香加皮強心作用有效部位及製備方法和含它們的藥物製劑與應用的製作方法
2023-05-19 14:19:01
專利名稱：香加皮強心作用有效部位及製備方法和含它們的藥物製劑與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥技術領域，更具體的說是一種香加皮強心作用有效部位及其製備方法和含它們的藥物製劑，以及該製劑在治療急、慢性充血性心力衰竭藥物方面的應用。
背景技術：
香加皮是蘿藦科植物槓柳的乾燥根皮，中醫認為其具有祛風溼、強筋骨的功效，主要用於風寒溼痺、腰膝酸軟、心悸氣短、下肢浮腫等。因香加皮兼有強心及利尿的功效，近年來香加皮常和益氣、溫陽、化瘀、利水的其它中藥組成複方，應用於CHF的臨床治療，如複方生脈飲，強心飲、芪加衝劑、北五加皮合劑、心衰靈等。從其製備工藝來看，均為湯劑或藥材粉末裝入膠囊等全成分入藥的方法。授權公告號為CN1186071C的發明專利說明書公開了一種治療慢性心衰的藥物組合物及製備方法，公開號為CN1530117A的發明專利申請書公開了一種補益強心片及其製備方法，二者的組方中均含有香加皮，但是都未對香加皮中的槓柳毒苷進行富集，也未對香加皮藥材及製劑中槓柳毒苷的含量進行控制。
香加皮中含有強心苷成分槓柳毒苷，既是治療急、慢性心衰的有效成分，又是有毒成分，故應對其含量進行控制；而且香加皮中強心苷成分槓柳毒苷如若不能得到富集，不符合現代中藥「三效」(高效，速效，長效)、「三小」(劑量小，毒性小，副作用小)以及「三便」(便於儲存，攜帶和服用)的要求。
本發明人在過去的研究中發現，採用乙醇或甲醇水溶液提取，大孔樹脂吸附分離等方法，可富集香加皮中強心苷成分——槓柳毒苷，製得香加皮強心作用有效提取物。此研究成果的在先申請已公開，具體內容見申請號200410019967.0及200041000199975.5。
發明內容
本發明的一個目的是對在先研究的進一步補充，提供一種香加皮強心作用有效部位，其活性成分槓柳毒苷的含量達到50％以上。
本發明的另一個目的是提供了香加皮強心作用有效部位的製備方法。
本發明的第三個目的是提供了香加皮強心作用有效部位在製備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物中的應用。
本發明的再一個目的是公開了以香加皮強心作用有效部位為活性組分，與一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑結合製成各種製劑。
本發明的技術方案概述如下以香加皮提取物為原料，採用索氏提取、樹脂吸附、柱層析等工藝中的一種或者兩種工藝，並結合薄膜濃縮、真空乾燥、噴霧乾燥、冷凍乾燥等常用乾燥方法製備成香加皮強心作用有效部位；採用HPLC法測定所製備的有效部位活性成分槓柳毒苷含量在50％以上；並且可以將其用常規方法製成各種劑型的藥物，用於治療急、慢性充血性心力衰竭。
香加皮強心作用有效部位的製備方法，它是以香加皮提取物為原料，採用索氏提取、樹脂吸附、柱層析中的一種或兩種方法進行分離、純化；並以水或10～99.5％的醇類、酯類、酮類或烷烴及滷代烷烴類有機溶劑的一種或兩種為溶劑或洗脫劑，可進行梯度或等度洗脫；合併槓柳毒苷含量較高的流份，濃縮乾燥，得到含槓柳毒苷50％以上的香加皮強心作用的有效部位；槓柳毒苷含量較低的流份合併濃縮後重新進行製備。
本發明所述的索氏提取所用溶劑為乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇之一種或兩種；提取時間為1～24小時。
所採用的樹脂吸附法所用樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂。所用洗脫劑為濃度範圍為水或v/v 10％～99.5％的甲醇、乙醇、丙酮水溶液。
所述柱層析可以是正相柱層析，也可以是反相柱層析；可以是梯度洗脫，也可以是等度洗脫；可進行1次或多次。
