一種瓜蔞和銀杏葉的藥物組合物的製作方法

2023-05-09 06:58:56

專利名稱：：一種瓜蔞和銀杏葉的藥物組合物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種新的藥物組合物，及其在製備治療心血管疾病藥物中的應用，以及含有該藥物組合物的製劑，屬於醫藥
技術領域：
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背景技術：
心血管疾病是指心臟和動脈血管發生硬化而引起的心臟缺血或出血的疾病，包括冠心病、心絞痛、高血脂、心律失常、心肌梗塞等，中國每年有200萬以上患者死於心血管疾病；該病發病率呈逐年上升的趨勢，全國有1億多高血壓病患者，每年新增患者350萬人，患病率每十年增加50%;除遺傳因素外，年輕人工作壓力過大、精神高度緊張或過度焦慮、生活方式不良，從而導致心腦血管病呈現出年輕化趨勢；中國老年人中，心血管病發病率高達30%，心血管疾病居死因首位，大大高於其它疾病的比率。然而目前在中國心血管藥的開發速度不及心血管病的高發病率，因此迫切需要開發有效治療心血管疾病的藥物。瓜蔞為葫蘆植物栝樓7Wc/w幼"//^fo>//ow//Maxim或雙邊栝樓7Wc/wwm快MroWAorw'/Harms的乾燥果實，始載於《神農本草經》。主要含有油脂、有機酸類、甾醇、三萜及其苷類、蛋白質、胺基酸類及微量元素、水溶性多糖等多種化學成分。現代研究表明，全瓜蔞能擴張冠狀動脈，增加冠脈血流量，增加心肌收縮力，擴張微血管，抗血小板聚集，提高耐缺氧能力，能夠降低血脂，降低血清膽固醇等作用，對心絞痛、冠心病有很好的療效。銀杏葉為銀杏科植物銀杏(Gf"紐oW/oML.)的乾燥葉。近年來，銀杏葉藥材及其提取物的醫用價值已引起國內外的廣泛關注，有關其活性成分及臨床應用的研究報導較多。銀杏葉提取物(ExtractofGinkgobilolaleaves,EGb)是一種作用廣泛、不良反應較少的天然藥物，其有效成分主要為黃酮類和萜類，EGb具有抗氧化，清除自由基(FR),抗血小板激活因子(PAF)作用。EGb通過調節血脂防治動脈粥樣硬化，抗缺血、缺血再灌注損傷，抗心律失常，達到保護心臟功能的作用。銀杏葉提取物已有國家標準，見中國藥典2000年版2002年增補本第6頁，或中國藥典2005年版一部第281頁。標準規定，本品按乾燥品計，含總黃酮醇苷，不得少於24.0%;含砲類內酯以白果內酯(C15H1808)、銀杏內酯A(C20H24O9)、銀杏內酯B(C2oH24010)和銀杏內酯C(C2oH240)的總量計，不得少於6.0%;本品含總銀杏酸不得過百萬分之十；製劑為銀杏葉片。國內上市的還有舒血寧注射液，可以擴張血管、改善微循環，用於缺血性心血管疾病，冠心病、心絞痛，腦栓塞，腦血管痙攣等。目前，利用瓜蔞或瓜蔞提取物與銀杏葉或銀杏葉提取物的相互作用，配伍組方，製備治療心血管疾病等的藥物，尚未見報導。3、
發明內容為了滿足臨床需要，更好的治療心血管疾病，提高人民的健康水平，本發明提供了新的藥物組合物，並提供了其製備方法和用途，以及含有該組合物的製劑。它是由瓜蔞或其提取物和銀杏葉或其提取物製成，在治療心血管疾病方面療效顯著。本發明藥物組合物主要由瓜蔞和銀杏葉製成，其重量份數為瓜蔞1002000份、銀杏葉1001000份；優選份數為瓜蔞5001500份、銀杏葉150400份；最佳份數為瓜蔞1000份、銀杏葉200份。以上組成是按重量份作為配比的，在生產時可按照相應比例增大或減小，如大規模生產可以以千克為單位，或以噸為單位，小規模生產也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間的重量配比不變。上述藥物組合物中的瓜蔞和銀杏葉可以用適宜的溶劑和方法通過單提或混提製備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合製成任一製劑。適宜的溶劑是指中藥提取常用的溶劑，優選水或醇。提取方法可以採用中藥提取的一般方法，如浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續提取法。本發明提供了瓜蔞的提取工藝，具體如下工藝一取瓜蔞藥材，烘乾，粉碎成粗粉，加入水回流提取2次，每次加入10倍量水，回流提取2小時，濾過，合併濾液，濃縮至相對密度為1.101.15(60'C)的濃縮液，加入乙醇至含醇量達80%，放置過夜，取上清液，回收乙醇至無醇味，減壓至稠裔狀，真空乾燥，即得瓜蔞粗提取物(可供口服用)。通過本工藝製備的瓜蔞提取物得率為68%，其中甾體類皂苷總含量不低於20%。工藝二將工藝一中得到瓜蔞粗提物用適量水溶解後，用等量石油醚振搖提取2次，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合併正丁醇提取液，濃縮至幹，殘渣加少量水使溶解，上大孔樹脂柱，分別用水、15%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，噴霧乾燥，即得瓜蔞精提取物。(可供注射用)通過本工藝製備的瓜蔞提取物得率為24%,其中甾體類皂苷總含量不低於30%。本發明提供了銀杏葉的提取工藝，具體如下-工藝一取銀杏葉，粉碎，加75%乙醇回流提取兩次，第一次加醇10倍量，提取3小時，第二次加醇8倍量，提取2小時，合併濾液，濾液濃縮至含醇約5%10%,加入等量的水，攪勻，14'C冷藏2448小時，離心，取上清液上柱，分別用34倍量體積水、15%乙醇、75%乙醇洗滌，收集75%乙醇液，減壓濃縮至藥材量的1/3體積數，靜置，濾過，濾液減壓濃縮，真空乾燥，粉碎，即得。通過上述工藝製備的銀杏葉提取物得率為14%,含總黃酮醇苷不低於24.0%，萜類內酯不低於6.0%。工藝二取銀杏葉，粉碎，加入60%的丙酮水溶液，5759'C劇烈攪拌30min,濾過，重複上述步驟，再提取一遍，合併濾液，濾液減壓濃縮至含固體物約30%40%(此時丙酮的含量約5%)。