蛋白和一種或多種具有抗炎性質的其它治療部分(例如非留體抗炎藥、類固醇、和/或免疫調節劑)的組合、或者抑制α 4β 7的抗原結合蛋白和一種或多種其它治療(例如手術、超聲或有效減輕炎症的治療)的組合。可與α 4β 7抑制劑組合的有益物質包括用於治療例如克羅恩病或潰瘍性結腸炎的物質，例如氨基水楊酸鹽(例如5-氨基水楊酸)、皮質留類(包括潑尼松 (predisone))、抗生素例如甲硝唑或環丙沙星(或用於治療例如瘻患者的其它抗生素)以及免疫抑制藥，例如硫唑嘌呤、6-巰基嘌呤、甲氨蝶呤、他克莫司和環孢菌素。這類物質的組合亦考慮用於與本發明的α4β7抑制劑一起使用。這類物質可以口服給予或通過另一種途徑給予，例如通過栓劑或灌腸劑。此外，一種或多種抗α 4β 7抗體或抗體衍生物可與一種或多種分子或其它治療組合使用，其中所述其它分子和/或治療不直接結合或影響α 4β 7，但其組合對治療或預防待治療的病況是有效的。例如，α 4β 7抑制劑可與益生菌療法(probiotic therapy)或用於恢復或維持正常腸菌群的其它療法組合使用。在一個實施方案中，一種或多種分子和 /或治療治療或預防在治療過程中由一種或多種其它分子或治療引起的病況，例如噁心、疲倦、脫髮、惡病質、失眠等。在其中採用分子和/或其它治療的組合的各種情況下，各種分子和/或治療可以有效的任何順序在任何持續時間內給予，例如同時、序貫或交替給予。在一個實施方案中，治療方法包括用一種分子或其它治療完成第一療程後再開始第二療程。第一療程結束與第二療程開始之間的時間長度可以是使總療程有效的任何時間長度，例如數秒鐘、分鐘、小時、天、周、月，甚至數年。在另一個實施方案中，所述方法包括給予一種或多種本文所述的α 4β 7拮抗劑和一種或多種其它治療(例如治療性治療或姑息療法)。如果方法包括給予受試者不止一種治療，則要理解的是，給藥的順序、時機、次數、濃度和體積僅限於醫學要求和治療限制， 即可以例如同時、序貫、交替或者按照任何其它方案給予受試者兩種治療。提供下面既是實際的也是預測的實施例用於說明本發明的具體實施方案或特徵， 但是不限制其範圍。實施例1 抗體的製備通過用表達人α 4 β 7的細胞(瞬時轉染的人胚腎(HEK) 293細胞093_a4b7)或穩定轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞(CH0-a4b7))給XenoMouse XG2 κ λ (kl)和XG4kl小鼠(分別表達人IgG2或IgG4以及人κ和λ輕鏈的轉基因小鼠；Abgenix Inc.，Fremont CA)免疫接種，來產生抗人α 4β 7的單克隆抗體。通過螢光激活細胞分選儀(FACS)分析比較α 4β 7轉染的細胞與相應的親代對照細胞，來監測血清效價。將得自任一種免疫活動 (immunization campaign)的超免疫動物處死，對脾和淋巴結組織進行雜交瘤融合。採用一系列測定法鑑定A4 β 7異二聚體特異性抗體。首先通過微體積螢光測定技術(Fluorometric Microvolume Assay Technology,FMAT Applera Corporation,Foster City CA;高通量篩選細胞檢測系統)篩選與模擬轉染細胞相比結合α 4β 7轉染細胞的雜交瘤上清液。按照文獻所述類似方法(Erie，J. Immunol, (1994) 153 :517)，對鑑定為結合α 4 β 7陽性的上清液(得自CH0_a4b7細胞免疫活動的1001種陽性結合上清液和得自 293-a4b7細胞免疫活動的1143種陽性結合上清液)抑制HUT78細胞與MAdCAM-I-Fc粘附的能力進行了評價。在該測定法中，得自CH0-a4b7活動的60種上清液和得自^3_a4b7活動的174種上清液的抑制大於90% (n = 2)，並進行進一步的特異性和功效分析。製備了 α 4β 7轉染的293細胞、α 4β1轉染的293細胞和α Εβ 7轉染的293細胞，並與在抑制測定法中鑑定的雜交瘤上清液用於FACS分析。顯示只與α 4β 7轉染的細胞結合的上清液被歸類為異二聚體特異性的，因為抗該整聯蛋白的α 4亞基的抗體也可與 α 4 β 1轉染細胞結合，並且結合β 7鏈的抗體可結合α E β 7轉染細胞。通過FACS分析， 還對雜交瘤上清液與食蟹猴α 4β 7轉染的293細胞的結合活性進行了分析。選出得自 CH0-a4b7活動的7個品系和得自^3_a4b7活動的25個品系用於亞克隆和進一步的分析。實施例2 抗體的分析將得到的抗體分泌細胞克隆，分離出編碼抗體的核酸並進行了測序。採用位點定向誘變製備在一個或多個胺基酸殘基上不同於分離序列的變體。抗體和變體的輕鏈和重鏈的胺基酸序列見下表1和表2。要了解的是，⑶R和FR區的邊界像之前討論的一樣可與下列所顯示的不同。表1 輕鏈的序列分析
權利要求
1.一種具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重鏈可變區及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的輕鏈可變區的分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中各個相應的CDR選自a)SEQ ID NO :55 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 58 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；b)SEQ ID NO 56 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 59 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；和c)SEQ ID NO 57 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 60 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3。
2.權利要求1的α4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其選自a)以下抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變區包含SEQID NO :55，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO 58 ；b)以下抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變區包含SEQID NO :55，其中一些、大部分或全部N端Glu被環化，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 58 ；c)以下抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變區包含SEQID NO :56，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO :59 ；禾口d)以下抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變區包含SEQID NO :57，所述重鏈可變區包含 SEQ ID NO :60。
3.一種具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重鏈可變區及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的輕鏈可變區的分離的α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中所述輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3 選自a)分別與SEQ ID NO :3 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；b)分別與SEQ ID NO :5 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；c)分別與SEQ ID NO :7 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；d)分別與SEQ ID NO 22 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；和e)分別與SEQID NO 24的CDRU CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDRU CDR2和 CDR3 ；所述重鏈可變CDR1、CDR2和CDR3來自SEQ ID NO :58。
