2-o-烷基抗壞血酸的鋰鹽的製作方法
2023-05-19 10:15:36 2
專利名稱：2-o-烷基抗壞血酸的鋰鹽的製作方法
技術領域：
本發明是關於新的抗壞血酸衍生物的鋰鹽。
已經知道，活性氧類或活性有機基類在心臟、腦、腎臟等疾病，例如缺血性心臟病、腦缺血障礙、缺血性腎障礙、缺血性消化器官系潰瘍、癌、動脈硬化、糖尿病、白內障等的病變發展(即，細胞機能低下、障礙、破壞、壞死等)中佔有重大作用[I.Fridovich，Annual Review of Pharmacology and Toxicology，23，239(1983);J.M.McCord，The New England Journal of Medicine，312，159(1985);K.P.Burton，J.M.McCord和G.Chai，American Journal of Physiology，246，H776(1984);井上正雄等，活性酵素と病態，學會出版センタ-(1992)]。超氧化物陰離子基(O-·2)、氫氧根(·OH)、單氧(JO2)、過氧化基(ROO·)等被認為是生物體中的活性氧類或活性有機基類。已經知道，尤其O-·2在生物體內的形成與在生物體中不斷引起的活性氧類的細胞或組織障礙之間的關係具有重大意義，超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)有效地或特異地消除這種O-·2的作用是有效果的[D.N.Granger，G.Rutili，J.M.McCord，Gastroenterology，81，22(1981)]。另外，抗壞血酸、α-生育酚、半胱氨酸、還原型穀胱甘肽等化合物具有消除游離基的作用，這些化合物能夠預防在某種疾病狀態中預料與游離基有關的組織障礙[I.Fridovich)，Science，201，875(1978)]。
作為具有循環系機能障礙預防治療作用的抗壞血酸衍生物，例如2-O-醚體已記載在特開昭61-263969號公報(EP-A-202589)中。
本發明人立足於到目前為止認為在生物體組織障礙中顯示極重要作用的活性氧類和有機基的基礎研究，進行研究探索比上述游離基消除劑效力更強、以消除活性氧類和有機基為目的、在藥理學及製劑學方面均優異的新型藥劑。結果發現，在試管內實驗和疾病動物實驗標本中，以低量使用新的2-O-取代抗壞血酸衍生物的鋰鹽能抑制脂質過氧化酶活性、缺血性心臟和腦機能障礙等，基於這些認識，進一步研究的結果，完成了本發明。
即，本發明提供了2-O-烷基抗壞血酸鋰。
本發明的2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽作為循環系統機能障礙預防和治療劑或抗癌劑等是有效的。
下面說明本發明。
本發明的2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽是由下述通式[Ⅰ](式中R1表示烷基)表示的化合物的鋰鹽，可以是一鹽、二鹽或三鹽中的任一種。
鋰的結合部位在1位、2位或3位的氧原子之中的任一個都可以，理想的是在其中的3位。
在上述通式[Ⅰ]中，作為以R1表示的烷基，例如可舉出可以有取代基的直鏈或支鏈的烷基。
作為在可以有該取代基的直鏈或支鏈烷基中的烷基，理想的碳原子數是1-20，更理想的碳原子數是9-20，特別理想的是14-18個碳原子的直鏈烷基。作為其例子，例如可以舉出甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基、正十九烷基和正二十烷基等。
在可以有上述取代基是的直鏈或支鏈烷基中的亞甲基數理想的是1-19。
作為上述烷基的取代基，例如可舉出可以有取代基的羥基、可以有取代基的氨基、可以有取代基的羧基、可以有取代基的氨基羰基、可以有取代基的乙烯基、可以有取代基的乙炔基、可以有取代基的環烷基、可以有取代基的芳基、可以有取代基的雜環基，以下式(式中，
