抗-MAdCAM抗體在治療腹部疾病及熱帶口炎性腹瀉中的用途的製作方法

2023-05-18 18:34:16 4

專利名稱：抗-MAdCAM抗體在治療腹部疾病及熱帶口炎性腹瀉中的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗-MAdCAM抗體在製備用於治療腹部疾病和/或熱帶口 炎性腹瀉的藥物中的用途。現有技術黏膜地址素細胞粘附分子(Mucosal addressin cell adhesin molecule, MAdCAM)是細胞粘附受體免疫球蛋白超家族的成員。其是借 助與在淋巴細胞表面的整聯蛋白分子進行相互作用來參與向組織募集 淋巴細胞(需要時)的粘附分子之一。已表明，可抑制MAdCAM與其整聯蛋白結合伴侶(oc4 P 7)結合的抗 體，例如抗-MAdCAM抗體(例如MECA-367;美國專利5403919號，美國專 利5538724)或抗-ou P 7抗體(例如Act-l;美國專利6551593),可抑制 白細胞向炎症性腸部的滲出，且因此有利於治療炎症性腸病(IBD)。然而，諸如MECA-367等抗-MAdCAM抗體在人患者中不具治療用途； MECA-367可結合小鼠MAdCAM，但對人MAdCAM分子未顯示出多少親和力。 此外，作為大鼠抗體，其會在人患者中引起免疫應答且因此不適合治 療用途。曾闡述過針對人MAdCAM的小鼠單克隆抗體(WO 96/24673)，但 這些也有可能在人中具有免疫原性。最近，已研發出對人及靈長類 MAdCAM具有強特異性及親和力的可用於治療的完整人抗-人MAdCAM抗 體並闡述於W0 2005/067620中。已提出MAdCAM與0C4P7整聯蛋白相互作用的抑制劑(例如阻斷性抗 -MAdCAM抗體或抗ou P 7整聯蛋白抗體，例如MLN02,其是人源化Act-l， 闡述於WO 01/078779)可用於治療炎症性腸病(IBD)。然而，現已發現 包括MAdCAM阻斷性抗體在內的這種相互作用抑制劑也可用於治療腹部 疾病及熱帶口炎性腹瀉。腹部疾病(亦稱作麩質敏感性腸病或口炎性腹瀉)是一種小腸病症。在英國、歐洲及美國，300人中就有1人受此病症影響。腹部疾病 是一種常見病症，且會影響到任何年齡的任何人。據認為其在男性中 更為常見，但有可能同樣出現在男性及女性中。麩質是兩種蛋白質(麥膠蛋白與麥谷蛋白)的混合物，存在於小麥、 大麥及黑麥中。其會與小腸發生反應，通過激活免疫系統從而攻擊脆 弱的負責吸收營養物質及維他命的腸內膜來造成損傷。儘管該病症可 在任何年齡診斷出，但其常在斷乳後飲食中引入穀物的兒童中得到診 斷。症狀會很細微，且在作出診斷之前患者會在一定時間內無原因地 感到不適。初始症狀通常包括變得易受刺激及感覺痛苦，伴隨食慾不佳且無 法增重。大便(排便)會變得無力、鬆散且難聞。 一些兒童開始嘔吐並 腹瀉，因此常會對其作出"胃腸炎"的錯誤診斷。胃會發脹，且手臂 和腿的肌肉消瘦並變細。在成年人中，症狀可能是類似的，包括伴隨 面色蒼白的體重減少、嚴重腹瀉或伴隨"排氣"的便秘及腹脹。有一 半具有腹部疾病的成年人不會具有任何來自腸部的症狀。其常會因為 以下原因去看醫生極度疲憊、心理問題，如抑鬱、骨痛且甚至有時 是骨折(由於骨頭變細所致)、口腔潰瘍或起泡、主要出現在肘部及膝 部的發癢性皮疹(稱作皰疹樣皮炎)。一些患有腹部疾病的女性很難懷孕，且會因此而得到診斷。復發 性流產(自然性流產)有時與腹部疾病有關。 一些女性在懷孕期間得到 診斷，因為其腸部無法吸收足夠的鐵及維他命來滿足妊娠需要，從而 使其嚴重貧血。患有腹部疾病的母親生下子宮內年齡小(子宮內生長遲 滯)的嬰兒的頻率更高。若不經治療，則腹部疾病會引起貧血、骨病且在較少情形下會引 起某些形式的癌症。目前最重要的治療是避免所有含有麩質的食物。 這通常的結果是腸內膜損傷得以改善或甚至消失。然而，若在飲食中 重新引入麩質則會重新造成損傷。儘管腹部疾病不可預防，但堅持不含麩質的飲食會逆轉小腸的損傷。此需要相當的自律。需要找到一種具有低風險副作用的如下藥物 能夠使患者食用正常飲食且可避免礦物質及維他命缺乏及其它與腹部 疾病有關的病症。熱帶口炎性腹瀉是一種出現在熱帶及亞熱帶的消化問題。患有熱 帶口炎性腹瀉的人們不能很好地吸收營養物質，尤其是維他命BU及葉酸。腹瀉是熱帶口炎性腹瀉的主要症狀；食用大量脂肪性食物的人們 會較食用低脂肪飲食的人們經歷更嚴重的腹瀉。其它症狀包括腹部絞 痛、噁心、減重、排氣及消化不良。大約每1000000人口中就有l人受熱帶口炎性腹瀉影響且出現在約 赤道北綷30。至赤道南煒30。之間。其在某些國家更常見，包括印度、 海地、古巴、波多黎各及多米尼加共和國。其在非洲、巴哈馬群島及 牙買加不常見或不存在。該病症給受影響國家的居民以及遊客帶來痛 苦，但通常其只會影響停留6個月或更長時間的遊客。人們尚未確定熱帶口炎性腹瀉的原因，但其很可能是因各種因素 的組合所致，該因素包括感染及營養不良，其會一起對小腸內膜造成 損傷，從而使小腸內膜無法吸收營養物質。熱帶口炎性腹瀉的診斷會很複雜，是因為許多病症均具有類似症 狀。實施大便及血液測試以排除其它的腹瀉原因。如果此等測試呈陰 性且患者曾長時間生活在熱帶，則熱帶口炎性腹瀉可能是引起該疾病 的原因。可以實施活體組織檢查以檢查絨毛從而鑑定小腸絨毛的典型 平整性。某些血液測試也會有助於熱帶口炎性腹瀉的診斷。由於該疾病會 阻斷某些維他命及礦物質的吸收，故會觀察到低含量的白蛋白、鈣或 維他命D、 A、 K及E。患者也會因維他命B12及葉酸缺乏而出現貧血。此 外，大便樣本會展現過量的脂肪。治療通常會是3至6個月的抗生素及葉酸(folic acid或folate)補 充物。缺乏維他命B12的人也會接受維他命補充物。發明內容本發明的一個方面是可特異結合MAdCAM的抗體在製備用於治療腹 部疾病和/或熱帶口炎性腹渴的藥物中的用途。本發明的另一個方面是 一種使用治療有效量的抗-MAdCAM抗體治療腹部疾病和/或熱帶口炎性 腹瀉(優選是腹部疾病)的方法。本發明的另 一方面是抗-ct 4 p 7整聯蛋白抗體在製備用於治療腹部 疾病和/或熱帶口炎性腹瀉(優選是腹部疾病)的藥物中的用途。優選 地，該抗-ct4P7整聯蛋白抗體是人源化Act-l，也稱作MLN02。本發明 的另一方面是使用治療有效量的抗-oc^ P 7抗體(優選是MLN02)治療腹 部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉(優選是腹部疾病)的方法。本發明的另 一方面是MAdCAM- ot 4 P 7整聯蛋白介導的粘附的抑制劑 在製備用於治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物中的用途。本發 明的另 一方面是使用治療有效量的MAdCAM- ct 4 P 7整聯蛋白介導的粘附 的抑制劑治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的方法。優選地，用於本發明的抗-MAdCAM抗體或其抗原結合部分可特異結 合MAdCAM。更優選地，至少該抗體的CDR序列是人CDR序列或人抗體的 抗原結合部分。優選地，該抗體是人抗體、進一步優選是人單克隆抗 體或其抗原結合部分、更優選是可作為MAdCAM拮抗劑的抗體或其抗原 結合部分。優選地，抗體或一部分具有至少一種以下性質(a) 結合人細胞；(b) 對MAdCAM具有較VCAM或纖連蛋白高至少IOO倍的選擇性；(c) 以3xl(T1。 M或更低的Kd結合人MAdCAM;或(d) 抑制ct 4 p 7表達細胞對人MAdCAM的結合，(e ) 抑制淋巴細胞向胃腸淋巴組織的募集。優選地，抗體或抗原結合部分可抑制人MAdCAM對ot, P 7的結合，且 具有至少一種以下性質(a) 與參照抗體交叉竟爭結合MAdCAM;(b) 與參照抗體竟爭結合MAdCAM;(c) 與參照抗體結合相同的MAdCAM表位；(d) 以與參照抗體大體相同的L結合MAdCAM;(e) 以與參照抗體大體相同的解離速率結合MAdCAM; 其中該參照抗體選自單克隆抗體1.7.2、單克隆抗體1.8. 2、單克隆抗體6. 14.2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6， 34. 2、單克隆抗 體6. 67. 1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆抗體7. 16. 6、 單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26. 4、單克隆抗體9. 8. 2、單克隆抗 體6. 22. 2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體6. 67. l-mod、單 克隆抗體6. 77. l-mod及單克隆抗體7. 26. 4-raod。在本發明的另一方面中，該抗-MAdCAM抗體的重鏈可變區、輕鏈可 變區或二者在胺基酸序列上與選自下述的單克隆抗體的對應區域具有 至少90%的同一性，該單克隆抗體選自單克隆抗體1.7.2、單克隆抗 體l. 8. 2、單克隆抗體6. 14. 2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6. 34. 2、 單克隆抗體6. 67. 1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆 抗體7. 16.6、單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26.4、單克隆抗體 9. 8. 2、單克隆抗體6. 22. 2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體 6. 67. l-mod、單克隆抗體6. 77. 1-mod及單克隆抗體7. 26. 4-mod。優選地，該抗體選自 (a) 含有示於SEQ ID N0:2及SEQ ID NO: 4的胺基酸序列且不含信 號序列的抗體；(b) 含有示於SEQ ID N0:6及SEQ ID NO: 8的胺基酸序列且不含信 號序列的抗體；(c) 含有示於SEQ ID NO:10及SEQ ID NO: 12的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(d) 含有示於SEQ ID N0:14及SEQ ID NO: 16的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(e) 含有示於SEQ ID N0:18及SEQ ID NO: 20的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(f) 含有示於SEQ ID N0:22及SEQ ID NO: 24的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(g) 含有示於SEQ ID NO:26及SEQ ID NO: 28的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(h) 含有示於SEQ ID NO:30及SEQ ID NO: 32的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(i) 含有示於SEQ ID NO:34及SEQ ID NO: 36的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(j)含有示於SEQ ID NO:38及SEQ ID NO: 40的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(k)含有示於SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 44的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(I)含有示於SEQ ID NO:46及SEQ ID NO: 48的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(m)含有示於SEQ ID N0:52及SEQ ID NO: 54的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(n)含有示於SEQ ID NO:56及SEQ ID NO: 58的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(o)含有示於SEQ ID NO:60及SEQ ID NO: 62的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；(p)含有示於SEQ ID N0:64及SEQ ID NO: 66的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體；及(q)含有示於SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 68的胺基酸序列且不含 信號序列的抗體。