治療多發性硬化的製作方法

2023-05-18 18:43:16

專利名稱：治療多發性硬化的製作方法
治療多發性硬化本申請是中國申請200580046885.8的分案申請，該母案於2005年11月18日以國際申請號PCT/US2005/042052提交，於2007年7月19日進入中國國家階段，本分案採用了與該母案一致的發明名稱。相關申請本申請要求2004年11月19日提交的美國臨時申請60/629，700的權利，該申請全文引入本文作為參考。
背景技術：
多發性硬化(multiple sclerosis, MS)是最常見的中樞神經系統疾病之一。目前全世界範圍內有超過2，500，000人患有MS。幹擾素β和考帕松(copaxone)是目前在售的MS治療法中主要的適應性改良療法。幹擾素β治療可以使MS患者的復發率降低 32-33%(Jacobs et al., Ann Neurol.39:285-94, 1996;也參見Neurology43:641-643, 1993)。 發明概述本發明是基於，至少是部分基於，以下發現:VLA_4阻斷療法，如VLA-4結合抗體如那他珠單抗(natalizumab)療法可以安全有效地治療此前已治療過多發性硬化等炎性疾病的患者。具體地，施用那他珠單抗使一些MS患者的症狀大大改善，而這些患者都是此前被證實對在先的治療、例如在先的生物學療法、尤其是在先的幹擾素β療法反應不足(inadequate response)。相應地,本發明一個方面涉及治療受試者如人類受試者的方法，所述受試者患有炎性疾病(inflammatory disorder),並且對第一種治療,例如第一種試劑(agent)，例如本文所述試劑，例如幹擾素β表現為反應不足。所述炎性疾病可以是，MS、類風溼性關節炎、炎性腸疾病(inflammatory bowel disease)、或系統性紅斑狼瘡。所述方法包括，對該受試者施用VLA-4結合蛋白(VLA-4binding protein),例如VLA-4結合抗體(VLA-4binding antibody),例如那他珠單抗,其施用量和施用時間足以導致治療所述疾病。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處在治療水平時，所述VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，可以施用至少一次,例如至少2，3，4，5次或更多次。(除非另外指明，VLA-4結合抗體，優選那他珠單抗，是本文所述所有實施方式中優選的LA-4結合蛋白。同樣，除非另外指明，優選的疾病多發性硬化)。在一個實施方案中，在不施用第一種試劑(例如幹擾素β)的情況下，將VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)持續施用至少2個月，例如至少4,8, 12，24，或 48 個月。在一個實施方案中，在對該受試者第一次施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)之後，不施用所述第一種療法，例如第一種試劑(例如幹擾素β )。在另一實施方案中，施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，來代替施用第一種試劑(例如幹擾素β)。反應不足可以是，例如反應低於本文所述預定水平。反應不足也可以是由第一種療法，例如第一種試劑(例如幹擾素β)引起的副反應(adverse reaction)或不耐受反應或不可接受的反應。在一個實施方案中，所述受試者事先已用第一種療法,例如第一種試劑(例如幹擾素β )治療了至少3個月，例如至少6，12，18，或24個月。在一個實施方案中，所述受試者因被診斷為患有諸如MS等疾病，而未施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)。在一些實施方案中，所述受試者在第一次施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)之前，有至少I個月，例如至少2，3，4，5，6，12，或24個月未施用所述第一種試劑(例如幹擾素β)。在其它實施方案中，所述受試者在第一次施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)之前的6周內，例如4，2或I周內，或6，5，4，3，2或I天內，施用所述第一種試劑(例如幹擾素β)。在一個實施方案中，所述受試者在第一次施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)的3個月內，例如6，12，18，24，30或36個月內，未施用米託蒽醌(mitoxantrone)、環磷醯胺、環孢菌素、硫唑嘌呤或氨甲蝶呤。在一個實施方案中，所述受試者是成年受試者，例如年齡在16，18，19，20，24，或30歲或更大的受試者。通常，所述受試者年齡為19-55歲。所述受試者可以是女性或男性。在一個實施方案中，所述受試者患有復發(relapsing)弛張型(remitting)多發性硬化。在另一實施方案中，所述受試者患有慢性漸進型多發性硬化(chronicprogressive multiple sclerosis),例如原發-漸進型(primary-progressive, PP),繼發-漸進型(secondar y progressive),或漸進復髮型(progressive relapsing)多發性硬化。在一個實施方案中，所述受試者患有炎性疾病，例如MS,該疾病是用第一種療法，例如第一種試劑(例如幹擾素β)治療時難治的(refractory)疾病。在一個實施方案中，所述VLA-4結合蛋白是VLA-4結合抗體，例如IgGl, IgG2, IgG3,或IgG4等全長抗體。所述抗體通常是有效人化(effectively human),人化(human)或人源化(humanized)的抗體。所述VLA-4結合抗體可抑制VLA-4與其關聯(cognate)配體，例如VCAM-1的相互作用。所述VLA-4結合抗體至少結合VLA-4的α鏈，例如結合α 4亞基的胞外區。例如，所述VLA-4結合抗體識別VLA-4a鏈上的表位B (如BI或B2)。所述VLA-4結合抗體可以與那他珠單抗、HP1/2、或本文所述另一種VLA-4結合抗體來競爭結合VLA-4，或具有與上述抗體重疊的VLA-4結合表位。在優選實施方案中，所述VLA-4結合抗體是那他珠單抗，或包括那他珠單抗的重鏈可變區和輕鏈可變區。所述第一種療法，例如第一種試劑可以是生物學療法(試劑)，例如具有指定序列的蛋白，如幹擾素。在一個實施方案中，所述第一種試劑包括幹擾素β，例如幹擾素β-la，例如AVONEX (幹擾素β-la)或Rebif (幹擾素β-1a)，或BETASERON (幹擾素β-1b)。所述第一種試劑也可以是未限定序列(undefined sequence)的蛋白，例如指定胺基酸的隨機共聚物，例如乙酸格拉太咪爾(glatiramer acetate)。在一個實施方案中，所述VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)的施用劑量是，足以實現每月一次(如每四周一次)施用約50-600mg(如約200-400mg，例如約300mg，通過靜脈(IV)途徑施用)所獲得的生物利用度的至少80%(優選90%，95%, 100%, 110%或更高)水平。例如，所述VLA-4結合抗體每月一次IV輸注約50-600mg (如約200-400mg，例如約300mg)。在另一實例中，VLA-4結合抗體皮下(SC)注射25-300mg(如50-150mg，例如約75mg)，例如一周一次，一周兩次或兩周一次。在一些實施方案中，所述VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，可以按照有效導致以下一或多種後果的量施用:a)降低復發嚴重度；b)阻止EDSS (殘疾狀況拓展量化表)分數升高；c)降低EDSS分數(例如在至少6個月、一年或更長時間內降低例如1、1.5、2、2.5、或3個點以上)；d)減少新的Gd+損傷的數量；e)減少新的Gd+損傷的出現率；和0減少Gd+損傷面積的擴大。VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用多個劑量(multiple doses)、並且是能在至少3、6、或9個月，或在1、2、3年內維持不加重或不復發階段的有效量。在一些實 施方案中，對例如受試者接受VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)之後的反應指標進行評價。專業人員可以採用一或多種不同的關於治療有效性的臨床指標或其它指標，例如EDSS分數;MRI掃描；復發次數、復發率或復發嚴重度；多發性硬化綜合功能(multiple sclerosis functional composite, MSFC);多發性硬化生活質量記錄(multiple sclerosis quality of life inventory,MSQLI)。所述受試者可以在實施治療方案期間(during a regimen)的不同時間點進行監控。在一個實施方案中，未檢查所述受試者的幹擾素生物利用度(例如，在施用之前或之後)。另一方面，本文涉及一種治療患有炎性疾病(例如多發性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，選擇對第一種試劑治療多發性硬化反應不足(例如是第一種試劑難治的MS)的受試者，對所述受試者施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，施用量和施用時間導致足以治療該疾病。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時，所述VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次,例如至少2，3，4，5或更多次。在一個實施方案中，所述方法還包括確定所述受試者是否患有第一種試劑(例如幹擾素β)難治的疾病(例如多發性硬化)。在一個實施方案中，確定疾病是否難治包括評價對第一種試劑(例如幹擾素β)治療的反應水平，例如評價本文所述反應，且當所述受試者對所述治療未達到預定的反應水平時，再確定所述受試者是否患有第一種試劑(例如幹擾素β )難治的疾病(例如MS)。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，確定所述受試者對第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗))的治療是否未達到預定的反應(例如本文所述反應)的水平，或是否表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性。所述方法包括，在所述受試者對所述治療未達到預定的反應水平、或表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性時，對所述受試者施用VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時間足以導致治療該疾病。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時，所述VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。
另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，選擇對第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗))的治療未達到預定的反應(例如本文所述反應)的水平，或表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性的受試者。所述方法包括，在所述受試者對所述治療未達到預定的反應水平、或表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性時，對所述受試者施用VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時間足以導致治療該疾病。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時，所述VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，對所述受試者施用VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時間足以導致治療該疾病。所述受試者可以是，對第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗))的治療未達到預定的反應(例如本文所述反應)的水平，或表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性的受試者。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時，所述VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，對所述受試者施用第一種試劑(例如幹擾素β)，並評價所述受試者對第一種試劑(例如幹擾素β)治療的反應(例如本文所述反應)。