一種檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺的試劑盒及方法
2023-05-19 01:27:01 1
專利名稱：一種檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺的試劑盒及方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測β -內醯胺類和三聚氰胺的試劑盒及方法。
背景技術：
β_內醯胺類藥物是醫學和獸醫學上的一類重要的抗菌藥物，應用十分廣泛。但由於過敏反應及細菌產生的耐藥性等原因，許多國家都對該類藥物在動物上的使用及在動物源性食品中的殘留進行了嚴格控制。美國食品和藥品監督管理局(FDA)的調查表明:不注意休藥期、用藥不合理或是使用違禁藥物，是導致動物性食品中抗生素殘留的主要原因。長期攝入含抗生素的食品，可造成藥物積累，當達到一定濃度後，就會對人體的健康帶來一系列負面影響，如產生過敏反應、破壞胃腸道菌群平衡和增強細菌耐藥性等。更為重要的是，抗生素被過量食入健康人腸道，會破壞健康人的正常菌群環境，導致人體免疫力的降低，從而危害消費者的身體健康，同時也影響牛奶及乳製品的出口貿易。我國的原料乳中β_內醯胺類抗生素殘留嚴重，對其開展監控檢測是我國乳品業發展中極為關注的問題。歐盟、美國等多個國家都制定了牛奶、肌肉和腎臟等動物源性食品中該類藥物的最高殘留限量(MRL)，我國農業部235號文件公告對其MRL也做了嚴格規定，該類藥物在牛奶中的MRL為4 100 μ g/L，在肌肉、肝臟和腎臟中的MRL為50 ΙΟΟΟμ g/kg。三聚氰胺(melamine)，簡稱三胺，是一種三嗪類含氮雜環有機化合物。食品工業中常需要測定食品中的蛋白質含量。由於直接測量蛋白質技術比較複雜，所以常用凱氏定氮法間接確定食品中蛋白質的含量。由於三聚氰胺與蛋白質相比含有更高比例的氮原子，所以三聚氰胺非法添加劑常被一些不法商販用作食品添加劑，以提升食品檢測中的蛋白質含量指標。2008年8月以來，中國一些醫院陸續檢查到部分嬰兒患有膽結石，而這些患有膽結石的嬰兒均喝了含有三聚氰胺的奶粉，這是影響全國的「三鹿奶粉」事件。在之後的調查中發現，有些不法商人為獲取更高的利潤，直接在原料奶中添加三聚氰胺。隨後在全國奶粉和液態奶的檢測中，發現市場上很大部分產品中均含有三聚氰胺，導致了乳品行業的誠信危機，也給人們的日常生活造成了巨大的負面影響。我國衛生部等五部門聯合發布公告，規定了我國嬰兒配方食品中三聚氰胺限量值為lmg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值為 2.5mg/kg。乳製品中的抗生素和三聚氰胺添加劑的殘留目前已經成為消費者所迫切關注的焦點問題，為使牛奶中抗生素和三聚氰胺添加劑殘留問題得到有效監控，符合最大殘留限量標準，奶牛場、乳製品廠、政府監督部門、出入境檢測、大型食品流通領域等都在努力尋求準確可行的檢測方法，許多大型化學試劑和儀器公司也致力於開發β_內醯胺類和三聚氰胺殘留檢測的方法和儀器。目前，牛奶及生鮮奶中內醯胺類和三聚氰胺殘留的檢測方法依據不同的檢測原理，大體可分為三大類:微生物受阻檢測、儀器檢測法、免疫學分析法。微生物受阻檢測方法,主要有抑菌圈試驗、渾濁度試驗、變色型檢測金標試劑盒方法,微生物檢測方法檢測成本價低，但是靈敏度低、耗時長、耐藥菌的存在容易導致誤檢；儀器檢測方法，是目前檢測β -內醯胺類抗生素和三聚氰胺的主要方法，有高效液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、氣相色譜法、氣相色譜-串聯質譜法等，儀器檢測方法精確度高，但其存在檢測成本高，檢測設備複雜，對檢測人員的要求較高，檢測耗時長等缺點，目前常用的免疫學分析法，主要為酶聯免疫檢測法和放射免疫分析法，兩種方法的前處理過程較為複雜，對於現場大規模篩查樣品還存在著一定局限性。中國發明專利200810162588.5 (CN101429241A)中公開了「青黴素與載體蛋白偶聯產物和β-內醯胺類青黴素抗體製備的方法及用途」，該方法中的青黴素單克隆抗體製備的酶聯免疫試劑盒僅能檢測青黴素G、氨苄青黴素、羧苄青黴素三種β-內醯胺類抗生素，檢測藥物種類少，製備的膠體金試紙條檢測靈敏度低。目前免疫分析領域缺乏能夠同時檢測內醯胺類抗生素和三聚氰胺的技術及其應用。因此，在實踐中有必要建立一種檢測藥物種類多、敏感度高、操作簡單、成本低、適合大規模推廣的檢測方法。
發明內容
