二苯並萘啶酮類化合物及其製備方法和應用與流程

2023-05-19 10:44:56

本發明涉及抗腫瘤化合物的研究領域，更具體的涉及二苯並萘啶酮類化合物，及其製備方法和在製備抗腫瘤藥物方面的應用。

背景技術：

二苯並萘啶酮類化合物是一類非常重要的拓撲異構酶I的毒化劑，具有很強的抗腫瘤活性，具有很好的靶向拓撲異構酶I的抗腫瘤新藥研發前景，最早報導這類化合物的合成及抗腫瘤活性的的美國新澤西州立大學的Lavoie,Edmond J.課題組,他們自2002年就開始報導這類化合物的合成及抗腫瘤活性研究，相關研究成果已經發表了許多論文，並申請了許多專利(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2002),12(22),3333-3336；Bioorganic&Medicinal Chemistry(2003),11(9),2061-2073；Journal of Medicinal Chemistry(2003),46(11),2254-2257；Bioorganic&Medicinal Chemistry(2004),12(13),3731-3742；Journal of Medicinal Chemistry(2005),48(3),792-804；Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters(2008),18(12),3570-3572；Bioorganic&Medicinal Chemistry(2008),16(20),9295-9301；European Journal of Medicinal Chemistry(2009),44(4),1471-1476；European Journal of Medicinal Chemistry(2009),44(9),3433-3438.WO 2003041653；WO 2003041660；WO 2004014906；WO 2004014918；WO 2010088544；WO 2010127360；WO 2010127363；WO 2012015875；WO 2012015901)。

現有的二苯並萘啶酮類化合物的合成路線(Scheme 1)為：

2013年，法國Desbois,Nicolas課題組又報導了這類化合物與鉑離子的配合物的製備及其抗腫瘤活性(European Journal of Medicinal Chemistry(2013),69,719-727)。

雖然目前為止已經有以上文獻這類化合物的合成及抗腫瘤活性研究報導，但他們採用的合成路線都是是從中間體2開始(Scheme 1)，中間體2的合成一般以芳醛為原料，經硝化、醛基與甲基格氏試劑的反應、醇的氧化、硝基的還原、鄰氨基芳乙酮跟甲酸酯環化成喹啉酮及喹啉酮與三氯氧磷的作用等5-6步反應，步驟非常繁瑣。另外其合成所需要的另一個原料鄰碘(溴)芳甲酸4也不太容易得到，限制了產物的取代基R1,R2及R3多樣化。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種具有抗腫瘤功效的二苯並萘啶酮類化合物，及其製備方法和應用。

為實現上述目的，本發明的技術方案為：

具有通式(I)的二苯並萘啶酮類化合物：

其中，其中，R1a獨立地選自-H、-CH3O，R1b為-CH3O；

當R2a為-Cl時，R2b和R2c均為-H；當R2b為-Cl時，R2a和R2c均為-H；當R2c獨立地選自-F、-Cl、-Br、-CH3、-CH3O、-CF3時，R2a和R2b為-H；

R3為(CH2)2N(CH3)2或(CH2)3N(CH3)2。

製備具有通式(I)的二苯並萘啶酮類化合物的方法，包括以下步驟：

(1)依次加入苯乙酸、無水乙醇、環己烷以及濃硫酸，回流反應至不再有水分，除去環己烷和剩餘的乙醇，加入冰水，萃取，合併有機層，有機層乾燥，除去溶劑，經柱層析得化合物A；

(2)依次加入化合物A、二甲基甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛，在氮氣或惰性氣體保護下反應，反應溫度為70～90℃，反應完成後除去二甲基甲醯胺和剩餘的N，N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛，得到化合物B的粗產物；再依次加入甲苯、對甲苯磺酸和苯胺，在氮氣或惰性氣體保護下，進行加熱回流反應，反應完成後，除去溶劑，經柱層析得化合物C；

