漁用腸溶口服疫苗及其製備方法
2023-05-19 11:16:21
專利名稱：：漁用腸溶口服疫苗及其製備方法
技術領域：
：本發明屬於漁用口服疫苗領域。
背景技術：
：養殖魚類的疾病呈逐年增加趨勢，所造成的經濟損失巨大，嚴重阻礙了水產養殖業的發展。目前控制各種疾病的主要手段是廣泛、大量的投入化學藥物和抗生素，而長期大量使用化學藥物和抗生素的結果，產生了環境汙染問題，致病性和非致病性微生物耐藥性問題，以及藥物殘留超標的食品安全問題；例如多寶魚事件就是典型的例子，受到多方密切關注。目前，國家已明令禁止生產和使用危害嚴重的藥物。提高水產養殖疾病防控能力迫在眉睫。隨著綠色環保食品和環境保護的要求以及免疫學技術的發展，免疫防治技術在疾病防治中的應用己越來越受到重視。應用疫苗、免疫增強劑等活化或加強動物自身的特異性和非特異性免疫功能，提高抗病能力，是今後防治病害最為有效的途徑之一，是我國科學研究重點支持的領域之一。國內外相繼開展了應用疫苗防治養殖魚類疾病的技術研究，製備了多種漁用疫苗，有浸泡、注射、口服三種劑型。由於浸泡接種具有疫苗消耗量大，免疫效果差的缺點，注射接種疫苗要求有一定的操作技術，且操作過程繁瑣，工作量大，均不適宜生產應用。口服接種具有免疫效率高，疫苗需求量適中，操作方便的優點，適宜在生產中大規模應用，成為當前研究熱點。目前的研究主要集中在微粒、微膠囊方面。一種研究用聚乳酸一乙醇酸共聚物PLG和聚乙烯醇(產品型號1788)採用復乳揮發法製備嗜水氣單胞菌口服疫苗，但沒有報導PLG、聚乙烯醇組合比例，產品相對免疫保護率為42.9%(丁詩華，《西南農業大學學報》2005年27巻6期)。一種研究採用海藻酸鈉、6呢PVP-30製備了銀鯽嗜水氣單胞菌微膠囊疫苗，產品相對免疫保護率61.1%(李新華，《水生生物學報》2007年第31期)。這兩種研究均是希望實現遞送疫苗有效作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織的目的。但是，以上技術沒有進行相關魚類胃腸道消化生理特性的研究，也沒有進行腸溶性實驗觀察，不能建立起適宜的疫苗控釋技術，缺少微粒、微膠囊疫苗體內、體外釋放的觀察，不能明確微粒、微膠囊疫苗在胃腸道中的釋放部位。其製備技術所採用的材料不具備確定的pH依賴性，只能實現口服遞送並發揮一定的緩釋作用，不能有效實現腸道釋放的目的，如果疫苗釋放過早，將被胃酸、消化酶消化、破壞，不能有效保護疫苗作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織。而且以上技術製備過程中需要將疫苗混溶到高分子材料的有機溶劑中，有機溶劑的存在會破壞疫苗的免疫源性，導致疫苗免疫效果不穩定，進一歩限制了其在生產中的應用。由於受胃腸道因素的影響，多數蛋白類藥物易失活且吸收差，致使生物利用度差，其口服給藥系統仍面臨挑戰。(疫苗口服接種及其微粒傳輸系統，李鳳前，費軼博等，藥學學報，2007年，42(3):322-328。口服疫苗傳遞系統研究進展，宋洪濤，張倩等，解放軍藥學學報，2005年，21(1):47-50)。因此，口服疫苗需要解決的關鍵點之一是如何保證疫苗順利地通過胃部，而不被胃酸、胃消化酶環境所破壞，在腸道中充分釋放，有效作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織，高效激發免疫應答。
發明內容本發明的目的是提供一種魚用腸溶口服疫苗的製備方法，採用多層功能性包被技術，通過改變含有疫苗的丸芯或微粒及其包被層的結構以及包被層成分及其含量，使其可以在魚胃液中起到保護疫苗的作用，在魚腸道中釋放出疫1§"，發揮免疫作用。本發明解決其技術問題所採用的技術方案是漁用腸溶口服疫苗，其特徵在於，包括外周噴塗疫苗層2的顆粒或微丸1、在疫苗層2外逐層包衣隔離層3和腸溶層4;用於疫苗嘖塗及隔離層包衣的乾粉組合物A，和用於腸溶層包'衣的乾粉組合物B的組分及重量比分別為乾粉組合物A:成膜劑選用羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一種或一種以上，重量比為4060份；增塑劑選用三磷酸甘油酯、檸檬酸三乙酯或聚乙二醇的一種或一種以上，重量比為310份，防粘劑選用二氧化矽、硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為3050份，表面活性劑選用卵磷脂、吐溫-80的一種，重量比為0-5份；乾粉組合物B:成膜劑是丙烯酸樹脂、羥丙甲基纖維素酞酸酯或羧甲基纖維素鈉的一種或一種以上，重量比為40~60份，增塑劑是鄰苯二甲酸二乙酯或檸檬酸乙醯基三丁酯的一種或一種以上，重量比為10~20份，防粘劑是滑石粉、二氧化矽或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為2050份。