加水稀釋至原體積的2倍，攪拌下冷卻至約12X:，保溫l小時，離心，棄去沉澱，上清液按30%加入硫酸銨，攪勾，使全溶，用丁酮-丙酮混合溶液(6:4)萃取2次，每次為水溶液的0.5倍量，丁酮-丙酮混合溶液減壓濃縮至含固體物50%70%,加入水使含固體物約10%，用1/2體積的水飽和正丁醇萃取3次，正丁醇液減壓濃縮至含固體物至少50%以上，然後加入適量水再繼續濃縮，在所得濃縮液中加入水及乙醇，使固體物含量達10%,醇濃度達30%，加入正己垸萃取3次，每次l/3量的，水相濃縮，並減壓乾燥(6080'C),即得。通過上述工藝製備的銀杏葉提取物得率為13%，含總黃酮醇苷不低於24.0%，萜類內酯不低於6.0%。工藝三取銀杏葉，粉碎，先用12倍量60%乙醇溶液加熱回流二次，每次3小時，濾過，合併乙醇提取液，濃縮成稠臠，用熱水溶解成每lml相當於0.5g原藥材的溶液，靜置冷卻，濾過，濾液上大孔樹脂(DA201)柱，分別用18%、30%、及50%濃度的乙醉洗脫，18%、30%乙醇脫液濃縮至無醇味，上聚醯胺柱，以95%乙醇洗脫，將大孔樹脂的50%乙醇洗脫液與聚醯胺柱的洗脫液合併，濃縮至無乙醇味，以環己垸萃取，棄去環己烷萃取液，濃縮液噴霧乾燥，即得。通過上述工藝製備的銀杏葉提取物得率為13%，含總黃酮醇苷不低於24.0%，萜類內酯不低於6.0%。工藝四取銀杏葉，粉碎，加70%乙醇6(TC溫浸提取兩次，每次加醇15倍量，攪拌下溫浸2小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇至相對密度為1.031.09(50'C),加入4倍量的水，攪勻，14'C冷藏過夜，濾過，濾液上柱，分別用34倍量體積水、15%乙醇、70乙醇洗滌，收集70%乙醇液，減壓濃縮，真空乾燥，浸膏加5倍量乙醇提取二次，每次15分鐘，合併濾液，減壓濃縮，真空乾燥，浸膏加8倍量水，加熱至沸騰，微沸5分鐘，放置室溫，14'C冷藏過夜，濾過，濾液加25%粗提物的聚醯胺，攪拌5分鐘，濾過，減壓濃縮，真空乾燥，即得。通過上述工藝製備的銀杏葉提取物得率為13%，含總黃酮醇苷不低於24.0%,萜類內酯不低於6.0%。上述藥物組合物中，銀杏葉提取物可以通過上述工藝製備，也可以市購或市購後精製，還可以通過其它工藝製備。本發明藥物組合物也可由瓜蔞提取物和銀杏葉提取物製成，按照提取物相對於藥材的得率計算，即瓜蔞提取物得率為2~8%，銀杏葉提取物得率為14%，其提取物的相應重量份數為瓜蔞提取物2160份、銀杏葉提取物140份，優選份數為瓜蔞提取物10120份、銀杏葉提取物1.516份，最優份數為瓜蔞提取物2080份、銀杏葉提取物28份。上述藥物組合物中，瓜蔞提取物中甾體類皂苷含量不低於20%,最好不低於30%;銀杏葉提取物中總黃酮醇苷含量不低於24.0%、萜類內酯含量不低於6.0%、總銀杏酸不超過百萬分之十，最好不超過百萬分之一。本發明的另一目的在於提供一種用於心血管疾病的藥物組合物，該藥物組合物對於冠心病、高血脂、等有很好的療效。本發明藥物組合物可與藥學上可接受的輔料製成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型，優選注射劑或口服製劑；可以腸胃外或口服給藥等方式施用於需要這種治療的患者。用於腸胃外給藥時，可製成注射劑。注射劑係指藥物製成的供注入體內的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配製或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌製劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液係指藥物製成的供注射入體內用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用於肌內注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規格有lml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、lOOml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小於100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末係指藥物製成的供臨用前用適宜的無菌溶液配製成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配製後注射，也可用靜脈輸液配製後靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結晶法、噴霧乾燥法或冷凍乾燥法等製得。注射用濃溶液係指藥物製成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。用於口服時，可製成常規的固體製劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可製成口服液體製劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。片劑係指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體製劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑係指藥物或加有輔料充填於空心膠囊或密封於軟質囊材中的固體製劑，依據其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑係指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法製成的球狀或類球秋固體製劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑係指藥物與適宜的輔料製成具有一定粒度的乾燥顆粒狀製劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。