所述方法還包括，在所述受試者對所述治療未達到預定的反應水平、或表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性 時，對所述受試者施用VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時間足以導致治療該疾病。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時,所述VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次,例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。另一方面，本文涉及對治療受試者(例如人類受試者)炎性疾病(例如多發性硬化)的治療有效性進行評價的方法。所述方法包括，選擇對第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗))的治療未達到預定的反應(例如本文所述反應)的水平，或表現出副反應或不能耐受的或無法接受的毒性的受試者。所述受試者是，當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時，隨後接受所述VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次的受試者。所述方法還包括，確定對VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)治療的反應(例如本文所述反應，例如與該疾病或副反應有關的參數)的水平。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。另一方面，本文涉及對患有多發性硬化的受試者進行治療的方法，所述受試者已用幹擾素β治療了一段時間，例如至少3個月、6個月、9個月、或至少一年，並有以下一或多種表現:(a)至少一次復發，(b)出現新的MRI增強型損傷，和(c)進行性殘疾(progression of disability) (EDSS)。所述方法包括,對所述受試者施用VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時間足以導致治療該疾病。當第一種試劑(例如幹擾素β)在該受試者體內未處於治療水平時，所述VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次,例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實施方案。另一方面，本發明的特徵在於作出決定(例如醫療決定或財政決定(financialdecision))的方法。所述方法包括:生成或接受關於第一種試劑(例如幹擾素β )治療受試者炎性疾病(例如多發性硬化)的反應(例如本文所述反應)的信息，(例如接受由本文所述方法生成的反應信息)；和利用所述信息作出決定，例如在第一行為進程(first course of action)和第二行為進程(second course of action)之間作出選擇。在優選實施方案中，所述決定包括，將所述信息與標準進行比較，並根據所述信息與所述標準的關係作出決定。例如，所述信息可以是表示反應可能性(likelihood ofresponse)的值或其它術語(other term),當所述值或其它術語具有事先選定的與所述標準的關聯時，例如當所述值或術語在數字上大於參考標準時，選擇第一行為進程，當所述數字小於參考標準時，選擇第二行為進程。行為進程(course of action)可以是,例如提供或不提供服務或治療，例如VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)，或支付(paying for)或不支付服務或治療(例如那他珠單抗)的全部或一部分。

在優選實施方案中，所述第一行為進程是，建議或提供第一個醫學治療療程，例如用VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)進行治療，所述第二行為進程是建議或決定不接受所述治療或不提供所述治療。在優選實施方案中，第一行為進程包括或導致授權或轉移資金來支付提供給受試者的服務或治療，例如用VLA-4結合蛋白(例如那他珠單抗)進行的治療，第二行為進程包括或導致拒絕支付提供給受試者的服務或治療。例如，支付或償還醫療費用的實體(如醫院、提供護理者(caregiver)、政府實體、或保險公司、或其它實體)，可以利用本文所述方法的結果，來決定當事人(party)，例如除了所述受試患者以外的其他當事人，是否為提供給所述患者的服務或治療支付費用。例如，第一種實體(如保險公司)，可以利用本文所述方法的結果，來決定是否要為患者付錢或代表患者，例如是否要向第三方(如出售食物或服務者、醫院、醫師、或其它提供護理者)償還提供給患者的服務或治療。定義本文中，「反應不足(inadequate response) 」是指，根據患者或有經驗的臨床人員的評估，表現為效力不足或有不能耐受的或無法接受的毒性的反應。效力不足可以是，不能達到用第一種試劑治療所預定的反應水平。在MS的情況中，例如，效力不足可以是，在以下一或多個方面，不能表現出至少10%、20%、30%、40%、50%或更大程度的降低:一段時間內的復發率(如，相對於標準而言，例如治療前的一段時間的復發率)；復發的嚴重程度；EDDS分數；和MR1-增強型損傷量、體積或新損傷；或本文所述其它參數。不能耐受的毒性可以是，針對第一種試劑的、導致從醫療角度必需或建議停止使用該第一種試劑的副反應。不能耐受的或無法接受的毒性的實例可以包括，肝損傷或肝功異常(hepaticinjury or dysfunction)、嚴重變態反應(severe allergic reaction)、嚴重抑鬱(severedepression)或有自殺想法(suicidal ideation)、過敏反應(anaphylaxis)、或注射部位壞死。本文所述方法可以減少這類毒性效應的發生和/或嚴重程度。在一個實施方案中，所述受試者患有用第一種療法難治的MS，例如，基於臨床上對該疾病特有的標準測量來評價，所述受試者接受第一種療法後未表現出臨床可接受的或顯著的改善，或接受第一種療法後最初表現改善但隨後不再有改善。例如對MS而言，針對第一種試劑治療的預定反應水平可以是以下一或多種:a) 一段時間內(如3個月、6個月、9個月、I年、2年、3年、4年或更長時間)，復發率降低至少10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%,例如與參考值相比；b)復發的嚴重程度降低至少10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% ；c)防止EDSS分數增加；d)降低EDSS分數(在例如至少6個月、I年或更長時間內，降低例如0.5、1、1.5、2、2.5或3個點以上)；e)減少新損傷(如Gd+損傷)數，例如比新損傷參考數減少至少10%，20%, 30%, 40%, 50%, 60%。新損傷參考數可以是，例如所述受試者接受在先治療後在相似時間段以內表現出的新損傷數，或者在不接受治療或接受在先治療的情況下，處於相似階段或患病嚴重程度相似的受試者預計有的平均數；f)新損傷(如Gd+損傷)出現率降低，例如比新損傷出現率參考值降低至少10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%。新損傷出現率參考值可以是，例如接受在先治療的所述受試者中的出現率，或者在不接受治療或接受在先治療的情況下，處於相似階段或患病嚴重程度相似的受試者預計有的平均出現率；和g)減少損傷面積(如Gd+損傷面積)的擴大，例如與損傷面積擴大的參考值相比。損傷面積擴大的參考值可以是，例如接受在先治療的所述受試者中的Gd+損傷面積的擴大，或者在不接受治療或接受在先治療的情況下，處於相似階段或患病嚴重程度相似的受試者預計有的平均擴大。在一個實施方案中，所述受試者是突破型患者(breakthrough patient),即，在用第一種療法治療具體的一段時間(如至少3個月、6個月、9個月、或至少一年)期間，有以下一或多個表現的患者:(a)至少一 次復發；(b)出現新的MRI增強型損傷；和(C)進行性殘疾(EDSS)。在一個實施方案中，所述受試者在用第一種療法治療的一段時間內(例如在6個月、9個月、I年、2年、3年、4年或更長時間內)，復發率降低的水平不到40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%。在一些實施方案中，所述受試者在VLA-4結合試劑療法(如施用VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗))開始後，在一段時間內(例如在6個月、9個月、I年、2年、3年、4年或更長時間內)，復發率降低至少40%, 45%, 50%, 60%, 65%, 70%或更多。在一個實施方案中，所述受試者用第一種療法治療的一段時間內(例如在6個月、9個月、I年、2年、3年、4年或更長時間內)，新損傷(如Gd+或T2張力過強型(hypertense)損傷)或損傷體積減小的水平不到50%，40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%。在一些實施方案中，所述受試者在VLA-4結合試劑療法(如施用VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗))開始後，在一段時間內(例如在6個月、9個月、I年、2年、3年、4年或更長時間內)，新損傷(如Gd+或T2張力過強型損傷)或損傷體積可以減小至少50%，60%, 65%, 70%, 80%或更多。術語「治療」在本文中指進行治療，且治療量、治療方式(例如用藥時間表)、和/或治療模式(如用藥途徑)導致可以有效改善疾病或其症狀、或者防止或減緩疾病或其症狀的進展。這可以表現為，例如與疾病或其症狀有關的參數的改進，例如改進到具有統計學顯著性的程度或改進到本領域技術人員可以檢測到的程度。有效量、有效方式或有效模式可以依受試者的不同而有多種情況，而且可以適應於受試者進行調整。防止或減緩疾病或其症狀的進展是指，治療可以在患病受試者或經確診的受試者中防止或減緩疾病或其症狀導致的變壞情況(deterioration)。術語「生物的」是指基於蛋白的治療試劑。在優選實施方案中，生物試劑是至少10，20，30，40，50或100個胺基酸殘基長。「VLA-4結合試劑」是指與VLA-4整聯蛋白以小於10_6M的Kd結合的任何化合物。一例VLA-4結合試劑是VLA-4結合蛋白，例如VLA-4結合抗體，如那他珠單抗。「VLA-4拮抗劑」是指，至少部分地抑制VLA-4整聯蛋白的活性、尤其是VLA-4整聯蛋白的結合活性或信號傳遞活性(例如傳遞VLA-4介導的信號的能力)的任何化合物。例如，VLA-4拮抗劑可抑制VLA-4與其關聯配體(例如VCAM-1等細胞表面蛋白)、或與細胞外基質成分(纖連蛋白(fibronectin)或骨橋蛋白(osteopontin))的結合。典型的VLA-4拮抗劑可結合VLA-4或VLA-4配體(例如VCAM-1)或纖連蛋白或骨橋蛋白等胞外基質成分。與VLA-4結合的VLA-4拮抗劑可以與α 4亞基和/或β I亞基結合。VLA-4拮抗劑也可以與含有其它α 4亞基的整聯蛋白(如α4β7)或含有其它β 的整聯蛋白結合。VLA-4拮抗劑可以與VLA-4或與VLA-4配體以小於10_6、10_7、10_8、10_9或ΙΟ,Μ的Kd結合。本文中術語「抗體」是指，包括至少一個免疫球蛋白可變區(例如提供免疫球蛋白可變區或免疫球蛋白可變區序列的胺基酸序列)的蛋白。例如，抗體可包括重鏈(H)可變區(本文中縮寫為VH)和輕鏈(L)可變區(本文中縮寫為VL)。在另一例中，抗體包括兩個重鏈(H)可變區和兩個輕鏈(L)可變區。術語「抗體」涵蓋抗體的抗原結合片段(如單鏈抗體、Fab片段、F(ab' )2片段、Fd片段、Fv片段、和dAb片段)以及完整抗體，例如完整且未接觸過抗原的(intact)免疫球蛋白，為IgA, IgG, IgE, IgD, IgM類(及其亞類)。免疫球蛋白輕鏈可以是kappa( K )或IambdaO )型。在一個實施方案中，抗體為糖基化抗體。抗體可以在抗體-依賴性細胞毒活性和/或補體介導型細胞毒活性中發揮功能，或者可以在上述一種或全部兩種活性中無功能。VH和VL區還可以進一步細分為，具有高度變異性的區(稱「互補決定區」，「⑶R」)，其間間隔了相對較保守的區(稱「框架區」，FR)。各個FR和各個⑶R的邊界已經清楚界定(見 Kabat, E.A.，et al.(1991) Sqeuences of Proteins of ImmunologicalInterest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, NIHPublication N0.91-3242; and Chothia, C.et al.(1987) J.Mol.Biol.196:901-917)。本文採用Kabat的指定。每一個VH和VL通常由三個⑶R和四個FR組成，它們從氨基端到羧基端按照以下順序排列:FR1，CDR1，FR2, CDR2，FR3, CDR3，FR4。「免疫球蛋白區」是指，免疫球蛋白分子可變區或恆定區的區。免疫球蛋白區通常包含兩個β-摺疊(它們各由約7個β鏈形成)和一個保守二硫鍵(見例如A.F.Williamsand A.N.Barclayl988Ann.Rev Immunol.6:381-405).
