二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物及其製備和應用方法

2023-05-09 10:12:26

專利名稱：二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物及其製備和應用方法
技術領域：
本發明公開了一種二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物及其製備和應用方法，尤其是在製備基於多肽自組裝納米線作為電子媒介體的葡萄糖電化學生物傳感器上的應用方法。
背景技術：
自克拉克和裡昂開發出將酶固定於電極表面的檢測方法以來(Annals of the NewYork Academy of Sciences, 1962, 102，29-45),酶傳感器得到了迅速發展。近十年來,雖然不同種類的生物傳感器和檢測器件相繼被開發出來，但葡萄糖生物傳感器的進一步完善和商業化依然是國際上生物傳感器研究領域的熱門。血糖的實時監控對於糖尿病患者病情控制意義重大，現今血糖測試儀已使糖尿病患者可在家中自行測定血糖值。將葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,簡稱GOx)和電子媒介體二茂鐵(ferrocene,簡稱Fe)固定於工作電極上，當在檢測體系中加入血樣後，血液中的葡萄糖被GOx氧化。Fe具有優良的電化學活性， 可起到增強電子傳遞、放大信號作用。通常分步將GOx和Fe固定到電極上，步驟較繁瑣且影響傳感器的重現性。因此，我們考慮製備一種納米複合材料同時包含Fe和G0x，這樣只需一步，將此納米材料固定在電極上即可完成葡萄糖傳感器的製備。近年來，自組裝多肽納米材料因其良好的生物相容性、簡單的自組裝過程以及易於功能化等特點而備受關注(Journal of the American ChemicalSociety, 2010, 132，15632-15636)。在已報導的多種多肽分子中，二苯丙氨酸(diphenylalanine, Phe-Phe,簡稱FF)及其衍生物因其分子結構簡單而得到研究工作者青睞。在不同條件下，FF可自組裝形成納米管、納米線,納米顆粒等。這類納米材料表面的氨基或羧基使其可進行多樣的化學修飾，從而應用於構造複雜納米器件、作為藥物載體以及製備生物傳感器。

發明內容
本發明的目的是提供一種二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物及其製備和應用方法。本發明首次基於二茂鐵-二苯丙氨酸(Fc-Phe-Phe-OH)通過共價鍵、氫鍵等作用自組裝形成的二茂鐵多肽納米線(Fc-Nano Peptide Wires,簡稱Fc-PNWs),並結合葡萄糖氧化酶，得到Fc-Nano Peptide Wires-GOx,簡稱Fc-PNWs_G0x,再由此製備了測定血糖的電化學生物傳感器。該傳感器靈敏度高，檢測限低且製備方法簡單。二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物的製備方法，包括以下任一方式所述的步驟:稱取二茂鐵-二苯丙氨酸溶於乙醇，待溶劑揮發後，二茂鐵-二苯丙氨酸逐漸析出並且自組裝形成線型納米材料A ;將A加入蒸餾水中，在超聲儀中超聲震蕩，使A由團聚狀態分散開來得到B ;取殼聚糖溶液與B混合，震蕩超聲後放置，使殼聚糖分子充分修飾到納米線表面得到C ;將C離心，移除上層溶液，然後至少重複進行兩次加pH=7.4的磷酸緩衝溶液、離心和移除上層溶液的過程後滴入戊二醛的水溶液，形成混合物後震蕩，然後離心得到D ;向D中加入葡萄糖氧化酶水溶液，震蕩，放置，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物；或者稱取二茂鐵-二苯丙氨酸溶於乙醇；待溶劑揮發後，二茂鐵-二苯丙氨酸逐漸析出並且自組裝形成線型納米材料A ;將A加入磷酸緩衝溶液，在超聲儀中超聲震蕩，使A由團聚狀態分散成單條納米線狀態，然後離心，再次加入磷酸緩衝溶液，離心，移除上層溶液，得到E，分別取殼聚糖溶液，戊二醛水溶液和葡萄糖氧化酶水溶液，加入E中配成二茂鐵-二苯丙氨酸溶液，震蕩超聲，放置，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物。上述方法具體如下:
