含有醯胺和視黃醇或視黃酯的皮膚護理組合物的製作方法

2023-05-19 04:18:46

專利名稱：含有醯胺和視黃醇或視黃酯的皮膚護理組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及含有脂肪醯胺和視黃醇或視黃酯的皮膚護理組合物，並涉及在皮膚上施用該組合物的方法。
背景技術：
視黃醇(維生素A)是一種內源的化合物，其天然存在於人體內，並且對正常的上皮細胞分化來說是必要的。天然的和合成的維生素A衍生物已經被廣泛地用於治療多種皮膚疾病，也已用作皮膚護理或再生劑。視黃酸已被用於治療多種皮膚病症，例如粉刺、皺紋、牛皮癬、老年斑和變色。見例如Vahquist,A.等，皮膚研究雜誌，Vol.94,Holland D.B.and Curdiffe,W.J.(1990),496-498頁；Ellis,C.N.等，″皮膚中視黃醇的藥理學″，Vasel,Karger,Vol.3(1989),249-252頁；Lowe,N.J.等，″皮膚中視黃醇的藥理學″，Vol.3(1989),240-248頁；PCT專利申請號WO93/19743。
人們相信，利用視黃醇或視黃醇酯比用視黃酸更有利。視黃醇天然地存在於人體內，並被認為比視黃酸安全。視黃醇酯在體內水解生成視黃醇。人們相信，視黃醇酯和視黃醇在皮膚內按照下述代謝方式轉化成視黃酸視黃酯視黃醇↓視黃酸然而，大多數內源性供應的(endogenously applied)視黃醇快速地被轉化成無活性的脂肪酯，貯存在表皮細胞(角質細胞)中。視黃醇在細胞中酯化為無活性的視黃酯的反應是通過如下方式完成的在醯基輔酶A視黃醇轉移酶(ARAT)的催化下，從醯基輔酶A轉移脂肪醯基；或在卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)的催化下，從磷脂醯膽鹼轉移醯基。這些酯化反應在角質細胞中是非常有效的，而細胞類視色素(retinoid)主要(95％)以脂肪酸視黃酯形式存在。因此，不利地，雖然視黃醇和視黃酯比視黃酸更安全，它們在使皮膚受益方面不如視黃酸有效。
本發明部份地基於這樣一個發現，即某些N-取代的脂肪醯胺抑制上述酯化反應，從而通過提高用於轉化為視黃酸的視黃醇的量，加強視黃醇的作用。因此，這些N-取代的脂肪醯胺與視黃醇或視黃酯的混合物模擬視黃酸的作用，而且比用視黃酸更安全。1996年11月13日出版(本申請的優先權日之後)的較早前提交的歐洲專利申請EP0742005(聯合利華，優先權日1995年5月8日)，公開了脂肪醯胺與視黃醇或視黃酯的結合。但是EP′005沒有講授本發明中特定的N-取代脂肪醯胺，或任何在氮原子上有支鏈含烷氧基取代基的脂肪醯胺。
發明概述本發明部份地包括一種皮膚調理組合物，其含有(a)0.001％到10％的視黃醇或視黃酯；(b)0.0001％到50％的N-取代的式Ⅰ脂肪醯胺