在本發明的另一方面中，該單克隆抗體或其一抗原結合部分選自 下列抗體(a) 重鏈包含參照抗體的重鏈CDR1、 CDR2及CDR3的胺基酸序列， 該參照抗體選自1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34.2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(b) 輕鏈包含參照抗體的輕鏈CDR1、 CDR2及CDR3的胺基酸序列，該參照抗體選自1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(c) 該抗體包含(a)的重鏈及(b)的輕鏈；及(d) 該(c)的抗體，其中該重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列選自相同參 照抗體。在本發明的另一方面中，該單克隆抗體或抗原結合部分包含(a) 含有下述抗體重鏈可變區胺基酸序列的重鏈，所述抗體選自 1. 7. 2 (SEQ ID NO: 2); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 6); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 10); 6.22. 2 (SEQ ID NO: 14) ; 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 18) ; 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 22); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 26); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 30); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 34) ; 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 38) ; 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 42);及 9. 8. 2 (SEQ ID NO: 46); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 52); 6. 34. 2-mod (SEQ ID NO: 56); 6. 67. 1-mod (SEQ ID NO: 60); 6. 77. l-mod (SEQ ID NO: 64); 及7. 26. 4-mod (SEQ ID NO: 42);(b) 含有下述抗體輕鏈可變區胺基酸序列的輕鏈，所述抗體選自 1. 7. 2 (SEQ ID NO: 4); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 8); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 12); 6.22. 2 (SEQ ID NO: 16) ; 6.34. 2 (SEQ ID NO: 20) ; 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 24); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 28); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 32); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 36) ; 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 40) ; 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 44);及 9. 8. 2 (SEQ ID NO: 48); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 54); 6. 34. 2-mod (SEQ ID NO: 58); 6. 67. l-mod (SEQ ID NO: 62) 、 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 66); 及7. 26. 4-raod(SEQ ID NO: 68);或(c) (a)的重鏈及(b)的輕鏈。本發明的另 一方面是該抗-MAdCAM抗體的重鏈和/或輕鏈或其可變 區或其它抗原結合部分或編碼前述任一分子的核酸分子及藥學上可接 受的載體的用途。本發明的這方面包括任一上述抗體的片段(包括但不 限於Fab片段、F(abOs片段、單鏈Fv (scFv)片段)的用途。優選地，該抗-MAdCAM抗體是選自如WO 2005/067620中所述的1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的人抑制性抗-MAdCAM抗體。 優選地，該抗-MAdCAM抗體包含如下輕鏈，該輕鏈含有選自如W0 2005/067620中所示SEQ ID NO: 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 58、 62、 66或68的胺基酸序列(含或不含信號序列) 或所述胺基酸序列中任一個的可變區或一個或多個來自所述胺基酸序 列的CDR。該抗-MAdCAM抗體優選包含如下重鏈，該重鏈含有選自如W0 2005/067620中所示SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42、 46、 52、 56、 60或64的胺基酸序列(含或不含信號序列)或可 變區胺基酸序列或一個或多個來自所述胺基酸序列的CDR胺基酸序列。 該抗-MAdCAM抗體優選是含有自上述序列中任一個的CDR1起始端至 CDR3末端的胺基酸序列的人抗-MAdCAM抗體。用於本發明的抗-MAdCAM 抗體也可是含有上述序列中任一個的一個或多個FR區的抗-MAdCAM抗 體。用於本發明的抗-MAdCAM抗體也可包括含有其中已進行一個或多 個修飾的上述胺基酸序列中的一個的抗-MAdCAM抗體。例如，該抗體中 具有化學反應性的半胱氨酸可由另一殘基(包括但不限於丙氨酸或絲 氨酸)取代。該取代可發生在非典型半胱氨酸處或典型半胱氨酸處。該 取代可在抗體可變結構域的CDR或框架區或恆定結構域內進行。也可以進行胺基酸取代以消除抗體中潛在蛋白水解位點。這樣的 位點可存在於抗體可變結構域的CDR或框架區或恆定結構域內。半胱氨 酸殘基的取代及蛋白水解位點的去除會降低抗體產品中的異質性。可 形成潛在脫醯胺位點的天冬醯胺-甘氨酸對可通過改變兩種殘基中的 一種或兩種來消除。進行胺基酸取代可用於本發明的抗體的可變區中 的潛在糖基化位點的加入或去除。可裂解掉用於本發明的抗-MAdCAM抗體的重鏈的C-末端賴氨酸。抗 -MAdCAM抗體的重鏈及輕鏈可視情況包含信號序列。用於本發明的12個優選抑制性人抗-MAdCAM單克隆抗體(1. 7. 2、1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6,67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7. 26. 4及9. 8. 2)詳述於W0 2005/067620中(其全文以引用方 式引入本專利說明書中)。
具體實施方式
拔-#^^^#拔沐#類身及亞類該抗體可以是IgG、 IgM、 IgE、 IgA或IgD分子。優選地，該抗體屬 於IgG類且屬於IgG" lgG2、 lgG3或lgG4亞類。更優選地，該抗-MAdCAM 抗體是lgG2或lgG4亞類。更優選地，該抗-MAdCAM抗體與作為lgG2的抗 體l. 7. 2、 1. 8. 2、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod或與作為lgG4的6. 14. 2 、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1或9. 8. 2 (如W0 2005/067620 中所述)屬於相同類別及亞類。抗-MAdCAM抗體所屬類別及亞類可通過任一業內已知方法確定。一般而言，抗體的類別及亞類可使用對特定類別及亞類抗體具有特異性的抗體來確定。這樣的抗體可商購獲得。ELISA、 Western印跡分析以及其它技術均可確定該類別及亞類。或者，該類別及亞類可如下確定測定抗體的所有或一部分重鏈和/或輕鏈恆定結構域的序列；將其胺基酸序列與各種類別及亞類免疫球蛋白的已知胺基酸序列加以比較；並 將該抗體的類別及亞類確定為顯示最高序列一致性的類別。參神遂舉嫂及為、子逸脊^用於本發明的抗-MAdCAM抗體既表現出物種選擇性也表現出分子 選擇性。該抗-MAdCAM抗體可結合人、獼猴或狗的MAdCAM。其它的用於 本發明的抗-MAdCAM抗體不能結合諸如狨等新世界猴物種。人們可使用 業內熟知方法來確定抗-MAdCAM抗體的物種選擇性。例如，人們可^f吏用 Western印跡分析、FACS、 ELISA或免疫組織化學來確定物種選擇性。 在一個優選的實施例中，人們可使用免疫組織化學來確定物種選擇性。用於本發明的可特異結合MAdCAM的抗-MAdCAM抗體對MAdCAM的選 擇性高於VCAM、纖連蛋白或任何其它抗原，其高出至少10倍、優選高至少20、 30、 40、 50、 60、 70、 80或90倍、最優選高至少100倍。優選 地，該抗-MAdCAM抗體除對MAdCAM外不會對VCAM、纖連蛋白或任何其它 抗原展現任何明顯的結合。人們可使用業內熟知方法根據本說明書的 教導確定抗-MAdCAM抗體對MAdCAM的選擇性。