由於魚用疫苗易受溫度、酸鹼度、胃蛋白酶影響，直接口服接種會損壞疫苗，降低疫苗免疫效果，無法口服給藥。養殖魚類的胃液pH—般在2.05.5，胃排空時間一般在48小時，腸液pH—般在5.5~7.5。我們對牙鮃魚的消化道進行了取樣檢測，其胃液pH為2.5~4.5，胃排空時間4~8小時，腸道pH為6.0~7.5。.在此基礎上，依據牙鮃魚胃腸pH變化，並結合丙烯酸樹脂的溶解性具有pH依賴的特點，我們設計一系列以丙烯酸樹脂為主的包衣材料組方和腸溶口服疫苗製備方案，既保護疫苗在魚胃中不被破壞，又使疫苗在腸道中迅速釋放，與腸道黏膜接觸，產生黏膜免疫反應，獲得高效免疫效果，解決疫苗口服給藥的問題。又由於滅活疫苗產品多對pH有一定的敏感性，在酸性環境下，疫苗活性降低。而且此類疫苗也易受有機溶劑的影響，使蛋白變性失活。而pH依賴的腸溶丙烯酸樹脂本身呈現偏酸性特點，疫苗層與丙烯酸樹脂直接接觸會導致疫苗效價降低，同時丙烯酸樹脂需要使用有機溶劑進行溶解，在包衣過程也容易影響疫苗活性。本技術採用了隔離層包衣，即在疫苗層與腸溶包衣層之間包覆一層非pH依賴的中性材料，並且使用水為溶劑，隔離疫苗與丙烯酸樹脂接觸和包衣過程的有機溶劑與疫苗接觸，有效防止了疫苗本身的失活問題。在疫苗噴塗過程中，本研究採用了中性材料的隔離層包衣所用乾粉組合物，有效避免了口服疫苗在製備過程中使用有機溶劑所帶來的疫苗失活問題。採用高分子材料混懸液進行噴塗，疫苗被牢固有效地包裹於顆粒或丸芯表面，避免了疫苗加入的不均勻和疫苗附著不牢固的缺點。同時疫苗是通過噴塗技術附著於顆粒核心的表面，與制粒過程中加入疫苗相比，在腸道內只要外層包衣材料溶解，不再需要顆粒核心全部崩散或溶解，即可使疫苗迅速釋放，作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織，發揮免疫作用。漁用腸溶口服疫苗製備方法漁用腸溶口服疫苗的製備過程分為疫苗噴塗、隔離層包衣、腸溶層包衣三個主要步驟疫苗噴塗將適量的疫苗生理鹽水溶液混入製備好的固含量(乾粉組合物與總溶液量的重量百分比)為5~20%的乾粉組合物A的水性混懸液中，製成含有疫苗10610uCFU/ml的水性混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於10~30目的澱粉顆粒或微丸表面；活性疫苗含量為10b10uCFU/g。隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成5~20%固含量的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗與疫苗層表面，包衣增重(千粉組合物的用量與包衣載體的重量比)為2%~10%;腸溶層包衣將腸溶層乾粉組合物B溶於6090免乙醇溶液中，製備成5~20%固含量的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面，包衣增重為5~20%。與現有技術相比，本發明的有益效果是本發明所製備出的疫苗，能夠控制口服疫苗在腸道中定點釋放，保護疫苗順利通過胃部消化環境不被胃酸及消化酶破壞，胃內腸溶層溶解率低於9%，腸道內疫苗層溶解釋放率高於78%，即疫苗在胃內得到了有效的保護，在腸道內能夠充分釋放，疫苗有效作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織，高效激發免疫應答，顯著提高口服疫苗免疫效率。以牙鮃腹水病腸溶型口服疫苗為例，經過口服免疫牙鮃實驗，黏膜抗體效價最大達到l:256，免疫保護率達到60%以上，最高達到80%。