口服溶液劑係指藥物溶解於適宜溶劑中製成供口服的澄清液體製劑。口服混懸劑係指難溶性固體藥物，分散在液體介質中，製成供口服的混懸液體製劑，也包括幹混懸劑或濃混懸液。糖漿劑係指含有藥物的濃蔗糖水溶液。製成注射劑時，可採用現有製藥領域中的常規方法生產，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9。/。氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配製注射劑時，可根據藥物的性質加入適宜的附加劑，如滲透壓調節劑、pH值調節劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調節劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調節劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等;常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。製成口服製劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括澱粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預膠化澱粉、甘露醇等;常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、澱粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化澱粉等；常用崩解劑包括幹澱粉、交聯聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二垸基硫酸鈉、微粉矽膠等。本發明的優點在於(1)首次提供了由瓜蔞或瓜蔞提取物和銀杏葉或銀杏葉提取物製成的用於製備治療心血管疾病的藥物組合物，並通過藥理實驗證實二者有協同增效的作用，優於二者單獨用藥。(2)對本發明藥物組合物中藥物組份的配比進行了大量摸索研究，通過研究本發明藥物組合物對二磷酸腺苷引起的大鼠血小板凝集作用的影響和對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響，篩選出具有顯著療效的重量配比範圍。(3)藥理藥效研究表明，本發明藥物組合物具有協同增效作用，可以顯著抑制二磷酸腺苷引起的大鼠血小板凝集，顯著增強小鼠常壓耐缺氧能力，顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平，對心肌缺血再灌注大鼠有顯著保護作用，在治療心血管疾病方面有顯著效果，是本領域普通技術人員所意想不到的。(4)本發明組合物可由瓜蔞提取物和銀杏葉提取物直接投料加工製成製劑，製備工藝簡便，避免了由於原藥材質量差異造成的製劑質量差異較大的缺點，製劑質量有很大的提高，雜質含量大大減少，安全性更高。(5)本發明藥物組合物的有效成分明確、含量高，通過穩定性實驗證實，製劑穩定性好,便於控制產品質量，可以保證臨床用藥安全。以下通過實驗例來進一步闡述本發明所述藥物的有益效果，這些實驗例包括本發明藥物組合物的藥效藥理實驗。以下實驗例中所用的瓜蔞提取物均參照實施例1中的瓜蔞提取物製備方法製備，銀杏葉提取物均參照實施例2中的銀杏葉提取物製備方法製備。實驗例1本發明藥物組合物對體外抗ADP誘導的血小板聚集作用的影響受試動物雄性大鼠140隻，體重200220g，隨機分為14組，每組10隻。供試品氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業有限公司；瓜蔞注射液以瓜蔞提取物為原料藥自製；銀杏葉注射液組以銀杏葉提取物為原料藥自製；瓜銀注射液以瓜蔞提取物和銀杏葉提取物為原料藥自製，不同配比見表l。實驗方法將大鼠隨機分為14組，分別為對照組、銀杏葉注射液組、瓜蔞注射液組、瓜銀注射液不同配比組。各給藥組動物按表1腹腔注射給藥，對照組給與氯化鈉注射液，每日l次，連續給藥7天，末次給藥l小時後，動物麻醉後自腹主動脈取血，抗凝劑採用3.28%枸櫞酸鈉，與血液以1:9混合。將抗凝全血在20'C條件下1500rpm離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR後，將剩餘PPR再次以3000rpm離心10min，獲得自身對照貧血小板血漿(PPP)。以PPP調節PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37'C的恆溫孔中預熱後，加入二磷酸腺苷(ADP，終濃度為3pmohL-l)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。實驗結果實驗結果見表l。1)與對照組相比較，瓜蔞注射液組、銀杏葉注射液組均顯著抑制血小板凝集(p<0.05)，瓜銀注射液各配比組均顯著的抑制血小板凝集(p<0.05、p<0.01)。2)與瓜蔞注射液組比較，瓜銀注射液各配比組均顯著的抑制血小板凝集(p<0.05、pO.Ol)。3)與銀杏葉注射液組比較，瓜銀注射液各配比組均顯著的抑制血小板凝集(p<0.05、p<0.01)。表l本發明藥物組合物對大鼠血小板凝集作用的影響(i±S,n=10)組別_1§_給藥劑量(/kg)最大聚集率tableseeoriginaldocumentpage9注*p<0.05，**p<0.01，與對照組相比較；#p<0.05，##p<0.01，與銀杏葉注射液組比較;&p<0.05，&&p<0.01,與瓜蔞注射液組比較。結論由實驗結果可知，與單獨給藥組比較，瓜銀注射液各配比組的效果均更加顯著。