本發明的一個目的是提供一種能夠同時檢測β_內醯胺類抗生素和三聚氰胺的試劑盒。本發明所提供的試劑盒包括微孔條、微孔試劑、微孔塞和試紙條，試紙條包括底板、樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜，其依次連接；所述微孔試劑為凍幹的頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物；頭孢類藥物特異性抗體可為頭孢類藥物單克隆抗體或頭孢類藥物多克隆抗體，三聚氰胺特異性抗體可為三聚氰胺單克隆抗體或三聚氰胺多克隆抗體；反應膜上包被有兩條檢測線和一條質控線；當頭孢類特異性抗體為頭孢類藥物單克隆抗體時，微孔試劑中包含頭孢類單克隆抗體-膠體金標記物，β_內醯胺類藥物檢測線包被有頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物，質控線包被羊抗鼠抗抗體；當頭孢類藥物特異性抗體為頭孢類藥物多克隆抗體時，微孔試劑中包含頭孢類多克隆抗體-膠體金標記物，β_內醯胺類藥物檢測線包被頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物，質控線包被羊抗兔抗抗體；當三聚氰胺特異性抗體為三聚氰胺單克隆抗體時，微孔試劑中包含三聚氰胺單克隆抗體-膠體金標記物，三聚氰胺檢測線包被有三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物，質控線包被羊抗鼠抗抗體；當三聚氰胺特異性抗體為三聚氰胺多克隆抗體時，微孔試劑中包含三聚氰胺多克隆抗體-膠體金標記物，三聚氰胺檢測線包被三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物，質控線包被羊抗兔抗抗體；三聚氰胺半抗原是通過三聚氰酸二醯胺與琥珀酸酐反應，得到的三聚氰酸二醯胺的半琥珀酸酯半抗原。所述保護膜粘貼在樣品吸收墊上的檢測端，上面有MAX標記線。所述的三聚氰胺檢測線靠近樣品吸收墊一端，質控線靠近吸水墊一端，β -內醯胺類藥物檢測線在三聚氰胺檢測線和質控線之間。其中三聚氰胺檢測線用檢測線(T)表示，β-內醯胺類藥物檢測線用檢測線(B)表示，質控線用質控線(C)表示。以試紙條的樣品吸收墊一端為始端，以試紙條的吸水墊一端為末端，質控線(C)距離反應膜與吸水墊始端相連的一端為5-8mm，檢測線⑶距離質控線(C)4_6mm，檢測線⑴距離檢測線(B)4_6mm。所述頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物是由頭孢類藥物與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。所述三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物是由三聚氰胺半抗原與載體蛋白偶聯得至IJ，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。所述頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物中的頭孢類藥物特異性抗體是以頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物作為免疫原製備獲得。所述頭三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物中的三聚氰胺特異性抗體是以三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原製備獲得。所述底板可為PVC底板或其他硬質不吸水的材料；樣品吸收墊可為吸濾紙或濾油紙；吸水墊為吸水紙；反應膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜；吸水墊為吸水紙；保護膜為PE材質保護膜。本發明的另一個目的是提供了一種製備上述試劑盒的方法，其包括步驟:I)在微孔條上製備凍幹有頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑，並用微孔塞該蓋在微孔條上；2)製備兩條分別具有包被頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物和三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線和一條包被抗抗體的質控線的反應膜；3)將2)製備好的反應膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板組裝成試紙條；4)將I)和3)製備好的凍幹有頭孢類藥物單克隆抗體-膠體金標記物和三聚氰胺單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑、試紙條、微孔條以及微孔塞組裝成試劑盒。