淨化的β-(1,3)-D-葡聚糖的製備方法

2023-04-27 16:26:11 4

專利名稱：淨化的β-(1,3)-D-葡聚糖的製備方法
淨化的β-(1，3)-D-葡聚糖的製備方法本發明涉及一種用於製備淨化的β-(1，3)- -葡聚糖的方法，其包括下面的關鍵 步驟鹼化β-(1，3)- -葡聚糖初始水溶液來降低該溶液的粘度，過濾該低粘度溶液和通 過酸化來恢復初始粘度，並且加熱所獲得的含有β-(1，3)- -葡聚糖的濾液。分類為i3-(l，3)_D-葡聚糖的多糖種類的特徵在於以β_(1，3)形式連接的D-葡 萄糖殘基主鏈，其中不同的β _(1，3)-D-葡聚糖在它們的側基和分子量方面的結構是彼此 不同的。例如凝膠多糖完全由β _(1，3)-D-葡萄糖主鏈組成，而裂褶多糖，硬葡聚糖和酵母 葡聚糖包含β_(1，6)_糖基側鏈。由於它們強的增稠性能和獨特的流變性能，這些多糖已 經獲得了諸多的工業應用，特別是在人類食品或者動物飼料領域中，作為化妝品，水彩畫， 印刷油墨的成分，以及用在石油工業中，例如在鑽探泥漿，隔離液中，和作為浙青乳液的穩 定劑。β _(1，3)-D-葡聚糖類型的多糖通常是通過微生物發酵來生產的，並且該發酵 液通常是直接使用和以稀釋形式使用的，通常是在巴氏滅菌之後使用(參見例如US專利 3301848)。但是，對於某些應用而言，需要更高純度的i3-(l，3)-D-葡聚糖，其應當不包含 微生物細胞和/或該發酵液的其他水溶性成分。在這種情況中，通常使用沉澱方法，其包括加入水溶性有機溶劑(典型的是 異丙醇)或者另外一種沉澱劑例如聚乙二醇，來沉澱β-(1，3)- -葡聚糖(參見例如 EP0266163A2和US3301848)。在沉澱後，將沉澱物與含水介質經由過濾器分離，或更優選， 經由離心分離進行分離。所形成的沉澱物或者「凝結物」然後可以加壓來除去儘可能多的 其中所含的液體，然後可以乾燥和研磨成為β-(1，3)- -葡聚糖粉末，如本領域已知的那 樣(參見例如 US5224988 和 US3301848)。但是，雖然β _(1，3)-D-葡聚糖直接由發酵液中沉澱會提供良好的回收產率，但 是所獲得的沉澱物混有微生物細胞，並且因此不能用於某些應用。所以，期望的是使β _(1， 3)-D-葡聚糖從無細胞的溶液中開始沉澱，該溶液可以通過任何便利的技術例如過濾或者 離心分離來獲得。一種特別有利的將β _(1，3)-D-葡聚糖與發酵液的其他成分，特別是微生物細胞 進行分離的技術是過濾。但是，目前的對含有β-(1，3)- -葡聚糖的溶液的過濾技術具 有這樣的缺點，即，這樣的溶液太粘稠而不能容易的進行過濾(參見例如ΕΡ0266163Α2和 US3301848)。具體的，該高的粘度會導致過濾壓力的升高或者過濾器的完全堵塞。為此原 因，目前的方法包括在過濾之前，為了降低粘度，用大量的溶劑來稀釋含有β-(1，3)- -葡 聚糖的溶液的步驟。結果，該常規的方法在生產率和生產成本方面是不令人滿意的。本發明因此的目標是提供一種用於製備淨化的i3-(l，3)_D-葡聚糖的方法，其提 供了高的產率，並且是比現有的β _(1，3)-D-葡聚糖製備方法更加成本有效的。已經令人驚訝的發現這個問題是通過所要求 保護的方法來解決的，該方法包括下 面的關鍵步驟通過加入鹼來鹼化β-(1，3)- -葡聚糖初始水溶液，以產生不太粘稠的溶 液，過濾該低粘度溶液，和使用酸來酸化所獲得的濾液，來恢復初始粘度，並且加熱所形成 的酸性β-(1，3)- -葡聚糖溶液。