本文中，「免疫球蛋白可變區序列」是指，可形成免疫球蛋白可變區結構的胺基酸序列。例如，所述序列可包括天然可變區的全部或部分胺基酸序列。例如，所述序列可省略I個、2個或更多個N -端或C-端胺基酸、內部胺基酸，可包括一或多個插入或額外的末端胺基酸，或者可包括其它改變。在一個實施方案中，含有免疫球蛋白可變區序列的多肽可以另一免疫球蛋白可變區序列結合，形成靶結合結構(或「抗原結合位點」)，例如與VLA-4相互作用的結構。
抗體的VH或VL鏈還可以包括重鏈恆定區或輕鏈恆定區的全部或部分，以分別形成免疫球蛋白重鏈或輕鏈。在一個實施方案中，抗體是具有兩條免疫球蛋白重鏈和兩條免疫球蛋白輕鏈的四聚體。免疫球蛋白重鏈和輕鏈可以經二硫鍵相連。重鏈恆定區一般包括三個恆定區:CH1、CH2和CH3。輕鏈恆定區一般包括CL區。重鏈和輕鏈的可變區包含與抗原相互作用的結合區。抗體恆定區一般介導抗體與宿主組織或因子(包括免疫系統的多種細胞(如效應細胞)和經典補體系統的第一種成分(Clq))的結合。抗體的一或多個區可以人化、有效人化或人源化。例如，一或多個可變區可以人化或有效人化。例如，一或多個 CDR，例如 HC CDRl1HC CDR2, HC CDR3, LC CDRl，LC CDR2,和 LC⑶R3可以人化。每一輕鏈⑶R可以人化。HC⑶R3可以人化。一或多個框架區可以人化，例如此或^:的？1 1，？1 2，？1 3，和FR4。在一個實施方案中，所有框架區都已經人化，例如源自人的體細胞，例如生成免疫球蛋白的造血細胞或非造血細胞。在一個實施方案中，人化序列都是種系(germline)序列，例如由種系核酸編碼的序列。一或多個恆定區可以人化、有效人化或人源化。在另一實施方案中，框架區(如FR1，FR2，和FR3—起，或FR1，FR2，FR3，和FR4 —起)的至少70，75，80, 85，90, 92，95，或98%或整個抗體可以人化、有效人化或人源化。例如，FRl, FR2,和FR3 一起可以至少70，75，80，85，90，92，95，98，或99%與由人的種系節段編碼的人的序列相同。「有效人化」免疫球蛋白可變區是，含有足夠數量的人化框架胺基酸位置、因而在正常人體內不激發免疫應答的免疫球蛋白可變區。「有效人化」抗體是，含有足夠數量的人化框架胺基酸位置、因而不在正常人體內激發免疫應答的抗體。「人化」免疫球蛋白可變區是，經過修飾導致修飾形式比非修飾形式在人體種激發較弱免疫應答的免疫球蛋白可變區，例如其經過修飾含有足夠數量的人化框架胺基酸位置、因而該免疫球蛋白可變區在正常人體內不激發免疫應答。對「人源化」免疫球蛋白的描述包括例如美國專利6，407，213和5，693，762。在一些情況中，人源化免疫球蛋白可以在一或多個框架胺基酸位置包含非人胺基酸。抗體的全部或部分可以由免疫球蛋白基因或其節段編碼。人免疫球蛋白基因例如有 kappa, lambda, alpha (IgAl 和 IgA2), gamma(IgGl, IgG2, IgG3, IgG4), delta, epsilon 和mu恆定區基因，以及眾多的免疫球蛋白可變區基因。全長免疫球蛋白「輕鏈」(約25Kd或214個胺基酸)在NH2-末端(約110個胺基酸)由可變區基因編碼，在COOH-末端由kappa或lambda恆定區基因編碼。同樣，全長免疫球蛋白「重鏈」(約50Kd或446個胺基酸)由可變區基因(約116個胺基酸)和上述其它恆定區基因之一，例如gamma(編碼約330個胺基酸)編碼。術語全長抗體的「抗原結合片段」是指，全長抗體的一或多個保留與目標靶(例如VLA-4)特異性結合的能力的片段。由術語全長抗體的「抗原結合片段」所涵蓋的結合片段的實例包括:(i)Fab片段，是單價片段，由VL，VH，CL和CHl區組成；(ii)F(ab, )2片段，是二價片段，包括兩個經二硫橋在鉸鏈區相連的Fab片段；(iii)Fd片段，由VH和CHl區組成；(iv) Fv片段，由抗體單臂的VL和VH區組成；(V) dAb片段(Ward et al.，(1989)Nature341:544-546)，由VH區組成；和(vi)分離的保留功能的互補決定區(CDR)。此外，儘管Fv片段的VL和VH區分別由不同基因編碼，但可以利用重組方法將它們用合成的連接子連接，使它們能夠形成單鏈蛋白，從而其中的VL和VH區配對形成已知為單鏈Fv (scFv)的單價分子。參見，例如 Bird et al.(1988) Science242:423-426;Huston et al.(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883。發明詳述多發性硬化(MS)是中樞神經系統疾病，特徵是炎症以及損失髓磷脂鞘。此前的研究顯示，用幹擾素β治療多發性硬化後，外周血淋巴細胞表面的VLA-4表達被下調，提示抗-VLA-4抗體和幹擾素β作用於同一途徑(Calabresietal.,Neurology49:1111-1116, 1997)。現在發現，對於曾接受MS療法(優選幹擾素療法)、並證實對該療法反應不足的患者,或者是最初證實對該療法有足夠的反應但後來反應不足的患者，VLA-4結合蛋白(如封閉抗體)可以非常有效地改進他們的狀況。在先的治療本文所述方法 涉及事先曾接受炎性疾病(例如MS)治療(例如試劑)的受試者。優選在先治療試劑是生物試劑，例如重組幹擾素β。這類在先治療的非限制性實例包括:.幹擾素，例如人幹擾素β -la(如AVONEX 或Rebif 』(g))以及幹擾素β -lb(BETASER0N ;在位置 17 有取代的人幹擾素 β ;Berlex/Chiron);.乙酸格拉太咪爾(也稱共聚物(Copolymer) I, Cop-1; COPAXONE ; TevaPharmaceutical Industries, Inc.);.延胡索酸,例如二甲基延胡索酸(如Fumaderm );.Rituxan(J)(利妥昔單抗(rituximab))或另一種抗-⑶20抗體,例如競爭或結合利妥昔單抗的重疊表位的抗體；.米託蒽醌(mixtoxantrone) (N0VANTR0NE Lederle);.化療劑，例如克拉利平(clabribine，LEUSTATIN )，硫唑嘌呤(MURAN )，環磷醯胺(CYT0XAN )，環孢菌素-A,氨甲蝶呤，4-氨基卩比唳，以及替扎尼定(tizanidine);.皮質類固醇，例如甲基強的松龍(MEDR0NE , Pfizer)，強的松； 免疫球蛋白，例如Rituxan (利妥昔單抗)；CTLA4Ig; alemtuzumab (阿侖單抗)(MabCAMPATH )或daclizumab (達利珠單抗)(結合0)25的抗體);.抑制素；.免疫球蛋白G靜脈注射劑(IgGIV)；.硫唑嘌呤；.TNF 拮抗劑。乙酸格拉太咪爾是由胺基酸隨機鏈構成的蛋白-穀氨酸、賴氨酸、丙氨酸和酪氨酸(因此稱GLATiramer)。它可以利用N-羧基胺基酸酐，按照大約5份丙氨酸、3份賴氨酸、
1.5份穀氨酸和I份酪氨酸的比例，在溶液中合成。其它在先試劑包括其它人細胞因子或生長因子的抗體或拮抗劑，所述人細胞因子或生長因子例如 TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12IL-15，IL-16, IL-18, EMAP-1I,GM-CSF, FGF,和 PDGF。第二種試劑的其它實例包括，抗 CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30，⑶40，⑶45，⑶69，⑶80，⑶86，⑶90等細胞表面分子或其配體的抗體。例如，達利珠單抗是可以改進多發性硬化狀況的抗-CD25抗體。其它抗體實例包括，提供本文所述試劑的活性的抗體，例如抗(engage)幹擾素受體，例如幹擾素β受體的抗體。其它在先試劑實例包括:FK506，雷帕黴素(rapamycin)，黴酚酸酯(mycophenolate mofetil),來氟洛米(Ieflunomide),非類固醇抗炎藥(NSAID),如磷酸二酯酶抑制劑，腺苷激動劑，抗血栓形成試劑，補體抑制劑，腎上腺素能(adrenergic)試齊U，幹擾本文所述促炎細胞因子的信號傳遞的試劑，IL-1 β轉化酶抑制劑(如Vx740)，抗-P7，PSGL，TACE抑制劑，T-細胞信號傳遞抑制劑如激酶抑制劑，金屬蛋白酶(metalloproteinase)抑制劑,柳氮磺胺卩比唳(sulfasalazine), azathloprine (硫唑嘌呤)，6_ 巰基嘌呤，血管緊張素(angiotensin)轉化酶抑制劑，可溶性細胞因子受體及其衍生物，如本文所述，抗炎細胞因子(如IL-4，IL-10, IL-13和TGF)。在一些實施方案中，在先試劑已用於治療MS的一或多種症狀或副作用。這類試劑包括，例如金剛燒胺(amantadine)、巴氯芬(baclofen)、帕帕非林(papaverine)、敏可靜(meclizine)、輕嗪(hydroxyzine)、橫胺甲卩惡唑(sulfamethoxazole)、環丙沙星(ciprofloxacin)、多庫酯(docusate)、匹莫林(pemoline)、達者侖(dantrolene)、去氨加壓素(desmopressin)、地塞米松(dexamethasone)、託特羅定(tolterodine)、苯妥英(phenytoin)、奧昔布寧(oxybutynin)、比沙可定(bisacodyl)、萬拉法新(venlafaxine)、阿米替林(amitriptyline)、烏洛託品(methenamine)、氯硝西泮(clonazepam)、帕司煙肼(isoniazid)、伐地那非(vardenafil)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、歐車前親水粘膠(psyllium hydrophilic mucilloid)、前列地爾(alprostadil)、加巴噴丁 (gabapentin)、去甲普林(nortriptyline)、帕羅西汀(paroxetine)、溴丙胺太林(propanthelinebromide)、莫達 非尼(modafinil)、氟西汀(fluoxetine)、非那卩比 P定(phenazopyridine)、甲基強的松龍、卡馬西平(carbamazepine)、丙咪嗪(imipramine)、地西泮(diazepam)、西地那非(sildenafil)、丁氨苯丙酮(bupropion)、和舍曲林(sertraline)。