舉例而言，人們可使用 Western印跡分析、FACS、 ELISA或免疫組織化學來確定該選擇性。 戎-^^^#戎#潛合船^^#,^力用於本發明的抗-MAdCAM抗體優選可以以高親和力特異性地結合 MAdCAM。用於本發明的抗-MAdCAM抗體以3xl(T8 M或更低的Kd特異性地 結合MAdCAM，如由表面等離子共振(諸如BIAcore)所測量的。優選地， 抗體以lx10—8或更低或lxl(T9 M或更低的Kd特異性地結合MAdCAM。更優 選，抗體以lx10—1Q M或更低的L特異性地結合MAdCAM。用於本發明的 抗體以2. 66x10—"M或更低、2. 35x10—11 M或更低或9x10—12 M或更低的Kd 特異性地結合MAdCAM。優選地，該抗體以lxl(T11 M或更低的Ka特異性 地結合MAdCAM。優選地，該抗體以與選自如WO 2005/067620中所述的 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的抗體大體相同的L特異性地 結合MAdCAM。與參照抗體具有"大體相同Kd，，的抗體具有是±100 pM、優選是 ±50 pM、更優選是±20 pM、進一步優選是土IO pM、 ±5 pM或± 2 pM 的L(在相同實驗中與參照抗體的Kd相比)。優選地，該抗體以與含有一 個或多個如下可變結構域或一個或多個如下CDR的抗體大體相同的Kd 結合MAdCAM，該可變結構域或CDR來自選自下列的抗體如WO 2005/067620中所述的L 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. 1-mod、 6. 77. 1-mod或7. 26. 4-mod。優選地，該抗 體以與含有如下胺基酸序列的抗體或其可變結構域大體相同的Kd結合MAdCAM，該胺基酸序列選自下列之一如WO 2005/067620中所述的SEQ IDNO:2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信號序列)。優選地，該抗體以與含有一個或多個如 下CDR的抗體大體相同的Kd結合MAdCAM，該CDR來自含有選自下列的氨 基酸序列的抗體如W0 2005/067620中所述的SEQ ID N0: 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68。抗-MAdCAM抗體對MAdCAM的結合親和力可通過任一業內已知方法 確定。在一個實施例中，該結合親和力可通過竟爭性ELISA、 RIA或表 面等離子共振(諸如BIAcore)測量。在一個更為優選的實施例中，該結 合親和力是通過表面等離子共振測量。在一個進一步優選的實施例中， 該結合親和力及解離速率是使用BIAcore測量。確定結合親和力的實例 可參見W0 2005/067620。^-船c^^/戎琳^一表痴用於本發明的抗-MAdCAM抗體在活體外或活體內具有至少1天的半 衰期。優選地，該抗體或其部分具有至少3天的半衰期。更優選地，該 抗體或其部分具有4天或更長的半衰期。進一步優選地，該抗體或其部 分具有8天或更長的半衰期。用於本發明的抗體或其抗原結合部分也可 經衍生或修飾以使其具有更長的半衰期，如下文所論述。在另一優選 的實施例中，該抗體可含有點突變以增加血清半衰期，如WO 00/09560 中所述。抗體半衰期可通過本領域的技術人員所已知的任何方式測量。舉 例而言，抗體半衰期可通過Western印跡分析、ELISA或RIA在一段適宜 時間內測量。抗體半衰期可在任何諸如靈長類等適宜動物(例如獼猴、 猴子或人)體內測量。^-船^^/戎謬識身^船^:^i/4在的婆定本發明還提供了與本專利中提供的人抗-MAdCAM抗體結合相同抗 原或表位的人抗-MAdCAM抗體的用途。此外，本發明提供了與人抗-MAdCAM抗體竟爭或交叉竟爭的人抗-MAdCAM抗體的用途。優選地，該人 抗-MAdCAM抗體是WO 2005/067620中揭示的1. 7. 2、 1.8.2、 6.14.2、6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9.8.2、 6. 22.2-mod、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或 7.26. 4-mod。優選地，該人抗-MAdCAM抗體含有來自選自下列的抗體的 一個或多個可變結構域或一個或多個CDR: 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod。優選地，該人抗-MAdCAM抗體含有選自W0 2005/067620 中SEQ ID N0:2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信號序列)的胺基酸序列中的一個或其可變 結構域中的一個。優選地，該人抗-MAdCAM抗體含有一個或多個來自選 自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68的胺基酸序列中的一個的抗體的CDR。人們可使用各種業內已知方法來確定抗-MAdCAM抗體是否與另一 抗-MAdCAM抗體結合相同抗原。舉例而言，人們可利用已知抗-MAdCAM 抗體捕獲抗原，將該抗-MAdCAM抗體上洗脫下抗原，並且隨後測定測 試抗體是否會結合經洗脫的抗原。人們可如下確定抗體是否與另一抗 -MAdCAM抗體竟爭使該抗-MAdCAM抗體在飽和條件下結合至MAdCAM上， 且隨後測測量試抗體結合MAdCAM的能力。若測試抗體能夠與抗-MAdCAM 抗體同時結合MAdCAM，則該測試抗體可結合不同於抗-MAdCAM抗體的 表位。然而，若該抗體不能同時結合MAdCAM，則該測試抗體可與該人 抗-MAdCAM抗體進行竟爭。這個實驗可使用ELISA或表面等離子共振或 優選為BIAcore實施。為測試抗-MAdCAM抗體是否與另一抗-MAdCAM抗體 交叉竟爭，人們可雙向使用上述竟爭方法，即確定已知抗體是否阻斷 測試抗體，並反之確定測試抗體是否阻斷已知抗體。控^及重鏈《^炎y^本發明還提供了包含由人K基因編碼的輕鏈可變區的抗-MAdCAM 抗體的用途。優選地，該輕鏈可變區是由人VK A2、 A3、 A26、 B3、 012或018基因家族編碼。優選地，該輕鏈含有相對於種是人vk A2、 A3、 A26、 B3、 012或018序列的胺基酸取代不超過11個、不超過6個或不超 過3個。優選地，所述胺基酸取代是保守性取代。優選地，抗-MAdCAM抗體的VL含有與WO 2005/067620中所述的抗體 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的VL的任一個或多個相同的相 較於種系(germline)胺基酸序列的突變。本發明包括與例示抗體採 用相同的人V k及人j k基因的抗-MAdCAM抗體的用途。該抗體可與一個 或多個所例示抗體含有一個或多個相同的相較於種系的突變，或該抗 體在一個或多個與一個或多個所列示抗體相同的位置可包含不同的取 代。舉例而言，該抗-MAdCAM抗體的VL可包含一個或多個與抗體7. 16. 6 中存在的這些相同的胺基酸取代及另一與抗體7. 26. 4相同的胺基酸取 代。以此方式，人們可混合併匹配抗體結合的不同特徵以改變(例如) 抗體對MAdCAM的親和力或其自抗原的解離速率。可在與存在於抗體 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. 1-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的任一個或多個VL中的相同位 置處進行突變，但保守胺基酸取代卻不是用相同胺基酸進行的。舉例 而言，若抗體l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod之一中相較於種系的胺基酸取 代是穀氨酸，則人們可保守性取代天冬氨酸。同樣地，若胺基酸取代 是絲氨酸，則人們可保守性取代蘇氨酸。抗-MAdCAM抗體的輕鏈可以含有與l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6.22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的 VL胺基酸序列相同的胺基酸序列。該輕鏈優選地含有與l. 7. 2、 1.8.2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod 或7. 26. 4-mod的輕鏈CDR區相同的胺基酸序列。該輕鏈可含有具有至少 一個l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的輕鏈CDR區的胺基酸序列。 該輕鏈可以含有具有來自使用相同V k及J k基因的不同輕鏈的CDR的 胺基酸序列。優選地，來自不同輕鏈的CDR是得自1. 7. 2、1. 8. 2、6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2 、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. 1—mod 、 6. 77. l-mod或 7.26. 4-mod。優選地，該輕鏈含有選自W0 2005/067620的SEQ ID N0: 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信號序列)的胺基酸序列。優選地，該輕鏈含有由選 自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 3、 7、 11、 15、 19、 23、 27、 31、 35、 39、 43、 47、 53、 57、 61、 65或67 (含或不含信號序列)的核苷酸序列 或編碼其中具有1至11個胺基酸的插入、缺失或取代的胺基酸序列的核苷酸序列編碼的胺基酸序列。優選地，該胺基酸取代是保守胺基酸取 代。該抗體或其部分可含有A輕鏈。本發明還提供包含人VH基因序列或源自人VH基因的序列的抗 -MAdCAM抗體或其部分的用途。該重鏈胺基酸序列可源自人VH 1-18、 3-15、 3-21、 3-23、 3-30、 3-33或4-4基因家族。優選地，相對於種 是人VH 1-18、 3-15、 3-21、 3-23、 3-30、 3-33或4-4基因序列，該重 鏈含有不超過15個、不超過6個或不超過3個胺基酸改變。公開於WO 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42及46提供了用於本發明的12個抗-MAdCAM抗體的全長重 鏈的胺基酸序列。本說明書所涉及的所有SEQ IDNo是指實際公開於W0 2005/067620中的序列。優選地，該抗-MAdCAM抗體的VH與抗體l. 7. 2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6. 34.2、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6.22. 2—mod、 6. 34. 2—mod、 6. 67. l-mod、 6. 77， l一mod或7， 26. 4-mod的VH中任一個或多個含有相同的相較於種系胺基酸序列的突變。與上文 所述相類似，該抗體與一個或多個所例示抗體含有一個或多個相同的 相較於種系的突變。該抗體還可以在與一個或多個所例示抗體相同的 一個或多個位置含有不同取代。