(3)依次加入化合物C和二苯醚，在氮氣或惰性氣體保護下，進行加熱回流反應，反應完成後，冷卻，加入溶劑，攪拌均勻後抽濾，濾渣經洗滌後得到化合物D；

(4)化合物D在氮氣或惰性氣體保護下，進行氯代反應，得到化合物E；

(5)加入化合物E、乙二醇和鏈狀二胺，加熱至140～160℃反應，反應完成後獲得混合物A，將混合物A倒入水中，調節pH，攪拌均勻，萃取，合併有機層，有機層乾燥，除去溶劑，經柱層析得到化合物F；

(6)依次加入化合物F、四氫呋喃和三乙胺，攪拌均勻後，攪拌加入氯甲酸乙酯，攪拌反應至反應完成，除去溶劑，冷卻，調節pH，萃取，合併有機層，有機層乾燥，除去溶劑，經柱層析得到化合物G；

(7)依次加入二甲苯、三氯氧磷和五氧化二磷，攪拌均勻後，加入已預溶於二甲苯的化合物G，在氮氣或惰性氣體保護下，加熱回流至反應結束，除去溶劑及三氯氧磷，冷卻，調節pH＞7，萃取，合併有機層，有機層乾燥，除去溶劑，經柱層析得到通式(I)的二苯並萘啶酮類化合物。

進一步的，所述步驟(1)中，依次加入苯乙酸、無水乙醇、環己烷以及濃硫酸，回流反應至不再有水分，除去環己烷和剩餘的乙醇，加入溶劑，依次用冰水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，萃取，合併有機層，有機層乾燥，除去溶劑，經柱層析得化合物A；

進一步的，所述步驟(2)中，依次加入化合物A、二甲基甲醯胺、N，N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛，在氮氣或惰性氣體保護下反應，反應溫度為75～85℃，反應時間為5～8h，反應完成後除去二甲基甲醯胺和剩餘的N，N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛，得到化合物B的粗產物；再依次加入甲苯、對甲苯磺酸和苯胺，在氮氣或惰性氣體保護下進行加熱回流反應，反應溫度為120～130℃，反應時間為5～8h，反應完成後，除去溶劑，經柱層析得化合物C。

進一步的，所述步驟(4)中，依次加入化合物D和三氯氧磷，攪拌均勻，在氮氣或惰性氣體保護下進行加熱回流反應，反應溫度為100～120℃，反應時間為1.5～3h，反應完成後，除去三氯氧磷，然後加入冰水，並調節pH至鹼性，用有機溶劑萃取後，合併有機層，有機層用去除水分的乾燥劑乾燥，除去溶劑，經柱層析得到化合物E。

進一步的，所述步驟(5)中，加入化合物E、乙二醇和鏈狀二胺，混勻後，攪拌加熱反應，反應溫度為140～160℃，反應時間為23～26h，反應完成後獲得混合物A，將混合物A倒入水中，加入質量分數為8～12％的氫氧化鈉水溶液，攪拌均勻，萃取，合併有機層，有機層用去除水分的乾燥劑乾燥，除去溶劑，經柱層析得到化合物F。

進一步的，所述步驟(6)中，依次加入化合物F、四氫呋喃和三乙胺，攪拌均勻後，室溫下攪拌加入氯甲酸乙酯，攪拌反應0.4～1h至反應完成，除去溶劑，加入冰水和飽和碳酸氫鈉溶液，用有機溶劑萃取，合併有機層，有機層用去除水分的乾燥劑乾燥，除去溶劑，經柱層析得到化合物G。

進一步的，所述步驟(7)中，向反應容器依次加入二甲苯、三氯氧磷和五氧化二磷，攪拌均勻後，加入已預溶於二甲苯的化合物G，在氮氣或惰性氣體保護下進行加熱回流反應，反應溫度為130～160℃，反應時間為23～26h，除去溶劑及三氯氧磷，加入冰水，調節反應容器中混合物的pH＞7，用有機溶劑萃取，合併有機層，有機層用去除水分的乾燥劑乾燥，除去溶劑，經柱層析得到通式(I)的二苯並萘啶酮類化合物。

