一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法
2023-05-09 11:32:41
專利名稱：一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及蔗糖含量測定方法。
背景技術：
蔗糖是菜用大豆鮮籽粒中含量最高的可溶性糖，其含量的高低直接決定菜用大豆的食用品質，有研究證明，受歡迎的菜用大豆品種均具有蔗糖含量高的特性。國外關於菜用大豆鮮籽粒中蔗糖含量的測定方法多採用高效液相色譜法，此方法儘管可行，但由於前處理繁瑣，所需耗材和儀器昂貴在實際應用中受到很大的限制。目前國內外關於菜用大豆鮮籽粒中蔗糖的簡單測定方法還較少見報導，而關於植物組織中的蔗糖含量的簡單測定方法，如鹽酸-間苯二酚法並未考慮到菜用大豆鮮籽粒中蛋白質含量高、色素多的特點，導致在實驗中所提取的糖溶液渾濁，顏色較深，最終使得比色結果偏差較大，影響最終蔗糖含量 的計算。
發明內容
本發明是解決現有的用鹽酸-間苯二酚法測定菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的方法測定結果偏差大的問題，而提供一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法。本發明的一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法按以下步驟實現一、按大豆鮮籽粒質量與蒸餾水體積比為Ig 5mL的比例稱取大豆鮮籽粒與蒸餾水，將大豆鮮籽粒與蒸餾水加入到勻漿機中研磨至0. 20、. 25小時，得到漿液；二、將步驟一得到的漿液轉移至離心管中，並將離心管置於65 75°C水浴中浸提3(T50min，浸提結束後將離心管在7000rpm轉速下離心分離15min，分別收集上清液與沉澱，向沉澱中再加入5mL蒸餾水重複提取兩次，合併三次提取的上清液；
三、按上清液的體積與活性炭的質量的比為15mL :0. Ig的比例，將活性炭與步驟二得到的上清液混合，然後置於7(T75°C水浴中脫色3(T50min，脫色後將離心管在7000rpm轉速下離心處理15min，收集上清液；四、按固體硫酸銨的質量與步驟三得到的上清液的體積比為3. 6(T3. 65g 15mL的比例，向步驟三得到的上清液中後加入硫酸銨，並置於25°C水浴中靜置f I. 5h，然後在7000rpm轉速下離心處理15min,得到樣品溶液；五、配製蔗糖標準溶液，同時取ImL步驟四製備的樣品溶液；將蔗糖標準溶液與樣品溶液分別放入試管中，然後向每個試管中加入0. ImL 2mol/LNa0H溶液,並將試管置於溫度為100°C的水中靜置3 4min，然後冷卻至室溫，再向每個試管中分別加入3mL的濃鹽酸及ImL質量百分含量為0. 1%的間苯二酚，搖勻後置於80°C水浴中靜置l(Tl5min，取出冷卻至室溫，得蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液，利用分光光度儀，在透過光波長為480 nm的條件下，測定蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液的吸光光度值，然後以蔗糖標準溶液測定液的吸光光度值為橫作標、以蔗糖標準溶液測定液的濃度為縱作標作圖；進行擬合，得到回歸方程y=ax+b，其中a、b為常數，y為蔗糖濃度，x為吸光光度值即OD值；
六、將樣品測定液所得OD值代入方程即可得出蔗糖濃度，用此濃度值計算鮮籽粒中蔗糖的含量，即完成對菜用大豆鮮籽粒蔗糖的含量測定。本發明運用改進後的測定方法使得菜用大豆鮮籽粒中蔗糖含量的測定更加精確。以測定中科毛豆I號為例，如以液相色譜法(示差檢測器)測定出的菜用大豆中科毛豆I號鮮籽粒中蔗糖含量41. 86mg/g為參照，運用植物組織的中蔗糖含量測定方法，由於糖的提取溶液中存在較多的可溶性蛋白質，溶液較混濁，同時由於色素的存在，提取液顏色也較深，測定結果為53. 13mg/g，從而增大了最終測定結果，而改進的方法能去除可溶性蛋白和色素的幹擾，測定結果為43. 03mg/g，較準確地反映菜用大豆鮮籽粒中蔗糖的含量。運用改進後的蔗糖含量測定方法能較準確地測定出菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量。為優質菜用大豆鑑定和菜用大豆高糖育種提供了重要的技術支持。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式的一種菜用大豆鮮籽粒鹿糖含量的測定方法按以下步驟實現一、按大豆鮮籽粒質量與蒸餾水體積比為Ig 5mL的比例稱取大豆鮮籽粒與蒸餾水，將大豆鮮籽粒與蒸餾水加入到勻漿機中研磨至0. 20、. 25小時，得到漿液；二、將步驟一得到的漿液轉移至離心管中，並將離心管置於65 75°C水浴中浸提3(T50min，浸提結束後將離心管在7000rpm轉速下離心分離15min，分別收集上清液與沉澱，向沉澱中再加入5mL蒸餾水重複提取兩次，合併三次提取的上清液；三、按上清液的體積與活性炭的質量的比為15mL 0. Ig的比例，將活性炭與步驟二得到的上清液混合，然後置於7(T75°C水浴中脫色3(T50min，脫色後將離心管在7000rpm轉速下離心處理15min，收集上清液；四、按固體硫酸銨的質量與步驟三得到的上清液的體積比為3. 