本發明的方法能夠過濾未稀釋的β _(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液，該溶液包含高濃度的β _(1，3)-D-葡聚糖，該濃度遠高於能夠用於常規方法中的溶液的濃度，同時最終 所獲得的β _(1，3)-D-葡聚糖的粘度類似於常規方法的粘度。因此，本發明的方法表現出 明顯提高的加工生產率。另外，不需要或者僅僅需要有限量的試劑來稀釋待過濾的溶液。結 果，本發明的方法是比常規方法遠遠更成本有效的。更具體的，本發明的方法包括下面的步驟(a)提供pH高於11.0的β _ (1，3)-D-葡聚糖的初始水溶液；(b)過濾該β _(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液來獲得含有i3-(l，3)_D-葡聚糖的濾 液；(c)用酸將該含有i3-(l，3)_D-葡聚糖的濾液的pH調整為低於5.0的pH，來獲得 酸性β _(1，3)-D-葡聚糖溶液；(d)將該酸性i3-(l，3)_D-葡聚糖溶液加熱到60-160°C的溫度的範圍。本發明方法的步驟(a)中所提供的β _(1，3)-D-葡聚糖初始溶液可以是任何含有 i3-(l，3)-D-葡聚糖的水溶液。該β _(1，3)-D-葡聚糖可以以下面的高濃度包含在初始溶 液中5g/l或者更高，特別是10g/l或者20g/l或者更高，高到這樣的高濃度例如40或者 50g/l或者仍然更高的濃度。典型的，該初始溶液是發酵液，未精製的β-(1，3)- -葡聚糖 或者任何其他未精製的β-(1，3)- -葡聚糖製劑的再生溶液。這些初始i3-(l，3)_D-葡聚 糖溶液可以任選的包含少量的，優選0-10重量％，更優選0-5重量％的混合的另外的物質， 例如鹽，表面活性劑，絡合劑等等。本發明的「發酵液」是任何的溶液，該溶液是通過具有產生i3-(l，3)_D-葡聚糖的 能力的微生物的作用，在介質例如基於糖和無機鹽的介質的發酵之後獲得的。發酵液因此 包含用於發酵的微生物，未發酵的發酵介質和發酵代謝物等等。在本發明含義中的發酵液 可以進一步是這樣一種發酵液，其在過濾之前已經進行了滅菌或者巴氏滅菌。用於發酵的 微生物可以是細菌，真菌和藻類。發酵是如本領域已知的那樣來進行的，並且描述在例如 US3301848 中。當在此使用時，「未精製的β _(1，3)-D-葡聚糖」的「再生溶液」包含任何這樣的 溶液，該溶液能夠通過將未精製的β _(1，3)-D-葡聚糖粉末溶解在合適的溶劑例如水中而 獲得的。術語「未精製的β-(1，3)- -葡聚糖」目的是表示液體或者更典型的固體形式的 β _(1，3)-D-葡聚糖製劑，其包含微生物細胞或者至少其碎片。其例子包括乾燥的或者醇 處理過的發酵液。該乾燥的發酵液通常是粉末形式的，並且通常包含大約5-60重量％的 β-(1,3)- -葡聚糖，其中其餘部分基本上由細胞和剩餘的少量的水組成。用於本發明中的i3-(l，3)_D-葡聚糖包括分類為i3-(l，3)_D-葡聚糖的任何多 糖，即，具有β_(1，3)_連接的D-葡萄糖殘基主鏈的任何多糖。這樣的i3-(l，3)-D-葡 聚糖的例子包括凝膠多糖(一種由例如土壤杆真菌屬物種(Agrobacterium spp.)