(Ⅰ)其中R1=具有1至10個碳原子的烷基或烷氧基；R2=具有8至25個碳原子的烷基或鏈烯基；R3=含有1至5個碳原子的烷基，或磷酸酯；以及(c)一種美容用賦形劑。
本發明也提供一種調理皮膚的美容方法，包括將本發明的組合物局部地施用在皮膚上。本發明進一步提供一種模擬視黃酸在皮膚上的作用的美容方法，該方法包括將本發明的組合物局部地施用在皮膚上。
本文使用的術語「調理」是指防止和治療一種或一種以上的如下皮膚病症皮膚乾燥、皮膚的光損傷、出現皺紋、老年斑和/或皮膚老化，增加角質層彈性，增加皮膚光澤，控制皮脂分泌和全面地改善皮膚質量。
作為本發明的一部分，已經發現式Ⅰ的脂肪醯胺在100μM濃度下，優選地抑制至少20％的LRAT或RAT催化的視黃醇酯化反應。這是通過體外微粒體檢測法(Microsomal assay，下文描述)測定的。因此，在本發明的組合物中存在式Ⅰ的N-取代的脂肪醯胺實質上提高了美容組合物中視黃醇或視黃酯的效能。
優選實施方案的描述除非另有說明，所有的量都是以最終組合物的重量計。
本發明組合物含有作為第一必需成分的選自視黃醇、視黃酯的化合物。術語「視黃醇」尤其包括視黃醇的下列異構體全-反-視黃醇、13-順-視黃醇、11-順-視黃醇、9-順頁-視黃醇、3,4-二脫氫-視黃醇。優選的異構體是全-反-視黃醇、13-順-視黃醇、3,4-二脫氫-視黃醇、9-順-視黃醇。最優選的是全-反-視黃醇，因為它有廣泛的商用上易得性。
視黃酯是一種視黃醇的酯。術語「視黃醇」已在上文定義。適合用於本發明的視黃酯是視黃醇的C1-C30酯，優選C2-C20的酯，並最優選C2、C3和C16的酯，因為它們較易得到。視黃酯的例子包括但不限於棕櫚酸視黃酯、甲酸視黃酯、乙酸視黃酯、丙酸視黃酯、丁酸視黃酯、戊酸視黃酯、異戊酸視黃酯、己酸視黃酯、庚酸視黃酯、辛酸視黃酯、壬酸視黃酯、癸酸視黃酯、十一酸視黃酯、十二酸視黃酯、十三酸視黃酯、十四酸視黃酯、十五酸視黃酯、十七酸視黃酯、硬脂酸視黃酯、異硬脂酸視黃酯、十九酸視黃酯、廿酸視黃酯、二十二酸視黃酯、亞油酸視黃酯、油酸視黃酯。
用於本發明的優選的酯選自棕櫚酸視黃酯、乙酸視黃酯和丙酸視黃酯、因為這些是商業上最易得的，也因此最便宜。亞油酸視黃酯由於其功效也是優選的。
本發明組合物中視黃醇和/或視黃酯的用量為0.001％到10％，優選0.01％到1％，最優選0.01％到05％。
本發明組合物的第二必需成分是式Ⅰ的N-取代的脂肪醯胺

(I)其中R1=具有1至10個碳原子的烷基或烷氧基；R2=具有8至25個碳原子的烷基或鏈烯基；R3=含有1至5個碳原子的烷基，或磷酸酯。
優選地，R1是含有1至5個碳原子(最優選1或4個碳原子)的直鏈飽和烷基或烷氧基R2優選是含有10至20個碳原子(最優選10至18個碳原子)的直鏈不飽和鏈烯基。
最適地，R2是亞油酸殘基(C18∶2)。
R3優選地是甲基或磷酸酯，最優選的是膽鹼或乙二醇的磷酸酯。
最優選地，N-取代的脂肪醯胺選自下面式A和B化合物


