地黃葉中具有治療慢性腎小球腎炎作用的毛蕊花糖苷的製備工藝的製作方法

2023-04-27 22:28:31 2

專利名稱：地黃葉中具有治療慢性腎小球腎炎作用的毛蕊花糖苷的製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥技術領域，特別是涉及一種具有治療慢性腎小球腎炎活作 用的活性成分的提取、分離製備工藝。
技術背景慢性腎小球腎炎是一種免疫性疾病(免疫複合物形成為主)全世界發病率高，在我國腎病的發病率高達5%，其中40%屬免疫性腎病。腎小球腎炎發病期長， 病程可達數月乃至數年，治療過程常常出現反跳，進一步發展嚴重時，可導致 腎功能衰竭。現代醫學在治療手段上，除對症，支持療法外，在免疫治療上的 武器仍是皮質激素及免疫抑制劑，在重症時加用激素短程衝擊、四聯療法、抗 凝、纖溶、透析等，無更多突破，其共同特點是難以避免的副作用(骨髓抑制， 性腺抑制，腎毒性，易感等)。近年來已上市的中藥製劑多為複方藥，雖然在臨床上發揮了一定的作用， 但至今未見有中藥單體藥品的報導。無論從國內，國際上緊迫需要一種高效、 低毒的天然單體藥物。本項目研究領域屬國家中藥新藥開發研究的創新領域工程，主要研究內容 是以《新藥審批辦法》為依據，進行了有關中藥1類新藥的綜述、藥學、臨床 三個方面的全部研究內容，其技術手段主要涉及到中藥化學、化學分析、中藥 藥理、毒理、藥代動力學、中藥製劑、臨床研究等多學科的配合，項目主要研 究目的為取得療慢性腎小球腎炎國家級1類新藥證書。地黃葉性味甘、涼，味甘能補益虛損，性涼有清熱之功。地黃葉之歸經主要
滋陰清熱，涼血止血；充填真陰，恢復腎之封藏之職，則能攝精而使蛋白之精 微不從尿中洩出；陰充血足，則血脈通利，瘀滯自然疏通；腎陰得補，則腎之 氣化之職復常，而能使水溼滲洩於外；肝腎乙癸同源，滋水涵木，則能柔肝以 平抑肝陽上亢之泉。地黃葉主產於河南省懷慶地區，在我國陝西、河北等地也有野生和栽培，藥 用地黃年產數十萬噸，而地上部分至今為止僅作為飼料和地裡的自然肥料之用。 地黃葉有效成分藥用價值的開發，必將帶來地黃及地黃葉的綜合利用，使地黃葉變廢為寶，為貫徹我國農村的〃三農〃政策，提高農民收入，作出一定的貢獻。 2、 發明內容毛蕊花糖苷是我研究所經多年的研究開發，從地黃葉中經過提取、分離、 精製得到的具有治療慢性腎小球腎炎作用的活性化合物(毛蕊花糖苷英文名稱 為Acteoside 或 Verbascoside 或 Kusaginin ; 化學名稱為 P -D-Glucopyranoside, 2_ (3，4-dihydroxyphenyl)ethyl 3_0_(6-deoxy- a -Z_mannopyranosyl)-4_[3-(3， 4-dihydroxyphenyl)-2-propenoate]， (E)-。)， 是中國中醫研究院中藥研究所主持開發的多年研究成果，並於2000年獲得國家 科技部中央院所專項基金的資助，現已按國家食品藥品監督管理局新藥審批標 準，完成了治療慢性腎炎的機理研究；主要藥效學實驗；生產工藝實驗(包括 工業化提取分離工藝)；質量控制標準；質量影響因素實驗；長期穩定性實驗； 大鼠急性毒性、長期毒性實驗；致畸、致突變實驗； 一般藥理學實驗；藥代動 力學實驗等臨床前的研究工作。