產生 的β_(1，3)_連接的D-葡萄糖殘基的均聚物)，灰樹花多糖(一種由例如真菌Grifola frondosa所產生的支化的β _(1，3)-D-葡聚糖)，香菇多糖(一種在β_(1，3)_主鏈的 每個第五葡萄糖殘基上連接有兩個葡萄糖接枝的支化的β-(1，3)- -葡聚糖，其例如是 由真菌埃杜香菇(Lentinus eeodes)產生的)，裂褶多糖(一種在β_(1，3)_主鏈的每個 第三葡萄糖殘基上具有一個葡萄糖接枝的支化的3-(l，3)-D-葡聚糖，其例如是由群交裂褶真菌(Schizophyllan commune)產生的)，硬葡聚糖(一種例如由真菌小核菌屬物種 (Sclerotium spp.)所產生的支化的β _ (1，3)-D-葡聚糖，其來自β - (1，3)-主鏈的三個葡 萄糖分子中的一個葡萄糖分子通過(1，6)-β鍵連接到側鏈D-葡萄糖單元上)，SSG(—種 例如由真菌油菜核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum)所產生的高度支化的β_(1，3)_葡 聚糖)，來自酵母的可溶性葡聚糖(一種帶有β_(1，6)_連接側基的i3-(l，3)-D-葡聚糖， 其例如是由啤酒糖酵母(Saccharomyces cerevisiae)產生的)，和海帶多糖(一種帶有 β _(1，3)_葡聚糖和β _(1，6)_葡聚糖側基的β _(1，3)_葡聚糖，其由例如褐藻類掌狀昆布 (the brown algae Laminariadigitata)產生)0 優選用於本發明中的β _(1，3)-D-葡聚糖不包含側基，例如凝膠多糖，或者經由 β _ (1，6)-連接鍵合到β - (1，3)-主鏈上的一種或多種葡萄糖殘基的接枝，例如裂褶多糖 和硬葡聚糖。此處所用的一種特別優選的β _(1，3)-D-葡聚糖是硬葡聚糖。在本發明方法的步驟(a)中，β _(1，3)-D-葡聚糖初始溶液的pH可以如同本領域 已知的那樣進行調整，例如使用任何的有機或者無機鹼來調整。根據本發明，該PH優選是 依靠鹼性化合物來調整的，其具有作為陽離子的鉀離子，例如氫氧化鉀，碳酸鉀或者碳酸氫 鉀。但是，雖然不太優選，但是也可以使用氫氧化鈉。優選將該β _(1，3)-D-葡聚糖初始溶 液的PH設定到高於11. 0，更優選高於12. 0，仍然更優選高於12. 2和最優選高於12. 3。在 這樣的高鹼性條件下，3-(l，3)-D-葡聚糖三重螺旋體以一種變性狀態而存在，在其中破壞 了該三股螺旋結構，並且分離了所述的股。這導致了粘度的明顯降低，並從而很大的促進了 淨化加工，這是因為能夠使用更高濃度的3-(l，3)-D-葡聚糖溶液，而沒有過濾器堵塞或 者過濾壓力不利的升高的風險。β _(1，3)-D-葡聚糖初始溶液的提供優選是在攪動下進行的，特別是在攪拌下進 行的，來保證均勻的溶液。攪拌速度對於分離的和淨化的β-(1，3)- -葡聚糖的產率和粘 度來說是不太重要的，並且可以處於10-150rpm的範圍內。典型的，攪拌是以40_80rpm的 攪拌速度來進行的。在本發明的一種優選的實施方案中，在步驟(a)中i3-(l，3)_D-葡聚糖初始溶 液的提供包括加入鈣絡合劑的步驟。鈣絡合劑降低了鈣離子對於強鹼性條件下的β-α， 3) -D-葡聚糖過濾能力的不利影響。