具體的說，步驟包括:1、β -內醯胺類藥物抗原的合成及其抗體的製備I)將頭孢類藥物與載體蛋白偶聯，形成頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物；2)用頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞通過融合、篩選，得到分泌頭孢類藥物單克隆抗體的雜交瘤細胞株或用頭孢類藥物-載體蛋白免疫兔，得到頭孢類藥物多克隆抗體；3)提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗體或羊抗兔抗抗體；2、三聚氰胺抗原合成及其抗體製備I)取0.64g三聚氰酸二醯胺和1.0g琥珀酸酐，再加入IOml吡啶，於室溫下攪拌12_24h,時間優選為24h,除去溶劑後在乙醇-水中重結晶得到白色粉末狀晶體，得到二聚氰酸二醯胺的半琥珀酸酯，即為三聚氰胺半抗原；2)將三聚氰胺半抗原與載體蛋白偶聯，形成三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物；3)用三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物免疫小鼠，將小鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞通過融合、篩選，得到分泌三聚氰胺單克隆抗體的雜交瘤細胞株或用三聚氰胺半抗原-載體蛋白免疫兔，得到三聚氰胺多克隆抗體；4)提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗體或羊抗兔抗抗體；3、用檸檬酸三鈉與氯金酸反應製備膠體金；4、將製備的頭孢類藥物特異性抗體和三聚氰胺特異性抗體分別加入到製備的膠體金中，得到頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑；5、將頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑凍幹在微孔條中後，將微孔條上蓋上微孔塞；6、將樣品吸收墊用含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在緩衝液中的終濃度為0.5%(體積百分含量))、PH為7.2,0.lmol/L磷酸鹽緩衝液浸泡2h，在37°C下烘乾2h。7、在底板上按順序貼上樣品吸收墊、反應膜、吸水墊和保護膜；8、將製備好的微孔試劑、試紙條、微孔條和微孔塞組裝成試劑盒，2_8°C條件下保存12個月。本發明的另一個目的提供了一種牛奶樣本中同時檢測內醯胺類抗生素和三聚氰胺殘留的方法。用本發明上述任一所述試劑盒進行檢測，可同時檢測β -內醯胺類藥物，包括:青黴素G、萘夫西林、氨苄青黴素、頭孢哌酮、阿莫西林、頭孢曲松、苯唑青黴素、頭孢噻呋、鄰青黴素、頭孢洛寧、雙青黴素、頭孢喹肟以及三聚氰胺。本發明試劑盒的檢測原理:將待檢牛奶樣本滴加於包含有微孔試劑的微孔條中，混勻後，孵育5min，將標有MAX標記線端向下，插入包含有孵育後的微孔試劑的微孔條中，待檢樣品液與微孔中的金標抗體結合後一起向反應膜擴散；若待檢樣品液中β-內醯胺類抗生素或(和)三聚氰胺的含量高，則擴散過程中待測樣品液中的β_內醯胺類抗生素或(和)三聚氰胺可與金標抗體相結合，進而完全封閉金標抗體上內醯胺類抗生素或(和)三聚氰胺的抗原結合點，阻止金標抗體與反應膜上頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物結合或(和)反應膜上的三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物的結合，相對應的β_內醯胺類抗生素檢測線或(和)三聚氰胺檢測線不能顯色，而抗抗體則可與頭孢類金標抗體或三聚氰胺金標抗體結合，質控線顯色；若待檢樣品液中β_內醯胺類抗生素或(和)三聚氰胺的含量低或者無，則對應的頭孢類金標抗體或(和)三聚氰胺金標抗體上的抗原結合位點不能被封閉，進而頭孢類金標抗體會與反應膜上頭孢類藥物-載體蛋白偶聯抗原結合或三聚氰胺金標抗體會與反應膜上頭孢類藥物-載體蛋白偶聯抗原結合，對應的β_內醯胺類藥物檢測線顯色或三聚氰胺檢測線顯色，同時抗抗體也可與頭孢類金標抗體或三聚氰胺金標抗體結合，質控線顯色；如果質控線不顯色，則試紙條失效。