本發明進一步提供了通式(I)的二苯並萘啶酮類化合物和藥學上可接受的輔料組成的藥物組合物。

本發明進一步提供了通式(I)的二苯並萘啶酮類化合物或權利要求8所述的藥物組合物在製備抗腫瘤藥物方面的應用；藥物的劑型可為顆粒劑、膠囊劑、噴霧劑、滴劑、注射劑和衝劑等；所述的腫瘤特別是指人胃癌、人肺癌、人肝癌引發的腫瘤。

本發明合成了具有通式(I)的化合物，並提供了其製備方法，通過對人胃癌細胞(MGC-803)、人肺癌細胞(NCI-H460)、人肝癌細胞(HepG-2)、人肝癌細胞(BEL-7404)的細胞體外抑制試驗，證實通式(I)的新化合物對這四種腫瘤細胞均具有很好的抑制活性。

將通式(I)的化合物與藥學上可接受的輔料組成藥物組合物，由於該藥物組合物添加了對腫瘤細胞具有很好抑制活性的通式(I)化合物，對腫瘤細胞尤其是人胃癌細胞(MGC-803)、人肺癌細胞(NCI-H460)、人肝癌細胞(HepG-2)、人肝癌細胞(BEL-7404)的細胞具有很好地抑制活性的作用，將在抗腫瘤藥物方面具有較好的應用前景。

具體實施方式

以下結合具體實施例對本發明作進一步說明，但本發明的保護範圍不限於以下實施例。

製備實施例1：化合物H1的製備：5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

(1)在攪拌下依次向50mL圓底燒瓶中加入3,4-二甲氧基苯乙酸(1.96g，10mmol)、無水乙醇(5mL)、環己烷(5mL)以及濃硫酸(1mL)，裝上分水器和直型冷凝管後,在100℃下回流直至分水器中不再有水分出；反應完成後，減壓除去環己烷和多餘的乙醇，向燒瓶中加入乙酸乙酯(30mL)，混合物用冰水洗滌2次，每次30mL，再用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌2次，每次30mL，有機溶劑萃取3次，合併有機層，有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓除去溶劑，用矽膠柱層析(洗脫劑：V石油醚:V乙酸乙酯＝8:1)提純，得到1.85g淡黃色油狀酯化產物，即化合物A。

(2)在攪拌下依次向50mL圓底燒瓶中加入上述化合物A(0.90g，4mmol)、DMF(3mL)和DMF-DMA(1.1mL，4.4mmol)，在氮氣保護下於80℃油浴加熱反應6h，採用TLC監測反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1，反應完成後減壓除去DMF及剩餘的DMF-DMA，得到化合物B的粗產物；在攪拌下依次向上述燒瓶中加入甲苯(20mL)、對甲苯磺酸(0.05g，0.3mmol)和對氯苯胺(0.41g，3.2mmol)，在氮氣保護下於125℃油浴加熱回流6h，採用TLC監控反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1)，反應完成後，減壓除去溶劑,用矽膠柱層析分離(洗脫劑：V石油醚:V乙酸乙酯＝6:1)，得到0.90g淡黃綠色油狀化合物C，產率63％。

(3)依次向100mL圓底燒瓶中加入上述合成的化合物C(5.46g，15.1mmol)和二苯醚(20mL)，攪拌均勻後，在氮氣保護下用電熱套加熱回流2h，採用TLC監控反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝1:1；反應完成後，自然冷卻至室溫，燒瓶中析出大量固體，向燒瓶中加入石油醚(20mL)，攪拌均勻後抽濾，濾渣用混合溶劑(V石油醚:V乙酸乙酯＝1:1)(10mL)洗滌後，得到4.05g白色固體化合物D，產率85％。