合適的鈣絡合劑是例如六偏磷酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽， 磷酸鹽，碳酸鹽等等，其中六偏磷酸鹽特別適用於本發明中。在本發明另外一種優選的實施方案中，在步驟(a)中β _(1，3)-D-葡聚糖初始溶 液的提供包括加熱該初始溶液的步驟。加熱到高溫導致了 β-(1，3)- -葡聚糖更完全的溶 解，這在下面的情況中是特別重要的在其中使用β _(1，3)-D-葡聚糖粉末來製備β-(1， 3)-D-葡聚糖初始溶液，並且來加速在鹼性ρΗ時粘度降低的過程，以及來提高產率。優選 使用的加熱溫度範圍是50-80°C。加熱時間取決於加熱溫度，並且通常的範圍是l_24h。通 常，l"6h的加熱時間對於完全溶解β _(1，3)-D-葡聚糖初始溶液和/或實現分離的和淨化 的i3-(l，3)-D-葡聚糖的高產率和粘度來說是足夠的。在一種優選的實施方案中，在70°C 的加熱時間是大約4h。在本發明方法的步驟(b)中，過濾在步驟(a)中所提供的i3-(l，3)_D-葡聚糖初 始水溶液，來獲得含有β-(1，3)- -葡聚糖的濾液。所獲得的濾液基本上不含微生物細胞 或者其碎片，例如菌絲體，並且僅僅由水溶性成分組成，例如β _(1，3)-D-葡聚糖本身和來自該β _(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液的其他水溶性成分，例如鹽，顏料等等。過濾可以使用任何已知的過濾手段來進行。在本發明上下文中，優選使用助濾劑 例如珍珠巖，硅藻土或者纖維素。將這些助濾劑在混合下加入到鹼性β-(1，3)- -葡聚糖 溶液或者漿體中，來保證均勻的分散。典型的，鹼性β-(1，3)- -葡聚糖溶液中的助濾劑與 i3-(l，3)-D-葡聚糖的重量比是0. 2-5，特別是0. 5-2。然後將該含有助濾劑的鹼性β-(1， 3)-D-葡聚糖初始水溶液供給到過濾器來分離助濾劑。可以使用任何類型的過濾來進行該 分離，其中壓濾器或者板式過濾器特別適用於此。也可以使用潷析離心分離機，雖然與壓濾 器或者板式過濾器相比其不太優選。任選的，該過濾步驟還可以包括再循環直到獲得透明 溶液的步驟，該溶液然後如上所述與微生物細胞進行分離。在過濾過程中β _(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液的溫度取決於所用的具體過濾手 段，待淨化的β-(1，3)- -葡聚糖的性質，和其他因素。典型的，過濾溫度是50-90°C，優選 是70-85°C，特別優選是80°C。在本發明方法的步驟(c)中，將步驟(b)中所獲得的濾液通過加入酸到該含有 β _ (1，3) -D-葡聚糖的濾液中進行酸化，來將所形成的酸性β _ (1，3) -D-葡聚糖溶液的ρΗ 降低到低於5.0，優選低於4，更優選低於3。特別優選的ρΗ範圍是2-4。為了調整ρΗ，可以 使用任何的酸，除了那些產生帶有鈣離子的不溶性鹽的酸例如硫酸或者磷酸之外。優選使 用鹽酸。在本發明方法的步驟(d)中，將步驟(C)中所獲得的酸性i3-(l，3)_D-葡聚糖 溶液進行熱處理，來恢復3-(l，3)-D-葡聚糖的初始粘度。優選該加熱處理包括將酸性 3-(1，3)-0-葡聚糖溶液加熱到60-1601，優選80-1401，更優選100-120°C的溫度範圍 內。