陰性:質控線(C)和檢測線⑶和檢測線⑴都顯示出紅色條帶，判為陰性，用表示。其中檢測線⑶表示β-內醯胺類藥物檢測線，檢測線(T)表示三聚氰胺檢測線。內醯胺類藥物呈陽性:質控線(C)和檢測線(T)顯示出紅色條帶，而檢測線(B)不顯色，判為陽性，用「 + 」表示。三聚氰胺呈陽性:質控線(C)和檢測線(B)顯示出紅色條帶，而檢測線(T)不顯色，判為陽性，用「 + 」表示。β -內醯胺類和三聚氰胺均呈陽性:質控線(C)顯示出紅色條帶，檢測線(T)和檢測線(B)均不顯色，判為陽性，用「 + 」表示。無效:當質控線(C)不顯示紅色條帶，則無論檢測線(T)和檢測線(B)是否出現紅色條帶，試紙條均失效。本發明的試劑盒具有敏感度高、檢測藥物種類多、成本低、操作簡單、便於攜帶、檢測時間短、適合各種單位使用、儲存簡單、保質期長的優點。其中，採用高特異性的頭孢類藥物單克隆抗體和三聚氰胺單克隆抗體，保證了檢測結果的可靠性；將金標抗體凍幹在微孔條中，在檢測過程中，能夠使金標抗體與待檢樣品液充分接觸，充分反應，從而減少誤差，增加整個體系的反應靈敏度。本發明試劑盒能夠同時檢測β_內醯胺類抗生素和三聚氰胺非法添加劑，實現了一個試紙條條對多種藥物的檢測，滿足了市場上對內醯胺類抗生素和三聚氰胺同時檢測的需求。用本發明試劑盒檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺的方法，簡便、快速、直觀、準確，適用範圍廣，成本低，易推廣使用。
圖1凍幹有金標抗體的微孔條圖。圖2微孔塞俯視圖。圖3微孔塞剖面結構示意圖。圖4試紙條剖面結構示意圖。圖5試紙條的俯視圖。圖6三聚氰胺半抗原合成路線圖。圖7試紙條檢測方法示意圖。圖8試紙條檢測結果判定圖。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。實施例1、檢測β -內醯胺類抗生素和三聚氰胺的試劑盒的構成一、凍幹有金標抗體的微孔條所述微孔試劑裝於微孔條之中，其中I為微孔條，2為凍幹的頭孢類藥物單克隆抗體-膠體金標記物和三聚氰胺單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑；所述包含有微孔試劑的微孔條上具有微孔塞3(圖2和圖3)；所述微孔條中凍幹的頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑，兩種藥物金標抗體包被量均為0.20-0.25 μ g/ml ；二、試紙條(圖4和圖5)所述試紙條是由底板、樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜組成；所述樣品吸收墊4、反應膜5、吸水墊6和保護膜7依次按順序黏貼在所述底板8上，樣品吸收墊的末端與反應膜相連，反應膜的末端與吸水墊相連，樣品吸收墊的始端與底板的始端對齊，吸水墊的末端與底板的末端對齊；保護膜7覆蓋在樣品吸收墊上的檢測端，在檢測端保護膜上應有MAX字樣。所述反應膜上有兩條檢測線分別為檢測線(T)9-1和檢測線(B)9-2以及一條質控線(C) 10，兩條檢測線和一條質控線均為與所述試紙條的長相垂直的條帶狀，兩條檢測線位於近於有MAX標記線的保護膜的一側，質控線位於遠離所述有MAX標記的保護膜的一側。以試紙條的樣品吸收墊一端為始端，以試紙條的吸水墊一端為末端，質控線(C)距離反應膜與吸水墊始端相連的一端為5-8mm,檢測線⑶距離質控線(C)4_6mm,檢測線⑴距離檢測線(B)4-6mm。檢測線(T)包被有三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物(三聚氰胺-卵清白蛋白)，檢測線(B)包被有頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物(頭孢類藥物-卵清白蛋白的偶聯物)，質控線(C)包被有羊抗鼠抗抗體。底板為PVC底板；樣品吸收墊為吸濾紙；吸水墊為吸水紙；反應膜為硝酸纖維素膜；所述保護膜為PE材質保護膜。將上述試紙條與微孔試劑、微孔條以及微孔塞組裝成試劑盒，在2 8°C的環境中儲存，有效期12個月。