而且在製備過程中，疫苗噴塗採用水為溶劑，中性高分子材料增強疫苗附著牢固度，減少有機溶劑的影響，隔離層將疫苗與偏酸性的腸溶層隔離，有效避免了疫苗在製備以及儲存過程中失活、效價降低的問題。圖l是漁用腸溶口服疫苗的結構示意圖，其中，l顆粒或微丸，2疫苗層，3隔離層，4腸溶層。具體實施例方式魚用腸溶口服疫苗結構見示意圖1。'魚用腸溶疫苗，包括帶有疫苗層2的顆粒或微丸1、在顆粒或微丸外逐層設有隔離層3和腸溶層4;其中，用於疫苗噴塗及隔離層包衣的乾粉組合物A，和用於腸溶層包衣的乾粉組合物B的組分及重量比為乾粉組合物A:成膜劑選用羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一種或一種以上，重量比為40~60份；增塑劑選用三磷酸甘油酯、檸檬酸三乙酯或聚乙二醇的一種或一種以上，重量比為310份，防粘劑選用二氧化矽、硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為3050份，表面活性劑選用卵磷脂、吐溫-80的一種，重量比為0~5份；乾粉組合物B:成膜劑是丙烯酸樹脂、羥丙甲基纖維素酞酸酯或羧甲基纖維素鈉的一種或一種以上，重量比為40~60份，增塑劑是鄰苯二甲酸二乙酯或檸檬酸乙醯基三丁酯的--種或一種以上，重量比為10~20份，防粘劑是滑石粉、二氧化矽或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為2050份。下面實施例說明本發明的包衣組合物各種配方及腸溶口服的製備工藝參數，以及採用此組合物及方法製備的漁用腸溶口服疫苗應用效果檢測結果。實施例1製備方法選取10~30目的澱粉顆粒，備用。第一步疫苗噴塗將乾粉組合物A溶於水中，配製成固含量為5%的水性混懸液，再向其中加入適量牙鮃魚腹水病疫苗生理鹽水溶液(108CFU/ml)，製備成106CFU/ml疫苗濃度的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於顆粒表面。疫苗噴塗量106CFU/g。第二步隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成固含量5%混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於疫苗層表面。包衣增重為2%。乾粉組合物A配方組成為羥丙甲基纖維素E5羥丙甲基纖維素E15聚乙烯醇S205檸檬酸三乙酯聚乙二醇6000滑石粉'二氧化矽第三歩腸溶層包衣將乾粉組合物B溶於60%乙醇溶液中:懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面。包衣增重為5%。乾粉組合物B配方組成為丙烯酸樹脂I丙烯酸樹脂n丙烯酸樹脂m羧甲基纖維素鈉LF-100鄰苯二甲酸二乙酯檸檬酸乙醯基三丁酯二氧化鈦滑石粉25g22g13g5g5g29g1g製備成固含量6%的混20g25g10g5g15g53g17g產品評價方法及檢測結果口服疫苗如何順利地通過胃酸、胃消化酶環境不被破壞，在腸道中充分釋放，有效作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織，高效激發免疫應答是評價該腸溶口服疫苗的有效手段。漁用腸溶口服疫苗可以保護疫苗順利地通過胃酸、胃消化酶環境不被破壞，在腸道中充分釋放，有效作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織，高效激發免疫應^^。該研究設計了體內解剖觀察的方法考察腸溶口服疫苗的耐胃酸性和腸溶性，並通過抗體效價檢測和相對免疫保護率兩項實驗綜合評價產品效果具體試驗方法如下1.耐胃酸、腸溶性檢測為了便於解剖觀察腸溶層、隔離層、疫苗層溶解情況，在製備過程中選擇白色丸芯或微粒，分別在腸寧層、隔離層、疫苗層加入綠色、黃色、藍色食用鋁色澱，將腸溶層、隔離層、疫苗層分別標記為綠色、黃色和藍色。隨機取20尾體長1012cm健康牙鮃，每尾灌服標記顏色的漁用腸溶口服疫苗20粒，正常條件下養殖。口服後4h、6h、8h、10h，分別隨機取3尾實驗魚，解剖觀察腸溶層、隔離層、疫苗層在胃腸道中溶解情況，記錄胃中、腸道中產品的總顆粒數量，以及胃中腸溶層溶解(綠色消失)的總顆粒數，腸道中疫苗層溶解(暴露白色核芯)的總顆粒數。