其中，當瓜銀配比在瓜蔞1002000份，銀杏葉1001000份範圍內時，抑制血小板凝集效果明顯，特別是當瓜銀配比在瓜蔞5001500份，銀杏葉150400份範圍內時，血小板聚集率降低更加顯著，以瓜銀配比為1000:200時效果最佳，提示瓜蔞提取物與銀杏葉提取物具有協同增效作用，本發明藥物組合物在抑制血小板凝集方面有顯著療效。實驗例2本發明藥物組合物對小鼠常壓耐缺氧的影響受試動物昆明種小鼠，150隻，體重1822g，雌雄兼用，隨機分為15組。供試品氯化鈉注射液250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業有限公司；瓜蔞片以瓜蔞為原料藥自製；銀杏葉片以銀杏葉為原料藥自製；瓜銀片組以瓜蔞和銀杏葉為原料藥，按不同配比自製，見表2;鹽酸異丙腎上腺素注射液(ISO),上海禾豐製藥有限公司；實驗方法小鼠150隻，均分15組，分別為對照組、模型對照組、銀杏葉片組、瓜蔞片組、瓜銀片不同配比組。第l，2組均灌胃生理鹽水，其餘給藥組分別灌胃相應藥物，各藥物給藥前均用蒸餾水稀釋至適宜濃度。給藥30min後，除第一組外均皮下注射Iso20mg/kg,15min後，分別放入250ml磨口廣口瓶內密封，每瓶放小白鼠l只，然後以最後一次呼吸為指標，記錄小白鼠的存活時間，並進行t檢驗。實驗結果結論實驗結果見表2。1)與空白對照比較，模型組小鼠存活時間明顯縮短(p<0.05),示造模成功。2)與模型組比較，銀杏葉片組、瓜蔞片組小鼠存活時間顯著延長(p<0.05)，示二者均有抗缺氧作用。瓜銀片不同配比組均可顯著延長小鼠存活時間(p<0.05、p<0.01)。說明瓜蔞與銀杏葉合用提高小鼠耐缺氧能力。3)與銀杏葉片組比較，瓜銀片不同配比組配比在瓜蔞5001500份，銀杏葉150400份範圍內時，小鼠存活時間顯著延長(p<0.05、p<0.01),配比為1000:200時，效果最佳。4)與瓜蔞片組比較，瓜銀片不同配比組配比在瓜蔞5001500份，銀杏葉150400份範圍內時，小鼠存活時間顯著延長(p<0.05、p<0.01)，配比為1000:200時，效果最佳。結論由實驗結果可知，與單獨給藥組比較，瓜銀注射液各配比組的效果均更加顯著。其中，當瓜銀配比在瓜蔞1002000份，銀杏葉1001000份範圍內時，抑制血小板凝集效果明顯，特別是當瓜銀配比在瓜蔞5001500份，銀杏葉150400份範圍內時，小鼠存活時間延長更加顯著，以瓜銀配比為1000:200時效果最佳，提示瓜蔞提取物與銀杏葉提取物具有協同增效作用，本發明藥物組合物在小鼠常壓耐缺氧方面有顯著療效。tableseeoriginaldocumentpage10注#p<0.05，與空白對照組比較；*p<0.05，**p<0.01，與模型對照組相比較；Ap<0.05，AAp<0.01,與銀杏葉片組比較；&p<0.05,^pO.Ol,與瓜蔞片組比較。實驗例3本發明藥物組合物對大鼠實驗性高J(IL脂症的影響受試動物大鼠，50隻，體重220240g，隨機分為5組，每組10隻。供試品氯化鈉注射液250ml:2,25g,山東長富潔晶藥業有限公司；瓜蔞片以瓜蔞提取物為原料藥自製；銀杏葉片以銀杏葉提取物為原料藥自製；瓜銀片以瓜蔞提取物和銀杏葉提取物為原料藥自製。給藥劑量瓜蔞片lg生藥/kg、銀杏葉片250mg生藥/kg、瓜銀片低劑量組200mg生藥/kg、瓜銀片中劑量組250mg生藥/kg、瓜銀片高劑量組300mg生藥/kg。各給藥組藥物給藥前均用蒸餾水稀釋至適宜濃度。實驗方法大鼠測藥前膽固醇及甘油三酯水平後，建高脂模型。除空白對照組給予普通飼料外,其餘各組均給予高脂飼料(配方為普通飼料86.8%、膽固醇3%、豬油10%、丙硫氧嘧澱0.2%)，連續餵飼10天後，測血清膽固醇及甘油三酯水平，確定高脂模型建成。模型建成後繼續飼高脂飼料，給藥組分別灌胃給藥相應藥物，分別每日灌胃給藥l次，連續給藥20天後，再取血測膽固醇及甘油三酯水平。表3本發明藥物組合物對飲食性高血脂大鼠血清膽固醇的影響(i±S，n=10)tableseeoriginaldocumentpage11注^p〈0.01，與空白對照組比較;*p<0.05,**p<0.01:,與高脂模型組相比較;△p<0.05,A、<0.01，與銀杏葉片組比較；&p<0.05，Mp<0.01,與瓜蔞片組比較。表4本發明藥物組合物對飲食性高血脂大鼠血清甘油三酯的影響(X±S,n=10)組別實驗前模型建立後給藥20天後空白對照組0.53±0,170.54±0.180.52±0.10高脂模型組0.56±0.241.12±0.301,10±0,23**瓜蔞片組0.57±0.321.11±0.250.站.±0.19銀杏葉片組0.52±0.271.02±0.220.85±0.24瓜銀片低劑量組0.55±0.131.05±0.230.54±0.15*瓜銀片中劑量組0.57±0.181.10±0.210.55±0.14*瓜銀片高劑量組0.54±0.141.15±0.300.57±0.20*注##p<0.01,與空白對照組比較；*p<0.05,**p<0.01，與高脂模型組相比較;實驗結果實驗結果見表3和表4。1)與空白對照組相比較，高血脂模型組大鼠血清膽固醇和甘油三酯均極顯著升高(p<0.01)，說明造模成功。2)與高脂模型組相比較，瓜蔞片組、銀杏葉片組，瓜銀片低劑量組可顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯水平(p<0.05)，中劑量組和高劑量組可極顯著降低飲食性商血脂大鼠的血清膽固醇水平(p<0.01)，顯著降低甘油三酯水平(p<0.05)。3)與銀杏葉片組比較，瓜銀片中、高劑量組明顯降低大鼠的血清膽固醇水平(p<0.05)。4)與瓜蔞片組比較，瓜銀片中、高劑量組顯著降低大鼠的血清膽固醇水平(p<0.05)。結論由結果可知，單獨給與受試動物銀杏葉片或瓜蔞片時，大鼠高血脂水平明顯降低，給與大鼠由瓜蔞提取物和銀杏葉提取物製成的瓜銀片後，血清膽固醇及甘油三酯水平降低更加顯著，說明二者有協同增效的作用，提示本發明藥物組合物有顯著的降血脂功能，且量效關係明顯，對於治療高血脂症將有良好的療效。