稱取二茂鐵-二苯丙氨酸溶於乙醇，配成2 5mg/mL的溶液；待溶劑揮發後，二茂鐵-二苯丙氨酸逐漸析出並且自組裝形成線型納米材料A ;稱取A2mg加入ImL蒸餾水，在超聲儀中超聲震蕩3 5分鐘，使A由團聚狀態分散開來得到B ;取ImL質量分數1%的殼聚糖溶液與B混合，震蕩超聲2分鐘後放置3小時，使殼聚糖分子充分修飾到納米線表面得到C ;將C離心，離心轉數為5000轉/分鐘，離心5分鐘，移除上層溶液，然後重複進行兩次加pH=7.4的磷酸緩衝溶液、離心和移除上層溶液的過程後滴入500 μ L0.25%的戊二醛的水溶液，形成混合物後震蕩半小時，然後離心得到D ;按照二茂鐵-二苯丙氨酸2mg/mL的配比，向D中加入10 15mg/mL的葡萄糖氧化酶水溶液，震蕩2_5分鐘，放置24h，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物；或者稱取2 5mg 二茂鐵-二苯丙氨酸溶於ImL乙醇；將溶液烘乾待二茂鐵_ 二苯丙氨酸析出及自組裝形成線型納米材料A ;稱取A2mg加入ImL磷酸緩衝溶液，在超聲儀中超聲3 5分鐘，使A由團聚狀態分散成單條納米線狀態，然後5000轉/分鐘，離心5分鐘，再次加入ImL磷酸緩衝溶液，離心，移除上層溶液，得到E，分別取100 μ L0.5%質量分數的殼聚糖溶液，450 μ L0.25%戊二醛水溶液和450 μ L10_15mg/mL的葡萄糖氧化酶水溶液，加入E中配成2mg/mL的二茂鐵-二苯丙氨酸溶液，震蕩超聲2 5分鐘，放置24小時，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物。所述的二茂鐵-二苯丙氨酸的製備方法如下:I)將摩爾比1:1.2:1.2的單羧基二茂鐵、1-羥基苯並三唑和苯並三氮唑-N，N，N』，N』 -四甲基脲六氟磷酸鹽溶在無水二氯甲烷中，體系置於冰浴中逐滴加入三乙胺至體系環境PH達到8.0 9.0範圍間；攪拌I小時；薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，依次用飽和NaC03、5%HCl和蒸餾水各萃取一次；萃取液濃縮，柱層析純化，真空乾燥；得暗紅色化合物Fc-OBt ；2)將N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸、苯並三氮唑-N，N, N』，N』 -四甲基脲六氟磷酸鹽和1-羥基苯並三唑溶解於無水二氯甲烷，三者的濃度均為4.4禮，冰浴條件下逐滴加入三乙胺直至體系環境達到PH8-9範圍間，反應I小時，再加入L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，使之濃度達到4.4mM，室溫攪拌18小時，薄層色譜點板監測反應基本完全；依次用飽和NaHCO3, 10%HC1和蒸餾水洗滌，並用Na2SO4乾燥；減壓蒸乾，柱層析純化，在旋轉蒸發儀上旋轉蒸乾至油狀液體，移入冷凍乾燥機內低溫乾燥，得Boc-Phe-Phe-OMe粉末；3)將Boc-Phe-Phe-OMe溶於無水二氯甲烷20mL，濃度為2mM，再和IOmL三氟乙酸混合，常溫攪拌反應30min，減壓蒸乾，所得中間產物H-Phe-Phe-OMe溶解在2mL無水二氯甲烷中，用三乙胺調至pH=8 ;繼續加入20mL無水二氯甲烷稀釋溶液，並加入步驟I)得到的Fc-OBt,使Fc-OBt濃度為2.2mM,常溫攪拌I小時，薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，依次用飽和NaC03、5%HCl和蒸餾水萃取一次；萃取液濃縮，柱層析純化，真空乾燥；得橙黃色化合物 Fc-Phe-Phe-OMe ；4)將Fc-Phe-Phe-OMe溶解在12mL的四氫呋喃，濃度為ImM，再緩慢滴加2.5mM的氫氧化鋰6mL，室溫下攪拌2小時；薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，減壓蒸餾將其中的四氫呋喃抽淨，然後向此懸濁液裡加入二氯甲烷30mL，依次用5%HC1和蒸餾水萃取，減壓旋轉蒸乾；柱層析純化，真空乾燥，得到化合物Fc-Phe-Phe-OH。