多種小分子在先試劑具有150-5000道爾頓的分子量。TNF拮抗劑的例子包括，嵌合的、人源化的、人化的或體外生成的抗TNF (如人TNF α )抗體(或其抗原結合片段)，諸如D2E7 (人TNF α抗體，美國專利 6，258，562;BASF), CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356(人源化抗-TNFα 抗體；Celltech/Pharmacia)，cA2(嵌合抗-TNFa 抗體；REMICADE , Centocor);抗-TNF抗體片段(如CPD870) ; TNF受體可溶性片段，例如p55或p75人TNF受體或其衍生物，例如 75kdTNFR-1gG(75kD TNF 受體-1gG 融合蛋白，ENBREL ; Immunex;參見，例如 Arthritis&Rheumatism(1994)Vol.37, S295;J.1nvest.Med.(1996)Vol.44, 235A), p55kdTNFR-1gG (55kD TNF 受體-1gG 融合蛋白(LENERCEPT ));酶拮抗劑，例如TNFa轉化酶(TACE)抑制劑(如α-磺醯異輕|虧酸(alpha-sulfonyl hydroxamicacid)衍生物，W001/55112，以及N-羥基甲醯胺TACE抑制劑GW3333, -005，或-022);以及TNF-bp/s-TNFR(可溶性 TNF 結合蛋白；參見，例如 Arthritis&Rheumatism(1996) Vol.39,N0.9 (supplement), S284;Amer.J.Physiol.-Heart and Circulatory Physiology (1995)Vol.268, pp.37-42)。在對幹擾素β療法反應不足的患者中進行VLA-4阻斷療法(如施用VLA-4結合抗體如那他珠單抗)的安全性和有效性表現表明，VLA-4阻斷療法在對其它療法(如其它生物療法)反應不足的患者中進行治療也是有效的。那他珠單抗及其它VLA-4結合抗體那他珠單抗是α 4整聯蛋白結合抗體，它抑制白細胞從血液遷移到中樞神經系統。那他珠單抗與活化T細胞和其它單核白細胞表面的VLA-4結合。它可以破壞T細胞與內皮細胞之間的粘附，從而組織單核白細胞跨過內皮、進入實質(parenchyma)。結果使促炎細胞因子水平也下降。那他珠單抗可以減少復發弛張型多發性硬化和復發性繼發-漸進型多發性硬化患者的腦損傷數和臨床復發次數。本文所述結果表明，那他珠單抗可以安全地施用於已接受在先的幹擾素(例如幹擾素β，如IFN-beta-la)治療的多發性硬化患者。那他珠單抗在對幹擾素β療法反應不足的患者中表現出意想不到的效力。那他珠單抗及相關VLA-4結合抗體在例如美國專利5，840, 299中描述。單克隆抗體21.6和ΗΡ1/2是結合VLA-4的鼠單克隆抗體的例子。那他珠單抗是鼠單克隆抗體
21.6的人源化形式(參見，例如美國專利5，840，299)。另有文獻描述了 ΗΡ1/2的人源化形式(參見，例如美國專利6，602，503)。其它數種結合VLA-4的單克隆抗體，如ΗΡ2/1、ΗΡ2/4、L25 和 P4C2，可參見例如美國專利 6，602，503; Sanchez-Madrid et al.，1986Eur.J.1mmunol., 16:1343-1349;Hemler et al., 1987J.Biol.Chem.2:11478-11485;Issekutzand ffykretowicz, 1991, J.Tmmunol., 147:109(TA~2mab);Pulido et al., 1991J.Biol.Chem.，266(16):10241-10245;美國專利 5，888，507。一些VLA-4結合抗體識別α 4亞基上參與結合關聯配體(如VCAM-1或纖連蛋白)的表位。多個這種抗體抑制VLA-4與關聯配體(如VCAM-1和纖連蛋白)的結合。一些有用的VLA-4結合抗體可以與細胞(例如淋巴細胞)表面VLA-4發生相互作用，但不引起細胞聚集。而另一些VLA-4結合抗體被發現引起這類聚集。ΗΡ1/2不引起細胞聚集。ΗΡ1/2單克隆抗體(Sanchez-Madrid et al.，1986)具有很高的活性，它阻斷VLA-4與VCAMl和纖連蛋白兩者的相互作用，並對VLA-4表面的表位B具有特異性。該抗體及其它B表位特異性抗體(如BI或B2表位結合抗體；Pulido et al.，1991，出處同上)代表了一類可用於本文所述方法中的VLA-4結合抗體。競爭與VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)的結合的抗體也可以用於本文所述方法中。一例VLA-4結合抗體具有本文所述具體抗體的一或多個⑶R，例如全部三個HC⑶R和/或全部三個LC⑶R，或具有與這種抗體(例如那他珠單抗)總體上至少80，85，90，92，94，95，96，97，98，99%相同的CDR0在一個實施方案中，Hl和H2超變環具有與本文所述抗體的超變環相同的典型結構(canonical structure)。在一個實施方案中，LI和L2超變環具有與本文所述抗體的超變環相同的典型結構。在一個實施方案中，HC和/或LC可變區的胺基酸序列至少70，80，85，90，92，95，97，98，99，或100%與本文所述抗體(例如那他珠單抗)的HC和/或LC可變區的胺基酸序列相同。HC和/或LC可變區的胺基酸序列可以有至少一個胺基酸、但最多不超過10、8、6、5、4、3、或2個胺基酸不同於本文所述抗體(例如那他珠單抗)的相應序列。例如，這種差別可以主要或全部位於框架區。HC和LC可變區的胺基酸序列，可以由在嚴格條件下與本文所述核酸序列雜交的核酸序列編碼，或者由編碼本文所述可變區或胺基酸序列的核酸序列編碼。在一個實施方案中，HC和/或LC可變區的一或多個框架區(如FR1，FR2, FR3和/或FR4)的胺基酸序列有至少70，80，85，90，92，95，97，98，99，或100%與本文所述抗體的HC和LC可變區的相應框架區相同。在一個實施方案中，一或多個重鏈或輕鏈框架區(如HC FR1，FR2和FR3)有至少70，80，85，90，95，96，97，98，或100%與人種系抗體的相應框架區序列相同。兩個序列之間的「同源性」或「序列同一性」(這兩個術語在本文中可互換使用)如下計算。對序列按照最佳比較的目的進行比對(如，為了進行最佳比對，可以在兩個胺基酸序列或核酸序列之一或兩者中引入空隙；為了進行比較，可以忽略非同源序列)。最佳比對用GCG軟體包中的GAP程序評出的最佳分值來確定，在該GAP程序中，使用Blossum62評分矩陣，空隙罰分為12,空隙延伸罰分為4,移碼空隙罰分(frameshift gap penalty)為5。然後比較相應胺基酸位置或核苷酸位置的胺基酸殘基或核苷酸。當第一個序列中的一個位置與第二個序列中的相應位置被相同的胺基酸殘基或核苷酸佔據時，這兩個分子在該位置是相同的(本文中，胺基酸或核酸「同一性」等同於胺基酸或核酸「同源性」)。兩個序列之間的同一性百分比是這兩 個序列所共有的相同位置的數量的函數。本文中術語「在嚴格條件下雜交」是指雜交和洗滌條件。雜交反應可參照CurrentProtocols in Molecular Biology, John ffiley&Sons, N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6進行，其全文引入本文作參考。該文獻中描述了水性(aqueous)和非水性(nonaqueous)的方法,它們都可以被採用。高度嚴格雜交條件包括，在6X SSC、約45°C雜交，然後在0.2X SSC、0.1%SDS、65°C洗一或多次，或者採用基本相似的條件。抗.體牛.成(Antibody Generation)與VLA-4結合的抗體可以通過對例如動物免疫而生成，或通過噬菌體展示等體外方法生成。VLA-4的全部或一部分可以用作免疫原。例如，可以用α 4亞基的胞外區作免疫原。在一個實施方案中，經免疫的動物含有產生免疫球蛋白的細胞，這些細胞具有天然的、人化的或部分人化的免疫球蛋白基因座。在一個實施方案中，所述非人動物具有人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如，可以用人Ig基因座的大片段對抗體生成有缺陷的小鼠品系進行改造。可以用雜交瘤技術從具有所需特異性的基因生成並篩選出抗原特異性單克隆抗體。參見，例如 XenoMouse ，Green et al., Nature Genetics7:13-21 (1994)，US2003-0070185,美國專利 5，789，650，以及 W096/34096。還可以產生抗VLA-4的非人抗體，例如嚙齒類抗體。可以將這種非人抗體人源化，例如參見美國專利6，602，503，EP239400,美國專利5，693，761，和美國專利6，407，213。EP239400 (Winter et al.)描述了通過將一個物種的抗體的互補決定區(CDR)用另一物種的CDR取代，從而改變(在指定的可變區改變)抗體的方法。