實驗例4本發明藥物組合物對實驗性大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響受試動物Wistar大鼠，60隻，體重180220g。供試品瓜蔞顆粒劑，以瓜蔞提取物為原料藥自製；銀杏葉顆粒劑，以銀杏葉提取物為原料藥自製；瓜銀顆粒劑，以瓜蔞提取物和銀杏葉提取物為原料藥自製；氯化鈉注射液250ml:2,25g,山東長富潔晶藥業有限公司；給藥劑量瓜蔞顆粒劑組lg生藥/kg、銀杏葉顆粒劑組250mg生藥/kg、瓜銀顆粒劑低劑量組200mg生藥/kg、瓜銀顆粒劑中劑量組250mg生藥/kg、瓜銀顆粒劑高劑量組300mg生藥/kg。實驗方法大鼠禁食12h,均分6組瓜蔞顆粒劑組、銀杏葉顆粒劑組、瓜銀顆粒劑低劑量組、瓜銀顆粒劑中劑量組、瓜銀顆粒劑高劑量組。分別灌胃不同劑量的相應藥物，對照組給等容積生理鹽水。lh後，腹腔注射戊巴比妥鈉35mg/kg麻醉。人工呼吸下開胸結紮冠狀動脈左旋支7min,隨後再灌注15min。描記II異心電圖。觀察再灌注後心律失常出現時間及維持時間(超過15min，以15min計)，並記錄室顫(VF)、室性心動過速(VT)發生數及室性早搏個數(VPB)。結果見表5表5本發明藥物組合物對實驗性大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響tableseeoriginaldocumentpage12實驗結果實驗結果見表5。1)與生理鹽水對照組比較，銀杏葉顆粒劑組、瓜蔞顆粒劑組均能顯著使大鼠再灌注後心律失常出現時間滯後(p<0.05)，顯著縮短心律失常維持時間(p<0.05);瓜銀顆粒劑低劑量組能顯著使大鼠再灌注後心律失常出現時間滯後(p<0.05)，顯著縮短心律失常維持時間(p<0.05);瓜銀顆粒劑中、高劑量組能極顯著使大鼠再灌注後心律失常出現時間滯後(p<0.01)，極顯著縮短心律失常維持時間(p<0.01)。2)與銀杏葉顆粒劑組比較，瓜銀顆粒劑中、高劑量組能顯著使大鼠再灌注後心律失常出現時間滯後(p<0.05)，顯著縮短心律失常維持時間(p<0.05)。3)與瓜蔞顆粒劑組比較，瓜銀顆粒劑中、高劑量組能顯著使大鼠再灌注後心律失常出現時間滯後(p<0.05),顯著縮短心律失常維持時間(p<0.05)。結論各給藥組均能使大鼠再灌注後心律失常出現時間滯後，顯著縮短心律失常維持時間，均能使室顫(VF)、室性心動過速(VT)室性早搏波(VPB)發生數減少，瓜銀顆粒劑中、高劑量組效果最好，表明本發名藥物組合物對大鼠缺血再灌注損傷明顯有保護作用。實驗例5組合物注射液穩定性實驗樣品組合物注射液，自製，(處方和製備方法參見實施例3水針劑的製備)。考察項目性狀、pH值、澄明度、有關物質、標示含量；並在加速實驗6個月和長期實驗期末增加無菌和熱原檢查。1、影響因素實驗強光照射實驗取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內放置10天。高溫實驗取供試品，分別置於40'C、6(TC條件下放置10天。低溫實驗取供試品，在4'C冰箱中放置10天。上述實驗，分別於第5、IO天取樣測定。比較性狀後測試各項指標，並將結果與O天比較。結果光照4500Lx條件下放置10天，除有關物質略有升髙外，其它各項指標均無明顯變化。髙溫60'C條件下放置10天，各項指標無明顯變化。髙溫40。C、低溫4'C條件下放置10天，各項指標無明顯變化。2、加速實驗方法置溫度40'C士2'C、相對溼度75%土5%的條件下放置6個月。在實驗期間分別於第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀後，測試各項指標，將結果與O個月比較；並在6個月末增加無菌和熱原檢査。結果溫度40'C土2'C、相對溼度75%±5%的條件下放置6個月，除有關物質略有增加，標示含量略有下降外，其它各項指標均無明顯變化，加速實驗6個月末，熱原、無菌檢査均符合規定。3、長期實驗長期穩定性實驗方法及結果將本品置溫度25'C士2'C、相對溼度60%±10%的條件下放置6個月、12個月，各項指標均無明顯變化，實驗結果表明組合物注射液長期放置基本穩定。結論由上述考察結果得出結論，各項實驗中，瓜蔞和銀杏葉組合物的注射液均比較穩定。可以用於放大生產。具體實施方式以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實施例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。以下實施例中各劑型的製備中所用的瓜蔞提取物、銀杏葉提取物的製備方法見分別實施例l、實施例2，輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實施例1瓜蔞提取物的製備以及鑑別和含量測定y2f魏攻教顏吝1)取瓜蔞藥材，烘乾，粉碎成粗粉，加入水回流提取2次，每次加入10倍量水，回流提取2小時，濾過，合併濾液，濃縮至相對密度為U01.15(60'C)的濃縮液，加入乙醇至含量達80%,放置過夜，取上清液，回收乙醇至無醇味，減壓至稠膏狀，真空乾燥，即得瓜蔞粗提取物(可供口服用)。2)將l)中得到瓜蔞粗提物用適量水溶解後，用等量石油醚振搖提取2次，水液用等量水飽和正丁醇振搖提取3次，合併正丁醇提取液，濃縮至幹，殘渣加少量水使溶解，上大孔樹脂柱，分別用水、15%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮至稠裔狀，噴霧乾燥，即得瓜蔞精提取物。(可供注射用);zr婆微欽才蘆浙定鮮類啟,#廁定對照品溶液製備取人參皂甙Rgl對照品約20mg，經60'C真空乾燥2小時，精密稱定，置10ml量瓶中，用無水乙醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，製得每lml含Rgl對照品2mg的溶液，即得。