延胡索水溶性部位藥物及製備方法和用途的製作方法
2023-05-09 06:07:46 1
專利名稱：延胡索水溶性部位藥物及製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明主要涉及延胡索(Corydalis YanhusuoW.T.Wang)的乾燥塊莖製備的延胡索水溶性部位藥物及製備方法；還涉及該延胡索水溶性部位藥物在治療心血管疾病中的用途。
背景技術：
冠心病、心絞痛等心血管疾病是嚴重危害人類生命和健康的常見病，據世界衛生組織報導，在美國每3個死亡的人中有1個死於冠心病，每年有50多萬人死於心肌梗塞。在我國，心血管疾病的發病率也在不斷升高，以冠心病為例，發病率約為2.5％，每年有150萬新發病人，10年間其死亡率增加了2-3倍。隨著我國工業現代化程度的提高，生活節奏的加快，膳食結構及生活習慣的改變，冠心病、心絞痛等心血管疾病發病率還將不斷上升。
延胡索具有活血、理氣、止痛等作用，已有的研究結果及文獻認為，延胡索提取物中生物鹼是其活性部位，生物鹼中脫氫延胡索、延胡索乙素、原阿片鹼等這些已知生物鹼是有效成分，延胡索的專著、文獻大都認為脫氫延胡索鹼一類的季銨鹼是治療心肌梗塞的有效成份。本發明改變了以前的研究觀點，延胡索生物鹼不是延胡索中具有最佳心血管作用的活性部位，新發現了一個更安全、更有效的活性部位，即延胡索水溶性部位藥物。本發明的一個特點，除去了脫氫延胡索鹼、延胡索乙素、原阿片鹼等所有的生物鹼，顯著減小了毒性，提高了藥品的安全性，本發明的另一個特點，製備的延胡索水溶性部位藥物，心血管作用得到了進一步加強，與延胡索、延胡索生物鹼相比，顯著提高了延胡索提取物的心血管作用。
本發明與可達靈片不同，可達靈片是用80％乙醇回流提取，其有效成分是脫氫延胡索鹼、延胡索乙素等一類生物鹼，生物鹼是其有效成分，本發明除去了所有的延胡索生物鹼，發明了延胡索新的活性部位，該部位的心血管作用比延胡索提取物中延胡索生物鹼強，給予小鼠最大耐受量，也沒有發現毒性。
本發明與專利《元胡多糖、生產方法和用途》CN1660914A不同，本發明為延胡索提取物經過大孔樹脂分離後得到的水溶性部位，CN1660914A為元胡多糖，二者物質基礎不一樣。
本發明與專利《延胡索滴丸及其製備》CN1730026A不同，本發明提取工藝與CN1730026A的工藝完全不同，活性部位也不一樣。經毒性試驗比較，本發明的延胡索水溶性部位藥物安全性得到了極大的提高。
本發明從延胡索藥材中提取得到的延胡索水溶性部位藥物，改變了這之前的研究結果和傳統觀點，有望獲得更安全、有效的具有心血管作用的新藥，這是實現中藥現代化過程中的偉大成果。
發明內容
本發明的任務是提供延胡索水溶性部位藥物及其製備方法和用途。
本發明的技術方案為 一種延胡索水溶性部位藥物的製備方法， 1)以延胡索(Corydalis Yanhusuo W.T.Wang)塊莖為原料，粉碎成粗粉，約為10-30目，用6倍量80％乙醇加熱回流提取三次，每次4小時，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.02-1.06(50℃)，得到延胡索提取液； 2)延胡索提取液經大孔樹脂柱吸附，大孔樹脂的量為延胡索提取液重量的3-6倍； 3)然後用6-8倍柱體積的水洗脫，收集水洗脫液，合併水洗脫液，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6％～8％，其中主要成份總黃酮含量大於15％。
所述的大孔樹脂選自D201、D101、AB-8、X-5中任一種，樹脂柱床徑高比為1∶4。
用大孔樹脂柱純化分離過程中，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h；至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附。
用水洗脫大孔樹脂柱過程中，水流速度1BV/h。
本發明製備方法製備的延胡索水溶性部位藥物，用於製備治療心血管疾病藥物的用途，根據本發明，術語「心血管疾病」是指例如冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞等疾病。
本發明方法製備的延胡索水溶性部位藥物，加入一定比例的常規藥用輔料，製成的製劑劑型可選自膠囊、片劑、滴丸、口服液中的任一種，製劑中延胡索水溶性部位藥物的用藥劑量為200-300mg。
本發明製備方法得到的延胡索水溶性部位藥物得率為6％～8％，主要成分為黃酮類成分，採用紫外分光光度法測定，總黃酮含量大於15％。
本發明與現有技術相比具有突出的特點和顯著的進步。
本發明以延胡索藥材為原料，延胡索(Corydalis Yanhusuo W.T.Wang)為多年生草本植物，地下塊莖為入藥部位，分布於浙江、江蘇、山東、河北等地。
本發明人經過研究意外發現，本發明方法製備的延胡索水溶性部位藥物，總黃酮含量大於15％，穩定性好，適合製備藥物，用於治療心血管疾病。本發明的有益效果主要有(1)提供了延胡索水溶性部位藥物的方法；(2)去除了毒性成分，提高了用藥安全性；(3)本發明方法設計先進、合理、穩定，操作方便，具有較強的實用性；(4)有望獲得更安全、有效的具有心血管疾病防治作用的新藥。
(四)具體實施方案 下面的實施例，用於進一步說明和描述本發明，但並不意味著本發明僅限於此。
實施例1 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，每次4小時，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.04(50℃)，得到延胡索提取液； 延胡索提取液經重量為3kg大孔樹脂D201柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用6倍柱體積水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.54％；採用紫外分光光度法測定，總黃酮16.5％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成膠囊，規格，每粒含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管疾病作用的藥物製劑。