舉例而言，該抗-MAdCAM抗體的VH可以 含有一個或多個與抗體7. 16. 6中所存在的胺基酸相同的胺基酸取代， 及與抗體7. 26. 4相同的另外的胺基酸取代。依此方式，人們可混合及 匹配抗體結合的不同特徵以改變(例如)抗體對MAdCAM的親和力或其自 抗原的解離速率。相較於種系的胺基酸取代可在與存在於參照抗體 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod中的任一個或多個VH中的相較於種系的取代 相同的位置進行，但該位置可用不同的殘基取代，這就是相較於參照 抗體的保守取代。優選地，用於本發明的抗-MAdCAM抗體的重鏈含有與l. 7. 2、1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod 或7. 26. 4-mod的VH的胺基酸序列相同的胺基酸序列。更優選地，該重 鏈含有與1.7. 2、 1.8.2、 6.14.2、 6. 22， 2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的重鏈CDR區相同的胺基酸序 列。優選地，該重鏈含有來自1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 7 3. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 4、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的重鏈的至少一 個CDR區的胺基酸序列，或該重鏈可含有具有來自不同重鏈的CDR的氨 基酸序列。優選地，該來自不同重鏈的CDR是得自1. 7. 2、1. 8. 2、6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2 、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-raod 、 6. 77. l-mod或 7.26.4-mod。優選地，該重鏈含有選自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42、 46、 52、 56、 60或64的胺基酸序列(含或不含信號序列)。該重鏈還可以含有由選自wo2005/067620的SEQ ID NO: 1、 5、 9、 13、 17、 21、 25、 29、 33、 37、 41、 45、 51、 55、 59或63的核苷酸序列或編碼其中具有1至15個胺基酸 的插入、缺失或取代的胺基酸序列的核苷酸序列編碼的胺基酸序列。 該取代優選是保守胺基酸取代。用於製備抗體的核酸、載體、宿主細胞及重組方法 用於製備此等抗體的核酸、載體、宿主細胞及重組方法闡述於WO 2005/067620中。經4汙生及標記的抗體可將本發明的抗體或抗體的部分衍生或連接至另一分子(例如，另 一個肽或蛋白質)。 一般而言，該抗體或其各部分可經衍生使得MAdCAM 結合不會受到衍生或標記的不良影響。因此，用於本發明的抗體及抗 體部分意欲包括本說明書所述的人抗-MAdCAM抗體的完整形式和經修 飾形式這二者。舉例而言，用於本發明的抗體或抗體部分在功能上可 連接(通過化學偶聯、基因融合、非共價鍵締合或其它方式)至一個或 多個其它分子實體，例如另一抗體(例如，雙特異性抗體或雙抗體)、 檢測劑、細胞毒性劑、醫藥劑和/或可介導該抗體或抗體一部分與另一 分子締合的蛋白質或肽(例如鏈黴抗生物素蛋白核心區或聚組氨酸標 籤)。可通過交聯兩個或兩個以上的抗體(同類型或不同類型，例如，以 生成雙特異性抗體)製備一種衍生的抗體。適宜交聯劑包括這些具有通 過適宜的間隔子分隔的兩個不同的反應性基團的異雙功能試劑(例如， 間-馬來醯亞胺苯甲醯基-N-羥基琥珀醯亞胺酯)或同雙功能試劑(例 如，辛二酸二琥珀醯亞胺酯)。這些交聯劑可自Pierce Chemical乂/^司， Rockford， III購得。另 一種類型的衍生抗體是標記的抗體。用於衍生本發明的抗體或 抗體部分的有用的檢測劑包括螢光化合物，包括螢光素、異硫氰酸熒 光素、羅丹明、5-二甲基胺-l-萘磺醯氯、藻紅素、鑭系元素磷光體等。 抗體也可以用可用於檢測的酶標記，例如辣根過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶及諸如此類。當用可檢 測的酶標記抗體時，其是通過加入可供該酶使用以產生可檢測反應產 物的額外試劑檢測。舉例而言，當存在試劑辣根過氧物酶時，加入過 氧化氫及二氛基聯苯胺可以生成能夠檢測的有色反應產物。還可以用 生物素標記抗體並通過間接測量抗生物素蛋白或鏈黴抗生物素蛋白結 合來加以檢測。抗體可用諸如釓等/P茲性劑標記。抗體還可以用由二級 報告子(例如，亮氨酸拉鏈對序列、二級抗體結合位點、金屬結合結 構域、表位標籤)識別的預先確定的多肽表位標記。在某些實施例中， 標記物是通過各種長度的間隔子臂連接以降低潛在的空間位阻。抗-MAdCAM抗體也可以用經^t射性標記的胺基酸標記。;^射性標記既可用於i貪斷目的也可以用於治療目的。舉例而言，；改射性標記可用於通過x-射線或其它診斷技術檢測表達MAdCAM的組織。此外，放射性標記可作為毒素用於染病組織或表達MAdCAM的腫瘤的治療。多肽標記物的實例包括但不限於以下放射性同位素或放射性核素--3H、 14C、 15N、 "s、 ，、 "TC、 mIn、 125工、131I。抗-MAdCAM抗體還可以用化學基團(諸如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙 基或碳水化合物基團)衍生。這些基團可用於改善抗體的生物學特性， 例如，增加血清半衰期或增加組織結合。這種方法也可以應用於任何 抗原-結合片段或抗-MAdCAM抗體的抗體版本。藥物組合物及套盒在另一方面中，本發明提供了含有抑制性人抗-MAdCAM抗體的組 合物和用這樣的組合物治療受試者的方法。在一些實施方案中，治療 的受試者是人。在其它實施方案中，該受試者是畜類受試者。在一些 實施例中，該畜類受試者是狗或非人靈長類。治療可以涉及單獨或與藥學上可接受的載體組合給藥一種或多種 抑制性抗-MAdCAM單克隆抗體或其抗原-結合片段。抑制性抗-MAdCAM 抗體及包含它的組合物可與一種或多種其它治療、診斷或預防性作用 劑聯合給藥。額外的治療劑包括抗炎或免疫調節劑。這些作用劑包括 但不限於外用及口服皮質類固醇類，諸如強的松龍(prednisolone)、甲基強的+>龍、NCX-1015或布地奈德(budesonide);氨基水楊酸類， 諸如美色拉"秦(mesalazine)、 奧色拉漆(olsalazine)、 巴柳氮 (balsalazide)或NCX-456 ; 免疫調節劑類，諸如硫唑嘌呤 (azathioprine) 、 6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、 氨曱蝶呤 (methotrexate)、 環孢菌素 (cyclosporin) 、 FK506 、 IL-10(Ilodecakin) 、 IL-ll (Oprelevkin) 、 IL-12、 MIF/CD74拮抗劑、 CD40拮抗劑，諸如TNX-100/5-D12、 OX40L拮抗劑、GM-CSF、吡美莫司 (pimecrolimus)或雷帕審素(rapamycin);抗一TNFot藥劑類，i者^口英 夫利昔單抗(infliximab)、阿達木單抗(adal imumab) 、 CDP-870、奧 那西普(onercept)、依那西普(etanercept);消炎劑類，諸如PDE-4 抑制劑(羅氟司特(roflumilast)等)、TACE抑制劑(DPC-333、 RDP-58 等)及ICE抑制劑(VX-740等)以及IL-2受體拮抗劑，諸如達克力莫 (dacl izumab); 選擇粘附分子拮抗劑類，諸如那他珠單抗 (natalizumab) 、 MLN-02或阿里卡福(alicaforsen);鎮痛藥類，包括 但不限於C0X-2抑制劑，諸如羅非考昔(rofecoxib)、伐地考昔 (valdecoxib)、塞來考昔(celecoxib) 、 P/Q-型電壓敏感性信道(oc 25) 調節劑，諸如力口巴噴丁 (gabapentin)及普力口巴林(pregabalin) 、 NK-1 受體拮抗劑、大麻素受體調節劑及5類鴉片受體激動劑；以及抗贅瘤藥、 抗腫瘤藥、抗血管生成藥或化療劑。可將這類額外的作用劑包括在相 同的組合物中或分開給藥。本說明書所用"藥學上可接受的載體"意指任何及所有生理上兼 容的溶劑、分散介質、塗布劑、抗細菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收 增強劑或吸收延遲劑諸如此類。藥學上可接受的栽體的實例是水、鹽 水、磷酸緩沖鹽溶液、含有氯化鈉的乙酸緩衝液、葡萄糖、甘油、聚 乙二醇、乙醇及諸如此類及其組合。在許多情況下，優選將等滲劑， 例如，糖、多元醇(例如，甘露醇、山梨醇)或氯化鈉包括在組合物中。 藥學上可接受的物質的其它實例是表面活性劑、潤溼劑或少量輔助物 質，諸如潤溼或乳化劑、保存劑或緩沖劑，其可增強抗體保存期或效 力。用於本發明的組合物可呈多種形式，舉例而言，如液體、半固體 及固體劑型，諸如液體溶液(例如，可注射及可輸注溶液)、分散液或 懸浮液、錠劑、丸劑、凍幹餅、乾粉、脂質體及栓劑。優選形式視期 望給藥模式及治療應用而定。典型優選組合物是呈可注射或可輸注溶液形式，例如類似於用於人被動免疫的組合物。給藥的優選模式是非 經腸(例如，靜脈、皮下、腹膜內、肌內、皮內)給藥。在優選的實施 方案中，該抗體是通過靜脈內輸注或注射給藥。在另一個優選實施方 案中，該抗體通過肌內、皮內或皮下注射給藥。需要時，該抗體可通 過泵、灌腸劑、栓劑或留置儲液器或諸如此類給藥。通常，治療組合物必須無菌且在生產及儲存條件下穩定。可將該 組合物調配成溶液、凍幹餅、乾粉、微乳劑、分散液、脂質體或其它適合高藥物濃度的所要求的結構。無菌可注射溶液可通過下述來製備 將所需量的抗-MAdCAM抗體摻入含有上述一種成份或多種成份的組合 (視需要而定)的適宜溶劑中，隨後進行無菌處理。如果為用於製備無 菌注射液的無菌粉劑，則優選製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥，如此 可自其先前經無菌處理的溶液製成活性成份外加任何期望的額外成份 的粉劑。 一般而言，可通過將活性化合物摻入含有基本分散介質及所 需的選自上文所列舉成份的其它成份的無菌媒劑中來製備分散液。舉 例而言，可通過表面活性劑及所需粒度(在分散液的情形中通過表面活 性劑、磷脂及聚合物)保持溶液的所需特性。通過在組合物中摻入可延 遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽、聚合材料、油及明膠)可使可注射組 合物的吸收延長。本發明的抗體可通過多種業內已知方法給藥，但對於許多治療應 用而言，優選給藥途徑/方式是皮下、肌內、皮內或靜脈內輸注。本領 域的技術人員應了解，給藥途徑和/或方式會因所期望的結果而變化。在某些實施例中，可以用可防止抗體快速釋放的載體製備該抗體， 例如受控釋放調製物，包括植入體、經皮貼劑及微嚢化遞送系統。可 使用生物可降解的生物兼容性聚合物，例如乙烯基乙酸乙烯酯、聚酸 酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯及聚乳酸。用於製備這種調製物的多種方法已獲得專利權或通常已為本領域的技術人員所熟知。