4.權利要求3的α4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變區選自a)與SEQID NO 3有至少90%同一性的輕鏈可變區；b)與SEQID NO 5有至少90%同一性的輕鏈可變區；c)與SEQID NO 7有至少90%同一性的輕鏈可變區；d)與SEQID NO 22有至少90%同一性的輕鏈可變區；禾口e)與SEQID NO 24有至少90%同一性的輕鏈可變區；所述重鏈可變區包含SEQ ID NO :58ο
5.一種具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重鏈可變區及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的輕鏈可變區的分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中所述輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3 選自a)分別與 SEQ ID NO 12 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和CDR3 ；b)分別與SEQ ID NO 25 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；和c)分別與SEQ ID NO 26 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；所述重鏈CDRl、CDR2和CDR3選自a，)分別與 SEQ ID NO :41 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；和b，)分別與 SEQ ID NO 54 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3。
6.權利要求5的α4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中所述輕鏈可變區選自與 SEQ ID NO :12、25和沈中的任一個有至少90%同一性的可變區，所述重鏈可變區選自與 SEQ ID NO 41和M中的任一個有至少90%同一性的可變區。
7.一種具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重鏈可變區及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的輕鏈可變區的分離的α 4 β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中各個相應的CDR與選自以下的 ⑶R有至少90%同一性a)SEQ ID NO :10 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 38 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；b)SEQ ID NO 2 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 30 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；c)SEQ ID NO 20 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 51 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；d)SEQ ID NO 11 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 39 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；e)SEQID NO :13 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 42 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；f)SEQ ID NO 17 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 46 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；g)SEQ ID NO 8 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 36 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；h)SEQ ID NO 19 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 49 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；i)SEQID NO 18 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 47 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；j) SEQ ID NO :21 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 52 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；k) SEQ ID NO 3 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 31 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；1) SEQ ID NO 7 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 35 的重鏈 CDRl、CDR2 和CDR3 ；m) SEQ ID NO 6 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO 34 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；n) SEQ ID NO 1 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 29 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；ο) SEQ ID NO 22 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 50 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；P) SEQ ID NO 24 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 40 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；q) SEQ ID NO 9 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 37 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；r) SEQ ID NO 4 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 32 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；s) SEQ ID NO 28 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 53 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；t) SEQ ID NO 16 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 45 