標準曲線製備分別精確移取人參皂苷標準品Rgl(濃度為2mg/m1)5、10、30、50、70、90、110於10ml具塞試管中製成系列標準溶液，水浴揮幹甲醇，加0.7ml8X香草醆冰乙酸溶液，再加人5ml高氯酸，搖勻，於60'C水浴15min,取出立刻用自來水衝至室溫，以加樣品平行樣作空白，於560nm測定吸光度，以吸光度對人參皂苷含量(M，單位ng)作回歸曲線，得回歸方程M=213.13A+4.7576，R=0.997。測定法準確移取樣品溶液30pl，置於10ml具塞試管中，水浴揮幹甲醇，力卩0.5mL8M香草醛冰乙酸溶液，再加人5ml高氯酸，搖勻，於6(TC水浴15min，取出立刻用自來水衝至室溫，以加樣品平行樣作空白，於560nm測定吸光度，以吸光度對人參皂苷含量(M，單位ng)作回歸曲線，得回歸方程M=213.13A+4.7576,R=0.997。通過上述工藝製備瓜蔞粗提取物，得率為7.5%，甾體類皂苷含量測定為24.96%,瓜蔞精提取物，得率為3.40%，甾體類皂苷含量測定為33.61%，結果見表6。表6瓜蔞提取物的含量測定結果和得率tableseeoriginaldocumentpage15實施例2銀杏葉提取物的製備及鑑別和含量淵定薪樹港歡教麟姿取銀杏葉5kg，粉碎，加70。/。乙醇60'C溫浸提取兩次，每次加醇15倍量，攪拌下溫浸2小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇至相對密度為1.031.09(50'C),加入4倍量的水，攪勻，14'C冷藏過夜，濾過，濾液上柱，分別用34倍量體積水、15%乙酵、70乙醇洗滌，收集70%乙醉液，減壓濃縮，真空乾燥，浸膏加5倍量乙醇提取二次，每次15分鐘，合併濾液，減壓濃縮，真空乾燥，浸膏加8倍量水，加熱至沸騰，微沸5分鐘，放置室溫，14'C冷藏過夜，濾過，濾液加25%粗提物的聚醯胺，攪拌5分鐘，濾過，減壓濃縮，真空乾燥，即得。分別製備三批銀杏葉提取物，得率見表7。敘辦碧攻教遊鄉(1)取銀杏葉提取物0.28，加正丁醇15ml，置水浴中溫浸15分鐘並時時振搖，放冷，濾過濾液蒸乾，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取銀杏葉對照提取物0.28，同法製成對照提取物溶液。照薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各3pl，分別點於同一以含0.4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的矽膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水(5:3:1:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照提取物色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。(2)照薄層色譜法實驗，吸取萜類內酯的含量測定項下的萜類供試品溶液和對照品溶液各15pl，分別點於同一以含0.4%醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10:5:5:0.6)為展開劑，在15。C以下展開，取出，晾乾，用醋酐蒸氣燻15分鐘，在140160。C加熱30分鐘，放冷，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。對上述製備的三批銀杏葉提取物進行鑑別實驗，均符合要求。薪辦楚攻教齡f浙定詹,辦奮潔定高效液相色譜法色譜條件與系統適用性實驗以十八烷基矽垸鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數按槲皮素峰計算應不低於2500。對照品溶液的製備分別精密稱取槲皮素對照品、山奈素對照品、異鼠李素對照品，加甲醇製成每lml分別含30ng、30嗎、20嗎的混合溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的製備取銀杏葉提取物約35mg，精密稱定，加甲醇-25%鹽酸溶液(4:1)的混合溶液25ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOpl，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃銅醇苷的含量。總黃銅醉苷氣槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量)X2.51薪劍磨財蘆激定高效液相色譜法色譜條件與系統適用性實驗以十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以正丙醇-四氫呋喃-水(1:15:84)為流動相；用蒸發光散射檢測器檢測。理論板數按白果內酯峰計算應不低於2500。對照品溶液的製備分別精密稱取白果內酯對照品、銀杏內酯A對照品、銀杏內酯B對照品和銀杏內酯C對照品適量，加甲醇製成每lml各含2mg、lmg、lmg、lmg的混合溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的製備取銀杏葉提取物約0.15g,精密稱定，加水10ml，置水浴中加熱使溶散，加2%鹽酸溶液2滴，用乙酸乙酯振搖提取4次(15ml，10ml,10ml，10ml)，合併提取液，用5c/o醋酸鈉溶液20ml洗滌。合併乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20ml，分取水液，用乙酸乙酯10ml洗滌，合併乙酸乙酯液，回收溶劑至幹，殘渣用甲醇溶解並轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液5jU、l(Hil，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程分別計算白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B和銀杏內酯C的含量，即得。