上述的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物的應用方法，用於製備檢測血糖的生物傳感器或者試紙。在製備檢測血糖的生物傳感器時將製備得到的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物滴加於電極上， 乾燥後即可。優選取IOyL 二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物滴加於電極上。本發明使用的多肽為二茂鐵-二苯丙氨酸。其結構如下:
λ)
o有益效果:(I)本發明利用二茂鐵多肽納米線的高比表面積來提高葡萄糖氧化酶的負載量，同時5納米長的納米線上包含約8X IO5個二茂鐵分子是一種性能優越的電子媒介體。與分步固定GOx和Fe的方法相比較,將其用於傳感器製備步驟簡單，Fc-PNWs結合GOx形成Fc-PNWs-GOx後，只需一步即可固定到電極表面，乾燥後即可進行檢測。(2)本發明首次將葡萄糖氧化酶與含大量二茂鐵分子的多肽納米線結合製成葡萄糖電化學傳感器，與同類型傳感器相比，製備過程簡單，靈敏度高，檢測限低。該傳感器在37°C，pH7.4生理條件下具有良好的檢測性能。在此條件下，對醫院提供的血樣的血糖值進行了檢測，所得到的結果與醫院提供的數據吻合。(3)本發明製備的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物具有優良的生物相容性和專一性，有望用於血糖試紙的開發。(4)本發明製備的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物，其製備方法可推廣到其他類型的酶與二茂鐵多肽納米線複合物的構建，從而有望開發出檢測多種物質的酶生物傳感器。(5)本發明中的電化學生物傳感器製備簡單，自組裝納米線廉價且易合成，在生物傳感方面具有廣泛的應用前景。


圖1為將葡萄糖氧化酶修飾到二茂鐵多肽納米線上的示意圖；圖2為二茂鐵多肽納米線的原子力顯微鏡圖；圖3為二茂鐵多肽納米線的掃描電子顯微鏡圖；圖4(A)為二茂鐵多肽納米線修飾電極10圈掃描的循環伏安圖；(B)為葡萄糖傳感器對葡萄糖的循環伏安響應圖，I號曲線為體系含有20mmol/L葡萄糖的循環伏安響應圖，2號曲線為10mmol/L，3號為O ; (C)為葡萄糖傳感器對連續加入葡萄糖的電流-時間響應圖；(D)為葡萄糖傳感器的校準曲線。
具體實施例方式下面列舉實施方式對本發明進行具體描述，但不限於以下實例。實施例1稱取2 5mg 二茂鐵-二苯丙氨酸溶於ImL乙醇。將溶液烘乾，二茂鐵-二苯丙氨酸自組裝形成線型納米材料A。稱取A2mg加入ImL蒸懼水,在超聲儀中超聲3 5分鐘，使A由團聚狀態分散開來得到B。取lmLl% (質量分數)殼聚糖溶液與B混合，震蕩超聲2分鐘後放置3小時，形成C。將C在5000轉/分鐘條件下離心5分鐘，移除上層溶液，離心後加適量磷酸緩衝溶液(pH=7.4)，重複加磷酸緩衝溶液離心步驟2次，最後滴入500 μ L戊二醛(0.25%)水溶液形成混合物後震蕩半小時，然後離心得到D。按照二茂鐵-二苯丙氨酸2mg/mL的配比，向D中加入10mg/mL的葡萄糖氧化酶水溶液，震蕩2 5分鐘，放置24h，即製成Fc-PNWs-GOx。取10 μ LFc-PNWs-GOx滴加於電極上，乾燥後即可進行電化學測試。實施例2稱取5mg 二茂鐵-二苯丙氨酸溶於ImL乙醇。將溶液烘乾待二茂鐵_ 二苯丙氨酸析出及自組裝形成線型納米材料A。