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；U) SEQ ID NO 15 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 44 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；v) SEQ ID NO 14 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 43 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；w) SEQ ID NO 27 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 43 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；χ) SEQ ID NO 5 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 33 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；y) SEQ ID NO 12 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 41 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；z) SEQ ID NO 23 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 48 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；a，)SEQ ID NO :25 的輕鏈 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重鏈 CDRU CDR2 和CDR3 ；禾口b，)SEQ ID NO 26 的輕鏈 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重鏈 CDRU CDR2 和 CDR3。
8.權利要求7的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中各個相應的CDR選自a)SEQ ID NO :10 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 38 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；b)SEQ ID NO 2 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 30 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；c)SEQ ID NO 20 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 51 的重鏈 CDRUCDR2 和CDR3 ；d)SEQID NO CDR3 ；e)SEQID NO CDR3 ；f)SEQID NO CDR3 ；g)SEQ ID NO CDR3 ；h)SEQID NO CDR3 ；i)SEQID NO CDR3 ；j)SEQ ID NO CDR3 ；k) SEQ ID NO CDR3 ；1)SEQ ID NO CDR3 ；m) SEQ ID NO CDR3 ；n)SEQ ID NO CDR3 ；ο)SEQ ID NO CDR3 ；P)SEQ TD NO CDR3 ；q)SEQ ID NO CDR3 ；r)SEQ ID NO CDR3 ；s)SEQ ID NO CDR3 ；t)SEQ ID NO CDR3 ；U)SEQ ID NO CDR3 ；v)SEQ ID NO CDR3 ；11的輕鏈CDRl、CDR2和 13的輕鏈CDRl、CDR2和 17的輕鏈CDRl、CDR2和 8的輕鏈CDRl、CDR2和 19的輕鏈CDRl、CDR2和 18的輕鏈CDRl、CDR2和 21的輕鏈CDRl、CDR2和 3的輕鏈CDRl、CDR2和 7的輕鏈CDRl、CDR2和 6的輕鏈CDRl、CDR2和 1的輕鏈CDRl、CDR2和 22的輕鏈CDRl、CDR2和 24的輕鏈CDRl、CDR2和 9的輕鏈CDRl、CDR2和 4的輕鏈CDRl、CDR2和 28的輕鏈CDRl、CDR2和 16的輕鏈CDRl、CDR2和 15的輕鏈CDRl、CDR2和 14的輕鏈CDRl、CDR2和CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO39的重鏈CDRl、CDR2和 42的重鏈CDRl、CDR2和 46的重鏈CDRl、CDR2和 36的重鏈CDRl、CDR2和 49的重鏈CDRl、CDR2和 ■Al的重鏈CDRl、CDR2和 52的重鏈CDRl、CDR2和 31的重鏈CDRl、CDR2和 35的重鏈CDRl、CDR2和 34的重鏈CDRl、CDR2和 29的重鏈CDRl、CDR2和 50的重鏈CDRl、CDR2和 40的重鏈CDRl、CDR2和 37的重鏈CDRl、CDR2和 32的重鏈CDRl、CDR2和 53的重鏈CDRl、CDR2和 45的重鏈CDRl、CDR2和 44的重鏈CDRl、CDR2和 43的重鏈CDRl、CDR2和5w) SEQ ID NO 27 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 43 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；χ) SEQ ID NO 5 的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 33 的重鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；y) SEQ ID NO 12 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 41 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；z) SEQ ID NO 23 的輕鏈 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 48 的重鏈 CDRUCDR2 和 CDR3 ；a，)SEQ ID NO :25 的輕鏈 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重鏈 CDRU CDR2 和CDR3 ；禾口b，)SEQ ID NO 26 的輕鏈 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重鏈 CDRU CDR2 和 CDR3。
9.權利要求7的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中a)所述輕鏈可變區與SEQID NO: 10有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 38有至少90%同一性；b)所述輕鏈可變區與SEQID NO :2有至少90%同一性，和所述重鏈可變區與SEQ ID NO 30有至少90%同一性；c)所述輕鏈可變區與SEQ NO 51有至少90%同一性；d)所述輕鏈可變區與SEQ NO 39有至少90%同一性；e)所述輕鏈可變區與SEQ NO 42有至少90%同一性；f)所述輕鏈可變區與SEQ NO :46有至少90%同一性；g)所述輕鏈可變區與SEQID NO :8有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO: 36有至少90%同一性；h)所述輕鏈可變區與SEQ NO 49有至少90%同一性；i)所述輕鏈可變區與SEQ NO 47有至少90%同一性；j)所述輕鏈可變區與SEQ NO 52有至少90%同一性；k)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :3有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 31有至少90%同一性；1)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :7有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID N0 ；35有至少90%同一性；m)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :6有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID N0: ；34有至少90%同一性；ID NO :20有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID ID NO :11有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID ID NO 13有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ IDIDNO 17有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQIDID NO 19有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID ID NO 18有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID ID NO :21有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ IDη)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :1有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO: 四有至少90%同一性；ο)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :22有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 50有至少90%同一性；P)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO 24有至少90 %同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 40有至少90%同一性；q)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :9有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO: 37有至少90%同一性；r)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :4有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 32有至少90%同一性；s)所述輕鏈可變區與SEQ NO 53有至少90%同一性；t)所述輕鏈可變區與SEQ NO 45有至少90%同一性；u)所述輕鏈可變區與SEQ NO :44有至少90%同一性；ν)所述輕鏈可變區與SEQ NO 43有至少90%同一性；w)所述輕鏈可變區與SEQ NO 43有至少90%同一性；χ)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :5有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO: 33有至少90%同一性；y)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO :12有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 41有至少90%同一性；ζ)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO 23有至少90 %同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 48有至少90%同一性；a，)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO 25有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO 54有至少90%同一性；和b，)所述輕鏈可變區與SEQ ID NO 26有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQ ID NO力4有至少90%同一性。
10.權利要求9的分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中a)所述輕鏈可變區包含SEQID NO 10，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 38 ；b)所述輕鏈可變區包含SEQID NO :2，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 30 ；c)所述輕鏈可變區包含SEQID NO :20，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 51 ；d)所述輕鏈可變區包含SEQID NO 11，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 39 ；e)所述輕鏈可變區包含SEQID NO 13，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 42 ；f)所述輕鏈可變區包含SEQID NO 17，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 46 ；g)所述輕鏈可變區包含SEQID NO :8，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 36 ；h)所述輕鏈可變區包含SEQID NO 19，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 49 ；IDNO J8有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQIDID NO 16有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQIDIDNO 15有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQIDIDNO 14有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQIDIDNO :27有至少90%同一性，所述重鏈可變區與SEQIDi)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 18，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO47 ；j)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :21，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO52 ；k)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :3，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 31 ；1)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :7，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 35 ；m)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :6，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 34 ；η)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :1，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 29 ；ο)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 