N-取代的脂肪醯胺在本發明的組合物中的含量是0.0001％至50％，優選0.01％至10％，最優選0.1％至5％。
式Ⅰ的N-取代的脂肪醯胺優選地在100μM濃度下抑制至少20％(由體外微粒體檢測法測定)的LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化反應。
體外微粒體檢按下述文獻所述獲得微粒體J.C.Saari和D.L.Bredberg，「視黃醛色素表皮細胞中輔酶A和非輔酶A依賴型視黃醇酯化反應」，生物化學雜誌，263,8084-90(1988)。
將含有0.1M磷酸鈉pH7緩衝液、5mM二硫蘇糖醇、2mg/ml牛血清白蛋白、40微摩爾棕櫚醯輔酶A、40微摩爾二月桂醯磷脂醯膽鹼、10微摩爾視黃醇和受試化合物的溶液或空白溶劑，與分離自牛視黃醛色素表皮細胞的微粒體級分一起，在37℃下溫育1小時。溫育後，加入等體積的乙醇中止反應，用己烷抽提出形成的視黃酯(來自LRAT催化反應的月桂酸視黃酯和來自ARAT催化反應的棕櫚酸視黃酯)。除去己烷層，在氮氣下蒸發，用HPLC(3.9×300mmC18反相柱，四氫呋喃流動相中含80％甲醇)分析殘餘物，用螢光檢測(325nm激發，480nm發射)量化視黃酯。以空白溶劑中形成的酯的量作為100％，用於計算受試化合物對酯形成的抑制百分數。將一份微粒體煮沸5分鐘失活，作為對照，它可產生對酯形成的至少95％的抑制作用。
在本發明的優選實施方案中，所選的N-取代的脂肪醯胺在100μM濃度下，至少抑制40％的LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化反應。美容用賦形劑本發明的組合物也包含一種美容用賦形劑，作為視黃醇和/或視黃酯以及N-取代的脂肪醯胺的稀釋劑、分散劑或載體，以促進它們在施用於皮膚上時的分布。
除了水之外，賦形劑還可包括液體或固體潤膚劑、溶劑、保溼劑、增稠劑和粉末。一種特別優選的非含水載體是聚二甲基矽氧烷，和/或聚二甲基苯基矽氧烷。本發明的矽氧烷可以是在25℃時粘度範圍在10到10,000,000mm2/s(釐司)中任何一值的矽氧烷。特別優選的是低粘度和高粘度矽氧烷的混合物。這些矽氧烷可以從通用電氣公司以商Vicasil,SE和SF獲得，或在Dow Corning公司的200和550系列中獲得。可以在本發明的組合物中利用的矽氧烷的用量範圍以組合物重量計為5％到95％，優選25％到90％。
美容用賦形劑的含量以組合物重量計通常佔5％到99.9％，優選25％到80％，並且在缺少其他的化妝品助劑時，可以使組合物達到足量。優選地，以賦形劑的重量計，賦形劑中最少50重量％，更優選最少80％是水。優選地，以組合物的重量計，水最少含50重量％，更優選60％到80重量％的本發明的組合物。可選的對皮膚有益的材料和化妝品助劑可以採用一種油或油性的材料，以及一種乳化劑，從而主要依據所用乳化劑的平均親水親脂平衡值(HLB)而提供油包水乳液或水包油乳液。本發明的組合物優選包含吸光成份(sunscreens。吸光成份包括通常用於阻隔紫外光的材料。例示化合物有對氨基苯甲酸酯(PABA)、肉桂酸酯和水楊酸酯衍生物。例如，可以用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基-二苯甲酮(也稱氧苯酮)。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基-二苯甲酮都可以分別以商標Parsol MCX和二苯甲酮-3購得。用於乳劑中的確切的吸光成份含量會視乎所需的防紫外光的保護程度而變化。
另一種優選的可選成份選自必需脂肪酸(EFA)，即那些對形成所有細胞的細胞膜所必需的脂肪酸。角質細胞如果缺乏EFA，會使細胞增殖過度。補充EFA可以抑制細胞增殖過度。EFA還會提高表皮中脂類的生物合成，並且為表皮的阻擋層的形成提供脂類。必需脂肪酸優選亞油酸，γ-亞油酸，高-γ-亞油酸(homo-γ-linolenic acid)，咖倫賓(columbinic)酸，二十碳-(n-o,9,13)-三烯酸(trienoicacid)。花生四烯酸，α-亞油酸，二十碳五烯酸，己烯酸(hexaenoicacid)和其混合物。
另一種可選成份選自吡咯類，例如氯咪巴唑、聯苯苄唑、克黴唑、酮康唑、咪康唑、益康唑、伊曲康唑、氟康唑、特康唑、布康唑、硫康唑、lionazole和其混合物。吡咯在本發明組合物中的含量是從0.001到50重量％，優選從0.001到10重量％，最優選從0.1到5％。
潤膚劑常被加進本發明的美容組合物中。如此的潤膚劑的水平自0.5％到50％，優選從5％到30％的總組合物重量。潤膚劑可通常分為酯類、脂肪酸類和脂肪醇類、多醇類(polyols)和碳氫化合物類。酯類可以是單酯或二酯。可接受的脂肪二酯的例子包括己二酸二丁酯，癸二酸二乙酯，二聚二異丙酯(diisopropyl dimerate)，和丁二酸二辛酯。可接受的支鏈脂肪酯包括十四烷酸2-乙基己酯。可接受的三鹼酸酯包括三亞油酸三異丙酯和檸檬酸三月桂酯。可接受的直鏈脂肪酯包括棕櫚酸月桂酯，乳酸十四烷酯，oleyl eurcate，和硬脂醯油酸酯。優選的酯包括椰子辛酸酯/癸酸酯(coco-caprylate/caprate)(一種椰子辛酸酯(coco-caprylate)和椰子癸酸酯(coco-capmte)的混合物)，丙二醇十四烷基醚醋酸酯，己二酸二異丙酯和辛酸十六烷酯。
合適的脂肪醇和酸包括有10至20個碳原子的化合物，特別優選的化合物有十六烷-，十四烷-，棕櫚-和十八烷醇和酸。
在多醇類中可用作潤膚劑的是直鏈和支鏈烷基多羥基化合物。例如，優選丙二醇，山梨醇和丙三醇。也可用聚合的多醇(polyol)如聚-丙二醇和聚乙二醇。丁二醇和丙二醇也特別優選用作滲透增強劑。
可以用作潤膚劑的示例碳氫化合物是擁有12至30個碳原子的碳氫鏈。具體的例子包括礦物油，凡士林，鯊烯和異鏈烷烴。
另一類在本發明的美容組合物的功能性成分是增稠劑。增稠劑通常用量為組合物重量的0.1到20％，優選從0.5％到10％。可以用作增稠劑的例子是交聯聚丙烯酸酯材料，在B.F.Goodrich公司可以商標Carbopol購得。可以使用膠質如黃原膠(xanthan)、角叉菜膠(carrageenan)、明膠、梧桐膠、果膠和刺槐豆膠。在某些情況中該增稠功能可以通過一種材料完成，該材料也起到矽氧烷或潤膚劑的作用。例如，粘度超過10釐司的矽氧烷膠質與諸如硬脂酸甘油酯的酯均有雙官能度。
可以將粉末加進本發明的美容組合物。這些粉末包括白堊、滑石、漂白土、高嶺土、澱粉、綠土、化學改性的鎂鋁矽酸鹽、化學改性的蒙脫土、水化矽酸鋁、燻制二氧化矽、鋁澱粉琥珀酸辛烯酯及其混合物。其他的附助性次要成分也可加進美容組合物中。這些成分可以包括著色劑、遮光劑和香水。這些附助性次要成分的用量範圍可以是組合物重量的0.001％到 20％。組合物的應用本發明的組合物主要地用來製成一種局部施用在人類皮膚上的產品，特別地是用作一種皮膚調理劑和皮膚光滑劑，並且防止或減少皺紋或皮膚衰老的出現。