對上述製備的三批銀杏葉提取物分別進行含量測定，測定結果見表7。表7銀杏葉提取物的含量測定結果和得率tableseeoriginaldocumentpage17實施例3本發明藥物組合物水針劑的製備處方瓜蔞提取物339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)銀杏葉提取物42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)注射用水加至10000ml_共製備2000支~~^製備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水衝洗。2)取配液量80%的注射用水，加入處方量的瓜蔞提取物和銀杏葉提取物，加熱攪拌溶解完全。3)補加注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的pH值。6)經0.45um的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度，半成品化驗。8)將溶液熔封於玻璃安瓿中。9)100'C流通蒸汽滅菌30分鐘。10)趁熱將樣品放入0.01%的亞甲藍溶液中檢漏。11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。^施例4^鵬艦錄醋布膽恪處方取物339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)提取物42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)500g射用水加至10000ml_畫支製備工藝l)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理。提葉醇注備蔞杏露菌制瓜銀甘無共2)照處方量稱取原料和輔料。3)取配液量80%的無菌注射用水，將瓜蔞提取物和銀杏葉提取物加入加熱攪拌溶解完全。再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補加無菌注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的pH值。6)經0.22um的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度，半成品化驗。8)分裝於抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍幹機中冷凍乾燥。預凍一45'C5小時，低溫真空乾燥一45°C(TC20小時，然後升溫至25'C真空乾燥3小時。9)凍乾結束，壓塞，軋蓋。10)成品全檢，包裝入庫。$翻5殺B月趣^物JL化鈉輸,鵬處方取物339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)提取物42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)900g水加至100000ml_1000瓶製備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水衝洗。2)取配液量20%的注射用水將瓜蔞提取物和銀杏葉提取物加入加熱攪拌溶解完全。將氯化鈉用配液量40%的注射用水溶解完全。3)合併兩溶液，補加注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的pH值。6)經0.45um的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度，半成品化驗。8)灌裝於100ml的輸液瓶中。9)115'C熱壓滅菌30分鐘。10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。實施例6本發明藥物組合物葡萄糖輸液的製備提葉鈉用備蔞杏化射制瓜銀氯注共處方取物339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)提取物42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)5000g^_加至100000ml_1000瓶製備工藝-1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水衝洗。2)取配液量20%的注射用水將瓜蔞提取物和銀杏葉提取物加入加熱攪拌溶解完全。將葡萄糖用配液量40%的注射用水溶解完全。3)合併兩溶液，補加注射用水至全量。4)加入配液量0.1%的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。5)經砂濾棒過濾脫炭。測定並調節溶液的pH值。6)經0.45um的微孔濾膜精濾。7)檢査溶液的澄明度，半成品化驗。8)灌裝於100ml的輸液瓶中。9)115'C熱壓滅菌30分鐘。10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。^翻7榷ffi論M合物M"雄繼處方I339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)瓜蔞提取物銀杏葉提取物澱粉微晶纖維素2%HPMC水溶液硬脂酸鎂羧甲澱粉鈉42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)120.0g40.0g2.0g4.0g共製備2000片製備工藝1)將瓜蔞粗提取物和銀杏葉提取物粉碎過100目篩備用。2)按照處方量稱取原料和輔料。3)將羥丙甲纖維素溶於水中製成2%的水溶液備用。4)將瓜蔞提取物、銀杏葉提取物、澱粉、微晶纖維素混合均勻，加入2WHPMC水溶液適量，攪拌均勻，製成適宜軟材。