稱取A2mg加入lmLPBS，在超聲儀中超聲5分鐘，使A由團聚狀態分散成單條納米線狀態，然後5000轉/分鐘，離心5分鐘，再次加入ImL磷酸緩衝溶液，離心，移除上層溶液，得到E ；分別取100 μ L0.5%質量分數的殼聚糖溶液，450 μ L0.25%戊二醛水溶液和450 μ L10mg/mL的葡萄糖氧化酶水溶液，加入E中配成2mg/mL的Fc-PNWs溶液，震蕩超聲5分鐘，放置24小時，形成附著於納米線表面的殼聚糖與葡萄糖氧化酶的複合物，Fc-PNWs-GOx即製成。取10 μ LFc-PNWs-GOx滴加於電極上，乾燥，用二次水衝洗電極以除去未附著在納米線上的葡萄糖氧化酶，隨後進行檢測。實施例3一，將摩爾比1:1.2:1.2的單羧基二茂鐵(Fc-COOH)U-羥基苯並三唑(HOBt)和苯並三氮唑-N，N，N』，N』 -四甲基脲六氟磷酸鹽(HBTU)溶在無水二氯甲烷(DCM)中，體系置於冰浴中逐滴加入三乙胺(Et3N)至體系環境pH達到8.0 9.0範圍間；攪拌I小時；薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，依次用飽和NaC03、5%HCl和蒸懼水各萃取一次；萃取液濃縮，柱層析純化，真空乾燥；得暗紅色化合物Fc-OBt ；二，將 N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸(Boc-Phe-COOH，4mM)，HBTU、H0Bt (均為 4.4mM)溶解於DCM，冰浴條件下逐滴加入2mL Et3N至pH至8_9，反應I小時，再加入L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(H-Phe-OMe *HC1,4.4mM)，室溫攪拌18小時，薄層色譜點板監測反應基本完全。分別用飽和NaHCO3, 10%HC1和蒸餾水洗滌並用Na2SO4乾燥。減壓蒸乾，柱層析純化，在旋轉蒸發儀上旋轉蒸乾至油狀液體，移入冷凍乾燥機內低溫乾燥，得Boc-Phe-Phe-OMe粉末。
三，將 Boc-Phe-Phe-OMe (2mM)溶於 DCM(20mL)和 TFA (IOmL)混合溶液中，常溫攪拌反應30min，減壓蒸乾，所得中間產物H-Phe-Phe-OMe溶解在2mL DCM中，用Et3N調至pH=8。繼續加入DCM(20mL)稀釋溶液，並加入Fc-OBt (2.2mM)常溫攪拌I小時，薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，依次用飽和NaC03、5%HCl和蒸餾水各萃取一次；萃取液濃縮，柱層析純化，真空乾燥；得橙黃色化合物Fc-Phe-Phe-OMe。四，將Fc-Phe-Phe-OMe (ImM)溶解在12mL的四氫呋喃，緩慢滴加2.5mM的氫氧化鋰6mL，室溫下攪拌2小時。薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，減壓蒸餾儘量將其中的四氫呋喃抽淨，然後向此懸濁液裡加入二氯甲烷30mL，依次用5%HC1和蒸餾水萃取，減壓旋轉蒸乾。柱層析純化，真空乾燥，得到化合物Fc-Phe-Phe-OH。實施例4一，採用參比電極(銀/氯化 銀電極)，對電極(鉬電極)，工作電極(修飾電極)的三電極體系，Fc-PNWs-GOx修飾電極在3mL100mmol/L磷酸鹽(pH=7.4)中，電壓掃描範圍O 0.7V，掃描速率為0.lV/s條件下進行循環伏安測試。如圖4 (A)和(B)，實驗結果顯示，修飾電極穩定性較好，隨著葡萄糖濃度的增加(0、10和20mmol/L), Fe的氧化峰電流明顯升高，由此可以說明Fc-PNWs結合大量G0x，間接提高了電極面積，且Fe促進了電子在酶和電極表面之間的轉移，同時CS包覆既不影響葡萄糖擴散也不影響Fc-PNWs和GOx分子間的電子轉移。二,三電極體系下,Fc-PNWs-GOx修飾電極在3mL100mmol/L磷酸鹽(pH=7.4)中，電壓0.6V，採集間隔0.ls，每隔20s進樣一次，進樣量為6μ L (lOOmmol/L葡萄糖溶解於磷酸緩衝溶液)，進行計時安培電流測試，圖4 (C)顯示在0.2 2mmol/L的範圍內，響應電流值與葡萄糖濃度呈現較好的線性關係，經測定保持線性關係最高葡萄糖濃度為3mmol/L，最低濃度為0.01mmol/L,標準曲線如圖4 (D)所示,信噪比為3時檢出限為5ymol/L,圖中所有點的誤差線(error bar,即相對標準偏差值)均小於6%。說明Fc-PNWs-GOx傳感器具有較好的重現性和再生性。三，採用二中的檢測方法檢測3種人體血樣檢測結果與醫院提供數據比對如下表:正常人與糖尿病患者血樣檢測