6(T3. 65g 15mL的比例，向步驟三得到的上清液中後加入硫酸銨，並置於25°C水浴中靜置f I. 5h，然後在7000rpm轉速下離心處理15min,得到樣品溶液；五、配製蔗糖標準溶液，同時取ImL步驟四製備的樣品溶液；將蔗糖標準溶液與樣品溶液分別放入試管中，然後向每個試管中加入0. ImL 2mol/LNa0H溶液,並將試管置於溫度為100°C的水中靜置3 4min，然後冷卻至室溫，再向每個試管中分別加入3mL的濃鹽酸及ImL質量百分含量為0. 1%的間苯二酚，搖勻後置於80°C水浴中靜置l(Tl5min，取出冷卻至室溫，得蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液，利用分光光度儀，在透過光波長為480nm的條件下，測定蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液的吸光光度值，然後以蔗糖標準溶液測定液的吸光光度值為橫作標、以蔗糖標準溶液測定液的濃度為縱作標作圖；進行擬合，得到回歸方程y=ax+b，其中，y為蔗糖濃度，x為吸光光度值即OD值；六、通過步驟五EXCEL計算出的回歸方程，將樣品測定液所得OD值代入方程即可得出蔗糖濃度，用此濃度值計算鮮籽粒中蔗糖的含量，即完成對菜用大豆鮮籽粒蔗糖的含量測定。本發明運用改進後的測定方法使得菜用大豆鮮籽粒中蔗糖含量的測定更加精確。以測定中科毛豆I號為例，如以液相色譜法(示差檢測器)測定出的菜用大豆中科毛豆I號鮮籽粒中蔗糖含量41. 86mg/g為參照，運用植物組織的中蔗糖含量測定方法，由於糖的提取溶液中存在較多的可溶性蛋白質，溶液較混濁，同時由於色素的存在，提取液顏色也較深，測定結果為53. 13mg/g，從而增大了最終測定結果，而改進的方法能去除可溶性蛋白和色素的幹擾，測定結果為43. 03mg/g，較準確地反映菜用大豆鮮籽粒中蔗糖的含量。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟二中的水浴溫度為68 72°C，其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟三中的水浴溫度為72 74°C，脫色時間為35 45min，其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟四中的25°C水浴中靜置時間為I. 3h，其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一不同的是步驟五中的蔗糖標準溶液配製方法為將lmg/mL蔗糖標準溶液按I倍、I. 25倍、2. 5倍、5倍、10倍方式加水進行稀釋。其它步驟及參數與具體實施方式
一相同。
通過以下試驗驗證本發明的有益效果試驗一本試驗的一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法按以下步驟實現一 精確稱取菜用大豆鮮籽粒lg，置於機械勻漿器中，用移液槍加入3mL蒸餾水，研磨0. 2^0. 25小時，得到漿液，二、然後將勻漿轉移到45mL離心管中，用2mL蒸餾水潤洗勻漿杯，將潤洗液全部移入離心管中，然後將離心管蓋緊後置於75°C水浴中浸提30min，浸提過程中用渦旋儀振蕩三次，浸提結束後7000rpm離心15min，分別收集上清液與沉澱，沉澱加入5mL蒸餾水重複提取兩次，合併上清液；三、向步驟二的上清液中加入活性炭0. IOg,置於75°C水浴中脫色30min，7000rpm離心15min,收集上清液；四向步驟三中的上清液中加入3. 65g固體硫酸銨後置於25°C水浴中lh，7000rpm離心15min除去蛋白質,取上清液定容至50mL,得到樣品溶液；五、取試管9支，從I到9進行編號，1-6號試管分別加入Img mL—1蔗糖標準溶液0mL、0. lmL、0. 2mL、0. 4mL、0. 8mL和lmL，然後分別補水至ImL, 7-9號試管分別加入ImL樣品溶液，每個試管中分別加入0. ImL 2mol L^1NaOH,蓋塞放入100°C的水中靜置3min，取出用流水冷卻至室溫，每個試管分別加入3mL濃鹽酸、0. 1% (w/v)間苯二酹ImL,搖勻後置於80°C水浴中lOmin，取出用流水冷卻至室溫，得蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液，利用分光光度儀，在透過光波長為480nm的條件下，測定蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液的吸光光度值，然後以蔗糖標準溶液測定液的吸光光度值為橫作標、以蔗糖標準溶液測定液的濃度為縱作標作圖；進行擬合，得到回歸方程y=0. 5379Xx-0. 0174，其中，y為蔗糖濃度，x為吸光光度值即OD值；六、將樣品測定液所得OD值代入方程即可得出蔗糖濃度，用此濃度值計算鮮籽粒中蔗糖的含量，即完成對菜用大豆鮮籽粒蔗糖的含量測定。具體效果如以液相色譜法(示差檢測器)測定出的菜用大豆中科毛豆I號鮮籽粒中蔗糖含量41. 86mg/g為參照，以本方法測定出菜用大豆中科毛豆I號鮮籽粒中蔗糖含量為43. 03mg/g，較對照低2. 8%，而未改進過的間苯二酚法測定出的菜用大豆中科毛豆I號鮮籽粒中蔗糖含量數值為53. 13mg/g，較對照高出26. 9%，則改進後方法較原方法更為接近參照值。