(4)依次向50mL圓底燒瓶中加入上述合成的化合物D(4.05g，12.9mmol)和三氯氧磷(20mL)，攪拌均勻後，在氮氣保護下於110℃油浴加熱回流2h，採用TLC監控反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1，反應完成後，減壓除去大部分三氯氧磷，在攪拌下向燒瓶中緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液至pH＞7，然後用二氯甲烷萃取3次，每次20mL；合併有機層，有機層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌後有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓除去溶劑，用矽膠柱層析(洗脫劑：V石油醚:V乙酸乙酯＝6:1)，得到3.55g白色固體化合物E，產率83％。

(5)依次向20mL反應釜中加入上述合成的白色化合物E(0.30g，1mmol)、乙二醇(10mL)和N,N-二甲基乙二胺(0.33mL,3mmol)，混勻後封閉反應釜，置於150℃油浴攪拌加熱24h，採用TLC監控反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1，反應完成後，將反應混合物倒入水(30mL)中，然後向其中加入10％氫氧化鈉水溶液(10mL)，攪拌均勻後用二氯甲烷萃取3次，每次20mL，合併有機層，有機層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌後用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓除去溶劑，用矽膠柱層析(洗脫劑：V石油醚:V乙酸乙酯＝4:1)，得到0.30g淡黃色油狀化合物F，產率78％。

(6)依次向50mL圓底燒瓶中加入上述合成的化合物(0.80g，2.09mmol)、四氫呋喃(10mL)和三乙胺(0.87mL,6.27mmol)，攪拌均勻後，在室溫下攪拌加入氯甲酸乙酯(0.59mL，6.27mmol)，加完後在室溫下攪拌反應0.5h，採用TLC監控反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝3:1)，反應完成後，減壓除去溶劑，依次向燒瓶中加入冰水(20mL)以及飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)，攪拌均勻後用二氯甲烷萃取3次，每次15mL，合併有機層，有機層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌後有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓除去溶劑，用矽膠柱層析(洗脫劑：V石油醚:V乙酸乙酯＝4:1)，得到0.84g淡黃色油狀化合物G，產率88％。

(7)在攪拌下依次向25mL圓底燒瓶中加入二甲苯(5mL)、三氯氧磷(1mL)以及五氧化二磷(約0.20g)，在室溫下攪拌0.5h後，向燒瓶中加入預溶於10mL二甲苯的上述合成的化合物G(0.20g，0.44mmol)，攪拌均勻後，在氮氣保護下於150℃油浴加熱回流24h，採用TLC監控反應進程，展開劑為V石油醚:V乙酸乙酯＝1:1，原料依然反應不完，停止加熱，減壓除去溶劑及三氯氧磷，然後向燒瓶中加入15mL冰水，將混合物倒入100mL燒杯中，在攪拌下向燒杯中緩慢加入飽和碳酸氫鈉溶液至溶液pH＞7，然後用二氯甲烷萃取3次，每次20mL，合併有機層，有機層用飽和食鹽水洗滌2次，每次20mL，洗滌後有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓除去溶劑，粗產物經柱層析得到0.07g白色目標化合物H1,產率37％。

化合物H1：m.p.240～241℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.38(s,6H,N(CH3)2),3.09(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),4.05(s,3H,OCH3),4.12(s,3H,OCH3),4.61(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),7.66(dd,J＝8.85Hz,1.70Hz,1H,ArH),7.69(s,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.10(d,J＝8.85Hz,1H,ArH),8.68(d,J＝1.70Hz,1H,ArH),9.51(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.97,49.29,56.44,56.48,57.86,102.26,108.90,112.43,119.76,119.89,124.10,127.27,129.97,131.99,132.18,140.15,145.94,147.19,150.93,154.43,163.75；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+412.1428(C22H22ClN3O3),實驗值412.1430。

製備實施例2：化合物H2的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-1-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以鄰氯苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀目標化合物H2。