耐胃酸性是指腸溶口服疫苗腸溶層在魚胃中不溶解，可避免疫苗與冑酸、胃消化酶接觸，有效保護疫苗抗原。耐胃酸性以腸溶層溶解(綠色消失)百分率表示，其數值越低表示胃中保護效果越好，計算公式為腸溶層溶解率(PO=胃中腸溶層溶解的顆粒數/胃中疫苗總顆粒數*100%腸溶性是指腸溶口服疫苗在腸道中溶解，有效釋放疫苗。以藍色疫苗層開始溶解，暴露出白色顆粒核芯的百分率表示，數值越高表示疫苗釋放越充分，計算公式疫苗層釋放率(P2)=腸道中觀察到白色核芯顆粒數/腸道中總疫苗顆粒總數*100%腸溶口服疫苗耐胃酸、腸溶性解剖觀察結果如下:tableseeoriginaldocumentpage8腸道中總顆粒數0145860腸道中疫苗層溶解(觀察到白色的)顆粒數04466083.3%2.腸道黏膜抗體效價測定:選擇體長1012cm健康牙鮃魚20尾，按照免疫程序口服接種腸溶疫苗。在初免後4周，隨機取3尾免疫魚，活體"0剖取腸道，無菌生理鹽水衝洗後，小心刮取腸道黏膜，收集入無菌塑料管中，組織勻漿器勻漿，離心機離心後，取上清液，此即為微量凝集反應用抗體。根據抗原抗體凝集反應原理進行微量凝集反應實驗，測定免疫魚腸道黏膜抗體效價。以3尾魚抗體效價全距和平均值表示群體黏膜抗體水平。檢測結果全距l:128256，'均值l:170.7。3.相對免疫保護率測定.在免疫魚抗體水平最高時，取免疫魚20尾、未免疫魚20尾，根據病原菌全致死量確定攻毒劑量進行攻毒試驗，同時設正常養殖試驗對照組，分別觀察實驗魚死亡情況。正常養殖試驗對照組在試驗期間以相同飼養條件飼養而不附加任何實驗條件。(艮據實驗魚死亡情況計算相對免疫保護率。相對免疫保護率(RPS)=(未免疫組死亡數一免疫組死亡數)/未免疫組死亡數X100%檢測結果:tableseeoriginaldocumentpage9實施例2製備方法選取10~30目的澱粉顆粒，備用。第一歩疫苗噴塗將乾粉組合物A溶於水中，配置成固含量為8%水性混懸液，再向其中加入適量牙鮃魚腹水病疫苗生理鹽水溶液液(101CFU/ml)，製備成107CFU/ml疫苗濃度的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於顆粒表面。疫苗噴塗量107CFU/g。(即每克噴塗完的顆粒含疫苗107CFU)第二歩隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成固含量8%混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於疫苗層表面。包衣增重為4%。乾粉組合物A配方組成為羥丙甲基纖維素E530g羥丙甲基纖維素E15聚乙烯吡咯烷酮VA64檸檬酸三乙酯聚乙二醇6000卵磷脂滑石粉硬脂酸鎂第三歩腸溶層包衣將乾粉組合物B溶於70%乙醇溶液中:懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面。包衣增重為5%。乾粉組合物B配方組成為丙烯酸樹脂I丙烯酸樹脂n丙烯酸樹脂m檸檬酸乙醯基三丁酯二氧化矽滑石粉產品檢測結果1.耐胃酸性及腸溶性tableseeoriginaldocumentpage102.抗體效價及相對免疫保護率檢測結果tableseeoriginaldocumentpage10實施例3漁用腸溶疫苗的功能性乾粉成膜組合物製備方法選取10~30目的澱粉顆粒，備用。第一歩疫苗噴塗將乾粉組合物A溶於水中，配置成固含量為5%的水性混懸液，再向其中加入適量牙鮃魚腹水病疫苗生理鹽水溶液液(l(^CFU/ml)，製備成108CFU/ml疫苗濃度的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於顆粒表面。疫苗噴塗量10sCFU/g。第二步隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成固含量10%混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗與疫苗層表面。包衣增重為4%。