實施例2 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.02(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經重量為4kg大孔樹脂D201柱吸附，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h；至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用8倍量柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.83％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮15.8％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成片劑，規格，每片含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管疾病作用的藥物製劑。
實施例3 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.06(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經6kg大孔樹脂D101柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用7倍量柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.97％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮在15.6％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成口服液，規格，每次服用含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管疾病作用的藥物製劑。
實施例4 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.05(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經5kg大孔樹脂D101柱吸附，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用8倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.92％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮在15.8％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成膠囊，規格，每粒含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物製劑。
實施例5 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.03(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經重量為4kg的大孔樹脂AB-8柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用6倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.16％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮在15.9％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成滴丸，規格，每次服用量含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物製劑。
實施例6 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.06(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經6kg的大孔樹脂AB-8柱吸附，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用8倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率6.99％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮在16.4％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成口服液，規格，每次服用含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物製劑。
實施例7 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.02(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經5kg重量的大孔樹脂X-5柱吸附，樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用7倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.13％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮含量為15.7％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成膠囊，規格，每粒含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物製劑。
實施例8 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.05(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經3.8kg重量的大孔樹脂X-5柱吸附，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用6倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.02％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮含量為15.6％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的稀釋劑，製成片劑，規格，每片含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物製劑。
實施例9 取延胡索藥材1000g，粉碎成粗粉，加入80％乙醇6000ml加熱回流提取三次，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.04(50℃)，得到延胡索提取液。
延胡索提取液經6kg重量的大孔樹脂X-5柱吸附，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h，至提取液全部進入樹脂床，靜止1小時，讓其充分吸附；用8倍柱體積的水洗脫，洗脫水流速度1BV/h，收集水洗脫液，合併水洗脫液，濃縮、減壓乾燥(70℃)，粉碎成細粉，得到延胡索水溶性部位藥物，得率7.83％，採用紫外分光光度法測定，總黃酮含量為15.9％。
延胡索延胡水溶性部位藥物加入一定量的常規藥用輔料，製成口服液，規格，每次服用含延胡索水溶性部位藥物200-300mg，即得具有治療心血管作用的藥物製劑。
實施例10 延胡索水溶性部位藥物的心血管保護作用的藥效學試驗1儀器ALC-V8動物呼吸機，ALC-MPA多道生物信號分析系統，上海奧爾科特生物技術有限公司製造；圖像分析系統，江蘇捷達科技有限公司提供。冰醋酸，杭州大方化學試劑廠，批號20040907；氯化硝基四氮唑藍(NBT)，中國前進化學試劑廠生產，批號20040602；戊巴比妥鈉，中國醫藥上海化學試劑有限公司生產，批號20030816；理鹽水，浙江平湖莎普愛思製藥有限公司生產，批號040711。
2方法 2.1延胡索水溶性部位藥物抗大鼠心肌缺血試驗 2.1.1對大鼠心肌梗死面積的影響、對心肌梗死大鼠心電圖的影響、大鼠心率的影響 取SD大鼠，雄性，體重160-180g，隨機分為以下各組，每組8隻，模型對照組、051901組(延胡索水溶性部位藥物)、061129組(延胡索乙醇提取物)、061130組(延胡索總鹼)、鹽酸地爾硫卓陽性對照組(給藥劑量見表1)。模型組造模後給以2ml生理鹽水。上述受試藥物均於手術後2min灌胃給藥。具體實驗步驟取SD大鼠，1％戊巴比妥鈉40mg/kg(ip)麻醉，仰臥固定，記錄II導聯ECG，消毒胸部皮膚，胸骨左側作2釐米的縱切口，鈍性分離肌肉，行人工呼吸(呼吸比1∶2，呼吸頻率53次/分，通氣量0.25～0.49ml/min)，開胸，剪開心包膜，輕壓胸廓右側，擠出心臟，於動脈圓錐與左心耳之間結紮冠脈左前降支，(根據心臟結紮部位以下的顏色和心電圖變化判斷心肌缺血)，閉胸，測II導聯ECG。各組手術後2min灌胃給藥。手術後4小時，取心，4℃生理鹽水衝洗，將結紮部位以下心臟切成0.1cm左右厚度的薄片，置於37℃0.1％NBT中染色10min，用圖像分析軟體計算梗死區和非梗死區面積。觀察II導聯ECG ST段抬高程度和心率變化。
2.2延胡索水溶性部位藥物對小鼠鎮痛的影響 2.2.1醋酸扭體法鎮痛實驗 取小鼠，隨機分為以下各組，每組10隻，雌雄各半。模型對照組、051901組(延胡索水溶性部位藥物)、061129組(延胡索乙醇提取物)、061130組(延胡索總鹼)、阿司匹林陽性對照組、消炎痛(給藥劑量見表2)。給藥組分別灌胃給予受試物，連續給藥3天。於末次給藥後30min，各小鼠均腹腔注射0.6％冰醋酸溶液0.2ml/只，觀察出現扭體反應的時間，計算潛伏期，並記錄1 5min內的扭體次數，對實驗結果統計分析。
2.2.2熱板法鎮痛實驗 調節金屬板的溫度為55±0.5℃，每次取雌性小鼠1隻，放在金屬板上，記錄小鼠出現舔後足所需時間，作為該小鼠的痛閾值，凡5s內舔後足或30s內不出現舔後足者，棄之不用。實驗前再測痛閾1次，將兩次痛閾的平均值作為該鼠給藥前的痛閾值。空白對照組給予N.S，給藥組分別灌胃給予受試物及陽性對照藥阿司匹林。給藥後30min，小鼠置於55℃(±0.5℃)恆溫熱板上，以小鼠舔後足反應的潛伏期為痛閾指標，截止時間為60S。給藥後10、30、60、120min測定小鼠的痛閾值，與給藥前和對照組比較。若小鼠在熱板上60s仍無痛覺，立即取出，按60s計算。
3.結果 3.1延胡索水溶性部位藥物抗大鼠心肌缺血試驗 3.1.1對大鼠心肌梗死面積的影響 結果見表一。
表一 延胡索水溶性部位藥物對大鼠心肌梗死面積的影響(n＝8，X±SD)
與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；有顯著性差異 3.1.2延胡索水溶性部位藥物對心梗大鼠心電圖的影響 結果見表二。
表二 延胡索水溶性部位藥物對心梗大鼠心電圖ST段抬高程度的影響(n＝8，X±SD)