更進一步解釋，所述的正相柱層析填料為可以是矽膠，也可以是三氧化二鋁或氨基鍵合相矽膠，所用洗脫劑為乙酸乙酯、氯仿、甲醇、乙醇、己烷、丙酮之一種或二種混合溶劑。
反相柱層析填料可以是碳十八烷基鍵合相矽膠，也可以是碳八烷基鍵合相矽膠或活性炭，洗脫劑可以是甲醇、乙醇、乙腈、水之一種或兩種混合溶劑。
所採用的乾燥方法為薄膜濃縮、真空乾燥、噴霧乾燥、冷凍乾燥等常用乾燥方法。
作為治療急、慢性充血性心力衰竭的藥劑，它包含香加皮強心作用有效部位以及一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。其中，香加皮強心作用有效部位的常規用量一般為每日0.5～8mg，可以根據患者的病情、醫生診斷的情況加以適當的調整。
香加皮強心作用有效部位可以按常規方法製成各種固體和液體劑型的藥物，製成固體製劑如片劑、緩釋片、分散片、滴丸、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、散劑、栓劑等；製成液體製劑如注射劑、口服液、粉針劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、噴霧劑等等。
製備口服藥劑可採用乳糖或澱粉做載體，明膠，羧甲基纖維素鈉，羥丙基甲基纖維素，甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮等是合適的粘合劑。作為崩解劑可選用羧甲基澱粉鈉、或微晶纖維素，常以滑石粉，微粉矽膠，硬脂酸甘油酯，硬脂酸鈣或鎂等作為合適的抗粘劑和潤滑劑。
製備液體製劑，例如注射用粉針劑，可以加入藥學適用的一種或一種以上附加物，例如填充劑選自藥用的氯化鈉、葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇或木糖醇之一種。優選氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇之一種；更優選為甘露醇，氯化鈉或葡萄糖，其用量未做特殊規定，但優選的用量為當粉針劑用2mL注射用水溶解後，溶液的滲透壓與0.9％的氯化鈉相等或相近。
本發明工藝簡單，可實現工業化生產；實用經濟，溶媒可反覆使用；產品富集香加皮強心作用活性成分槓柳毒苷達50％以上，並可製成各種劑型治療急慢性充血性心力衰竭，且槓柳毒苷含量可以得到控制。
下面通過藥效學實驗進一步說明本發明的有益效果香加皮有效部位對離體心臟心功能的影響採用離體心臟灌流的方法觀察香加皮有效部位對心功能的影響。選取健康大鼠16隻，隨機分為2組，每組8隻，大鼠斷頭，迅速取出心臟，置於4℃Krebs-Henseleit液中，絲線固定，灌流，灌流液恆溫37℃，通入95％氧氣。接心電電極，待心電平穩，將灌注壓調節在46±3mmHg，灌流量調節在6.00±0.06mL/min進行恆壓恆流灌注，穩定後記錄給藥前LVSP、LVEDP、±dp/dtmax，經給藥孔緩慢注入0.2mL/心臟配製好的藥液；有效部位組按0.17mg有效部位/心臟給藥，空白組0.2mL Krebs-Henseleit液/心臟，給藥完畢後立即記錄上述各項指標，持續觀察5分鐘，結果如下表香加皮有效部位對離體心臟心功能的影響
注*表示與空白組比P＜0.05，**表示與空白組比P＜0.01結論香加皮有效部位在恆壓、恆流灌注條件下，能顯著升高大鼠離體心臟的LVSP，增加±dp/dtmax，降低LVEDP，改善心功能，具有強心作用。
圖1為槓柳毒苷對照品色譜圖(1-槓柳毒苷)圖2為香加皮藥材色譜圖(1-槓柳毒苷)圖3為香加皮強心作用有效部位色譜圖(1-槓柳毒苷)具體實施方式
下面結合實施例對本發明做進一步的說明，實施例僅為解釋性的，決不意味著它以任何方式限制本發明的範圍。