R2表示甲基、甲氧基或者以2個R2表示形成-CH＝CH-CH＝CH-基的情況、R3表示可以有取代基的苯基、萘基、噻嗯基和吡啶基)表示的醌基或者由下式(式中，各符號與上述含義相同)表示的苯並二氫吡喃-2-基。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的羥基，可以舉出以下式(式中，R4-O-R4表示氫、C1-8烷基或苯基)表示的基，也就是除了未取代的羥基外，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基等C1-3烷氧基和苯氧基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的氨基，可以舉出以下式(式中，R5
和R6相同或不同，分別表示氫、C1-3烷基、苯基或對羥基苯基)表示的基，也就是除了未取代的氨基外，例如甲氨基、二甲氨基、乙氨基、丙氨基、異丙氨基等C1-3或者C1-8的烷基取代氨基和苯氨基、對羥基苯氨基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的羧基，可以舉出以下式(式中，R7表示氫、C1-8烷基或苯基)表示的基，也就是除了未取代的羧基外，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、苯氧基羰基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的氨基羰基，可以舉出以下式(式中，
R8表示氫、C1-3烷基、苯基或者對羥基苯基)表示的基，也就是除未取代的氨基羰基外，例如甲氨基羰基、乙氨基羰基、異丙氨基羰基、苯氨基羰基、對羥苯基氨基羰基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的乙烯基，可以舉出以下式(式中，
R9和R10相同或不同，表示氫、C1-5烷基、苯基、對甲氧基苯基、3-吡啶或者3，4-亞甲二氧基苯基)表示的基，也就是除未取代乙烯基以外，例如丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1，1-二苯基乙烯基、1-苯基-1-(3-吡啶)乙烯基、1-苯基-1-(2-噻嗯基)乙烯基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的乙炔基，可以舉出以下式(式中，R11-C≡C-R11表示氫或者C1-6烷基)表示的基，也就是除未取代的乙炔基以外，例如甲基乙炔基、乙基乙炔基、正戊基乙炔基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的環烷基中的環烷基，理想的是碳原子數為3-6個的環烷基，作為其例子，例如是環丙基、環丁基、環戊基或環己基等。該環烷基可以有1-3個取代基，作為該取代基例如可舉出羧基、羥基或者C1-3烷基等。作為有取代基的環烷基例如可舉出1-羧基環丙基、2-羧基環丙基、1-羧基環戊基、1-羧基環己基、4-羧基環己基等。
作為上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的芳基，可以舉出以下式(式中，R12
R13和R14相同或不同，表示氫、C1-3烷基、C1-3烷氧基、滷素、乙氧基羰基乙烯基、苯基、羧基、羧基甲基或者1-羧基乙基)表示的基、或者1-3個的C1-3烷基、C1-3烷氧基、滷素、羧基或者可以被乙醯基取代的萘基。具體地說，例如苯基、1-或2-萘基、2-、3-或4-一甲基苯基、2-、3-或4-一甲氧基苯基、2-、3-或4-一乙氧基苯基、2-、3-、或4-一滷代苯基(滷素原子表示氯、溴和氟的各原子)、2，3-亞甲二氧基苯基、3，4-二甲苯基、3，4-二甲氧基苯基、4-(乙氧基羰基乙烯基)苯基、4-異丙基苯基、4-甲氧基羰基苯基、3，4，5-三甲苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、4-二苯基、4-羧基苯基、4-羧基甲苯基、4-(1-羧乙基)苯基等。