乾粉組合物A的配方組成為羥丙甲基纖維素E525g羥丙甲基纖維素E1520g聚乙烯醇S20510g三磷酸甘油酯5g聚乙二醇60004g卵磷脂O.lg滑石粉35.4g硬脂酸鎂0.5g第三步腸溶層包衣將乾粉組合物B溶於75呢乙醇溶液中，製備成固含量10%的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面。包衣增重為8%。'乾粉組合物B配方組成為丙烯酸樹脂II32g丙烯酸樹脂III10g羥丙甲基纖維素酞酸酯HP5513g鄰苯二甲酸二乙酯15g二氧化鈦8g滑石粉22g產品檢測結果tableseeoriginaldocumentpage11tableseeoriginaldocumentpage12實施例4漁用腸溶疫苗的功能性乾粉成膜組合物製備方法選取10~30目的澱粉微丸，備用。第一步疫苗噴塗將乾粉組合物A溶於水中，配置成固含量為13%的水性混懸液，再向其中加入適量牙鮃魚腹水病疫苗生理鹽水溶液(1012CFU/ml)，製備成109CFU/ml疫苗濃度的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於顆粒表面。疫苗噴塗量109CFU/g。—第二步隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成固含量13%混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗與疫苗層表面。包衣增重為6%。乾粉組合物A的配方組成為羥丙甲基纖維素E520g羥丙甲基纖維素E1515g苯乙烯醇S20518g三磷酸甘油酯5g吐溫-80lg滑石粉36g二氧化鈦5g第三歩腸溶層包衣將乾粉組合物B溶於80呢乙醇溶液中，製備成固含量12%的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面。包衣增重為10%。乾粉組合物B配方組成為丙烯酸樹脂I10g丙烯酸樹脂ll20gtableseeoriginaldocumentpage13丙烯酸樹脂m鄰苯二甲酸二乙酉l二氧化鈦滑石粉產品檢測結果.1.耐胃酸性及腸溶性實施例5製備方法選取10~30目的澱粉微丸，備用。第一步疫苗噴塗將乾粉組合物A溶於水中，配置成固含量為15%的水性混懸液，再向其中加入適量牙鮃魚腹水病疫苗生理鹽水溶液(1012CFU/ml)，製備成10"'CFU/mI疫苗濃度的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於顆粒表面。疫苗噴塗量10"'CFU/g。第二歩隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成固含量15%混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗與疫苗層表面。包衣增重為8%。乾粉組合物A的配方組成為羥丙甲基纖維素E520g羥丙甲基纖維素E158g聚乙烯醇S205三磷酸甘油酯吐溫-80滑石粉二氧化矽22g3glg40g6g第三步腸溶層包衣將乾粉組合物B溶於85呢乙醇溶液中，製備成固含d混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面。包衣增重為15%。乾粉組合物B配方組成為丙烯酸樹脂II30g'丙烯酸樹脂m15g鄰苯二甲酸二乙酯12g二氧化鈦10g滑石粉33g15%的檢測結果:1.耐胃酸性及腸溶性tableseeoriginaldocumentpage142.抗體效價及相對免疫保護率檢測結果tableseeoriginaldocumentpage14實施例6製備方法選取10~30目的澱粉顆粒，備用(第一歩疫苗噴塗將乾粉組合物A溶於水中，配置成固含量為20%的水性混懸液，再向其中加入適量牙鮃魚腹水病疫苗生理鹽水溶液(1012CFU/ml)，製備成l(y'CFU/ml疫苗濃度的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於顆粒表面。疫苗噴塗量10"CRJ/g。第二歩隔離層包衣將乾粉組合物A溶於水中，製備成固含量20%混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗與疫苗層表面。