實施例1樹脂吸附-正相柱層析法香加皮提取物60g，懸浮於水中，過濾後用D101大孔樹脂吸附，先用水洗，後用10％乙醇洗脫，再用60％乙醇洗脫，收集60％洗脫液，減壓濃縮至幹，回收溶劑；將所得固體進行矽膠柱層析，乙酸乙酯∶甲醇＝20∶1等度洗脫，每100mL為一份，用薄層層析(展開劑∶氯仿∶甲醇∶水＝65∶35∶10的下層，矽膠G薄層板，3，5，-二硝基苯甲酸試劑顯色)檢驗收集的流份，將含有槓柳毒苷的流份合併，減壓濃縮後在同樣條件下再進行一次矽膠柱層析，經薄層檢驗(薄層條件同上)，合併槓柳毒苷含量較高的流份，濃縮，冷凍乾燥，得到香加皮強心作用的有效部位112mg，經HPLC測定，槓柳毒苷含量為51％；槓柳毒苷含量較低的流份合併後可重新進行柱層析。
實施例2索氏提取-正相柱層析法
25g香加皮提取物，與25g矽膠混勻，用乙酸乙酯進行索氏提取，提取12小時；提取液經減壓濃縮至幹，回收溶劑，將所得固體與5g矽膠混勻，上樣於矽膠柱，先用乙酸乙酯洗脫，再用乙酸乙酯∶乙醇＝25∶1洗脫，經薄層檢驗(薄層條件同實施例1)，合併槓柳毒苷含量較高的流份，冷凍乾燥，得到香加皮強心作用的有效部位48mg，經HPLC測定，槓柳毒苷含量為58％；槓柳毒苷含量較低的流份合併後可重新進行柱層析。
實施例3反相柱層析法香加皮提取物5g進行反相柱層析，填料為碳十八鍵合相矽膠，用10％～99.5％甲醇梯度洗脫，經薄層檢驗(薄層條件實施例1)收集槓柳毒苷含量較高的流份，合併，濃縮後噴霧乾燥，得到香加皮強心作用的有效部位10mg，經HPLC測定，槓柳毒苷含量為56％；槓柳毒苷含量較低的流份可重新進行一次反相柱層析。
實施例4樹脂吸附-正相柱層法香加皮提取物50g懸浮於水中，過濾後上樣於D301大孔樹脂柱，水洗後，用20％甲醇洗脫，再用70％甲醇洗脫，收集70％洗脫部位濃縮，將濃縮所得固體進行正相柱層析，填料為三氧化二鋁，依次用v/v 10∶1～10∶8的己烷∶丙酮洗脫，收集含有槓柳毒苷的流份，合併，濃縮後真空乾燥，得到香加皮強心作用的有效部位90mg，經HPLC測定，槓柳毒苷含量為54％。
實施例5正相柱層析法香加皮提取物10g，進行矽膠柱層析，用氯仿∶乙醇＝10∶1洗脫，每100mL為一份，經薄層檢驗(矽膠G板，乙酸乙酯∶甲醇＝5∶2為展開劑，間二硝基苯試劑顯色)，合併含有槓柳毒苷的流份，減壓濃縮回收溶劑，所得固體再進行一次矽膠柱層析，合併槓柳毒苷含量較高的流份，濃縮後真空乾燥，得到香加皮強心作用的有效部位12mg，經HPLC測定，槓柳毒苷含量為53％；槓柳毒苷含量較低的部分可重新進行柱層析。
採用上述實施例的製備方法製成的有效部位幹膏，可用於臨床上製備片劑、緩釋片、分散片、滴丸、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、散劑、栓劑等；製成液體製劑如注射劑、口服液、粉針劑、糖漿劑、乳劑、混懸劑、酊劑、噴霧劑等等。
實施例6製成片劑(1000片配方)
香加皮強心作用有效部位380mg(槓柳毒苷含量為51％)，乳糖250g，微晶纖維素105g，羧甲基澱粉鈉15g，5％PVPK30溶液100mL，阿斯巴甜5g，硬脂酸鎂2g；將香加皮強心作用有效部位、乳糖、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉及阿斯巴甜混合均勻。用PVPK30溶液制軟材，16目篩制粒，60℃乾燥並整粒。整粒後的顆粒加入硬脂酸鎂，混合均勻，壓片。片劑中槓柳毒苷含量為0.19mg/片。
實施例7製成膠囊劑(1000粒配方)香加皮強心作用有效部位380mg(槓柳毒苷含量為58％)，乳糖170g，微晶纖維素100g，羧甲基澱粉鈉8g，5％PVPK30溶液80mL，阿斯巴甜5g，硬脂酸鎂1g，微粉矽膠2g。
製備方法將香加皮強心作用有效部位、乳糖、微晶纖維素、羧甲基澱粉鈉及阿斯巴甜混合均勻。用PVPK30(聚乙烯吡咯烷酮)溶液制軟材，20目篩制粒，60℃乾燥並整粒。整粒後的顆粒加入硬脂酸鎂及微粉矽膠，混合均勻，裝入1號膠囊。膠囊中槓柳毒苷含量為0.21mg/粒。
實施例8製成分散片(1000片)香加皮強心作用有效部位380mg(槓柳毒苷含量為51％)，乳糖110g，預膠化澱粉30g，微晶纖維素38g，交聯聚乙烯吡咯烷酮15g，3％PVPK30乙醇溶液40mL，甜菊糖苷5g，硬脂酸鎂2g。