作為上述烷基的取代基例示的可以有取代基的雜環基中的雜環基，可以舉出例如含有1個硫原子、氮原子或者氧原子的5-7節雜環基，含有2-4個氮原子的5-6節雜環基，含有1-2個氮原子和1個硫原子或者氧原子的5-6節雜環基。這些雜環基可以有1-3個取代基，作為這種取代基，例如可舉出可以被苯基取代的C1-3烷基，羧基，羥基，C1-3烷氧基，可以被滷素取代的苯基，滷素，羧甲基，苯甲醯基等。作為可以有這種取代基的雜環的具體例子可舉出2-、3-或4-吡啶基、2-或3-噻嗯基、嗎啉代基、吡咯烷基、1-哌啶基、哌啶基、哌嗪基、4-苯基哌嗪基、4-(對氟苯基)哌嗪基、4-二苯甲基哌嗪基、4-(對甲氧基苯基)哌嗪基等。
在本說明書中所述的C1-6烷基，例如可舉出甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、正戊基、正己基等。
本說明書中所述的C1-3烷基，例如可舉出甲基、乙基、正丙基、異丙基等。
本說明書中所述的C1-3烷氧基，例如可舉出甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基等。
本說明書中所述的滷素可舉出氯、溴、氟和碘。
本發明的2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽可通過對上述通式[Ⅰ]所示的化合物(以下簡稱化合物[Ⅰ])進行鋰化反應而獲得。
使用一般公知的方法，例如使碳酸鋰等鋰化合物進行反應來實現上述反應。
在不阻礙反應的溶劑中進行該反應。溶劑可以使用水、醇類(例如，甲醇、乙醇等)。
碳酸鋰等鋰化合物的用量相對於原料化合物[Ⅰ]來說是約0.5-10倍摩爾。
反應溫度約10-80℃。
反應時間約10分鐘至6小時左右。
這樣製成的2-O-烷基抗壞血酸鋰可以通過公知的分離·提純方法(例如，使用矽膠、聚苯乙烯系樹脂、活性炭、反相系等的柱色譜法，再結晶等)離析提取。
在本發明方法中作為原料使用的化合物[Ⅰ]例如可以由下述的反應過程來製備[特開昭61-26396號公報(EP-A-202589)、特開昭60-130582號公報(US4780549)等]。
在上述方法中，化合物[Ⅰ]是這樣製備的，使抗壞血酸或異抗壞血酸按照公知的方法與例如甲氧基甲基氯化物、乙氧基甲基氯化物、苄基溴化物、三甲基甲矽烷基氯化物、二甲基叔丁基甲矽烷基氯化物等的保護基反應，生成3-O-醚體，接著使所得到的醚體與以式R1-Z[式中，R1具有與上述相同的含義，Z表示滷素(例如，氯、溴)]表示的化合物進行反應。該反應在無機鹼存在下進行。作為無機鹼，例如使用氫氧化鈉、氫氧化鉀等鹼金屬氫氧化物，碳酸鈉、碳酸鉀等鹼金屬鹽。該反應在不阻礙反應的溶劑中進行。作為溶劑使用二甲基甲醯胺、六甲基磷醯胺等醯胺類，二甲基亞碸等亞碸類，四氫呋喃等環狀醚類等的一種或者它們中的二種以上。反應時間約1-18小時。反應溫度約10-60℃。
本發明的2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽，在使用脂質過氧化酶、磷脂水解酶A2、GST-cdc25Hu2(蛋白質脫磷氧化酶)的試管內的實驗中顯示消除游離基和抗癌作用。並且在大鼠心臟的貧血-再灌流模型等中顯示預防和改善心機能障礙作用，而且毒性、副作用極低。本發明化合物對哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、猴、人等)的缺血性心臟障礙(心律不齊、冠狀動脈痙攣、心臟組織壞死、心肌梗塞等)、蛛網膜下出血障礙、缺血性腦組織障礙(例如，腦梗塞、痴呆、老年性痴呆症等)、缺血性腎障礙、缺血性消化器官障礙(例如，消化道潰瘍等)、癌、動脈硬化症、糖尿病、白內障等諸障礙具有治療和預防改善效果，可以用作循環系統機能障礙預防·治療劑或者抗癌劑。