包衣增重為6%。.乾粉組合物A的配方組成為tableseeoriginaldocumentpage15第三步腸溶層包衣將乾粉組合物B溶於90呢乙醇溶液中，配製成固含j混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面。包衣增重為20%。乾粉組合物B配方組成為丙烯酸樹脂n.丙烯酸樹脂m'鄰苯二甲酸二乙酯二氧化鈦滑石粉32g8g10g10g40g20%的產品檢測結果tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage162.抗體效價及相對免疫保護率檢測結果tableseeoriginaldocumentpage16採用本發明的材料組合併通過疫苗噴塗、隔離層包衣、腸溶層包衣的工藝技術，產品完全能夠達到漁用口服給藥的目的，同時口服疫苗在腸道中定點釋放，保護疫苗順利通過胃部消化環境不被胃酸及消化酶破壞，有效作用於腸道黏膜免疫相關淋巴組織，高效激發免疫應答，顯著提高了口服疫苗的免疫效率。權利要求1、漁用腸溶口服疫苗，其特徵在於，包括外周噴塗疫苗層的顆粒或微丸、在疫苗層外逐層包衣隔離層和腸溶層；用於疫苗噴塗及隔離層包衣的乾粉組合物(A)，和用於腸溶層包衣的乾粉組合物(B)的組分及重量比分別為乾粉組合物(A)成膜劑選用羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一種或一種以上，重量比為40～60份；增塑劑選用三磷酸甘油酯、檸檬酸三乙酯或聚乙二醇的一種或一種以上，重量比為3～10份，防粘劑選用二氧化矽、硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為30～50份，表面活性劑選用卵磷脂、吐溫-80的一種，重量比為0～5份；乾粉組合物(B)成膜劑是丙烯酸樹脂、羥丙甲基纖維素酞酸酯或羧甲基纖維素鈉的一種或一種以上，重量比為40～60份，增塑劑是鄰苯二甲酸二乙酯或檸檬酸乙醯基三丁酯的一種或一種以上，重量比為10～20份，防粘劑是滑石粉、二氧化矽或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為20～50份。2、根據權利要求l所述的漁用腸溶口服疫苗，其特徵在於，所述的顆粒或微丸選用10~30目的澱粉顆粒。3、漁用腸溶口服疫苗製備方法主要包括疫苗噴塗、隔離層包衣、腸溶層包衣三個步驟疫苗噴塗將適量的疫苗生理鹽水溶液混入製備好的固含量為5~20%的乾粉組合物(A)的水性混懸液中，製成含有疫苗1061HCFU/ml的水性混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於10-30目的澱粉顆粒或微丸表面；活性疫苗含量為1610HCFU/g;隔離層包衣將千粉組合物(A)溶於水中，製備成5~20%固含量的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗與疫苗層表面，包衣增重為2%~10%;腸溶層包衣將腸溶層乾粉組合物(B)溶於60~90%乙醇溶液中，製備成5~20%固含量的混懸液，使用高壓噴槍均勻噴塗於隔離層表面，包衣增重為5~20%。全文摘要本發明屬於漁用口服疫苗領域。漁用腸溶口服疫苗，包括外周噴塗疫苗層的顆粒或微丸、在疫苗層外逐層包衣隔離層和腸溶層，用於疫苗噴塗及隔離層包衣的乾粉組合物A的組分及重量比分別為成膜劑選用羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮的一種或一種以上，重量比為40～60份；增塑劑選用三磷酸甘油酯、檸檬酸三乙酯或聚乙二醇的一種或一種以上，重量比為3～10份，防粘劑選用二氧化矽、硬脂酸鎂、滑石粉或二氧化鈦的一種或一種以上，重量比為30～50份，表面活性劑選用卵磷脂、吐溫-80的一種，重量比為0～5份，本發明的疫苗能夠在腸道中定點釋放。文檔編號A61K9/28GK101283985SQ200810053428公開日2008年10月15日申請日期2008年6月5日優先權日2008年6月5日發明者孫金生,翔李,王守斌,王雪惠,耿緒雲,董學旺,超韓申請人:天津市水產研究所;天津愛勒易醫藥材料有限公司