化合物H2：產率36％,m.p.222～223℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.26(s,6H,N(CH3)2),2.94(t,J＝7.10Hz,2H,CH2),4.05(s,3H,OCH3),4.11(s,3H,OCH3),4.67(t,J＝7.10Hz,2H,CH2),7.49(dd,J＝8.70Hz,7.45Hz,1H,ArH),7.69(s,1H,ArH),7.85(dd,J＝7.45Hz,0.95Hz,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.41(d,J＝8.70Hz,1H,ArH),9.65(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.89,49.47,56.38,56.43,57.77,102.16,108.87,112.63,119.91,120.13,120.50,123.78,125.55,127.08,129.52,134.52,141.26,144.89,146.09,150.91,154.42,163.89；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+412.1428(C22H22ClN3O3),實驗值412.1443。

製備實施例3:化合物H3的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-2-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以間氯苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體目標化合物H3。

化合物H3：產率14％,m.p.235～236℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.31(s,6H,N(CH3)2),2.99(t,J＝7.25Hz,2H,CH2),4.03(s,3H,OCH3),4.10(s,3H,OCH3),4.61(t,J＝7.25Hz,2H,CH2),7.52(dd,J＝9.25Hz,2.30Hz,1H,ArH),7.63(s,1H,ArH),7.84(s,1H,ArH),8.10(d,J＝2.30Hz,1H,ArH),8.45(d,J＝9.25Hz,1H,ArH),9.48(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.87,49.01,56.38,56.43,57.68,102.02,108.73,111.91,117.32,119.53,126.15,126.75,127.27,129.34,135.06,140.78,146.71,149.32,150.71,154.35,163.59；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+412.1428(C22H22ClN3O3),實驗值412.1434。

製備實施例4:化合物H4的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-fluorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對氟苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體目標化合物H4。

化合物H4：產率42％,m.p.223～224℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.35(s,6H,N(CH3)2),3.04(t,J＝7.10Hz,2H,CH2),4.05(s,3H,OCH3),4.12(s,3H,OCH3),4.64(t,J＝7.10Hz,2H,CH2),7.67(br,1H,ArH),7.70(s,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.15(dd,J＝9.15Hz,2.60Hz,1H,ArH),8.34(dd,J＝11.80Hz,2.60Hz,1H,ArH),9.51(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.91,48.79,56.43,57.79,102.25,108.85,109.40,109.61,112.33,118.87,119.07,119.61,119.68,119.90,127.31,132.85,132.92,140.39,145.14,145.86,150.85,154.35,159.18,161.14,163.74；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+396.1723(C22H22FN3O3),實驗值396.1733。

製備實施例5:化合物H5的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-brominedibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對溴苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體狀目標化合物H5。

化合物H5：產率39％,m.p.246～247℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.38(s,6H,N(CH3)2),3.08(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),4.05(s,3H,OCH3),4.12(s,3H,OCH3),4.58(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),7.67(s,1H,ArH),7.77(dd,J＝8.85Hz,1.95Hz,1H,ArH),7.88(s,1H,ArH),8.00(d,J＝8.85Hz,1H,ArH),8.86(d,J＝1.95Hz,1H,ArH),9.50(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:46.04,49.41,56.43,56.46,57.89,102.16,108.79,112.30,119.80,120.13,120.17,120.27,127.19,132.04,132.57,139.95,145.99,147.36,150.86,154.35,163.67；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+456.0923(C22H22BrN3O3),實驗值456.0933。

製備實施例6:化合物H6的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methyldibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲基苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體目標化合物H6。