22，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO50 ；P)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO丨4，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO40 ；q)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :9，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 37 ；r)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :4，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 32 ；s)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO丨8，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO53 ；t)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 16，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO45 ；U)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 15，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO44 ；ν)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 14，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO43 ；W)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 27，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO43 ；χ)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO :5，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 33 ；y)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 12，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO41 ；ζ)所述輕鏈可變區包含SEQIDNO 23，所述:重鏈可變區包含SEQ ID NO48 ；a，)所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO :25，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO 54 ； b，)所述輕鏈可變區包含SEQ ID NO 26，所述重鏈可變區包含SEQ ID NO :54。
11.權利要求1-10中任一項的分離的α4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其還包含輕鏈恆定區和重鏈恆定區。
12.權利要求11的分離的α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中所述輕鏈恆定區選自a)κ型輕鏈恆定區；和b)λ型輕鏈恆定區； 所述重鏈恆定區選自 a，)IgD抗體的恆定區； b，)IgE抗體的恆定區； c，) IgM抗體的恆定區； d』 ) IgGl抗體的恆定區； e，)IgG2抗體的恆定區； f' )IgG3抗體的恆定區； g，) IgG4抗體的恆定區；和h』 )在鉸鏈區中具有降低形成H鏈內二硫鍵的趨勢的至少一個突變的IgG4抗體的恆定區。
13.權利要求12的分離的α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其中所述輕鏈恆定區選自a)包含SEQ ID NO 70的多肽；b)與SEQID NO 70有至少90%同一性的多肽；c)具有其中剔除了1、2、3、4或5個N端和/或C端胺基酸的如SEQ ID NO 70所示胺基酸序列的多肽；和d)加入一種或多種翻譯後修飾的a)、b)或c)的多肽；所述重鏈恆定區選自a，)包含SEQ ID NO 72的多肽；b，)與SEQ ID NO 72有至少90%同一性的多肽；c，)具有其中剔除了 1、2、3、4或5個N端和/或C端胺基酸的如SEQ ID NO 70所示胺基酸序列的多肽；和d』 )加入一種或多種翻譯後修飾的a』)、b』)或c』)的多肽。
14.一種分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在CD4+記憶T細胞結合測定法中的EC50小於;35ng/ml。
15.權利要求14的分離的α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在⑶4+記憶T細胞結合測定法中的EC50小於10ng/ml。
16.一種分離的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在MAdCAM競爭測定法中的 IC50 小於 30ng/m。
17.權利要求16的分離的α4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白，其在MAdCAM競爭測定法中的IC50小於10ng/ml。
18.—種結合α4β7的S250N突變體的分離的α 4 β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白。
19.一種編碼權利要求1-18中任一項的抗原結合蛋白的分離核酸。
20.一種包含權利要求19的核酸的載體。
21.一種用權利要求20的載體轉染或轉化的分離宿主細胞。
22.—種產生抗原結合蛋白方法，所述方法包括在促進表達的條件下培養權利要求21 的宿主細胞，並從培養基中回收蛋白質。
23.一種組合物，所述組合物包含權利要求1-18中任一項的多肽和生理學上可接受的稀釋劑、賦形劑或載體。
24.—種抑制α 4β 7的至少一種活性的方法，所述方法包括使表達α 4β 7的細胞與權利要求1-18中任一項的α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白接觸，使得所述細胞與 MAdCAM-I的粘附被部分或完全抑制。
25.—種抑制表達α 4β 7的細胞運輸至包含表達MAdCAM-I的細胞的組織中的方法，所述方法包括使表達α 4β 7的細胞與權利要求1-18中任一項的α 4β 7異二聚體特異性抗原結合蛋白接觸，使得所述細胞與MAdCAM-I的粘附被部分或完全抑制。
26.一種治療患有以下病況的個體的方法，所述病況的特徵是表達α 4β 7的細胞不恰當地運輸至包含表達MAdCAM-I的細胞的組織中，所述方法包括以足以抑制表達α4β7的細胞運輸至包含表達MAdCAM-I的細胞的組織中的量，將權利要求23的組合物給予所述個體。
27.權利要求沈的方法，其中所述病況是炎性腸病。
28.權利要求27的方法，其中所述病況選自潰瘍性結腸炎、克羅恩病、乳糜瀉(非熱帶性口炎性腹瀉)、腸病伴發血清反應陰性關節病、顯微鏡下結腸炎或膠原性結腸炎、嗜酸性胃腸炎以及直腸與結腸切除術和迴腸肛管吻合術後所致的迴腸囊袋炎。
29.權利要求沈的方法，其中所述病況選自胰腺炎、胰島素依賴性糖尿病、乳腺炎、膽囊炎、膽管炎、膽管周圍炎、慢性支氣管炎、慢性鼻竇炎、哮喘和移植物抗宿主病。
30.一種足以用作雜交探針、PCR引物或測序引物的分離多核苷酸，其是權利要求19的核酸分子的片段或其互補序列。
全文摘要
本文公開了α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白、編碼所述α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白的核酸以及製備和使用所述α4β7異二聚體特異性抗原結合蛋白的方法。
文檔編號C07K16/28GK102388068SQ201080013557
公開日2012年3月21日 申請日期2010年3月16日 優先權日2009年3月20日
發明者F·W·雅各布森, I·富爾茨, T·阿羅拉, 許海琳 申請人:安姆根有限公司