在應用時，將少量的，例如從1到100ml的本發明組合物塗在皮膚的暴露部位。該少量的本發明組合物可以取自一種合適的容器或敷料器，並且如有需要，用手或手指或一種合適的裝置將該組合物塗和/或擦在皮膚之上。產品形式與包裝根據本發明的局部皮膚治療的組合物可以適當地製成洗劑、霜劑或凝膠。該組合物可以在合適的容器內包裝以配合它的黏度和消費者所需的應用。例如，洗劑或霜劑可以在瓶子或滾珠敷料器(roll-ball applicator)內包裝，或是在一種噴霧裝置內包裝或在一種安裝了適用於手指操作的泵的容器內包裝。當組合物是霜劑時，它可以簡單地儲存在一種不會變形的瓶子或擠壓容器內，例如一種管或有蓋的罐內。本發明的組合物也可包含在膠囊內，例如那些在美國專利5063057中所描述的。
本發明也相應地提供一種密封的容器，該容器含有一種在本文中定義的美容組合物。
下列的具體實施例進一步闡明本發明。材料與方法細胞培養人類角質細胞，通過胰蛋白酶處理分離自新生的包皮，在用射線照射的3T3老鼠纖維原細胞存在下，培養於Dulbecco Modification Eagle(DME)HamsF12(1∶1)培養基/10％胎牛血清中，用以確立分裂中的角質細胞集落。該細胞在上述的條件生長到它們的第二代(second passage)，並且冷凍保存以作未來之用。解凍冷凍的第二代角質細胞，將上述的培養基放進平板並培養五日，然後換成Clonetics公司(san Diego,CA)的角質細胞生長培養基(KGM)，它是含有0.15mM鈣的無血清的基於MCDB153的培養基，或者GIBCO公司的含有0.09mM鈣的角質細胞無血清培養基(KSFM)。到第七日，當細胞80-90％匯合時，將細胞用胰蛋白酶處理並置於無血清培養基中培養，以用於不同的實驗。轉穀氨醯胺酶檢測轉穀氨醯胺酶檢測與角質細胞分化在表皮內末端分化(terminal differentiation)的過程中，一個15nm厚的蛋白質層，稱為角質被膜(CE)，形成於細胞外周的內表面。該角質被膜由許多不同的蛋白質組成，這些蛋白質通過形成Nc-(γ-穀氨醯基)賴氨酸異二肽鍵交聯在一起，該Nc-(γ-穀氨醯基)賴氨酸異二肽鍵的形成是經至少兩種不同的在表皮中表達的轉穀氨醯胺酶(TGases)催化完成。轉穀氨醯胺酶Ⅰ(TGaseⅠ)在表皮的已分化層(特別是粒狀層)中大量表達，卻不存在於未分化的基底皮層。因此TGaseⅠ是一種有用的表皮角質細胞分化的標記物，TGaseⅠ的水平高時，表示較高程度的分化狀態。利用一種基於ELISA、使用TGaseⅠ抗體的TGaseⅠ檢測方法，評定下述實施例中培養的角質細胞的分化狀態對於實施例1，採用下面的步驟將角質細胞(用如同上述的方法培養)置於96孔平板中，密度為每孔200μl培養基中有3000個細胞。培養了四日以後，將培養基換為含有受試化合物的培養基(每個測試用六個重複實驗)。將細胞進一步培養72小時，然後吸出培養基,並將平板儲存於-70℃。將平板從冷藏箱中取出，並且用PBS洗滌細胞。加入100μl無菌水，在通過在-70℃冷凍然後溶化使細胞冷凍破碎。然後用PBs/3％BSA(洗滌緩衝液，牛血清白蛋白)在室溫(R/T)培養細胞達一小時，然後用新鮮的等份洗滌緩衝液洗滌細胞。將細胞與得自BiomedicalIndustries、用洗滌緩衝液以1∶2000比率稀釋的50μl的初級抗體單克隆抗-人類轉穀氨醯胺酶鼠抗體(IgG)一起溫育，在37℃溫育一小時，然後用洗滌緩衝液洗滌兩次。然後將細胞與用洗滌緩衝液以1∶4000比率稀釋的50μl的次級抗體(Fab片段，從Amersham得到的過氧化物酶偶聯的抗-鼠IgG)溫育，在37℃達一小時，然後用洗滌緩衝液洗滌兩次。將細胞與底物溶液(4mg鄰-苯二胺和在10ml的0.1MpH5.0檸檬酸緩衝液中的3.3μl30％過氧化氫)溫育，在室溫下，黑暗中(在鋁箔下)溫育五分鐘。加入50μl4N硫酸以中止反應。於492nm在平板讀數器中測讀試樣的吸光度。在六個重複實驗中，四個接受兩種抗體的處理，兩個只接受次級抗體的處理(即，測定與酶偶聯的抗體的本底結合)。TGase水平由每個處理的讀數減去本底值，並且測定暴露於兩種抗體的重複實驗的平均值±標準誤差。
對於實施例3，採用下面的步驟將角質細胞(用如同上述的方法培養)置於96孔平板中，密度為每孔200μl細胞培養培養基中有3000個細胞。培養了四日以後，將培養基換為含有受試化合物的培養基(每測試用六個重複實驗)。將細胞進一步培養72小時，然後吸出培養基，並將平板儲存於-70℃。將平板從冷藏箱取出以後，透過冷凍後解凍進一步將細胞冷凍破碎，然後用PBS洗滌細胞三次。用PBS/5％BSA緩衝液在室溫(R/T)溫育細胞達一小時。將細胞以100∶1的比率與由BiomedicalTechnologies Inc.得到的、用TBS/1％BSA緩衝液以1∶2000比率稀釋的單克隆抗-人類轉穀氨醯胺酶(IgG)鼠抗體(初級抗體)溫育，在37℃溫育二小時，然後用洗滌緩衝液(TBS/1％BSA/0.05％Tween-20)洗滌六次。然後將細胞與用洗滌緩衝液以1∶4000比率稀釋的100μl的Fab斷片，即從Amersham得到的與過氧化物酶偶聯的抗-鼠IgG(次級抗體)一起溫育，在37℃達二小時，然後用洗滌緩衝液洗滌三次和用PBS洗滌三次。將細胞與底物溶液(4mg鄰-苯二胺和在10ml的0.1MpH5.0檸檬酸緩衝液裡的3.3μl30％過氧化氫)溫育，在室溫下，黑暗中(在鋁箔下)溫育五分鐘。加入50μl 4N硫酸以中止反應。於492nm在平板讀數器中測讀試樣的吸光度。在六個重複實驗中，四個接受兩種抗體的處理，兩個只接受次級抗體的處理(即，測定與酶偶聯的抗體的本底結合)。轉穀氨醯胺酶Ⅰ(TGaseⅠ)水平由每個處理的讀數減去本底值，並且測定暴露於兩種抗體的重複實驗的平均值±標準誤差。DNA檢測細胞處理後測得的轉穀氨醯胺酶Ⅰ(TGaseⅠ)水平可受細胞數目的影響，即，細胞數目越大，測得的轉穀氨醯胺酶Ⅰ(TGaseⅠ)水平越高。將轉穀氨醯胺酶Ⅰ(TGaseⅠ)水平歸一化為在同一孔內細胞的脫氧核糖核酸含量，從而消除細胞數目差異引起的變化。脫氧核糖核酸的量是一個特別有用的細胞數目(包括角質細胞數目)的指標，因為每個細胞實際上有相同的基因組，因此有相同的脫氧核糖核酸量。一個孔內細胞的總脫氧核糖核酸含量是與那個孔內的細胞數目成正比的。脫氧核糖核酸的量可用於將轉穀氨醯胺酶數據歸一化為細胞數目。
將角質細胞培養在96孔平板中，密度為每孔200μl細胞培養培養基中有3000個細胞。培養了四日以後，將培養基換為含有受試化合物的培養基(每測試用六個重複實驗)。將細胞進一步培養72小時，然後吸出培養基並將平板於-70℃至少儲存1.5小時。將平板從冷藏箱取出，並且將細胞解凍30分鐘。加入100μl/孔的Hoechst染料(最終濃度1μg/ml)，並溫育15分鐘，蓋上蓋後用螢光計讀數(ex.360nm,em.460nm)。去掉染料溶液。用PBS洗孔，以準備TGase檢測。實施例1視黃酸在改變角質細胞分化狀態方面比視黃醇更有效檢測加入了視黃酸(RA)和加入了視黃醇(ROH)歸一化為細胞DNA含量的轉穀氨醯胺酶水平的作用，結果在表1中顯示。
表1