化合物H6：產率18％,m.p.198～199℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.38(s,6H,N(CH3)2),2.60(s,3H,CH3),3.08(t,J＝7.23Hz,2H,CH2),4.05(s,3H,OCH3),4.12(s,3H,OCH3),4.70(t,J＝7.23Hz,2H,CH2),7.56(dd,J＝8.45Hz,1.55Hz,1H,ArH),7.70(s,1H,ArH),7.90(s,1H,ArH),8.06(d,J＝8.45Hz,1H,ArH),8.31(s,1H,ArH),9.48(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:22.08,45.87,49.13,56.40,56.45,57.84,102.16,108.77,111.98,118.94,119.59,123.89,127.73,130.20,131.32,136.13,140.47,144.81,147.31,150.55,154.29,163.96；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+392.1974(C23H25N3O3),實驗值392.1982。

製備實施例7:化合物H7的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methoxydibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體目標化合物H7。

化合物H7：產率18％,m.p.209～210℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.29(s,6H,N(CH3)2),3.05(t,J＝7.25Hz,2H,CH2),4.03(s,3H,OCH3),4.04(s,3H,OCH3),4.11(s,3H,OCH3),4.69(t,J＝7.25Hz,2H,CH2),7.37(dd,J＝9.10Hz,2.55Hz,1H,ArH),7.67(s,1H,ArH),7.75(d,J＝2.55Hz,1H,ArH),7.87(s,1H,ArH),8.05(d,J＝9.10Hz,1H,ArH),9.39(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.88,49.00,55.99,56.37,56.42,58.02,102.24,104.36,108.74,112.38,119.67,119.81,121.02,127.63,131.36,131.94,140.02,143.30,144.68,150.57,154.24,157.54,164.00；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+408.1923(C23H25N3O4),實驗值408.1929。

製備實施例8:化合物H8的製備5H-8,9-dimethoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-trifluoromethyldi-benzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對三氟甲基苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體狀目標化合物H8。

化合物H8：產率26％,m.p.227～228℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.32(s,6H,N(CH3)2),3.08(t,J＝7.05,2H,CH2),4.06(s,3H,OCH3),4.13(s,3H,OCH3),4.63(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),7.70(s,1H,ArH),7.88～7.91(m,2H,ArH),8.26(d,J＝8.70Hz,1H,ArH),9.02(s,1H,ArH),9.62(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.86,49.69,56.46,56.50,57.81,102.18,108.88,112.55,118.35,119.87,123.19,124.95,127.11,131.59,141.40,147.71,149.81,151.03,154.50,163.64；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+446.1692(C23H22F3N3O3),實驗值446.1699。

製備實施例9:化合物H9的製備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯乙酸代替3,4-二甲氧基苯乙酸，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體目標化合物H9。

化合物H9：產率38％,m.p.170～171℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.38(s,6H,N(CH3)2),3.09(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),3.98(s,3H,OCH3),4.64(t,J＝7.05Hz,2H,CH2),7.45(dd,J＝8.90Hz,2.80Hz,1H,ArH),7.66(dd,J＝8.90Hz,2.10Hz,1H,ArH),7.94(d,J＝2.80Hz,1H,ArH),8.10(d,J＝8.95Hz,1H,ArH),8.33(d,J＝8.95Hz,1H,ArH),8.88(d,J＝2.10Hz,1H,ArH),9.59(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.81,49.24,55.78,57.57,109.00,112.68,119.63,123.28,123.59,123.81,125.73,126.99,129.76,131.90,132.08,139.19,145.89,146.99,160.34,164.01；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+382.1322(C21H20ClN3O2),實驗值382.1330。

製備實施例10:化合物H10的製備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methyldibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯乙酸代替3,4-二甲氧基苯乙酸，以對甲基苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體狀目標化合物H10。

化合物H10：產率33％,m.p.209～210℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.34(s,6H,N(CH3)2),2.60(s,3H,CH3),3.05(t,J＝7.20Hz,2H,CH2),3.97(s,3H,OCH3),4.68(t,J＝7.20Hz,2H,CH2),7.42(dd,J＝8.90Hz,2.85Hz,1H,ArH),7.54(dd,J＝8.45Hz,1.55Hz,1H,ArH),7.94(d,J＝2.85Hz,1H,ArH),8.05(d,J＝8.45Hz,1H,ArH),8.31～8.33(m,2H,ArH),9.54(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:21.91,45.85,49.37,55.73,57.75,108.88,112.17,118.85,123.15,123.40,123.69,126.21,126.75,130.13,131.03,135.91,139.57,144.79,147.19,159.98,164.20；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+362.1869(C22H23N3O2),實驗值362.1878。