CDR-取代型抗體比真正的嵌合抗體較少激發人的免疫應答，因為CDR-取代型抗體中的非人成分很少(Riechmann et al., 1988, Nature332, 323-327;Verhoeyen etal.，1988，Science239, 1534-1536)。通常利用重組核酸技術，將鼠抗體的⑶R取代為人抗體的相應區，產生編碼所需取代型抗體的序列。可以添加具有所需獨特型的人恆定區基因節段(通常是CH的gamma I和CL的kappa)，並使人源化的重鏈基因和輕鏈基因在哺乳動物細胞中一起表達，從而產生可溶性人源化抗體。Queen et al.(Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:10029-33, 1989)和 W090/07861描述了一種方法，其包括，通過利用計算機分析與原始鼠抗體的V區框架的最佳蛋白序列同源性，來選擇人V區框架區，並建立鼠V區的三級結構，從而顯示出很可能與鼠CDR相互作用的框架胺基酸殘基。然後將這些鼠胺基酸殘基置於同源人框架之上。也參美國專利 5, 693, 762; 5, 693, 761; 5, 585, 089;和 5,530,101。Tempest etal.，1991，Biotechnology9:266-271利用分別源自NEWM和REI重鏈和輕鏈的V區框架作為標準，在不引進鼠殘基的情況下，進行⑶R-移植。用Tempest et al.方法構建基於NEWM和REI的人源化抗體的一個好處在於，NEWM和REI的可變區的三維結構已通過X-線晶體成像技術弄清楚了，因而可以針對CDR和V區框架殘基之間的特異性相互作用建立模型。非人抗體可以經過修飾而包括插入人免疫球蛋白序列的取代，例如在具體位置的共有的人胺基酸殘基，例如以下一或多個(優選至少5，10，12，或全部)位置:(在輕鏈可變區的 FR 中)4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L,和 / 或(在重鏈可變區的 FR 中)2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 70H, 73H, 74H, 75H, 78H, 91H, 92H, 93H,和 / 或 103H(遵循 Kabat編號)。參見，例如美國專利6，407，213。與VLA-4結合的完全的人單克隆抗體可以利用例如體外刺激(invitro-primed)的人脾細胞來製備，參見Boerner et al.，1991，J.1mmunol.，147，86-95。它們可以通過所有組分克隆(repertoire cloning)來製備，參見 Persson et al., 1991, Proc.Nat.Acad.Sc1.USA, 88:2432-2436 或 Huang and Stollar, 1991, J.1mmunol.Methodsl41, 227-236;以及美國專利5，798，230。大型非致敏人噬菌體展示文庫也可以用於分離高親和力抗體，將它們研發為人類治療劑，這可以利用標準噬菌體技術(參見，例如Vaughan etal, 1996;Hoogenboom et al.(1998)Immunotechnology4:1-20;Hoogenboom et al.(2000)Immunol Today 2:371-8;US2003-0232333)。抗.體製備(Antibody Production)
抗體可以在原核細胞和真核細胞中產生。在一個實施方案中，抗體(如scFv)在畢赤酵母(Pichia)(參見，例如Powers et al.(2001) J Tmmunol Methods.251:123-35)、漢遜酵母(Hanseula)或糖酵母(Saccharomyces)等酵母細胞中表達。在一個實施方案中，抗體，尤其是全長抗體，例如IgG，在哺乳動物細胞中表達。用於重組表達的哺乳動物宿主細胞例如有，中國倉鼠卵巢(CH0細胞)(包括dhfr-CHO細胞，見Urlaub and Chasin (1980) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA77:4216-4220，使用 DHFR選擇標記，例如見 Kaufman and Sharp (1982) Mol.Biol.159:601-621)、淋巴細胞系例如 NSO 骨髓瘤細胞和SP2細胞、COS細胞、K562、以及轉基因動物(例如轉基因哺乳動物)的細胞。例如，所述細胞是哺乳動物上皮細胞。重組表達載體除了攜帶編碼免疫球蛋白區的核酸序列，還可以攜帶其它核酸序列，如調節該載體在宿主細胞中的複製的序列(如複製起點)和選擇標記基因。選擇標記基因有利於選出引入了所述載體的宿主細胞(參見，例如美國專利4，399，216，4，634，665和5，179，017)。選擇標記基因例如有，二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(其利用氨甲蝶呤選擇/擴增dhfr-宿主細胞)和neo基因(其用於G418篩選)。在一例抗體(如全長抗體或其抗原結合部分)重組表達系統中，將編碼抗體重鏈和抗體輕鏈兩者的重組表達載體，通過磷酸鈣介導的轉染，引入dhfr-CHO細胞。在該重組表達載體中，抗體的重鏈和輕鏈基因各自與增強子/啟動子調節元件(如源自SV40、CMV、腺病毒等，諸如CMV增強子/AdMLP啟動子調節元件或SV40增強子/AdMLP啟動子調節元件)可操作相連，以便驅動所述基因的高水平轉錄。所述重組表達載體還可以攜帶DHFR基因，其允許用氨甲蝶呤選擇/擴增轉染了所述載體的dhfr-宿主細胞。對選出的轉化宿主細胞進行培養，使之表達抗體重鏈和輕鏈，並從培養基中回收完整抗體。用標準分子生物學技術製備所述重組表達載體，來轉染宿主細胞，選出轉化體，培養宿主細胞，並從培養基中回收抗體。例如，一些抗體可以利用蛋白A或蛋白G通過親和層析進行分離。抗體還可以包含修飾，例如改變Fe功能的修飾，從而例如減弱或消除與Fe受體和/或與Clq的相互作用。例如，人IgGl恆定區可以突變一或多個殘基，例如殘基234和237的一或多個，編號例如見美國專利5，648，260。其它修飾例子可參見美國專利5，648，260。對於一些含Fe區的抗體，可以設計抗體製備系統，來合成含糖基化Fe區的抗體。例如，IgG分子的Fe區在CH2區的天冬醯氨297處糖基化。該天冬醯氨是用雙觸角型寡糖(biantennary-type oligosaccharide)進行修飾的位置。這種糖基化參與Fe受體和補體 Clq 所介導的效應器功能(Burton and Woof (1992) Adv.1mmunol.51:1-84; Jefferis etal.(1998) Immunol.Rev.163:59-76)。Fe區可以在哺乳動物表達系統中產生，從而使對應於天冬醯氨297的殘基適當糖基化。Fe區也可以包含其它的真核細胞翻譯後修飾。抗體也可以由轉基因動物產生。例如，美國專利5，849，992描述了在哺乳動物乳腺中表達抗體的方法 。構建轉基因，使其含有乳特異性啟動子和編碼目標抗體(如本文所述抗體)的核酸序列，以及分泌所需的信號序列。由這類轉基因哺乳動物中的雌性動物產出的乳汁含有分泌至其中的目標抗體，例如本文所述抗體。所述抗體可以從乳汁中純化出來，或在一些應用中，不經純化而直接使用。抗體還可以用例如改進其在循環(如血液、血清、淋巴)、支氣管肺泡灌洗液或其它組織中的穩定性和/或滯留時間的組分(moiety)進行修飾，所述改進例如是改進至少1.5、2，5、10、或 50 倍。例如，VLA-4結合抗體可以與聚合物結合，所述聚合物例如基本上無抗原性的聚合物，如聚環氧燒烴(polyalkylene oxide)或聚環氧乙燒(polyethylene oxide)。合適的聚合物分子量可以差別很大。可以採用分子量平均約200-約35，000道爾頓(或約1，000_約15，000、以及2，000-約12，500)的聚合物。例如，VLA-4結合抗體可以與水溶性聚合物偶聯，所述聚合物例如親水聚乙烯聚合物，如聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。這類聚合物的非限制性例子有，聚環氧烷烴均聚物如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇(polyoxyethylenated polyols)、它們的共聚物和嵌段共聚物，只要所述嵌段共聚物維持水溶性即可。其它可用的聚合物包括，聚氧化烯(polyoxyalkylenes)如聚氧化乙烯(polyoxyethylene)、聚氧化丙烯(polyoxypropylene)、以及聚氧化乙烯和聚氧化丙烯的嵌段共聚物(Pluronics);聚甲基丙烯酸酯(polymethacrylates);丙烯酸共聚物(carbomer);含有以下單糖的分支或非分支多糖:D_甘露糖、D-及L-半乳糖、巖藻糖(fucose)、果糖、D-木糖(xylose)、L-阿拉伯糖、D-葡糖醒酸(glucuronic acid)、唾液酸(sialic acid)、D_半乳糖醒酸(galacturonicacid)、D-甘露糖醒酸(mannuronic acid)(如聚甘露糖醒酸或藻酸(alginic acid))、D_葡糖胺(glucosamine)、D-半乳糖胺(galactosamine)、D-葡萄糖和神經氨酸(neuraminicacid)包括同多糖(homopolysaccharide)和雜多糖(heteropolysaccharide)如乳糖、支鏈澱粉(amylopectin)、澱粉(starch)、輕乙基澱粉、直鏈澱粉(amylose)、硫酸葡聚糖(dextrane sulfate)、葡聚糖(dextran)、糊精(dextrin S)、糖原(glycogen)、或酸性粘多糖(acid mucopolysaccharide)的多糖亞基，如透明質酸(hyaluronic acid);糖醇聚合物如聚山梨糖醇(polysorbitol)和聚甘露糖醇(po lymanni to I);肝素(heparin)或heparon。