實施例2、實施例1中所述試劑盒的製備方法一、試劑盒的製備該試劑盒的製備方法主要包括如下步驟:I)在微孔條上製備凍幹有頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑，並用微孔塞該蓋在微孔條上；2)製備具有包被頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物的檢測線(B)、包被三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線(T)和包被羊抗鼠抗抗體的質控線(C)的反應膜；3)將2)製備好的反應膜與樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板組裝成試紙條；4)將I)和3)製備好的凍幹有頭孢類藥物單克隆抗體-膠體金標記物和三聚氰胺單克隆抗體-膠體金標記物的微孔試劑、試紙條、微孔條以及微孔塞組裝成試劑盒。下面分步詳細敘述:(一 )各部件的製備1、抗原的製備I)、頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物的合成與鑑定頭孢類藥物是小分子物質，只有免疫反應性，沒有免疫原性，不能誘發機體產生免疫應答，必須與大分子載體蛋白偶聯後才具有免疫原性。a.免疫原的製備-頭孢類藥物與卵清白蛋白(OVA)偶聯物合成取頭孢菌素C16mg加入Iml 二甲基甲醯胺(DMF)溶解得到溶液I，取30.5mg的EDC用0.5ml的水完全溶解後，在攪拌條件下加入到溶液I中，室溫反應24h得到溶液II ；取40mg牛血清白蛋白(BSA)與5ml 0.01mmol/L pH7.4的磷酸鹽緩衝液(PBS)混合，振蕩溶解，得到溶液III ;在磁力攪拌下，將溶液II逐滴加入到溶液III中，密封，室溫下攪拌反應6h得到反應液IV即為β-內醯胺類藥物免疫原；將反應液IV裝入透析袋中，4°C透析三天，分裝，於_20°C保存備用。b.包被原的製備-頭孢類藥物與牛血清白蛋白偶聯物合成取頭孢菌素C12mg加入Iml 二甲基甲醯胺(DMF)溶解得到溶液I，取24mg的EDC用0.5ml的水完全溶解後，在攪拌條件下加入到溶液I中，室溫反應24h得到溶液II ;取40mg卵清白蛋白(OVA)與5ml 0.01mmol/L pH7.4的磷酸鹽緩衝液(PBS)混合，振蕩溶解，得到溶液III ;在磁力攪拌下，將溶液II逐滴加入到溶液III中，密封，室溫下攪拌反應6h得到反應液IV即為內醯胺類藥物包被原；將反應液IV裝入透析袋中，4°C透析三天，分裝，於-20°C保存備用。c.頭孢類藥物-載體偶聯物的鑑定將載體蛋白、頭孢類藥物、頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物用PH7.4的PBS配成0.5mg/ml的溶液，以0.01mol/L pH7.4PBS調零，用紫外分光光度計在波長200_800nm範圍內掃描，得到載體蛋白、頭孢類藥物、頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物的吸收曲線。三者出現不同的吸收曲線，表明頭孢類藥物與載體蛋白偶聯成功。2)、三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物的合成與鑑定a.三聚氰胺半抗原合成(圖6)取0.64g三聚氰酸二醯胺和1.0g琥珀酸酐，加入IOml吡啶，室溫下攪拌24h，除去溶劑後在乙醇-水中重結晶得到白色粉末狀晶體，為三聚氰酸胺的半琥珀酸酯，即為三聚氰胺半抗原，分子結構如式I所示:
權利要求
1.一種檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺的試劑盒，其特徵在於包括試紙條、微孔條、微孔試劑和微孔塞，所述試紙條包括反應膜、樣品吸收墊、吸水墊、保護膜、底板，所述反應膜上有兩條檢測線和一條質控線，兩條檢測線分別包被有頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物和三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物，質控線包被有抗抗體，所述微孔試劑為凍幹的頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述試紙條由樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜依次黏貼在底板上組成，所述微孔條上具有微孔塞。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特徵在於:所述保護膜粘貼在試紙條的樣品吸收墊上，為檢測端，上面有MAX標記線。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於所述的三聚氰胺檢測線靠近樣品吸收墊一端，質控線靠近吸水墊一端，β_內醯胺類藥物檢測線在三聚氰胺檢測線和質控線之間。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於:所述微孔條底部含有凍幹的頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑。