n=3
所有受測試的視黃酸濃度，即，2.5×10-7M,2.5×10-8M和2.5×10-9M與乙醇對照實驗比較，都使角質細胞分化下降，並且與對應的2.5×10-7M,2.5×10-8M和2.5×10-9M視黃醇處理後的相比，角質細胞分化下降得更為顯著。轉穀氨醯胺酶水平的下降依賴於視黃酸和視黃醇兩者的劑量。這和視黃酸具有比視黃醇更高的抑制表皮分化的作用是一致的。實施例2視黃醇的體外微粒體酯化反應按下述文獻所述獲得微粒體JC.Saari和D.L.Bredberg，「視黃醛色素表皮細胞中輔酶A和非輔酶A依賴型視黃醇酯化反應」，生物化學雜誌，263,8084-90(1988)。
將含有0.1M磷酸鈉pH7緩衝液、5mM二硫蘇糖醇、2mg/ml牛血清白蛋白、40微摩爾棕櫚醯輔酶A、40微摩爾二月桂醯磷脂醯膽鹼、10微摩爾視黃醇和受試化合物的溶液或空白溶劑，與分離自牛視黃醛色素表皮細胞的微粒體級分，在37℃下溫育1小時。溫育後，加入等體積的乙醇中止反應，用己烷抽提出形成的視黃酯(來自LRAT催化反應的月桂酸視黃酯和來自ARAT催化反應的棕櫚酸視黃酯)。除去己烷層，在氮氣下蒸發，用HPLC(3.9×300mmC18反相柱，四氫呋喃流動相中含80％甲醇)分析殘餘物，用螢光檢測(325nm激發，480nm發射)量化視黃酯。以空白溶劑中形成的酯的量作為100％，用於計算受試化合物對酯形成的抑制百分數。將一份微粒體煮沸5分鐘失活，作為對照，它可產生對酯形成的至少95％的抑制作用。
所得結果如表2A和2B所示。
表2A中的化合物在100μM的濃度下測定。表2B中的化合物在10μM的濃度下測定。
未包括在本發明範圍內的式C化合物也被測試。
式C