製備實施例11:化合物H11的製備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminoethyl)-3-methoxy dibenzo[c,h][1,6]-naphthyridin-6-one

以對甲氧基苯乙酸代替3,4-二甲氧基苯乙酸，以對甲氧基苯胺代替對氯苯胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體狀目標化合物H11。

化合物H11：產率38％,m.p.169～170℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.28(s,6H,N(CH3)2),3.04(t,J＝7.25Hz,2H,CH2),3.98(s,3H,OCH3),4.04(t,J＝7.25Hz,2H,CH2),7.38(dd,J＝9.15Hz,2.65Hz,1H,ArH),7.43(dd,J＝8.95Hz,2.70Hz,1H,ArH),7.78(d,J＝2.70Hz,1H,ArH),7.94(d,J＝2.80Hz,1H,ArH),8.07(d,J＝9.15Hz,1H,ArH),8.33(d,J＝8.95Hz,1H,ArH),9.48(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:45.94,49.25,55.88,55.99,57.98,104.28,109.05,112.81,119.89,120.96,123.43,123.54,126.31,127.00,132.02,139.31,143.44,144.68,157.58,160.21,164.45；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+378.1818(C22H23N3O3),實驗值378.1793。

製備實施例12:化合物H12的製備5H-8-methoxy-5-(2-N,N-dimethylaminopropyl)-3-chlorodibenzo[c,h][1,6]-naphthayridin-6-one

以N,N-二甲基丙二胺代替N,N-二甲基乙二胺，其他製備方法同製備實施例1，得到白色粉末狀固體目標化合物H12。

化合物H12：產率30％,m.p.211～213℃；1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:2.35(s,6H,N(CH3)2),2.42(m,2H,CH2),2.60(t,J＝7.10Hz,2H,CH2),4.06(s,3H,OCH3),4.13(s,3H,OCH3),4.51(t,J＝7.10Hz,2H,CH2),7.65(dd,J＝8.90Hz,2.15Hz,1H,ArH),7.69(s,1H,ArH),7.89(s,1H,ArH),8.09(d,J＝8.90Hz,1H,ArH),8.30(d,J＝2.15Hz,1H,ArH),9.52(s,1H,CH＝N)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ:26.87,45.36,49.14,56.46,56.49,56.81,102.19,108.83,112.40,119.70,119.73,123.58,127.14,129.85,131.87,132.11,140.10,146.00,147.11,150.92,154.39,163.64；HRMS(ESI):m/z計算值[M+H]+426.1584(C23H24ClN3O3),實驗值426.1595。

效果驗證實施例1：目標化合物的體外抗腫瘤活性研究

採用MTT[3-(4,5)-雙甲基-2-噻唑-(2,5)-苯基溴化四氮唑藍]法來測定苯並啡啶類N-雜衍生物對人胃癌細胞(MGC-803)、人肺癌細胞(NCI-H460)、人肝癌細胞(HepG-2)、人肝癌細胞(BEL-7404)的半數抑制濃度(IC50)。

(1)培養液(每升)的配製：①懸浮細胞：RPMI-1640培養粉一袋(10.4g)，新生牛血清100mL，青黴素溶液(20萬U/mL)0.5mL，鏈黴素溶液(20萬U/mL)0.5mL，加三蒸水溶解後，用5.6％的NaHCO3溶液調pH值至7.2～7.4，最後定容至1000mL，過濾滅菌；②貼壁細胞：同上，再加入NaHCO3 2.00g，HEPES 2.38g。