製備方法將香加皮強心作用有效部位、乳糖、預膠化澱粉、微晶纖維素及交聯聚乙烯吡咯烷酮混合均勻。用3％PVPK30乙醇溶液制軟材，20目篩制粒，60℃乾燥並整粒。整粒後的顆粒加入甜菊糖苷和硬脂酸鎂，混合均勻，壓片。分散片中槓柳毒苷含量為0.19mg/片。
實施例9製成注射劑(1000支)香加皮強心作用有效部位800mg(槓柳毒苷含量為51％)以普通注射劑製造法，用加熱到60℃的注射用蒸餾水2000mL溶解，活性炭脫色，用NaCl調節等滲，濾過，無菌封入2mL安瓿。本注射劑2mL中含槓柳毒苷0.40mg。
實施例10製成滴丸(1000丸)將40g聚乙二醇4000置水浴上加熱使熔融，加入香加皮強心作用有效部位200mg(槓柳毒苷含量為51％)使溶解分散，再加入到預熱的滴丸機中，85℃保溫，調節滴速，將藥液滴入到10～15℃的液體石蠟冷凝液中，收集滴丸，吸去附著在滴丸表面的冷凝液，乾燥。滴丸中槓柳毒苷含量為0.1mg/丸。
權利要求
1.一種香加皮強心作用有效部位，其特徵是以香加皮提取物為原料，採用索氏提取、樹脂吸附、柱層析之一種或兩種經分離、純化製備而成，且香加皮主要活性成分槓柳毒苷的含量達50％以上。
2.一種香加皮強心作用有效部位的製備方法，其特徵是以香加皮提取物為原料，採用索氏提取、樹脂吸附、柱層析中的一種或兩種方法進行分離、純化；並以水或10～99.5％的醇類、酯類、酮類或烷烴及滷代烷烴類有機溶劑的一種或兩種為溶劑或洗脫劑，可進行梯度或等度洗脫；合併含有槓柳毒苷的流份濃縮乾燥，得到含槓柳毒苷50％以上的香加皮強心作用的有效部位。
3.如權利要求2所述的製備方法，其特徵是所述索氏提取，採用的有機溶劑為乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇之一種或兩種；提取時間為1～24小時。
4.如權利要求2所述的製備方法，其特徵是所述樹脂吸附法所用樹脂為非極性大孔樹脂或弱極性大孔樹脂；所用洗脫劑為濃度範圍為水或v/v 10％～95％的甲醇、乙醇、丙酮水溶液。
5.如權利要求2所述的製備方法，其特徵是所述柱層析包括正相柱層析、反相柱層析；可以是梯度洗脫，也可以是等度洗脫；可進行1次或多次洗脫。
6.如權利要求5所述的製備方法，其特徵是所述正相柱層析吸附劑為矽膠或三氧化二鋁或氨基鍵合相矽膠，所用洗脫劑為乙酸乙酯、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、己烷之一種或二種混合溶劑；反相柱層析吸附劑是碳十八烷基鍵合相矽膠、碳八烷基鍵合相矽膠或活性炭，洗脫劑是甲醇、乙醇、乙腈、水之一種或兩種。
7.權利要求1所述的香加皮強心作用有效部位在製備治療急、慢性充血性心力衰竭藥物方面的應用。
8.一種用於治療急、慢性充血性心力衰竭的藥劑，它包含權利要求1所述的有效部位，以及一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。
9.如權利要求8所述的藥劑，其特徵在於所述的藥劑為片劑、緩釋片、膠囊、分散片、滴丸、軟膠囊、粉針或大、小針劑。
全文摘要
本發明公開了香加皮強心作用有效部位及製備方法和含它們的藥物製劑與應用。以香加皮提取物為原料，採用索氏提取、樹脂吸附、柱層析等工藝中的一種或者兩種工藝，並結合薄膜濃縮、真空乾燥、噴霧乾燥、冷凍乾燥等常用乾燥方法製成香加皮強心作用有效部位。用本發明方法製備的香加皮強心作用有效部位，其活性成分槓柳毒苷含量可達50％以上。所製備的香加皮強心作用的有效部位可以用常規方法製成各種劑型的藥物，用於治療急、慢性充血性心力衰竭。
文檔編號A61K125/00GK1857354SQ20051001338
公開日2006年11月8日 申請日期2005年4月29日 優先權日2005年4月29日
發明者劉虹, 張伯禮, 潘桂湘, 高秀梅 申請人:天津中醫學院