由表2A和2B的結果可以看出，N-取代的脂肪醯胺，其中R2具有7個以上的碳原子(即式A和B)，是LRAT和ARAT催化的視黃醇酯化反應的強力抑制劑。實施例3檢測了表3所列各化合物和組合對角質細胞分化的作用。結果以對照的百分數表示。轉穀氨醯胺酶水平被規一化為DNA。
表3視黃醇和式A醯胺對角質細胞TGase/DNA的作用

n=3
2.5×10-7M視黃酸在抑制角質細胞TgaseⅠ水平方面是非常有效的(達對照水平的69％)。當單獨使用時，2.5×10-7M視黃醇和10-4式A化合物在抑制角質細胞TgaseⅠ水平方面不如視黃酸有效。然而，2.5×10-7M視黃醇+10-4式A化合物抑制角質細胞TgaseⅠ水平達對照水平的58％。此實施例也在微粒體檢測和細胞培養數據之間建立了良好的關聯。
實施例4-9例示了本發明局部組合物。這些組合物可用常規的方法加工。它們適於化妝用。具體地說，這些組合物適用於皮膚皺紋、粗糙、乾燥、脫皮、老化和/或紫外傷害，以改進皮膚的外觀和感覺；也可適用於健康的皮膚以防止或延緩傷害。
實施例4本實施例例示摻入了本發明組合物的高內相油包水乳液。