(2)D-Hanks緩衝液(每升)的配製：NaCl 8.00g，KCl 0.40g，Na2HPO4·12H2O 0.06g，KH2PO4 0.06g，NaHCO3 0.35g，高壓滅菌。

(3)胰蛋白酶液的配製：利用D-Hanks緩衝液配成濃度為0.5％胰蛋白酶液，過濾除菌。

(4)實驗藥液的配製：將測試樣品用少量的三蒸水溶解配成儲備液，一般按實驗最高濃度的10倍配製儲備液.根據化合物溶解性不同，可用三蒸水直接溶解，或用少量DMSO助溶，再加三蒸水溶解；DMSO在培養液中的濃度不宜過大，加藥後的每孔細胞懸液中DMSO的終濃度一般不超過0.05％-0.1％，儲備液保存於-20℃冰箱中備用。

(5)人腫瘤細胞的培養：為懸浮生長細胞，常規培養於RPMI-1640培養液內(含10％小牛血清、100U/mL鏈黴素)，置於37℃、5％CO2培養箱中培養，每隔3-4天傳代一次；傳代時將原瓶中培養液轉移至離心管中，1000rpm離心5min，棄去原培養液，加入等量新鮮培養液，吹打均勻，移取適量至新鮮培養瓶中，再補充新鮮培養液至原體積(培養液體積約為培養瓶容量的1/10)。

(6)細胞孵育：取對數生長期的腫瘤細胞，調細胞懸液濃度為1～1.5×105個mL-1；在96孔培養板中每孔加細胞懸液100μL，置37℃、5％CO2培養箱中培養24h，然後分別按設計加入藥液。

(7)加藥：將測試藥液按照最終濃度的濃度梯度分別加入到各個孔中，每個濃度設6個平行孔；實驗分為藥物試驗組(分別加入不同濃度的測試藥)、對照組(只加培養液和細胞，不加測試藥)和空白組(只加培養液，不加細胞和測試藥)；將加藥後的96孔板置於37℃，5％CO2培養箱中培養48h；陽性對照藥物的活性按照測試樣品的方法測定。

(8)存活細胞的測定：在培養了48h後的96孔板中，每孔加MTT 40μL(用D-Hanks緩衝液配成4mg/mL)；在37℃放置4h後，移去上清液；每孔加150μLDMSO，振蕩5min，使formazan結晶溶解；最後，利用自動酶標儀在490nm波長處檢測各孔的光密度(OD值)。

抑制率的計算：細胞生長的抑制率按照下列公式計算：

生長抑制率＝(1-存活率)×100％＝[1-(OD實驗-OD空白)/(OD對照-OD空白)]×100％(OD實驗表示測試藥物組的平均光密度，OD對照表示對照組的平均光密度，OD空白表示對照組的平均光密度)。

半數抑制濃度(IC50)定義為當50％的腫瘤細胞存活時的藥物濃度；根據測定的光密度(OD值)，製作細胞生長抑制率的標準曲線，在標準曲線上求得其對應的藥物濃度。

以喜樹鹼為陽性對照，測得的IC50見表1所示。

表1本發明所列二苯並萘啶酮類化合物對腫瘤細胞的抑制IC50值(μmol/L)

在化合物的抗腫瘤活性測試部分，利用MTT法測試了目標化合物對MGC-803(人胃癌細胞)、NCI-H460(人肺癌細胞)、HepG-2(人肝癌細胞)以及7404(人肝癌細胞)的體外抗腫瘤活性，結果顯示所合成的目標化合物對這四種腫瘤細胞均具有很好的抑制活性，其中，化合物H6對腫瘤細胞系NCI-H460、BEL-7404和HepG-2具有最高的抑制活性，IC50值分別為0.477、0.577和0.022μmol/L，而化合物H7對腫瘤細胞系MGC-803具有最高的抑制活性，IC50值為1.547μmol/L。