藥物糹目合物VLA-4結合試劑，如VLA-4結合抗體(如那他珠單抗)可以配製成藥物組合物。藥物組合物通常含有可藥用載體。本文中「可藥用載體」包括所有任何溶劑、分散介質(dispersion media)、包衣(coating)、抗細菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑、以及其它生理相容性試劑。「可藥用鹽」是指，保留本發明化合物的所需活性且不引起任何不良毒性的鹽(參見，例如 Berge，S.M.，et al.(1977) J.Pharm.Sc1.66:1-19)。這樣的鹽例如有，酸加成鹽和鹼加成鹽。酸加成鹽包括，由無毒性無機酸和無毒性有機酸衍生的鹽，所述無機酸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸(sulfuric acid)、氫溴酸、氫碘酸等，所述有機酸如脂肪族一羧酸和二羧酸(aliphatic mono-and dicarboxylic acid)、苯基取代的鏈燒酸(phenyl-substituted alkanoic acid)、輕基鏈燒酸、芳香酸(aromatic acid)、脂肪族和芳香族磺酸(aliphatic and aromatic sulfonic acid)等。鹼加成鹽包括，由鹼土金屬和無毒性有機胺衍生的鹽，所述鹼土金屬如鈉、鉀、鎂、鈣等，所述有機胺如N，N' -二節基乙二胺(dibenzylethylenediamine)、N_ 甲基還原葡糖胺(methylglucamine)、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽喊(choline)、二乙醇胺(diethanolamine)、乙二胺(ethylenediamine),普魯卡因(procaine)等。

那他珠單抗及本文所述其它試劑可按標準方法配製。藥物配製使本領域很成熟的技術，可參見 Gennaro (ed.)，Remington:The Science and Practice ofPharmacy, 20th ed.,Lippincott, ffilliams&ffilkins(2000)(ISBN:0683306472) ; Ansel etal., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed.., Lippincottffilliams&ffilkins Publishers (1999)(ISBN:0683305727);and Kibbe(ed.), Handbook ofPharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3rd ed.(2000)(ISBN:091733096X)。在一個實施方案中，那他珠單抗或另一種試劑(如另一種抗體)可以與賦形劑物質一起配製，所述賦形劑物質如氯化鈉、七水磷酸氫二鈉(sodium dibasic phosphateheptahydrate)、憐酸二氫鈉(sodium monobasic phosphate)、以及 polysorbate80。它可以是例如緩衝溶液中約20mg/ml的濃度，並可以貯存在2_8°C。那他珠單抗可以按產品標籤所注進行配製。藥物組合物還可以是多種其它形式。例如,液體、半固體及固體劑型,如溶液(如注射液和灌注液)、分散體(dispersion)或懸浮液(suspension)、片劑、丸劑、粉劑、脂質體和栓劑。優選形式可以取決於用藥模式和治療目的。通常，本文所述試劑的組合物採用注射液或灌注液的形式。所述組合物可以經非胃腸道途徑施用(如靜脈、皮下、腹腔、或肌肉注射)。術語「非胃腸道施用」在本文中是指，除了腸道使用和局部表面使用以外的施用模式，通常經注射而施用，包括但不限於經以下模式注射和輸注:靜脈內(intravenous)、肌肉內(intramuscular)、動脈內(intraarterial)、鞘內(intrathecal)、囊內(intracapsular)、眼眶內(intraorbital)、心內(intracardiac)、皮內(intradermal)、腹腔(intraperitoneal)、經氣管(transtracheal)、皮下(subcutaneous)、表皮下(subcuticular)、關節內(intraarticular)、被膜下(subcapsular)、蛛網膜下(subarachnoid)、脊柱內(intraspinal)、硬膜外(epidural)以及胸骨內(intrasternal)。藥物組合物通常必須是無菌的，且在製備和貯存條件下保持穩定。也可以對藥物組合物進行測試，以確保它符合用藥規定和行業標準。可以將組合物配製成溶液、微乳液、分散體、脂質體或其它適於藥物高濃度的有序結構。將需要量的本文所述試劑，與所需的一或多種上文所列的成分一起，摻入合適的溶劑中，再過濾除菌，可以 製得無菌注射液。通常，將本文所述試劑和上文所列的所需其它成分一起，摻入含有基本分散介質的無菌媒介物(vehicle)中，可製得分散體。在製備無菌注射液所用的無菌粉末的情況下，優選的製備方法是真空乾燥和凍幹，產生本文所述試劑的粉末外加任何來自事先經過過濾除菌的本文所述試劑的溶液的所需成分。溶液的適當流動性(proper fluidity)可以通過以下方法維持,例如，利用卵磷脂之類的包衣、在分散體的情況下維持所需的粒徑(particle size)、以及利用表明活性劑。注射液通過在組合物中包含硬脂酸鹽和明膠之類的延遲吸收劑，可延長吸收時間。

MMVLA-4結合抗體可以經多種方法對受試者(例如人類受試者)用藥。在多種應用中，用藥途徑是以下之一:靜脈注射或輸注、皮下注射、或肌肉注射。VLA-4結合抗體(如那他珠單抗)可以按固定劑量施用，或者按mg/kg劑量施用，但優選按固定劑量施用。所述抗體可以靜脈(IV)或皮下(SC)施用。所述抗體(例如那他珠單抗)通常按50_1000mg IV，例如100_600mg IV，例如約300mg IV的固定單位劑量(fixed unit dose)施用。可以每4周施用一個單位劑量,或採用更高或更低的頻率，例如每2周一次或每周一次。當皮下施用時，所述抗體通常按50-100mgSC(如75mg)的劑量施用例如至少一周一次(如一周兩次)。也可以按l_10mg/kg(例如約
6.0, 4.0, 3.0, 2.0, 1.0mg/kg)的劑量以快速輸注(bolus)的形式施用。在以下情況下,可以進行連續用藥，例如經皮下泵進行連續用藥。也可以選用減少或避免抗VLA-4結合抗體的抗體生成的劑量，以實現α 4亞基的40，50, 70, 75，或80%以上飽和度，或實現α 4亞基的80，70, 60, 50,或40%以下飽和度，或
阻止循環白細胞量增加。在一些實施方案中，活性試劑可以與保護該化合物免於快速釋放的載體(carrier) 一起配製，如成為控釋配製劑(包括植入體(implant))和微囊遞送體系(microencapsulated delivery system)。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙酯(ethylene vinyl acetate)、聚酸酐(polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、膠原(collagen)、聚原酸酯(polyorthoester)和聚乳酸(polylactic acid)。製備這類配製劑的多種方法有專利或者是眾所周知的。參見,例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R.Robinson, ed., MarcelDekkerj Inc.，New York, 1978。藥物組合物可以利用醫療設備進行施用。例如，藥物組合物可以用無針式皮下注射設備(needleless hypodermic injection device)進行施用，所述設備參見例如美國專利 5，399，163，5，383，851，5，312，335，5，064，413，4，941，880，4，790，824 或 4，596，556。眾所周知的植入體和模塊(module)有:美國專利4，487，603公開了一種可植入的顯微-輸注泵，用於以控制速率分配(dispensing)藥物；美國專利4，486，194公開了一種治療設備,用於穿過皮膚施用藥物；美國專利4，447，233公開了一種藥物輸注泵，用於以精確的輸注速率遞送藥物；美國專利4，447，224公開了一種可變流植入型輸注裝置，用於連續遞送藥物；美國專利4,439，196公開了一種滲透型藥物遞送體系，其具有多室隔間(mult1-chambercompartment);美國專利4，475，196公開了一種滲透型藥物遞送體系。當然，另有多種這類植入體、遞送體系和模塊也是本領域已知的。本文中，單位劑型(Dosage unit form)或「固定劑量(fixed dose)」是指物理離散單位，是適合對受治受試者施用的單次藥劑(unitary dosage);每一單位含有預定量的活性化合物和所需的藥用載體，還可以任選含有其它試劑，所述活性化合物的預定量是經過計算可以產生所需治療效應的量。藥物組合物可以包含「治療有效量」的本文所述試劑。