作為上述疾病預防·改善劑使用的具體例子，可舉出例如抗心律不齊劑、抗心肌梗塞劑、抗腦梗塞劑、老年痴呆和老年性痴呆症預防劑、蛛網膜下出血後的治療改善等循環器官系統改善劑、腎機能改善劑、緊張性消化器官潰瘍治療劑、抗癌劑等。
本發明化合物毒性低，可以與已知的藥理上允許的載體、賦形劑、稀釋劑等混合，按照公知的方法，製成藥物組合物[例如，片劑、膠囊(包括軟膠囊、微膠囊)、液劑、栓劑、注射劑、經鼻劑、經皮劑、點眼劑等]，採用口服或者非口服安全地給藥。給藥量隨用藥對象、用藥路線、症狀等而異，向上述哺乳動物口服給藥時，本發明的化合物通常作為一次量約0.1mg/Kg-500mg/Kg體重，最好是約0.5mg/Kg-200mg/Kg體重，每日1-3次給藥。
另外，在非口服給藥時，例如作為栓劑的本發明化合物可以約5mg-100mg/Kg體重，每日1-2次給藥。作為注射劑的本發明化合物希望以約0.1mg/Kg-5mg/Kg體重，每日1-2次進行注射。
在製造上述口服製劑例如片劑時，可以適當配合粘合劑(如羥丙基纖維素、羥甲基丙基甲基纖維素、聚乙二醇等)、崩解劑(例如澱粉、羧甲基纖維素鈣等)、賦形劑(例如乳糖、澱粉等)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石等)等。
另外，製造非口服劑例如注射劑時，可以適當配合等滲劑(例如，葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露糖醇、氯化鈉等)、防腐劑(例如，苄醇、氯代丁醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯等)、緩衝劑(例如，磷酸緩衝液、乙酸鈉緩衝液等)等。
實施例下面舉出實驗例和實施例，更具體地說明本發明，但本發明不限於所舉出的實驗例和實施例。
實驗例12-O-十八烷基抗壞血酸鋰的溶血性和溶解度將含有下述實施例1中得到的2-O-十八烷基抗壞血酸鋰的生理食鹽溶液加熱到37℃，然後收集在施皮茨滾筒中，加入0.1ml預先加熱到37℃的兔脫纖維血(注)，輕輕地振動混合後，在37℃加熱1小時。此後，將該液體進行離心分離，對上清液用肉眼觀察有無溶血。
結果，2-O-十八烷基抗壞血酸鋰在1μg/ml以下，沒有看到溶血。
(注)兔脫纖維血從兔身上採集約20ml血液，集中到裝有約20個直徑8mm的玻璃球的燒瓶中，緩慢地振動混合約5分鐘後，用網過濾。用時進行調製。
對水的溶解度在28℃時是1g/83ml(水)。
實驗例22-O-十八烷基抗壞血酸鋰的毒性[方法]向JclICR小鼠和JclWistar大鼠各1組雌雄2隻，口服和靜脈內投給被檢驗體。另外，作為被檢驗體，將實施例1所得到的2-O-十八烷基抗壞血酸鋰以口服投藥時懸浮在0.5%甲基纖維素中，以靜脈內投藥時溶解在生理食鹽水中。小鼠、大鼠共同LD50以口服時是2000mg/Kg以上，以靜脈內時是25-50mg/Kg的範圍。沒有看到性別的差異，生存例的解剖檢查觀察也未看到異常現象。另外，靜脈內投藥死亡例的解剖檢查看到肺部充血。
實驗例32-O-十八烷基抗壞血酸鋰的脂質過氧化酶活性阻止作用[方法]使2mg NADPH生成系的大鼠肝微粒體、300μM被檢驗體(實施例1所得到的2-O-十八烷基抗壞血酸鋰)和20mM四氯化碳在37℃反應12分鐘，向該溶液中加入硫代巴比土酸和三氯乙酸的混合液，在535nm測定吸光度。酶活性阻止率是75%，看到被檢驗體有消除游離基作用。
實驗例42-O-十八烷基抗壞血酸鋰的磷脂質水解酶A2活性阻止作用[方法]使來自在豬胰腺的磷脂質水解酶A2、300μM被檢驗體(實施例1所得到的2-O-十八烷基抗壞血酸鋰)和0.1M含標記的磷酸膽鹼(pH 9)在氨基乙酸-NaOH緩衝液中反應10分鐘，然後加入2.5M Ca++再反應5分鐘。向該反應液中加入0.2M EDTA溶液而中止反應，用酸性己烷萃取，測定己烷層部分的閃爍。磷脂水解酶活性59%被阻止。