5)過20目篩制顆粒。提葉糖用備蔞杏萄射制瓜銀葡注共6)顆粒在60'C的條件下烘乾。7)乾燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲澱粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。8)取樣，半成品化驗。9)按照化驗確定的片重壓片。10)成品全檢，包裝入庫。實施例s本發明藥物組合物膠ii布j的葡j備處方339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)瓜蔞提取物銀杏葉提取物澱粉微晶纖維素2MHPMC水溶液硬脂酸鎂42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)60g20g適量ig_共製備2000粒製備工藝1)將瓜蔞提取物和銀杏葉提取物粉碎過100目篩備用。2)按照處方量稱取原料和輔料。3)將羥丙甲纖維素溶於水中製成2%的水溶液備用。4)將瓜蔞提取物、銀杏葉提取物、澱粉、微晶纖維素混合均勻，加入2XHPMC水溶液適量，攪拌均勻，製成適宜軟材。5)過20目篩制顆粒。6)顆粒在60'C的條件下烘乾。7)乾燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。8)取樣，半成品化驗。9)按照化驗確定的裝量裝入膠襄。10)成品全檢，包裝入庫。實施例9本發明藥物組合物顆粒劑的製備處方瓜蔞提取物339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)銀杏葉提取物42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)糖粉1500g2XHPMC50X乙醇溶適量^_共製備畫包製備工藝-1)蔗糖粉碎過100目篩備用。將瓜蔞提取物和銀杏葉提取物粉碎過100目篩備用。2)照處方量稱取原料和輔料。3)將瓜蔞提取物、銀杏葉提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2%HPMC50%乙醇溶液適量，攪拌均勻，製成適宜軟材。4)過20目篩制顆粒。5)顆粒在60°C的條件下烘乾。6)幹顆粒過18目篩整粒。7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量。8)包裝，成品全檢，包裝入庫。實施例IO本發qg藥物組合物口服液的製備處方物339g(相當於瓜蔞原藥材10kg)取物42.8g(相當於銀杏葉原藥材2kg)15g10g_加至10000ml_1000支製備工藝1)先將EDTA-2NA用配液量60%的水溶解完全，再將瓜蔞提取物和銀杏葉提取物加入加熱攪拌溶解完全。2)將苯甲酸鈉和甜蜜素用配液量20%的水溶解完全。3)合併上述兩個溶液，補加水至全量。4)過a8um的微孔濾膜過濾。5)半成品化驗。8)灌裝。成品全檢，包裝入庫。取提鈉提葉酸素備蔞杏甲蜜制瓜銀苯甜水共權利要求1.一種用於心血管疾病的藥物組合物，其特徵在於，製成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為瓜蔞100～2000份、銀杏葉100～1000份。2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於，該藥物組合物原料藥的組成為瓜蔞5001500份、銀杏葉150400份。3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於，該藥物組合物原料藥的組成為瓜蔞1000份、銀杏葉200份。4.如權利要求13所述的任一藥物組合物，其特徵在於，瓜蔞和銀杏葉可以用適宜的溶劑和方法通過單提或混提製備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合製成任一製劑，其中，瓜蔞提取物中所含的有效成分為甾體類皂苷，銀杏葉提取物中所含的有效成分為總黃酮醇苷、萜類內酯。5.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於，製成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成還可以是瓜蔞提取物2160份、銀杏葉提取物140份。6.如權利要求5所述的藥物組合物，其特徵在於，該藥物組合物原料藥的組成為瓜蔞提取物10120份、銀杏葉提取物1.516份。7.如權利要求6所述的藥物組合物，其特徵在於，該藥物組合物原料藥的組成為瓜蔞提取物2080份、銀杏葉提取物28份。8.如權利要求57所述的任一藥物組合物，其特徵在於，瓜蔞提取物中留體類皂苷的含量不低於20%，銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量不低於24.0%、萜類內酯的含量不低於6.0%、總銀杏酸不超過百萬分之十。9.如權利要求13、57所述的任一藥物組合物，其特徵在於，該藥物組合物可以製成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。10.如權利要求9所述的任一藥物組合物，其特徵在於，該藥物組合物可以製成注射劑或口服製劑。全文摘要本發明屬於醫藥
技術領域：
，公開了一種新的用於心血管疾病的藥物組合物及其製備方法和用途，製成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為瓜蔞100～2000份或其提取物2～160份和銀杏葉100～1000份或其提取物1～40份。該藥物組合物可以製成各種藥學上可接受的任一劑型，優選注射劑和口服製劑。對於冠心病、高血脂等心血管疾病有顯著療效。文檔編號A61K36/185GK101152233SQ20061015948公開日2008年4月2日申請日期2006年9月25日優先權日2006年9月25日發明者黃振華申請人:黃振華