參見，舉例而言,5^"a/72ed a/ f/ Co/^ro/Zed Ae/ease "eh>ery 5y"e邁s (J.R. Robinson編輯，Marcel Dekker公司，New York (1978))。在某些實施例中，本發明的抗-MAdCAM抗體可經口服給藥，舉例而 言，通過惰性稀釋劑或可吸收食用的載體給藥。還可將該化合物(及其它成份，需要時)封裝入硬質或軟質殼的明膠膠嚢中、壓縮成錠片或直 接加入受試者飲食中。對於口服治療給藥而言，可將該抗-MAdCAM抗體 與賦形劑摻合在一起並以可吸收的錠劑、口含片、片劑、膠嚢、酏劑、 懸浮劑、糖漿、糯米紙嚢劑及諸如此類的形式使用。為通過非經腸之 外的途徑給藥本發明化合物，可能有必要用一材料塗覆該化合物或與 該化合物共同給藥以防止其失活。本發明組合物可以包含"治療有效量"或"預防有效量的本發明抗體或抗原結合部分。"治療有效量"是指在所需時期內以所需劑量有效達成期望治療效果的量。抗體或抗體一部分的治療有效量會隨 以下因素變化諸如疾病狀態、個體年齡、性別及體重以及抗體或抗 體部分在該個體體內引發期望的反應的能力。治療有效量還是其中抗 體或抗體部分的治療有益作用大於其任何毒性或有害作用的量。"預 防有效量"是指在所需時期內以所需劑量有效達成期望預防效果的量。 通常，由於預防劑量是在患病之前或患病早期用於受試者中，故預防 有效量可少於治療有效量。可對劑量方案加以調整以提供最佳期望反應(例如，治療或預防反 應)。舉例而言，可給藥單次濃注劑、可經一段時間給藥數個細分劑量或可根據治療狀況緊急程度所指示按比例降低或增加劑量。以劑量單元形式來調配非經腸組合物特別有利於方便給藥及達成劑量一致性。本說明書所用劑量單元形式是指適於作為單位劑量供擬受治療哺乳動 物受試者使用的物理分立單元；每一單元包括經計算可產生期望治療 效果的預定量的活性化合物及所需醫藥載體的組合。本發明的劑量單元形式的規格取決於且直接依賴於下列因素(a)抗-MAdCAM抗體或其 部分的獨特性質及想要達到的特定治療或預防效果，及(b)業內調配該抗體以治療個體敏感性的固有居限性。本發明的抗體或抗體一部分的治療或預防有效量的例示性非限制範圍是O. 025至50毫克/公斤、更佳是O. l至50毫克/公斤、更佳是O. 1 至25、 0. I至IO或O. l至3毫克/公斤。在一些實施方案中，調製物含有5 毫克/毫升抗體，存於含有20 mM乙酸鈉，pH 5.5、 140 mM NaCl及O. 2 毫克/毫升聚山梨醇酯80的緩衝液中。在其它的實施方案中，對於(例 如)靜脈內用途，調製物含有10毫克/毫升抗體，存在於2. 73毫克/毫升 三水乙酸鈉、45毫克/毫升甘露醇、0. 02毫克/毫升二水EDTA二鈉、0.2 毫克/毫升聚山梨醇酯80(用冰乙酸調節至pH 5. 5)中。在其它實施方案 中，對於(例如)皮下或皮內用途，調製物含有50毫克/毫升抗體、2.73 毫克/毫升三水乙酸鈉、45毫克/毫升甘露醇、0. 02毫克/毫升二水EDTA 二鈉、0. 4毫克/毫升聚山梨醇酯80(用冰乙酸調節至pH 5.5)。應注意 的是，劑量值會隨待緩解病症的類型和嚴重性而變化。應進一步了解 對於任一特定受試者而言，應根據個體需要及給藥組合物或監督組合 物給藥的個人的專業判斷隨時調整具體劑量方案，且本說明書所述的 劑量範圍僅為舉例說明而非意欲限制所主張組合物的範圍或應用。在一個實施方案中，該抗體以呈無菌水溶液形式的調製物給藥， 該無菌水溶液的pH介於約5. 0至約6. 5之間且含有約l毫克/毫升至約 200毫克/毫升的抗體、約1毫摩爾至約100毫摩爾組氨酸緩沖液、約0. 01 毫克/毫升至約10毫克/毫升聚山梨醇酯80、約100毫摩爾至約400毫摩 爾海藻糖及約O. Ol毫摩爾至約l. O亳摩爾二水EDTA二鈉。本發明的另 一方面提供含有本發明的抗-MAdCAM抗體或抗體一部 分或含有該抗體的組合物的套盒。除抗體或組合物外套盒可包含診斷 或治療劑。套盒還可以包含用於診斷或治療方法的使用說明。在優選 實施方案中，該套盒包含抗體或含有該抗體的組合物及可在下述方法 中使用的診斷劑。在另外一個優選的實施方案中，該套盒包含該抗體 或含有該抗體的組合物及一種或多種可在下述方法中使用的治療劑。用於本發明的抗體可經由基因治療給藥給有此需要的患者。該療法可在活體內或來自體內方式進行。在一個優選實施方案中，將編碼 重鏈及輕鏈二者的核酸分子給藥給患者。在一更優選的實施方案中，給藥該核酸分子以使其穩定整合至B細胞的染色體上，因為該細胞可專 門產生抗體。在一個優選實施方案中，離體轉染或感染前體B細胞並重 新植入有此需要的患者體內。在另一個實施方案中，使用已知可感染 感興趣細胞類型的重組病毒體內感染前體B細胞或其它細胞。用於基因 治療的典型載體包括脂質體、質粒及病毒載體。例示性病毒載體是逆 轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒。體內或離體感染後，可通過自經治達水平。在一個優選實施方案中，基因療法包括給藥編碼抗-MAdCAM抗體重 鏈或其抗原結合部分的經分離的核酸分子及表達該核酸分子的步驟。 在另一個實施方案中，該基因療法包括給藥編碼抗-MAdCAM抗體輕鏈或其一抗原結合部分的分離的核酸分子及表達該核酸分子的步驟。在一 個更佳方法中，該基因療法包括給藥編碼本發明的抗-MAdCAM抗體重鏈 或其抗原結合部分的分離的核酸分子及編碼本發明抗-MAdCAM抗體輕 鏈或其抗原結合部分的分離的核酸分子並表達該核酸分子的步驟。該 基因療法還可以包括給藥另 一抗炎劑或免疫調節劑的步驟。 抗-MAdCAM抗體對oc 4 P 7/MAdCAM依賴性粘附的抑制 本發明還提供了結合MAdCAM並抑制具有a4 p 7-整聯蛋白的細胞對 MAdCAM或其它同源配體(諸如L-選擇素)對MAdCAM的結合及粘附的抗 -MAdCAM抗體的用途。在一個優選實施方案中，該MAdCAM是人MAdCAM 且呈可溶形式或在細胞表面上表達。在另一優選實施例中，該抗-MAdCAM抗體是人抗體。在另一實施方案中，該抗體或其部分抑制0C4 |3 7與MAdCAM之間的結合，其中ICs。值不超過50nM。在一個優選的實施 方案中，該IC5。值不超過5 nM。在一更優選的實施例中，該ICs。值小於 5 nM。在一更優選的實施例中，ICs。值小於0. 05微克/毫升、0. 04微克 /毫升或0. 03微克/毫升。在另一優選實施例中，該IC5。值小於0. 5微克/ 毫升、0. 4微克/毫升或0. 3微克/毫升。該ICs。值可通過業內已知的任一方法測量。通常，I"值可通過ELISA或粘附分析測量。在一個優選的 實施方案中，該ICs。值是通過粘附分析使用天然表達MAdCAM的細胞或組 織或已經構建可表達MAdCAM的細胞或組織測量。除非本說明書另外定義，否則用於本發明的科學及技術術語具有 為業內普通技術人員通常所了解的含義。並且，除非上下文另有要求， 否則單個術語應包括複數形式且複數術語應包括單數形式。 一般而言， 用於本說明書的所述細胞及組織培養、分子生物學、免疫學、微生物 學、遺傳學、蛋白質及核酸化學以及雜交的術語及技術是為業內熟知 且常用的。除非另有說明，否則本發明的方法及技術一般可根據業內 熟知的傳統方法和如本發明說明書各處引用及論述的各種通用性及更 具體的參考文獻中所述實施。參見例如，Sambrook等人，#o/eci//fl/" C7o/72./7^v 爿 Za6orator/ vl/a/7i/a/, 第二版,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N-Y, (1989)及Ausubel等 人，Ci/_rre/7f /VWoco/s // #o_/ecw/ar Si.o/o^o Greene Publishing Associates (1992)， 及Harlow與Lane， J/z〃6ocT/w 爿"6or"or/ 艙/7i/a/， Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)，這些文獻以引用方式引入本說明書中。酶促反應及純化 技術依照製備商的說明書實施，或如業內習用方法實施，或如本說明 書所述實施。化學品合成、化學品分析、藥物製備、調配及遞送、及 患者的治療採用標準技術。術語"多肽"涵蓋天然或人工合成蛋白質、蛋白質片段及蛋白質 序列的多肽類似物。多肽可以是單體或聚合物。術語"經分離蛋白質"或"經分離多肽，，根據其起源或衍生自如 下蛋白質或多肽(l)不與原本在其天然狀態下伴隨其的天然結合組份 相結合，(2)不含來自相同物種的其它蛋白質；(3)可由來自不同物種 的細胞表達；或(4)在天然狀態下不存在。因此，經化學合成或在不同 於多肽天然起源的細胞的細胞系統中合成的多肽是與其天然結合組份 "分離"的。也可通過分離利用業內熟知的蛋白質純化技術使蛋白質 大體不含天然結合組份。當一樣品的至少約60至75%展現單一種類多肽時，蛋白質或多肽是 "實質純淨"、"實質均一"或"經實質純化"的。該多肽或蛋白質 可以是單體或多聚體。實質純淨多肽或蛋白質通常會佔蛋白質樣品的 約50%、 60%、 70%、 80%或90% W/W、更通常約95%，且優選地會是99% 以上純度。蛋白質純度或均一性可由業內熟知的多種方式展現，例如 進行蛋白質樣品的聚丙烯醯胺凝膠電泳，隨後在用業內熟知染劑染色 凝膠時目測單個多肽條帶。對於某些目的而言，可通過HPLC或業內熟 知的其它方法進行純化來提供更高的分辯力。如本說明書所用術語"多肽片段"是指具有氨基末端缺失和/或羧 基末端缺失的多肽，但其中剩餘的胺基酸序列是與天然存在序列中相 應位置相同。在一些實施例中，片段是至少5、 6、 8或10個胺基酸長。 在其它實施例中，該片段至少14個胺基酸長，更佳至少20個胺基酸長， 通常至少50個胺基酸長，進一步優選至少70、 80、 90、 100、 150或200 個胺基酸長。本說明書所用術語"多肽類似物"是指包含與一胺基酸序列的一 部分具有實質一致性且具有至少一種以下性質的含有至少25個胺基酸 的片段的多肽(l)可在適合結合的條件下特異結合MAdCAM; (2)抑制 a 4 P 7整聯蛋白和/或L-選擇素結合MAdCAM的能力；或(3)降低活體外或 活體內MAdCAM的細胞表面表達的能力。通常，相對於天然存在序列多 肽類似物含有一保守胺基酸取代(或插入或缺失)。類似物通常至少20 個胺基酸長、優選至少50、 60、 70、 80、 90、 100、 150或200個胺基酸 長或更長，且常與全長天然存在的多肽一樣長。"免疫球蛋白"是四聚體分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每 一個四聚體由兩對相同多肽鏈構成，每一對具有一個"輕"鏈(約25kDa)及一個"重"鏈(約50至70 kDa)。每條鏈的氨基末端部分包括一 主要負責抗原識別的具有約100至110或更多胺基酸的可變區。每條鏈 的羧基末端部分界定主要負責效應功能的恆定區。人輕鏈分類為K輕 鏈及X輕鏈。重鏈可分類為ia、 5、 y、 oc或e，且將抗體的同種型 分別定義為IgM、 IgD、 IgA及IgE。在輕鏈及重鏈中，可變區及恆定區是經由含有由約12或更多個胺基酸的"J"區連接，其中該重鏈還包括 含有由約10或更多個胺基酸的"D"區。屍w^/錢e/z"7 /歸加/柳Ch. 7 (Paul, W.編輯，第二版，Raven Press, N. Y. (1989))(出於所有目的，其全部內容以引用方式引入本說明書中)。每 個輕鏈/重鏈對的可變區形成抗體結合位點以使免疫球蛋白具有兩個 結合位點。免疫球蛋白鏈展示具有相同的由三個超變區(亦稱為互補決定區 或CDR)連接的相對保守的框架區(FR)的通用結構。來自每一對的兩條 鏈的CDR通過框架區排列成直線以形成表位特異結合位點。