試劑的治療有效量也可以因個體的疾病狀態、年齡、性別、體重，以及該化合物在該個體體內激發所需反應的能力而有不同，所述能力例如改進至少一個疾病參數，例如多發性硬化參數，或改進該疾病(例如多發性硬化)的至少一種症狀。治療有效量也可以是治療有益效果超過該組合物的任何毒副作用或有害作用的量。多發性硬化多發性硬化(MS)是中樞神經系統疾病，其特徵是炎症以及髓磷脂鞘的損失。MS患者可以 通過MS臨床確診的已有標準來鑑別，該標準由MS診斷的專題研究小組(the workshop on the diagnosis of MS)制定(Poser et al., Ann.Neurol.13:227, 1983)。簡言之，臨床確診的MS患者有兩處發作(attack)，還有任兩處損傷的臨床症狀或一處損傷的臨床症狀以及除這兩處以外的另一損傷的亞臨床症狀。MS還可以通過兩處發作的證據以及腦脊液中IgG的單一克隆帶(clonal band)來確診,或者通過將發作、兩處損傷的臨床證據、以及腦脊液IgG單一克隆帶這三者綜合來確診。也可以用McDonald 標準診斷 MS (McDonald et al., 2001, Recommended diagnostic criteria formultiple sclerosis:guidelines from the International Panel on the Diagnosis ofmultiple sclerosis, Ann Neurol50:121-127)。McDonald 標準包括,在無多處臨床發作的情況下，使用用於診斷MS的一段時間內CNS損傷的MRI證據。多發性硬化的有效治療可以用多種不同方法評估。可以用以下參數量化療效。兩個示例性標準包括=EDSS(殘疾狀況拓展量化表(extended disability status scale)),以及MRI (磁共振成像)所示加重表現。EDSS是對MS所致臨床損傷分級的一種工具(Kurtzke, Neurology33:1444，1983)。對8個功能系統進行評估，以考查神經損傷的類型和嚴重程度。簡言之，在治療之前，對患者以下系統的損傷進行評估:錐體(pyramidal)、小腦(cerebella)、腦幹(brainstem)、感覺(sensory)、腸和膀胱(bowel and bladder)、視覺(visual)、大腦(cerebral)及其它。定期隨訪。評分從O (正常)至10 (因MS致死)。降一整級(A decrease of one full step)表示有效治療(Kurtzke, Ann.Neurol.36:573-79，1994)。加重是指，出現MS引起的新症狀，並伴有相應的新的神經異常(IFNBMS StudyGroup,出處同上)。此外，加重必需持續至少24小時且之前穩定或改進至少30天。簡言之，由臨床醫師對患者進行標準神經學檢查。加重依據神經學等級評分(NeurologicalRating Scale)的變化可以分為輕度(mild)、中度(moderate)、或重度(severe) (Sipe etal.，Neurology34:1368, 1984)。另外還測定年度加重率和無加重患者比例。當治療組和安慰劑組經過上述任一測量發現，無加重或無復發患者比例有統計學顯著性差異，可認為治療有效。另外還可以測量第一次加重的時刻、加重總時間(duration)以及嚴重程度。在這一方面，治療有效是指，治療組第一次加重的時刻、或總時間以及嚴重程度比對照組有統計學顯著性差異。無加重或無復發的階段超過I年、18個月、或20個月尤其值得注意。臨床測量包括:間隔I年或2年的復發率、以及EDSS的改變,後者包括從持續6個月的EDSS基線水平1.0個單位進展的時間。在Kaplan-Meier曲線中，持續進行性殘疾延遲表示有效。其它標準包括，MRI T2成像的面積和體積的變化，以及由釓增強型成像(gadolinium enhanced image)所測定的損傷數和損傷體積的變化。MRI可以用於，利用禮-DTPA-增強型成像測量活動性損傷(active lesion)(McDonald et al.，Ann.Neurol.36:14，1994),或利用 T2_weighted 技術測量損傷的位置和範圍(extent)。簡言之，獲得基線MRI。每一輪後續研究採用同一成像平面(imagingplane)和患者部位(patient position)。可以選擇定位和成像順序(positioning andimaging sequence),從而最大程度檢測損傷(maximize lesion detection)並促進對損傷的顯跡(lesion tracing)。後續研究可以採用同一定位和成像順序。MS的存在、位置和範圍可以由放射學專業人員確定。可以劃處損傷面積的輪廓，將各部分總計，獲得損傷總面積。可以進行三項分析:新損傷證據、活動性損傷出現率、損傷面積的百分比變化(Paty etal.，Neurology43:665, 1993)。患者個體相對於基線水平或治療組相對於安慰劑組有統計學顯著性改進，可以確定治療導致改進。與多發性硬化有關、可以用本文所述方法治療的正組例如有:視神經炎(opticneuritis)、復視(diplopia)、眼球震顫(nystagmus)、視辨距不良(ocular dysmetria)、核間性眼肌癱瘓(internuclear ophthalmoplegia)、移動和聲音幻覺(movement and soundphosphenes)、相對傳入性瞳孔障礙(afferent pupillary defect)、輕癱(paresis)、單肢輕癱(monoparesis)、下肢輕癱(paraparesis)、輕偏癱(hemiparesis)、quadraparesis、麻痺(plegia)、下身麻痺(paraplegia)、半身不遂(hemiplegia)、四肢麻痺(tetraplegia)、quadraplegia、強直(spasticity)、構音困難(dysarthria)、肌肉萎縮(muscle atrophy) >0.攣(spasms)、痛性疫攣(cramps)、張力過低(hypotonia)、陣攣(clonus)、肌陣攣(myoclonus)、肌纖維顫搐(myokymia)、腿多動綜合症(restless leg syndrome)、足下垂(footdrop)、功能不良性反射(dysfunctional reflexes)、下身感覺缺失(paraesthesia)、麻木(anaesthesia)、神經痛(neuralgia)、神經病性痛和神經原性痛(neuropathic andneurogenic pain) > I' hermitte' s、本體感受障石尋(proprioceptive dysfunction)、三叉神經痛(trigemina l neuralgia)、共濟失調(ataxia)、意向震顫(intention tremor) >辨距困難(dysmetria)、前庭性共濟失調(vestibular ataxia)、眩暈(vertigo)、speechataxia、張力失常(dystonia)、輪替運動障礙(dysdiadochokinesia)、尿頻(frequentmicturation)、膀胱疫攣(bladder spasticity)、膀胱弛緩(flaccid bladder)、逼肌括約肌協同動作障礙(detrusor-sphincter dyssynergia)、勃起障礙(erectiledysfunction)、性感缺失(anorgasmy)、性冷淡(frigidity)、便秘(constipation)、便急(fecal urgency)、大便失禁(fecal incontinence)、抑鬱(depression)、認知障礙(cognitive dysfunction)、痴呆(dementia)、情緒波動(mood swings)、情緒不穩定(emotional lability)、欣快(euphoria)、兩極綜合症(bipolar syndrome)、焦慮(anxiety)、失語(aphasia)、言語困難(dysphasia)、疲勞(fatigue)、uhthoff 綜合症、胃食管反流(gastroesophageal ref lux)、以及睡眠障礙。每一例MS顯不出表現及後續過程(presentation and subsequent course)的多種模式中的一種。最常見，MS首先表現為一系列發作，隨後完全或部分消失，因為症狀神秘減少，僅在一段穩定期後再出現。這稱為復發-弛張型(RR)MS。原發-漸進型(PP)MS的特徵是，逐漸的臨床衰退，無明顯消除跡象，但症狀有短暫的平臺期或略有緩解。繼發-漸進型(SP)MS是以復發-弛張過程開始、隨後是原發-漸進過程。在較少病例中，患者可能有漸進-復發(PR)過程，其疾病持續發展並不斷被急性發作打斷。PP、SP、和PR在有些病例中集中表現,稱慢性漸進型MS。少數患者出現惡性MS,特徵是持續快速衰退(swift and relentless decline),導致明顯殘疾或甚至在生病不久就死亡。施用本文所述聯合療法，可以阻止或減慢這種衰退。除了對人的研究，或者在對人進行研究之前，可以用動物模型評價治療效力。多發性硬化動物模型例如有，實驗型自身免疫性腦炎(EAE)小鼠模型，例如參見 Tuohy et al.(J.1mmunol.(1988) 141:1126-1130)，Sobel et al.(J.1mmunol.(1984) 132:2393-2401)，and Traugott (Cell Immunol.(1989) 119:114-129。可以在誘導EAE之前，對小鼠施用本文所述試劑。 然後，評價小鼠的特徵性標準，以確定在該模型中施用所述試劑的效力。其它疾病本文所述方法也可以用於治療已表現出對幹擾素療法反應不足的患者中的其它炎性疾病、免疫疾病、或自身免疫病。