與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01；有顯著性差異 3.1.3延胡索水溶性部位藥物對大鼠心率的影響 結果見表三。
表三 延胡索水溶性部位藥物對心梗大鼠心率的影響(n＝8，X±SD)
與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01，有顯著性差異 3.2延胡索水溶性部位藥物對小鼠鎮痛的影響 3.2.1延胡索水溶性部位藥物對小鼠醋酸扭體法鎮痛實驗 結果見表四。
表四 醋酸扭體法鎮痛實驗結果
與生理鹽水組比較，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001 3.2.2延胡索水溶性部位藥物對小鼠熱板法鎮痛作用的實驗 結果見表五。
表五 對小鼠熱板法鎮痛作用的影響(x±s)
與對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01 結果 動物試驗表明延胡索水溶性部位藥物(051901組)、延胡索乙醇提取物(061129組)與延胡索總鹼(061130組)均能顯著降低大鼠心肌梗死面積，能顯著降低心肌梗塞大鼠ST段抬高的程度，維持正常心率，能顯著提高小鼠對熱刺激的痛閾值，能顯著減輕小鼠因注射醋酸而引起的疼痛。
結論 從以上藥效試驗比較，延胡索水溶性部位藥物(051901組)在心血管藥效方面其藥效較延胡索乙醇提取物(061129組)與延胡索總鹼(061130組)作用強。因而是目前延胡索水溶性部位的藥效新發現。
實施例11 延胡索水溶性部位藥物急毒試驗 1.實驗材料 1.1.動物ICR小鼠，體重18～22g，24隻，雌雄各半 1.2.藥物 1)延胡索水溶性部位藥物(051901組) 2)延胡索乙醇提取物(061129組) 3)延胡索總鹼(061130組) 2.器材灌胃器、燒杯、注射器 3.實驗方法 根據鎮痛實驗中動物的死亡情況及當時的給藥量，受試物延胡索水溶性部位藥物(051901組)、延胡索乙醇提取物(061129組)、延胡索總鹼(061130)各設計1個劑量組即3g/kg，每組各4隻，雌雄兼半。小鼠禁水不禁食6-12小時後，稱重，分別按所設劑量灌胃給予受試物延胡索水溶性部位藥物(051901組)、延胡索乙醇提取物(061129組)、延胡索總鹼(061130)，給藥體積分別為0.2ml/10g，給受試藥物後應立即觀察動物的反應情況，持續觀察30分鐘，第1-4小時各觀察一次，特別要注意給藥後6小時內的動物中毒症狀及死亡原因並詳細記錄，一般要觀察給藥後7-14天內的動物死亡數和中毒反應，逐天觀察並詳細記錄動物毒性反應表現和特點，毒性反應出現和消失的時間、死亡時間及各劑量組內死亡動物的分布，每天稱重並觀察兩次。觀察症狀包括行動、神經系統反應、自主神經系統反應及死亡。
4.實驗結果 延胡索乙醇提取物(061129組)、延胡索總鹼(061130組)各組小鼠給藥45分鐘後均出現不同程度的症狀，症狀表現為起先躁動不安，2小時後出現懶動，精神萎靡。延胡索水溶性部位藥物(051901組)小鼠給藥2小時內未出現症狀。藥後8小時內061129組死亡2隻，061130組死亡4隻，051901組沒有死亡，均做解剖未見異常。藥後48小時後各組存活小鼠，逐漸恢復正常。
小鼠藥後死亡情況詳見下表
結果 毒性試驗表明，本發明所製備的延胡索水溶性部位藥物毒性低，安全性高，有很好的應用前景。
權利要求
1.一種延胡索水溶性部位藥物的製備方法，其特徵是，所述方法包括如下步驟
(1)將延胡索藥材粉碎成粗粉，用6倍量的80％乙醇加熱回流提取三次，每次4小時，合併三次提取液，回收、濃縮，得到相對密度在50℃為1.02-1.06的延胡索提取液；
(2)將步驟(1)的提取液經大孔樹脂柱純化分離，大孔樹脂選自D201、D101、AB-8、X-5中任一種，大孔樹脂的用量與延胡索提取液的重量比為3-6∶1；
(3)將步驟(2)吸附了延胡索活性部位的大孔樹脂柱用6-8倍柱體積的水進行洗脫，收集水洗脫液，回收水份、乾燥，即得延胡索水溶性部位藥物。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵是，步驟(2)所述的樹脂柱床徑高比為1∶4，延胡索提取液經過大孔樹脂柱的速度為1BV/h。
3.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵是，步驟(3)所述的洗脫水的流速度為1BV/h。
4.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵是該方法製備的延胡索水溶性部位藥物，得率為6％～8％，其中主要成份總黃酮含量大於15％。
5.根據權利要求1所述的製備方法製備的延胡索水溶性部位藥物，在製備用於治療冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞的藥物中用途。
6.根據權利要求1或4或5所述的製備方法製備的延胡索水溶性部位藥物，加入常規藥用輔料製備藥物製劑，該藥物製劑可以是藥劑學可以實現的劑型，選自膠囊、片劑、滴丸、口服液中的任一種，製劑中含有延胡索水溶性部位藥物的劑量為200-300mg。
全文摘要
本發明涉及一種延胡索水溶性部位藥物及其製備方法，將延胡索藥材粉碎成粗粉，用80％乙醇加熱回流提取三次，每次4小時，合併三次提取液，回收濃縮至相對密度1.02-1.06(50℃)，得到延胡索提取液，經大孔樹脂柱吸附，用6-8倍量柱體積的水洗脫，收集水洗脫液，回收水份、乾燥，即得延胡索水溶性部位藥物。還涉及延胡索水溶性部位藥物在心血管疾病方面的作用，尤其是用於製備治療冠心病、心絞痛、急性心肌梗塞的藥物中的用途。
文檔編號A61K36/66GK101284050SQ20081006190
公開日2008年10月15日 申請日期2008年5月9日 優先權日2008年5月9日
發明者胡季強, 王如偉, 葉劍鋒, 健 吳, 姚建標, 胡江寧, 胡新龍, 燊 呂, 邱紅英 申請人:浙江康恩貝製藥股份有限公司, 浙江現代中藥與天然藥物研究院有限公司