6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於:所述微孔塞能夠緊密地塞在微孔條中。
7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於:所述頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物由頭孢類藥物與載體蛋白偶聯得到，所述三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物由三聚氰胺半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清白蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。
8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特徵在於:三聚氰胺半抗原是通過三聚氰酸二醯胺和琥珀酸酐反應，得到的三聚氰酸二醯胺的半琥珀酸酯的半抗原。分子結構如式I所示:
9.根據權利要求1或8所述的試劑盒，其特徵在於:頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物中的頭孢類藥物特異性抗體是以頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物作為免疫原製備獲得，所述頭孢類藥物特異性抗體可為頭孢類藥物單克隆抗體或頭孢類藥物多克隆抗體；三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物中的三聚氰胺特異性抗體是以式I化合物與載體蛋白偶聯得到的三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原製備獲得，所述三聚氰胺特異性抗體可為二聚氰!胺單克隆抗體或二聚氰!胺多克隆抗體。
10.一種製備權利要求1-9任一項所述的試劑盒方法，其包括步驟: 1)分別製備凍幹有頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑； 2)分別製備具有包被頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物和包被有三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物的檢測線和包被抗抗體的質控線的反應膜； 3)將2)製備好的反應膜與樣品吸收墊、保護膜、吸水墊、底板組裝成試紙條； 4)將I)和3)製備好的凍幹有頭孢類藥物特異性抗體-膠體金標記物和三聚氰胺特異性抗體-膠體金標記物的微孔試劑、微孔條、微孔塞和試紙條組裝成試劑盒。
11.一種牛奶樣本中能夠同時檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺殘留的方法,其包括步驟: 1)用權利要求1-9任一項所述的試劑盒進行檢測； 2)分析檢 測結果。
全文摘要
本發明公開了一種檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺的試劑盒及方法。試劑盒包括微孔條、微孔試劑、試紙條和微孔塞，所述的微孔試劑為凍幹的膠體金標記的頭孢類和三聚氰胺特異性抗體，所述頭孢類藥物特異性抗體可為頭孢類藥物單克隆抗體或頭孢類藥物多克隆抗體；所述三聚氰胺特異性抗體可分為三聚氰胺單克隆抗體或三聚氰胺多克隆抗體；所述試紙條由樣品吸收墊、反應膜、吸水墊、保護膜、底板，依次連接組成，所述反應膜上包括兩條檢測線和一條質控線，兩條檢測線分別包被有頭孢類藥物-載體蛋白偶聯物和三聚氰胺半抗原-載體蛋白偶聯物，質控線包被有抗抗體。用本發明試劑盒檢測β-內醯胺類抗生素和三聚氰胺的方法，簡便、快速、直觀、準確、便於攜帶、適用範圍廣、成本低、易推廣使用。
文檔編號G01N33/577GK103105494SQ20111035676
公開日2013年5月15日 申請日期2011年11月11日 優先權日2011年11月11日
發明者何方洋, 萬宇平, 吳鵬, 羅曉琴, 郭旭, 崔海峰, 馮靜, 段盈盈, 崔彥虎, 聶雯瑩 申請人:北京勤邦生物技術有限公司