權利要求
1.二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物的製備方法，其特徵在於，包括以下任一方式所述的步驟: 稱取二茂鐵-二苯丙氨酸溶於乙醇，待溶劑揮發後，二茂鐵-二苯丙氨酸逐漸析出並且自組裝形成線型納米材料A ;將A加入蒸餾水中，在超聲儀中超聲震蕩，使A由團聚狀態分散開來得到B ;取殼聚糖溶液與B混合，震蕩超聲後放置，使殼聚糖分子充分修飾到納米線表面得到C ;將C離心，移除上層溶液，然後至少重複進行兩次加pH=7.4的磷酸緩衝溶液、離心和移除上層溶液的過程後滴入戊二醛的水溶液，形成混合物後震蕩，然後離心得到D ；向D中加入葡萄糖氧化酶水溶液，震蕩，放置，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物； 或者 稱取二茂鐵-二苯丙氨酸溶於乙醇；待溶劑揮發後，二茂鐵-二苯丙氨酸逐漸析出並且自組裝形成線型納米材料A ;將A加入磷酸緩衝溶液，在超聲儀中超聲震蕩，使A由團聚狀態分散成單條納米線狀態，然後離心，再次加入磷酸緩衝溶液，離心，移除上層溶液，得到E，分別取殼聚糖溶液，戊二醛水溶液和葡萄糖氧化酶水溶液，加入E中配成二茂鐵-二苯丙氨酸溶液，震蕩超聲，放置，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物。
2.根據權利要求1所 述的製備方法，其特徵在於，具體方法如下: 稱取二茂鐵-二苯丙氨酸溶於乙醇，配成2 5mg/mL的溶液；待溶劑揮發後，二茂鐵-二苯丙氨酸逐漸析出並且自組裝形成線型納米材料A ;稱取A2mg加入ImL蒸餾水，在超聲儀中超聲震蕩3 5分鐘，使A由團聚狀態分散開來得到B ;取ImL質量分數1%的殼聚糖溶液與B混合，震蕩超聲2分鐘後放置3小時，使殼聚糖分子充分修飾到納米線表面得到C ;將C離心，離心轉數為5000轉/分鐘，離心5分鐘，移除上層溶液，然後重複進行兩次加pH=7.4的磷酸緩衝溶液、離心和移除上層溶液的過程後滴入500 μ L0.25%的戊二醛的水溶液，形成混合物後震蕩半小時，然後離心得到D ;按照二茂鐵-二苯丙氨酸2mg/mL的配比，向D中加入10 15mg/mL的葡萄糖氧化酶水溶液，震蕩2_5分鐘，放置24h，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物； 或者 稱取2 5mg 二茂鐵-二苯丙氨酸溶於ImL乙醇；將溶液烘乾待二茂鐵_ 二苯丙氨酸析出及自組裝形成線型納米材料A ;稱取A2mg加入ImL磷酸緩衝溶液,在超聲儀中超聲3 5分鐘，使A由團聚狀態分散成單條納米線狀態，然後5000轉/分鐘，離心5分鐘，再次加入ImL磷酸緩衝溶液，離心，移除上層溶液，得到E，分別取100 μ L0.5%質量分數的殼聚糖溶液,450 μ L0.25%戊二醒水溶液和450 μ L10-15mg/mL的葡萄糖氧化酶水溶液,加入E中配成2mg/mL的二茂鐵-二苯丙氨酸溶液，震蕩超聲2 5分鐘，放置24小時，即製成二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物。