自N-末端至 C-末端，輕鏈及重鏈皆包括結構域FR1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3 及FR4。胺基酸在各結構域中的分配符合Kabat的5^^/e/ ces o屍 i7^e//751 o屍/邁邁w3o/og/ca/ //7fere" (National Institutes of Health, Bethesda， Md. (1987及1991))或Chothia & Lesk /. A/o人196:901-917 (1987); Chothia等人，#a ， 342:878-883 (1989)的定義。"抗體"是指完整免疫球蛋白或指可與完整抗體竟爭特異性結合 的其抗原結合部分。在一些實施例中，抗體是其抗原結合部分。抗原 結合片段是通過重組DNA技術或通過酶促或化學裂解完整抗體產生。抗 原結合部分尤其包括Fab、 Fab'、 F(ab02、 Fv、 dAb及互補決定區(CDR) 片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙抗體及含有至少免疫球蛋白一 部分的多肽(該免疫球蛋白一部分足以賦予該多肽以特異性抗原結合 能力)。Fab片段由VL、 VH、 CL及CH1結構域構成的單價片段；F(ab)2 片段含有在鉸鏈區由二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；Fd片段由 VH及CH1結構域構成；Fv片段由抗體單臂的VL及VH結構域構成；而dAb 片段(Ward等人，^a^re， 341: 544-546 (1989))由VH結構域構成。本說明書所用稱作(例如)1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6.77.2、 7.16.6、 7.20.5、 7. 26. 4或9. 8. 2的抗體是由具有相同名字 的雜交瘤生成的單克隆抗體。舉例而言，抗體1,7. 2是由雜交瘤1.7. 2 產生的。稱作6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的抗體是其序列以定點誘變修飾自其相應的母體的單克隆 抗體。單鏈抗體(scFv)是其VL及VH區經由能夠使其成為單個蛋白質鏈的 合成連接子配對形成單價分子的抗體(Bird等人，Sc/e/7ce, 242: 423-426 (1988)及Huston等人，戶roc. ^a〃. Jcad. 5W. MJ， 85:5879-5883 (1988))。雙抗體是二價雙特異性抗體，其中VH及VL結構 域表達在單一多肽鏈上，但是所用連接子太短因而不容許相同鏈上兩 個結構域之間進行配對，從而迫使這樣的結構域與另一鏈的互補結構 域配對並形成兩個抗原結合位點(參見例如，Holliger， P.等人，戶roc.5W. ,, 90:6444-6448 (1993); Poljak, R. J.等人， 5Y藩&re， 2:1121-1123 (1994))。可以共價或非共價方式將一個或 多個來自本發明抗體的CDR引入一個分子以使其成為可特異結合 MAdCAM的免疫粘附素。免疫粘附素可引入CDR作為較大多肽鏈的一部 分；可共價連接CDR以成為另一多肽鏈；或可以非共價方式引入CDR。 該CDR可以使免疫粘附素特異性結合至特定感興趣的抗原。抗體可具有一個或多個結合位點。若存在一個以上的結合位點，則該結合位點可彼此相同或不相同。舉例而言，天然存在的免疫球蛋 白具有兩個相同的結合位點，單鏈抗體或Fab片段具有一個結合位點， 而"雙特異性"或"雙功能"抗體(雙抗體)則具有兩個不同的結合位 點。"分離的抗體"是如下抗體(l)不與原本在其天然狀態下伴隨其 的天然結合組份(包括其它天然結合的抗體)相結合，(2)不含來自相同 物種的其它蛋白質；(3)可由來自不同物種的細胞表達；或(4)在天然 狀態下不存在。分離的抗體的實例包括已利用MAdCAM親和純化的抗-MAdCAM抗體、已由雜交瘤或其它細胞系在活體外產生的抗-MAdCAM抗體 及源自轉基因哺乳動物或植物的人抗-MAdCAM抗體。本說明書所用術語"人抗體"意指其中可變區及恆定區序列抗體 是人序列的抗體。該術語涵蓋具有源自人基因但為(例如)降低可能的 免疫原性、增加親和力、消除可能會引起不期望的摺疊的半胱氨酸或糖基化位點等已發生改變的序列的抗體。該術語涵蓋這些在非人細胞 (其可能會賦予不具人細胞特徵的糖基化)中重組產生的抗體。該術語 亦涵蓋已在含有一些或所有人免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因座的轉基因 小鼠中飼養的抗體。在一方面中，本發明提供人源化抗體。在一些實施例中，該人源 化抗體是源自非人物種的抗體，該抗體重鏈及輕鏈的框架及恆定結構 域中某些胺基酸已接受突變以便避免或消除人體內的免疫反應。在一 些實施例中，人源化抗體可通過使來自人抗體的恆定結構域與來自非 人物種的可變結構域融合產生。如何形成人源化抗體的實例可見於美國專利第6， 054， 297號、第5，886，152號及笫5， 877， 293號。在一些實 施例中，本發明的人源化抗-MAdCAM抗體含有本發明的一個或多個人抗 -MAdCAM抗體的 一個或多個框架區的胺基酸序列。在另一方面中，本發明包括"嵌合抗體"的用途。在一些實施例 中，該嵌合抗體是指含有一個或多個來自 一個抗體的區域且含有一個 或多個來自一個或多個其它抗體的區域的抗體。在一個優選的實施方 案中， 一個或多個CDR源自本發明的人抗-MAdCAM抗體。在一個更佳實 施例中，所有CDR源自本發明的人抗-MAdCAM抗體。在另一個優選實施 例中，將該來自 一個以上的本發明的人抗-MAdCAM抗體的CDR在一嵌合 抗體中混合併配對。舉例而言，嵌合抗體可含有來自第一個人抗 -MAdCAM抗體輕鏈的CDRl,該CDR1可與來自第二個人抗-MAdCAM抗體輕 鏈的CDR2及CDR3組合，且重鏈的CDR可源自第三個抗-MAdCAM抗體。此 外，框架區可源自相同抗-MAdCAM抗體、 一個或多個不同抗體(諸如人 抗體)或人源化抗體的框架區。"中和抗體，，、"抑制性抗體"或拮抗劑抗體是可抑制至少約20% 的ot 4 P 7或a 4 P廣表達細胞或任何其它同源配體或同源配體表達細胞 結合MAdCAM的抗體。在一個優選的實施方案中，該抗體對a^7整聯蛋 白或oup7表達細胞與MAdCAM結合的抑制至少為40y。、更佳60%、進一步 優選80%、 85%、 90°/。、 95%或100%。結合降低可通過本領域的技術人員 已知的任何方法測量，舉例而言，如通過活體外竟爭結合分析測量，測量a 4 P 7表達細胞對MAdCAM的結果降低的例子如實施例1所示。本領域的技術人員遵照本說明書的教導會很容易地製備抗體片段 或類似物。片段或類似物的優選氨基-及羧基-末端出現在功能結構域 邊界區附近。可將核苷酸和/或胺基酸序列數據與公開的或專利所有序 列資料庫進行比較藉此確定結構及功能結構域。優選地，用計算機化 比較方法來確定在其它具有已知結構和/或功能的蛋白質中出現的序 列基序或預期蛋白質構象結構域。鑑別可摺疊成已知三維結構的蛋白 質序列的方法為人們所公知(Bowie等人，iWe細,253:164 (1991))。 術語"k。ff"指用於表徵抗體自抗體/抗原複合體離解的解離速率 常數。術語"Kd"指特定抗體-抗原相互作用的離解常數。據稱抗體在解 離常數《1 jaM、優選《100 nM且最優選《10 nM時可與抗原結合。術語"表位"包括能夠特異結合結合免疫球蛋白或T-細胞受體或 以其它方式與一分子相互作用的任何蛋白質決定簇。表位決定簇通常 由分子的化學活性表面基團(例如，胺基酸或碳水化合物側鏈)組成， 且其通常具有特異性三維結構特徵以及特異性電荷特徵。An表位可呈"線性"或"構象"形式。在線性表位中，蛋白質與相互作用分子(諸 如抗體)之間所有相互作用點均沿該蛋白質主要胺基酸序列以線性方式出現。在構象表位中，相互作用點交叉出現在蛋白質上彼此分開的 胺基酸殘基上。如本說明書所用，20種公知胺基酸及其縮寫遵循公知用法。參見 /邁/z/""o/og7 -」《5>/7^"2、(第2版，E.S. Golub及D.R. Gren編輯， Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))，其以引用的方 式引入本專利說明書中。20種公知胺基酸的立體異構體(例如D-氨基 酸)、非天然胺基酸(例如a-， ot-二取代胺基酸、N-烷基胺基酸)、乳 酸、及其它非公知胺基酸也適用於本發明的多肽的組份。非公知氨基 酸的實例包括4-羥脯氨酸、Y-羧基麩氨酸、e-N,N，N-三曱基賴氨 酸、e-N-乙醯基賴氨酸、0-磷酸絲氨酸、N-乙醯基絲氨酸、N-甲醯基 曱硫氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、s-N-甲基精氨酸、及其它類似胺基酸及亞胺基酸(例如，4-羥基脯氨酸)。在本說明書所用多肽 符號中，左手方向為氨基末端方向而右手方向為羧基末端方向，符合 標準用法及慣例。如本說明書所提及術語"多核苷酸"意指具有至少10個鹼基長度 的核苷酸(或為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸或任一類型核苷酸的經 修飾形式)聚合形式。該術語包括DNA的單鏈及雙鏈形式。如本說明書所用術語"分離的多核苷酸"意指基因組來源、cDNA 來源、或合成來源或其某一組合的多核苷酸，根據其來源，該"分離 的多核苷酸"(l)並非與全部或一部分在天然狀態下於其中可發現該 "分離的多核苷酸，，的多核苷酸相結合，(2)以可操作方式與一在天然 狀態下其並未與其連接的多核苷酸相連接，或(3)未在天然狀態中作為 較大序列的一部分出現。本說明書所提及術語"寡核苷酸"包括通過天然存在及非天然存 在寡核苷酸鍵結連接在一起的天然存在及經修飾核苷酸。寡核苷酸是 多核苷酸子集，其通常具有200鹼基或更少的長度。寡核苷酸優選IO 至60鹼基長且最優選12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、或20至40鹼 基長。寡核苷酸通常是單鏈，例如對於探針；但寡核苷酸也可以是雙 鏈，例如對於基因突變體的構造。本發明的寡核苷酸可以是有義鏈寡 核苷酸或反義鏈寡核苷酸。本說明書所提及術語"天然存在的核苷酸"包括脫氧核糖核苷酸 及核糖核苷酸。本說明書所提及術語"經修飾核苷酸"包括帶有經修 飾或經取代糖基的核苷酸及諸如此類。本說明書所提及術語"寡核苷 酸鍵"包括如下寡核苷酸鍵，例如硫代磷酸酯基、二硫代磷酸酯基、 硒代磷酸酯基、二硒代磷酸酯基、苯氨基硫代磷酸酯基、苯氨基磷酸 酯基、砩醯胺酯基、及諸如此類。參見例如，LaPlanche等人，峁c/力c/^ 14:9081 (1986); Stec等人，/. J瓜Soc 106:6077 (1984); Stein等人，#wc/.爿c油紋，16: 3209 (1988); Zon等人，紐/-C露er / ri/g "e"'^ 6:539 (1991); Zon等人，組,wc/eo"Ves a/7d 細7餵w "rac〃c"場r瞎力，第87-108頁(F. Eckstein編輯，Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec等人,美 國專利第5， 151， 510號；Uhlmann及Peyman ， Chemical Review， 90: 543 (1990)，上述參考文獻及專利的揭示內容一引用方式引入本專 利說明書中。寡核普酸可視需要包括一用於檢測的標記物。"