權利要求
1.一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法，其特徵在於菜用大豆鮮籽粒中蔗糖含量測定方法按以下步驟實現 一、按大豆鮮籽粒質量與蒸餾水體積比為Ig5mL的比例稱取大豆鮮籽粒與蒸餾水，將大豆鮮籽粒與蒸餾水加入到勻漿機中研磨至O. 2(Γ0. 25小時，得到漿液； 二、將步驟一得到的漿液轉移至離心管中，並將離心管置於65 75°C水浴中浸提3(T50min，浸提結束後將離心管在7000rpm轉速下離心分離15min，分別收集上清液與沉澱，向沉澱中再加入5mL蒸餾水重複提取兩次，合併三次提取的上清液； 三、按上清液的體積與活性炭的質量的比為15mL0. Ig的比例，將活性炭與步驟二得到的上清液混合，然後置於7(T75°C水浴中脫色3(T50min，脫色後將離心管在7000rpm轉速下離心處理15min,收集上清液； 四、按固體硫酸銨的質量與步驟三得到的上清液的體積比為3.6(T3. 65g 15mL的比例，向步驟三得到的上清液中後加入硫酸銨，並置於25°C水浴中靜置fl.5h，然後在7000rpm轉速下離心處理15min,得到樣品溶液； 五、配製蔗糖標準溶液，同時取ImL步驟四製備的樣品溶液；將蔗糖標準溶液與樣品溶液分別放入試管中，然後向每個試管中加入O. lmL2mol/L NaOH溶液,並將試管置於溫度為100°C的水中靜置3 4min，然後冷卻至室溫，再向每個試管中分別加入3mL的濃鹽酸及ImL質量百分含量為O. 1%的間苯二酚，搖勻後置於80°C水浴中靜置l(Tl5min，取出冷卻至室溫，得蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液，利用分光光度儀，在透過光波長為480nm的條件下，測定蔗糖標準溶液測定液與樣品測定液的吸光光度值，然後以蔗糖標準溶液測定液的吸光光度值為橫作標、以蔗糖標準溶液測定液的濃度為縱作標作圖；進行擬合，得到回歸方程y=ax+b，其中a、b為常數，y為蔗糖濃度，x為吸光光度值即OD值； 六、將樣品測定液所得OD值代入方程即可得出樣品測定液蔗糖濃度，用此濃度值計算鮮籽粒中蔗糖的含量，即完成對菜用大豆鮮籽粒蔗糖的含量測定。
2.根據權利要求I所述的一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法，其特徵在於步驟二中的水浴溫度為68 72°C。
3.根據權利要求I所述的一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法，其特徵在於步驟三中的水浴溫度為72 74°C，脫色時間為35 45min。
4.根據權利要求I所述的一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法，其特徵在於步驟四中的25°C水浴中靜置時間為I. 3h。
5.根據權利要求I所述的一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法，其特徵在於步驟五中蔗糖標準溶液配製方法為將lmg/mL蔗糖溶液按I倍、I. 25倍、2. 5倍、5倍、10倍方式分別加水進行稀釋。
全文摘要
一種菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的測定方法，本發明涉及蔗糖含量的測定方法。本發明是要解決現有的測定菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量的方法中存在測定結果偏差較大的問題。本發明的測定方法為一、植物組織的研磨；二、蔗糖的提取；三、對提取的蔗糖進行脫色；四、對提取的蔗糖去除蛋白質；五、製備蔗糖標準溶液測定液及樣品溶液測定液同時根據蔗糖標準溶液測定液的濃度與吸光光度值進行擬合，得到回歸方程y=ax+b；六、根據蔗糖樣品溶液測定液比色後的OD值代入此回歸方程計算出樣品溶液中的蔗糖濃度，用此濃度值計算鮮籽粒中蔗糖的含量。運用改進後的蔗糖含量測定方法能較準確地測定出菜用大豆鮮籽粒蔗糖含量，本發明應用於蔗糖含量測定領域。
文檔編號G01N1/28GK102798600SQ20121024349
公開日2012年11月28日 申請日期2012年7月13日 優先權日2012年7月13日
發明者李彥生, 張秋英, 杜明, 劉居東, 王光華, 劉曉冰 申請人:中國科學院東北地理與農業生態研究所