實驗例52-O-十八烷基抗壞血酸鋰的GST-cdc25Hu2(蛋白質脫磷氧化酶)阻止作用將80μM被檢驗體(實施例1所得到的2-O-十八烷基抗壞血酸鋰)加入含GST-cdc25Hu2融合蛋白質60μg/ml、10mM對硝基苯基磷酸鹽(和光純藥社(制))、牛血清蛋白(Sigma公司，美國)、10mM DDT(ジチォスレィト-ル)(和光純藥社(制))、25mM HEPES(2-羥乙基哌嗪-N′-2-乙烷硫酸(pH8.0)的反應液中，在37℃反應60分鐘，然後測定在405nm的吸光度，根據吸光度減少判斷阻礙活性。cdc25活性有93.6%被阻止。即在被檢驗體中發現抗癌作用。
實驗例62-O-十八烷基抗壞血酸的大鼠心肌梗塞巢發展抑制作用[方法]使用雄性Wistar鼠(11-12周齡)，用戊巴比妥鈉麻醉，在人工呼吸下在正中部開胸。切開心包膜後，使心臟露出。用帶線的縫合針(日本レダリ-出售，7-0絲)將線在左冠狀動脈的基始部連帶心肌穿過左冠狀動脈，將線穿入聚乙烯管，利用拉緊線進行冠狀動脈閉塞。1小時後鬆開線，再開始血流動。再灌流30-60分鐘後閉胸，保持清醒狀態。
24小時後再麻醉，迅速地摘出心臟浸入冰冷的生理食鹽水中。為了求出危險區域再次閉塞冠狀動脈，通過逆向插入到主動脈中的聚乙烯管將伊凡斯藍(1%)灌流，使正常區域和危險區域分離。此後，將左心室沿平行垂直軸分割成6個部分，用1%氯化三苯基四唑(TTC)在37℃將壞死細胞以外染色10分鐘，稱量梗塞巢。將被檢驗體藥物(實施例1所得到的2-O-十八烷基抗壞血酸鋰)溶解在生理食鹽水中，在冠狀動脈閉塞30分鐘後靜脈內給藥。在生理食鹽水(1ml/Kg)靜脈內給藥組(N＝12)中，危險區域的梗塞巢(IS/AR)是60.2±1.8%。與此相反，在被檢驗體1mg/Kg的靜脈內給藥組(N＝7)中，顯示40.5±4.6%(IS/AR)，與對比組相比，看到32.7%的有效的抑制(P＜0.001)。相應左心室的危險區域(AR/LV)在兩組之間沒有顯著的差別以上結果表明，被檢驗體以1mg/Kg自變量用量能有效地抑制大鼠冠狀動脈閉塞-再灌流後的心肌梗塞巢發展。
實施例1將4.28g(10mM)2-O-十八烷基抗壞血酸懸浮在150ml水中，邊攪拌邊每次少量地加入0.37g(5mM)碳酸鋰。接著加入50ml乙醇，形成透明的均勻溶液，然後自然過濾。減壓餾去乙醇，將水溶液凍結乾燥得到粉末。將該粉末用丙酮洗淨後，在乾燥器中減壓乾燥，得到4.0g2-O-十八烷基抗壞血酸鋰(熔點163-165℃)。
實施例2用已知的方法製成含有3mg 2-O-十八烷基抗壞血酸鋰和具有下述組成的片劑。
2-O-十八烷基抗壞血酸鋰 3mg乳糖 65mg玉米澱粉 40mg羥基丙基纖維素 2mg硬脂酸鎂 0.2mg110.2mg(每片)
實施例3用已知的方法製成含有500mg 2-O-十八烷基抗壞血酸鋰和具有下述組成的片劑。
2-O-十八烷基抗壞血酸鋰 500mgα化澱粉 15mg玉米澱粉 22mg硬脂酸鎂 3mg540mg(每片)
權利要求
1.2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽。
2.權利要求1所述的2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽，其中烷基的碳原子數是14-18。
3.含有2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽的循環系統機能障礙預防和治療劑。
全文摘要
提供了可用來作為循環系統機能障礙預防和治療劑等的2-O-烷基抗壞血酸的鋰鹽。
文檔編號C07D307/62GK1093360SQ9311416
公開日1994年10月12日 申請日期1993年9月30日 優先權日1992年10月2日
發明者清水忠一, 金和龍彥 申請人:武田藥品工業株式會社