以可操作方式連接的"序列既包括與感興趣基因鄰接的表達控 制序列也包括反式或遠距作用以控制感興趣基因的表達控制序列。本 說明書所用術語"表達控制序列"是指對於實現其所連接的編碼序列 的表達及加工不可缺少的多核苷酸序列。表達控制序列包括適宜的轉 錄起始、終止、啟動子及增強子序列；有效RNA加工信號，諸如剪接及 聚腺苷酸化信號；穩定胞質mRM的序列；增強轉錄效率的序列(即， Kozak—致序列)；增強蛋白質穩定性的序列；且需要時，包括可增強 蛋白質分泌的序列。該控制序列的性質視宿主生物而不同；在原核生 物中，該控制序列通常包括啟動子、核糖體結合位點、及轉錄終止序 列；在真核生物中，該控制序列一般包括啟動子及轉錄終止序列。術 語"控制序列，，意欲包括(最低限度)所有其存在對於表達及加工是必 不可少的組件且也可包括額外的其存在是有益處的組件，例如前導序 列及融合伴侶序列。本說明書所用術語"載體"欲指能夠轉運已與其連接的另一核酸 的核酸分子。 一類載體是"質粒"，其指其中可連接有額外DNA段的環 狀雙鏈DNA環。另一類載體是病毒載體，其中額外DM段可連接於病毒 基因組中。某些載體(例如，具有細菌複製起始點的細菌載體及附加型 哺乳動物載體)能夠在其中併入此載體的宿主細胞中自主複製。其它載 體(例如，非附加型哺乳動物載體)可在併入宿主細胞後整合至宿主細 胞的基因組中，藉此與宿主基因組一起複製。此外，某些栽體能夠引 導以可操作方式與其連接的基因的表達。本說明書將此等載體稱作"重 組表達載體"(或簡稱為"表達載體，，)。通常，用於重組DM技術的表 達載體通常呈質粒形式。在本說明書中，由於質粒是最常用的載體形 式，所以"質粒"及"載體"可互換使用。然而，本發明欲包括可提 供等效功能的其它形式的表達栽體，例如病毒栽體(例如，複製缺陷型逆轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒)。本說明書所用術語"重組宿主細胞"(或簡稱為"宿主細胞")欲 指其中已引入重組表達載體的細胞。應了解，該術語不僅欲指特定受 試者細胞而且還指此細胞的子代。由於突變或環境影響可使後續各代 發生某些改變，因此，該子代實際上可能與母細胞不同但卻仍涵蓋於 本說明書所用術語"宿主細胞"的範圍內。本說明書所提及術語"選擇性雜交"意指可檢測地且特異性地結 合。本發明多核苷酸、寡核苷酸及其片段在使可估計的與非特異性核 酸的可檢測結合量最小化的雜交及洗滌條件下選擇性雜交至核酸鏈 上。如業內所公知及本說明書所論述，可用"高嚴謹性，，或"高度嚴 謹"條件來實現選擇性雜交條件。"高嚴謹性"或"高度嚴謹，，條件 的一個實例是使一多核苷酸與另一多核苷酸一起如下孵育的方法，其中可將一多核苷酸固定於固體(諸如膜)表面上，於含有6XSSPE或SSC、 50%曱醯胺、5X Denhardt試劑、0.5% SDS、 100微克/毫升變性片段化 鮭魚精子DNA的雜交緩沖液中在42。C的雜交溫度下孵育12至16小時，然 後在55。C下用含有1X SSC、 0.5% SDS的洗滌緩沖液洗滌兩次。可參見 Sambrook等人，上述文獻，第9. 50-9. 55頁。就核苷酸序列範圍而言的術語"百分比序列一致性，，指當就最大 一致性進行比對時兩個序列中相同的殘基。序列 一致性比較的長度可 超過一段含有至少約9個核苷酸的核酸序列、通常至少約18個核苷酸、 更通常至少約24個核苷酸、典型至少約28個核苷酸、更典型至少約32 個核苷酸、且優選地至少約36、 48或更多個核普酸。有多種可用來測 量核苷酸序列 一致性的不同的業內已知算法。舉例而言，可使用FASTA、 Gap或Bestfit (該是Wisconsin Package Version 10. 3中的程序， Accelrys， San Diego， CA)來比較多核苦酸序列。包括(例如)程序 FASTA2及FASTA3的FASTA可提供查詢與搜索序列之間最佳重迭區的比 對及百分比序列一致性(Pearson, f/7z/iz70/. ， 183: 63-98(1990); Pearson, , 132: 185-219 (2000); Pearson,〃ef力0(/; i"/3zjwo/. ， 266: 227—258 (1996); Pearson, /. #0/. A/o厶，276: 71-84 (1998);該文獻以引用方式引入本專利說明書中)。除非 另有說明，否則可使用用於特定程序或算法的默認參數。舉例而言，利用Gap以其Wisconsin Package Version 10. 3 (以引用方式引入本專一致性。除非另有說明，否則提及核苷酸序列也包括其互補部分。因此應 了解，提及具有特定序列的核酸分子也包括具有其互補序列的其互補鏈。在分子生物學業內，研究者可互換使用術語"百分比序列一致性"、 "百分比序列相似性，，及"百分比序列同源性，，。在本申請案中，此 等術語僅對核苷酸序列具有相同含義。當提及核酸或其片段時，術語"實質相似性"或"實質序列相似 性"表示，用適宜核苷酸插入或刪除與另一核酸(或其互補鏈)進行最 優比對時，在至少約85%、優選至少約90%且更佳至少約95%、 96%、 97%、 98%或99%核苷酸鹼基中具有核苷酸序列一致性，如上所述通過任一熟 知序列一致性算法(諸如FASTA、 BLAST或Gap)所測得。用於多肽時，術語"實質一致性"意指，當兩個肽序列通過(例如) 程序GAP或BESTFIT利用默認空位加權進行最有比對時，二者具有至少 75%或80%序列一致性、優選具有至少90%或95%序列一致性、進一步優 選具有至少98%或99%序列一致性。優選地，不完全相同的殘基位置因保守胺基酸取代而不同。"保守胺基酸取代"是其中一胺基酸殘基由 另一具有有相似化學性質(例如，電荷或疏水性)的側鏈(R基團)的胺基酸殘基所取代這樣的取代。 一般而言，保守胺基酸取代不會實質改變 蛋白質的功能性質。在其中兩個或兩個以上胺基酸序列因保守取代而 彼此不同的情況中，可上調百分比序列一致性或相似度以校正取代的 保守性質。用於進行此調整的方法為本領域的技術人員所熟知。參見 例如，Pearson, "/o入，24: 307-31 (1994)，該文獻以引用方式引入本專利說明書中。具有有相似化學性質的側鏈的各組胺基酸的實例包括l)脂肪族側鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨 酸及異亮氨酸；2)脂肪族羥基側鏈絲氨酸及蘇氨酸；3)含醯胺側鏈 天冬醯胺及谷胺醯胺；4)芳香族側鏈苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸； 5)鹼性側鏈賴氨酸、精氨酸及組氨酸；以及6)含硫側鏈半胱氨酸 及曱硫氨酸。優選保守胺基酸取代基團是纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、 苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、穀氨酸-天冬氨 酸及天冬醯胺-谷胺醯胺。或者，保守取代是在Gonnet等人，Sc/e腳，256: 1443-45 (1992)(以引用方式引入本專利說明書中)中揭示的PAM250對 數相似度矩陣中具有正值的任何改變。"中度保守"取代是在PAM250 對數相似度矩陣中具有非負值的任何改變。多肽的序列相似性通常利用序列分析軟體測量。蛋白質分析軟體 使用分配給各種取代、缺失及其它修改(包括保守胺基酸取代)的相似 性量度匹配類似序列。舉例而言，GCG含有諸如"Gap"及"BestfU" 等程序，可利用該程序以默認值確定緊密相關多肽(諸如來自不同物種 生物體的多肽)之間或野生型蛋白質與其一突變蛋白質之間的序列同 源寸生或序歹寸一致'〖生。參見例》口， Wisconsin package Version 10. 3。 也可以使用FASTA (Wisconsin package Version 10. 3中一程序)以默 認或推薦參數比較多肽序列。FASTA(例如，FASTA2及FASTA3)可提供查 詢與搜索序列之間最佳重迭區的比對及百分比序列一致性(Pearson (1990); Pearson (2000))。當將本發明序列與含有大量來自不同生物 體的序列的資料庫進行比較時，另一優選算法是電腦程式BLAST,尤 其是blastp或tblastn(使用默認參數)。參見例如，Altschul等人，/. #。7. S/o/. 215: 403-410 (1990); Altschul等人，腸/e/c 25:3389-402 (1997);該文獻以引用方式引入本專利說明書中。進行同源性比較的多肽序列的長度一般會是至少約16個胺基酸殘 基、通常至少約20個殘基、更通常至少約24個殘基、典型至少約28個 殘基且優選多於約35個殘基。當搜索含有來自大量不同生物體的序列 的資料庫時，優選去比較胺基酸序列。本說明書所用術語"標記物"或"經標記"是指在抗體中摻入另 一分子。在一個實施例中，該標記物是可檢測的標記物，例如，摻入 經放射標記的胺基酸或連接至具有可通過經標記抗生物素蛋白檢測的 生物素基部分的多肽(例如，包含螢光標記物或具有可通過光學或比色 方法檢測的酶促活性的鏈黴抗生物素蛋白)。在另一實施例中，該標記 或標記物可以是治療劑，例如，藥物共軛物或毒素。多種標記多肽及 糖蛋白的方法為業內所知且可使用。用於多肽的標記物實例包括但不限於以下各物放射性同位素或放射性核素(例如，3H、 14C、 15N、 35S、 9。Y、 "Tc、出ln、 I25l、 i3!l)、螢光標記物(例如，FITC、羅丹明、鑭系 元素磷光體)、酶標記物(例如、過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、螢光素 酶、鹼性磷酸酶)、化學發光標記物、生物素基團、由二級報告子識別 的預先確定的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對序列、二級抗體的結合位 點、金屬結合結構域、表位標籤)、磁性劑，諸如釓螯合物、毒素，諸 如百曰咳毒素(pertussis toxin)、 紫杉醇(taxol)、細胞鬆弛素 B(cytochalasin B)、短桿菌肽D (gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、吐根鹼(emetine)、絲裂黴素(mitomycin)、表鬼桕毒素 (etoposide)、鬼臼瘞汾戒(tenoposide)、長春新鹼(vincrist ine)、 長春鹼(vinblastine)、 秋7Jc仙鹼(colchicin)、 多柔比星 (doxorubicin)、 柔紅黴素(daunorubicin) 、 二羥基蒽酉昆(dihydroxy anthracin dione)、 米託蒽硫(mitoxantrone)、 光輝黴素 (mithramycin)、 方欠線菌素D(actinomycin D) 、 l一去氛華酉同 (l-dehydrotestosterone)、糖皮質激素、普魯卡因(procaine) 、 丁 卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、 及噤呤黴素(puromycin)及其類似物或同系物。在某些實施例中，標記 物通過各種長度之間隔子臂添加以降低潛在的空間位阻。
權利要求
1.一種抗-MAdCAM抗體或其抗原結合部分的用途，其用於製備用來治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物。
2. 權利要求l的用途，其中該藥物用於治療腹部疾病。
3. 權利要求1或權利要求2的用途，其中該抗-MAdCAM抗體是人單 克隆抗體。