本研究治療慢性腎腎炎的特點
(1) 藥效學結果顯著
經口服毛蕊花糖苷給藥，①對小鼠和大鼠IgG加速型腎毒血清腎炎有明顯 的治療作用，表現在明顯降低尿蛋白、升高血漿白蛋白、降低尿素氮、膽固醇 和肌酐，形態學觀察中發現毛蕊花糖苷可減輕腎組織的病損(包括腎小球毛細血管基底膜增厚，纖維素樣壞死，新月體形成等)及IgG在腎小球的沉積；②在大鼠C-BSA腎炎模型上，明顯降低尿蛋白、尿素氮、膽固醇和肌酐，形態學 觀察有明顯改善(包括腎小球增大、繫膜增生、小球內細胞增多等)亦可減少 IgG和C3補體在腎小球的沉積；③對大鼠被動Heymann的腎炎試驗中可明顯降低動物尿蛋白量，降低總膽固醇和肌酐，尿素氮含量也有降低的趨勢，免疫螢光 檢査結果顯示，IgG和C3補體沉積均有不同程度減輕，沉積顆粒變小、稀疏， 螢光強度減弱，可明顯抑制IgM抗體的形成；④對體液免疫呈抑制作用；對正 常小鼠脾淋巴細胞增殖及遲髮型超敏反應無明顯作用，而對免疫低下小鼠的 遲髮型超敏反應有增強作用，顯示對細胞免疫有一定調節作用，並可提高小 鼠腹腔巨噬細胞的吞噬功能。(2) 明確的多途徑作用機制 目前所有的腎炎治療藥物如類固醇類製劑、免疫抑制劑、抗凝劑和中草藥，其治療作用機理單一或比較模糊，因此在治療發病複雜、病徵多元化的腎炎病 時，常採用聯合或衝擊應用，在取得了一定療效的同時加大了毒副作用，產生 其它的藥源性損害，延緩了預後恢復。因此挖掘具有複合作用機制的治療藥物， 減少使用藥物的種類和用量，是一個全新的方向。
該藥物在兔、大小鼠多類動物和多種腎炎模型均有明顯治療效果的基礎上， 進行了體內體外、模型正常、免疫抗凝等多角度的機理研究，結果表明它具有較明確的免疫調節和抗凝雙重作用機制，具備臨床中單獨或重點應用的實驗學基礎和可行性。其作用機制如下
免疫調節特點①抑制抗體的生成，②抑制免疫複合物的形成，③抑制白細胞 相關抗原的積聚，④抑制白細胞亞型對腎小球的浸潤，⑤抑制粘附因子的表達， (D抑制囊上皮細胞的增殖，⑦減少過氧分物的堆積，⑧增強單核吞噬細胞的功 能，⑨提高CD4/CDs的比值，提高細胞免疫水平。血液流變學特點①抑制凝血速率，②縮短凝血時間，③抗血小板聚集的趨勢， ④加快增生組織的降解(3) 治療方式的多樣性為使該藥物能較快的為中西醫認可並應用，和臨徵個性化治療的需要，我 們進行了合併用藥研究，包括激素類藥物、免疫抑制劑、抗凝劑(本項研究中)。 實驗結論如下1、治療效果梯度增強；2、激素類藥物、免疫抑制劑的用量和 用藥時間明顯降低；3、試驗動物的體重、血象、器官指數和死亡數均有所好轉。 因此本藥有在臨床應用中有合併西藥，減毒增效的可行性，臨床的多樣化使用 可增加醫生的使用機會和使用範圍。(4) 臨床應用的安全性已進行的大小鼠的急毒試驗、大鼠的長毒試驗、至畸、致突變試驗均表明 該藥物具有無毒安全的特點，這將極其有利於它的臨床廣泛應用。本研究提取分離的製備工藝特點(1) 本工藝採用了乙醇提取，經大孔吸附樹脂分離，丙酮精製，酸水重結晶的 方法，步驟明確。(2) 本工藝適宜工業化生產，量化程序可靠，操作簡單。(3) 本工藝的率高，得率可達5%。(4) 本工藝生產得到的毛蕊花糖苷純度可達90%以上。 毛蕊花糖苷化合物結構:3.