*Brij92是聚氧乙烯(2)油醚實施例55本實施例例示摻入了本發明組合物的水包油霜劑。

*Brij56是十六烷醇POE(10)Alfol16RD是十六烷醇實施例6本實施例例示摻入了本發明組合物的乙醇洗液。

實施例7本實施例例示摻入了本發明組合物的另一種乙醇洗液。

實施例8本實施例例示摻入了本發明組合物的防曬霜

實施例9本實施例例示摻入了本發明結合物的非水性的皮膚護理組合物。

1一種二甲基矽氧烷聚合物，分子量至少為50,000,25℃下粘度至少為10,000釐司，可從GEC獲得。2二甲基矽氧烷環化五聚物，可從Dow Corming公司獲得。3二甲基矽氧烷四聚物，可從Dow Corning公司獲得。
實施例中的受試化合物可以從以下來源得到化合物 來源視黃醇 Sigma棕櫚酸視黃酯Sigma視黃酸 SigmaN-取代的脂肪醯胺Utrecht大學，荷蘭
權利要求
1.一種皮膚調理組合物，它含有(a)0.001％-10％的選自視黃醇、視黃酯及其混合物的化合物；(b)0.0001％-50％的下式N-取代的脂肪醯胺
其中R1=具有1至10個碳原子的烷基或烷氧基；R2=具有8至25個碳原子的烷基或鏈烯基；R3=含有1至5個碳原子的烷基，或磷酸酯；以及(c)美容用賦形劑。
2．權利要求1的組合物，其中N-取代的脂肪醯胺在100μM濃度下抑制至少20％的LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化反應，所述抑制是用體外微粒體檢測法測定的。
3．權利要求2的組合物，其中N-取代的脂肪醯胺在100μM濃度下抑制至少40％的LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化反應，所述抑制是用體外微粒體檢測法測定的。
4．權利要求1-3中任一權項的組合物，其中視黃酯選自棕櫚酸視黃酯、乙酸視黃酯、丙酸視黃酯及其混合物。
5．權利要求1-3中任一權項的組合物，其中視黃酯是亞油酸視黃酯。
6．權利要求1-3中任一權項的組合物，其中化合物(a)是視黃醇。
7．一種調理皮膚的美容方法，該方法包括向皮膚局部施用權利要求1-6中任一權項的組合物。
8．一種模擬視黃酸對皮膚作用的美容方法，該方法包括向皮膚施用權利要求1-6中任一權項的組合物。
全文摘要
特定結構的N－取代的脂肪醯胺充分地抑制LRAT或ARAT催化的視黃醇轉化為無活性的視黃酯的酯化反應，因此對角質細胞具有同視黃酸相同的抑制作用。視黃醇或視黃酯與這些N－取代的脂肪醯胺結合後的作用與用視黃酸處理後的作用類似。
文檔編號A61K8/42GK1237898SQ97199921
公開日1999年12月8日 申請日期1997年9月18日 優先權日1996年9月27日
發明者S·P·格蘭格, A·V·羅林斯, I·R·斯科特 申請人:尤尼利弗公司