4. 權利要求3的用途，其中該抗體或部分具有至少一種以下性質(a) 結合人細胞；(b) 對MAdCAM具有較VCAM或纖連蛋白高至少100倍的選擇性；(c) 以3xl0—" M或更低的Kd結合人MAdCAM;或(d) 抑制ou )3 7表達細胞對人MAdCAM的結合；(e) 抑制淋巴細胞向胃腸淋巴組織的募集。
5. 權利要求1至4中任一項的用途，其中所述抗體或抗原結合部分 抑制人MAdCAM對oc4 P 7的結合，且其中該抗體或其部分具有至少一種以 下性質(a) 與參照抗體交叉竟爭結合MAdCAM;(b) 與參照抗體竟爭結合MAdCAM;(c) 與參照抗體結合相同的MAdCAM表位；(d) 以與參照抗體大體相同的Kd結合MAdCAM;(e) 以與參照抗體大體相同的解離速率結合MAdCAM; 其中該參照抗體選自單克隆抗體1.7. 2、單克隆抗體1.8.2、單克隆抗體6. 14.2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6. 34. 2、單克隆抗體 6.67.1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆抗體7. 16. 6、 單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26.4、單克隆抗體9. 8. 2、單克隆抗 體6. 22.2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體6. 67. l-mod、單克 隆抗體6. 77. l-mod及單克隆抗體7. 26. 4-mod。
6. 權利要求1至5中任一項的用途，其中該抗-MAdCAM抗體的重鏈 可變區、輕鏈可變區或二者在胺基酸序列上與選自下列的單克隆抗體的對應區域具有至少90%的同一性單克隆抗體1.7. 2、單克隆抗體1.8. 2、 單克隆抗體6.14. 2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6. 34. 2、單克隆抗 體6. 67. 1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆抗體7. 16. 6、 單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26.4、單克隆抗體9. 8. 2、單克隆抗 體6. 22.2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體6. 67. 1-mod、單克 隆抗體6. 77. l-mod及單克隆抗體7. 26. 4-mod。
7.權利要求1至6中任一項的用途，其中該抗體選自(a) 含有示於SEQ ID N0:2及SEQ ID NO: 4的胺基酸序列但不含信號序 列的抗體；(b) 含有示於SEQ ID N0:6及SEQ ID NO: 8的胺基酸序列但不含信號序 列的抗體；(c) 含有示於SEQ ID NO:10及SEQ ID NO: 12的氛基酸序列但不含信號 序列的抗體；(d) 含有示於SEQ ID N0:14及SEQ ID NO: 16的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(e) 含有示於SEQ ID N0:18及SEQ ID NO: 20的氛基酸序列但不含信號 序列的抗體；(f) 含有示於SEQ ID NO: 22及SEQ ID NO: 24的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(g) 含有示於SEQ ID NO:26及SEQ ID NO: 28的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(h) 含有示於SEQ ID NO:30及SEQ ID NO: 32的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(i) 含有示於SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 36的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(j) 含有示於SEQ ID NO: 38及SEQ ID NO: 40的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(k) 含有示於SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 44的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(1) 含有示於SEQ ID NO: 46及SEQ ID NO: 48的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；On) 含有示於SEQ ID NO:52及SEQ ID NO: 54的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(n) 含有示於SEQ ID NO:56及SEQ ID NO: 58的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(o) 含有示於SEQ ID NO:60及SEQ ID NO: 62的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；(p) 含有示於SEQ ID N0:64及SEQ ID NO: 66的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體；及(q) 含有示於SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 68的胺基酸序列但不含信號 序列的抗體。
8. 權利要求1至7中任一項的用途，其中重鏈C-末端的賴氨酸自該 抗-MAdCAM抗體裂解。
9. 權利要求1至8中任一項的用途，其中該單克隆抗體或其抗原結 合部分選自下列抗體(a) 重鏈包含選自於下列的參照抗體的重鏈CDR1、 CDR2及CDR3胺基酸 序列1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(b) 輕鏈包含選自於下列的參照抗體的輕鏈CDR1、 CDR2及CDR3胺基酸 序列:1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. 1-mod及7. 26. 4-mod(c) 該抗體包含(a)的重鏈及(b)的輕鏈；及(d) (c)的抗體，其中重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列選自相同的參照抗體。
10. 權利要求1至9中任一項的用途，其中該單克隆抗體或抗原結合 部分包含(a)含有選自下列的抗體的重鏈可變區胺基酸序列的重鏈1. 7. 2(SEQID NO: 2); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 6); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 10); 6. 22. 2 (SEQ ID NO: 14); 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 18); 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 22); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 26); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 30); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 34); 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 38); 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 42); 及9. 8. 2 (SEQ ID NO: 46); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 52) ;6. 34. 2-mod卿 ID NO: 56);6. 67. l-mod(SEQ ID NO: 60) ; 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 64); 及7. 26. 4—mod (SEQ ID NO: 42);(b) 含有選自下列的抗體的輕鏈可變區胺基酸序列的輕鏈1. 7. 2 (SEQ ID NO: 4); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 8); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 12); 6. 22. 2 (SEQ ID NO: 16); 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 20); 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 24); 6， 73. 2 (SEQ ID NO: 28); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 32); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 36); 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 40); 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 44); 及9. 8. 2 (SEQ ID NO: 48); 6. 22. 2-mod (SEQIDNO: 54) ;6. 34. 2-mod (SEQID NO: 58);6. 67. 1-mod (SEQ ID NO: 62) ; 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 66); 及7. 26. 4-mod(SEQ ID NO: 68);或(c) (a)的重鏈及(b)的輕鏈。
11. 一種抗-ouP7整聯蛋白抗體或其抗原結合部分的用途，其用於 製備用來治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物。
全文摘要
本發明是關於抗-MAdCAM抗體在製備用於治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物中的用途。本發明還涵蓋使用治療有效量的抗-MAdCAM抗體治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的方法。
文檔編號A61K39/395GK101227923SQ200680026974
公開日2008年7月23日 申請日期2006年6月28日 優先權日2005年7月8日
發明者G·C·伯吉斯 申請人:輝瑞有限公司