這類疾病包括，例如中樞神經系統炎症(如除了多發性硬化以外，腦炎(meningitis)、視神經脊髓炎(neuromyelitis optica)、神經肉樣瘤病(neurosarcoidosis) > CNS 脈管炎(vasculitis)、腦炎(encephalitis)、和橫貫性脊髓炎(transverse myelitis));組織或器官移植物排斥或移植物抗宿主疾病；急性CNS損傷,例如中風(stroke)或脊髓損傷(spinal cord injury);慢性腎病(chronic renal disease)；變態反應(allergy),例如變態反應性哮喘(allergic asthma) ;1型糖尿病；炎性腸疾病，例如 Crohn 病、潰瘍性腸炎(ulcerative colitis);重症肌無力(myasthenia gravis)；肌纖維痛(fibromyalgia);關節炎性疾病(arthritic disorder),例如類風溼性關節炎、銀屑病關節炎(psoriatic arthritis);炎性/免疫性皮膚病，例如銀屑病(psoriasis)、白癜風(vitiligo)、皮炎(dermatitis)、扁平苔癬(lichen planus);系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus);乾燥綜合症(Sjogren，sSyndrome);血液學癌症(hematological cancers),例如多發性骨髓瘤(multiple myeloma)、白血病(leukemia)、淋巴瘤(lymphoma);實體癌，例如肉瘤(sarcomas)或腺癌(carcinoma),如肺、乳腺、前列腺以及腦部的癌；纖維化(fibrotic)疾病，例如肺纖維化(pulmonary fibrosis)、肌纖維化(myelofibrosis)、肝硬化(liver cirrhosis)、腎小球膜增生性腎小球腎炎(mesangial proliferative glomerulonephritis)、新月體性腎小球腎炎(crescenticglomerulonephritis)、糖尿病性腎病(diabetic nephropathy)、以及腎間質纖維化(renalinterstitial fibrosis)。例如，可以施用VLA-4結合試劑(如VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗))，來治療這些或其它炎性疾病、免疫病、或自身免疫病，例如對另一種或多種試劑，如本文所述一或多種試劑反應不足的疾病。試齊Il倉(kit)可以用試劑盒形式提供VLA-4結合試劑(如那他珠單抗)。在一個實施方案中，所述試劑盒包括(a)裝有組合物的容器，所述組合物含有VLA-4結合試劑(如那他珠單抗)，還可以含有(b)信息物質(informational material)。所述信息物質可以是描述性質(descriptive)、建議性質(instructional)、商品廣告性質(marketing)或其它性質的物質，它們與本文所述方法和/或使用所述試劑的治療益處有關。試劑盒中的信息物質其形式不限。在一個實施方案中，所述信息物質包含關於該化合物的製備、該化合物的分子量、濃度、有效期、批號或生產地信息等等的信息。在一個實施方案中，所述信息物質涉及施用VLA-4結合試劑的方法，例如合適的用量、施用方式(manner)、或模式(mode)(如本文所述劑量(dose)、劑型(dosage form)、或施用模式)。所述方法可以是治療多發性硬化的方法，例如在已接受幹擾素β治療的患者中治療多發性硬化的方法。

試劑盒中的信息物質其形式不限。在多種情況中，所述信息物質，如說明書(instructions),為印刷體(printed matter),如印刷的文字(text)、圖(drawing)和 /或照片(photograph),例如標籤(label)或印刷的傳單(printed sheet)。但所述信息物質也可以是其它形式，如盲文(Braille)、計算機可讀形式、視頻、或聲頻形式。在另一實施方案中，試劑盒中的信息物質是聯絡信息，例如物理地址(physical address)、電子郵件地址、網址、或電話號碼，使試劑盒的用戶可以從中獲得關於本文所述試劑和/或本文所述該試劑的用途的實質信息。當然，所述信息物質也可以是多種形式的任意組合。試劑盒的組合物中，除了含有VLA-4結合試劑，還可以含有其它成分，如溶劑或緩衝液、穩定劑、或保存劑(preservative)。所述試劑盒還可以包含其它試劑,例如第二種或第三種試劑，例如其它治療試劑。這些試劑可以為任何形式，例如液體、乾燥形式或凍幹形式。優選所述試劑是基本純(但它們可以混合在一起或彼此分開遞送)和/或無菌的。當所述試劑為溶液時，該溶液優選是含水溶液，優選無菌含水溶液。當所述試劑為乾燥形式時，一般加入合適的溶劑來重建。所述溶劑，例如無菌水或緩衝液，可以選擇包含在試劑盒中。所述試劑盒可以包括一或多個容器，其中裝有一或多種含所述試劑的組合物。在一些實施方案中，所述試劑盒包括相互分隔的容器、分隔體(divider)或分隔室(compartment),用於裝載組合物和信息物質。例如，可以將組合物裝在大瓶(bottle)、小瓶(vial)或注射器(syringe)中，將信息物質裝在塑料套或袋中。在其它實施方案中，將試劑盒的不同組件裝在一個不分隔的容器中。例如，將組合物裝在大瓶、小瓶或注射器中，而所述大瓶、小瓶或注射器上貼有標籤形式的信息物質。在一些實施方案中，試劑盒包括一組(如一整包)容器，其中每一容器裝有一或多個單位劑型(如本文所述劑型)的所述試齊U。所述容器可以包括一個單位劑(unit dosage),例如一個含有VLA-4結合試劑的單位。例如，所述試劑盒包括一組注射器、安瓿(ampules)、箔袋(foil packet)、帶氣泡的包裝袋(blister pack)、或醫療裝置(medical devices),例如每一個都容納一個單位劑。試劑盒中的這些容器可以是隔絕空氣的(air tight)、防水的(waterproof)(如溼度或蒸發引起的變化都無法透過)、和/或避光的(light-tight)。所述試劑盒還可以選擇含有適於施用所述組合物的裝置，例如注射器或其它合適的遞送裝置。所述裝置可以預裝VLA-4結合試劑，例如一個單位劑，或者也可以是空的但適於裝載試劑。本文中出現的所有文獻和出版物都引入本文作參考。以下實施例無意進行任何限制。
實施例實施例1 - AFFIRM 和 SENTINEL 研究AFFIRM 和 SENTINEL 研究(Rudick et al.，2003，Neurology60Supp.1:A479)在第13個月的臨床終點分別見表I和2。表I
權利要求
1.治療患有炎性疾病並對第一種試劑反應不足的受試者的方法，所述方法包括對該受試者施用VLA-4結合蛋白，其施用量和施用時間致使足以治療所述疾病，其中當所述第一種試劑在該受試者體內未達到治療性水平時，所述VLA-4結合蛋白施用至少一次。
2.權利要求1的方法，其中所述反應不足包括低於預定反應水平。
3.權利要求1的方法，其中所述反應不足包括第一種試劑引起的副反應或對第一種試劑發生不能耐受的毒性反應。
4.權利要求1的方法，其中所述炎性疾病對所述第一種試劑在該受試者中的治療無反應。
5.權利要求1的方法，其中所述第一種試劑選自:幹擾素、乙酸格拉太咪爾、延胡索酸、米託蒽醌、化療劑、皮質類固醇、免疫球蛋白、抑制素、硫唑嘌呤、以及TNF拮抗劑。
6.權利要求1的方法，其中所述受試者被施用所述第一種試劑至少6個月。
7.權利要求1的方法，其中所述施用VLA-4結合蛋白在不施用所述第一種試劑的情況下持續至少2個月。
8.權利要求1的方法，其中所述受試者在第一次施用VLA-4結合蛋白之前至少3個月未施用所述第一種試劑。
9.權利要求1的方法，其中所述受試者在第一次施用VLA-4結合蛋白之前的2周內施用了所述第一種試劑。
10.權利要求1的方法，還 包括監控受試者的EDSS評分進展。
11.權利要求1的方法，其中所述受試者之前因被診斷患有多發性硬化而未施用VLA-4結合蛋白。
12.權利要求1的方法，其中所述VLA-4結合蛋白是VLA-4結合抗體。
13.權利要求12的方法，其中所述VLA-4結合抗體抑制VLA-4與VCAM-1相互作用。
14.權利要求13的方法，其中所述VLA-4結合抗體至少結合VLA-4的α鏈。
15.權利要求12的方法，其中所述VLA-4結合抗體是那他珠單抗。
16.權利要求12的方法，其中所述VLA-4結合抗體與ΗΡ1/2或那他珠單抗競爭結合VLA-4。
17.權利要求12的方法，其中所述VLA-4結合抗體是人抗體或人源化抗體。
18.權利要求1的方法，其中所述受試者患有慢性漸進型多發性硬化、原發-漸進型(PP)多發性硬化、繼發-漸進型多發性硬化或漸進復髮型多發性硬化。
19.權利要求1的方法，其中所述受試者被靜脈施用多劑VLA-4結合蛋白，每劑為200-400mgo
20.治療受試者的方法，所述受試者患有MS且經幹擾素β治療至少3個月仍有以下一或多種症狀:(a)至少一次復發、(b)出現新的MRI增強型損傷、和(c)進行性殘疾(EDSS)，所述方法包括對該受試者施用VLA-4封閉抗體或其VLA-4結合片段，其施用量和施用時間致使足以治療MS，其中當幹擾素β在該受試者體內未達到治療性水平時，將VLA-4封閉抗體施用至少一次。
全文摘要
本發明公開了治療多發性硬化和其它疾病的方法。
文檔編號A61K39/395GK103169965SQ20131005420
公開日2013年6月26日 申請日期2005年11月18日 優先權日2004年11月19日
發明者麥可.潘扎拉, 艾爾弗雷德.桑德羅克 申請人:比奧根艾迪克Ma公司