附圖1是原藥材經提取、純化成粗提取物工藝圖，圖2是粗提取物精製成毛蕊 花糖苷的工藝圖。
具體實施方式
千燥的地黃葉碎葉片，以酸性乙醇回流，提取兩次，每次60分鐘，合併兩 次提取液，濃縮，濃縮液加入乙醇至含醇量40%，放置過夜。濾過，上清夜加 水稀釋至含醇量15%，放置過夜，取上清液加入到己處理合格的SP825大孔樹脂 柱上，先以水洗脫，再以15%乙醇洗脫，再以40%乙醇洗脫，收集40%乙醇洗脫 液濃縮至小體積(無醇味)後，低溫真空乾燥，粉碎成細粉(60目篩)。丙酮 溶解，濾過，活性炭脫色，濾過。濃縮丙酮至小體積，低溫真空乾燥，粉碎成 細粉(80目篩)，以酸水重結晶。
權利要求
1、 毛蕊花糖苷的製備工藝特徵在於以地黃葉為原料，用酸性乙醇提取，濃縮， 採用稀醇沉澱除去葉綠素，通過大孔吸附樹脂分離，丙酮溶解，活性炭脫 色，酸水重結晶得到毛蕊花糖苷，以毛蕊花糖苷為原料製成中藥製劑，用 於臨床治療慢性腎小球腎炎。
2、 權力要求1所述的毛蕊花糖苷英文名稱為Acteoside或Verbascoside或 Kusaginin ; 化學名禾爾為 P -D-Glucopyranoside，2-(3，4-dihydroxyphenyl)ethyl 3-0-(6-deoxy- a -Z-mannopyranosyl)-4-[3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoate],(E)-。
3、 按權力要求1所述的毛蕊花糖苷原料來源為地黃葉，地黃葉為新鮮或脫水 後的綠色乾燥葉片或碎片。
4、 按權力要求l所述的酸性乙醇的pH值為1.5-6.5
5、 按權力要求1所述的稀醇沉澱的乙醇濃度為10-90%。
6、 按權力要求1所述的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂。
7、 按權力要求1所述的酸水重結晶時其酸水的pH值為1.5-6.5。
8、 按權力要求1所述毛蕊花糖苷的純度為90%以上。
9、 按權力要求1所述的中藥製劑為片劑，膠囊劑，顆粒劑，滴丸劑，微丸劑， 分散片等口服固體製劑。
10、 按權力要求l所述的慢性腎小球腎炎是指由於機體免疫系統發生病變，引 起腎小球毛細血管基底膜增厚或纖維素樣壞死或新月體形成等以及IgA、 IgM、 IgG等免疫複合物在腎小球上的沉積。
11、 按權力要求1所述的治療慢性腎小球腎炎是指通過口服毛蕊花糖苷及其制 劑，可以降低、減少人體尿中尿蛋白和紅細胞，升高血漿中白蛋白、降低 血中尿素氮、膽固醇和肌酐，減輕腎組織的病損(包括降低腎小球毛細血 管基底膜增厚，減少纖維素樣壞死，減少新月體形成等)。
全文摘要
本發明屬於中藥技術領域，特別是涉及一種具有具有治療慢性腎小球腎炎活作用的活性成分的提取、分離製備工藝。毛蕊花糖苷是我研究所經多年的研究開發，從地黃葉中經過提取、分離、精製得到的具有治療慢性腎小球腎炎作用的活性化合物，是中國中醫研究院中藥研究所主持開發的多年研究成果，並於2000年獲得國家科技部中央院所專項基金的資助，現已按國家食品藥品監督管理局新藥審批標準，完成了治療慢性腎炎的機理研究；主要藥效學實驗；生產工藝實驗(包括工業化提取分離工藝)；質量控制標準；質量影響因素實驗；長期穩定性實驗；大鼠急性毒性、長期毒性實驗；致畸、致突變實驗；一般藥理學實驗；藥代動力學實驗等臨床前的研究工作。地黃葉主產於河南省懷慶地區，在我國陝西、河北等地也有野生和栽培，藥用地黃年產數十萬噸，而地上部分至今為止僅作為飼料和地裡的自然肥料之用。地黃葉有效成分藥用價值的開發，必將帶來地黃及地黃葉的綜合利用，使地黃葉變廢為寶，為貫徹我國農村的「三農」政策，提高農民收入，作出一定的貢獻。
文檔編號A61P13/00GK101121740SQ20061010435
公開日2008年2月13日 申請日期2006年8月9日 優先權日2006年8月9日
發明者偉 何, 王宏潔, 邊寶林 申請人:中國中醫科學院中藥研究所