3.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，所述的二茂鐵-二苯丙氨酸的製備方法如下: I)將摩爾比1:1.2:1.2的單羧基二茂鐵、1-羥基苯並三唑和苯並三氮唑-N，N，N』，N』 -四甲基脲六氟磷酸鹽溶在無水二氯甲烷中，體系置於冰浴中逐滴加入三乙胺至體系環境PH達到8.0 9.0範圍間；攪拌I小時；薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，依次用飽和NaC03、5%HCl和蒸餾水各萃取一次；萃取液濃縮，柱層析純化，真空乾燥；得暗紅色化合物Fc-OBt ； 2)將N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸、苯並三氮唑-N，N，N』，N』-四甲基脲六氟磷酸鹽和1-羥基苯並三唑溶解於無水二氯甲烷，三者的濃度均為4.4mM,冰浴條件下逐滴加入三乙胺直至體系環境達到PH8-9範圍間，反應I小時，再加入L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，使之濃度達到4.4mM,室溫攪拌18小時，薄層色譜點板監測反應基本完全；依次用飽和NaHCO3, 10%HC1和蒸餾水洗滌，並用Na2SO4乾燥；減壓蒸乾，柱層析純化，在旋轉蒸發儀上旋轉蒸乾至油狀液體，移入冷凍乾燥機內低溫乾燥，得Boc-Phe-Phe-OMe粉末； 3)將Boc-Phe-Phe-OMe溶於無水二氯甲烷20mL，濃度為2mM，再和IOmL三氟乙酸混合，常溫攪拌反應30min，減壓蒸乾，所得中間產物H-Phe-Phe-OMe溶解在2mL無水二氯甲烷中，用三乙胺調至pH=8 ;繼續加入20mL無水二氯甲烷稀釋溶液，並加入步驟I)得到的Fc-OBt，使Fc-OBt濃度為2.2mM，常溫攪拌I小時，薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，依次用飽和NaC03、5%HCl和蒸餾水萃取一次；萃取液濃縮，柱層析純化，真空乾燥；得橙黃色化合物Fc-Phe-Phe-OMe ； 4)將Fc-Phe-Phe-OMe溶解在12mL的四氫呋喃，濃度為ImM，再緩慢滴加2.5mM的氫氧化鋰6mL，室溫下攪拌2小時；薄層層析點板跟蹤反應；待反應完畢，減壓蒸餾將其中的四氫呋喃抽淨，然後向此懸濁液裡加入二氯甲烷30mL，依次用5%HC1和蒸餾水萃取，減壓旋轉蒸乾；柱層析純化，真空乾燥，得到化合物Fc-Phe-Phe-OH。
4.二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物，其特徵在於，是由權利要求1或2或3所述的方法製備而成的。
5.權利要求4所述的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物的應用方法，其特徵在於，用於製備檢測血糖的生物傳感器或者試紙。
6.根據權利要求5所述的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物的應用方法，其特徵在於，在製備檢測血糖的生物傳感器時將製備得到的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物滴加於電極上，乾燥後即可。
7.根據權利 要求6所述的二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物的應用方法，其特徵在於，取10 μ L 二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物滴加於電極上。
全文摘要
本發明公開了一種二茂鐵多肽納米線-葡萄糖氧化酶複合物及其製備和應用方法。首次基於二茂鐵-二苯丙氨酸自組裝納米線並結合葡萄糖氧化酶製備葡萄糖傳感器。該葡萄糖傳感器製備簡單，在37℃，pH=7.4的人體生理條件下具有較高的靈敏度和較寬的線性範圍，有望實現商品化。同時，該酶傳感器製備方法可望拓展到其它電化學酶傳感器的構建。
文檔編號C12N9/98GK103224925SQ20131010622
公開日2013年7月31日 申請日期2013年3月29日 優先權日2013年3月29日
發明者陽明輝, 李丁, 王建秀, 孫志方 申請人:中南大學