加熱時間取決於加熱溫度，並且能夠由本領域技術人員通過常規試驗來容易的確定。典 型的，該加熱時間的範圍在高溫情況中是幾秒，至在低溫情況中是幾小時。例如，20s的加熱 時間在130°C的加熱溫度可能是足夠的，而在120°C的加熱溫度可能需要大約Imin的加熱 時間。在90°C批次處理3h也可以適用於恢復β-(1，3)- -葡聚糖的粘度。加熱可以以批次或者UHT模式來進行。在批次模式中，將大體積的β _ (1，3) -D-葡 聚糖溶液進行長時間(通常大於10分鐘)的處理。該UHT處理是一種連續的加熱，在這裡將 一定體積的β-(1，3)- -葡聚糖溶液進行短時間(通常小於10分鐘)的熱處理。UHT方法 還能夠處理大體積，但是是以連續流動模式來進行。加熱時間可以通過所謂的「 chambrage 」 的另外階段根據期望來增加。在本發明方法的步驟(d)之後，所獲得的含有i3-(l，3)_D-葡聚糖的溶液可以根 據期望來進一步加工。例如，如果期望分離包含在β-(1，3)- -葡聚糖初始溶液中的其他 水溶性成分，則β _(1，3)-D-葡聚糖可以與任何已知的沉澱劑以足夠的量進行混合，來沉 澱β-(1，3)- -葡聚糖。該沉澱劑可以是例如溶劑，特別是醇，例如甲醇，乙醇，丙醇，或者 丙酮。為了進行該沉澱，便利的，將足夠量的沉澱劑在期望的溫度加入到步驟(d)中所獲 得的加熱的含有β-(1，3)- -葡聚糖的溶液中。通常，所形成的溶液的沉澱溫度範圍是 70-100°C，優選是80-95°C。典型的，該沉澱溫度是90°C。 在沉澱之後，β _ (1，3) -D- 葡聚糖可以通過任何便利的方法與液體進行分離，例如 過濾，離心分離或者潷析。如果期望，所獲得的β _(1，3)-D-葡聚糖產物可以如下來進一步 淨化用上述有機溶劑的一種進行清洗，或者將該β-(1，3)- -葡聚糖再分散到水中，並且以上述相同的方式來重新沉澱。在本發明的上下文中，一種優選的沉澱方法是使用異丙醇的醇沉澱方法。更具體 的，將該含有β _(1，3)-D-葡聚糖的溶液與等價的或者較大體積的異丙醇進行混合，通常 1-1.5重量份的異丙醇，基於1重量份的含有i3-(l，3)-D-葡聚糖的溶液。沉澱通常是在高 溫例如在90°C進行的。優選然後將所獲得的沉澱物用70%的異丙醇清洗至少一次，來獲得 含有水和溶劑的β _(1，3)-D-葡聚糖的纖維性產物。然後可以通過任何已知的方式來乾燥該i3-(l，3)_D-葡聚糖產物因此將該獲得 的淨化的β _(1，3)-D-葡聚糖產物轉化成為粉末形式，所述的方式是例如空氣乾燥，醇 或者丙酮乾燥，噴霧乾燥，轉鼓乾燥或者流化床乾燥。在乾燥之前，還可以壓榨該淨化的 β - (1，3)-D-葡聚糖產物，來除去儘可能多的包含在其中的液體。該乾燥的產物然後壓碎和 /或研磨成為粉末，其可以方便的用於寬泛的應用中。本發明現在將通過下面的實施例來進一步說明。
實施例 下面的試驗結果證實了與通常使用的淨化方法相比，本發明製備淨化的硬葡聚糖 的有益性能，硬葡聚糖是一種β-(1，3)- -葡聚糖，其在β-(1，3)_主鏈中的每三個葡萄糖 上具有β_(1，6)_連接的側D-葡萄糖殘基。具體的，已經發現硬葡聚糖溶液在過濾之前的 粘度在高PH值時會顯著降低，以及發現通過將ρΗ降低到酸性範圍，並且加熱處理該酸性溶 液，能夠將濾液的粘度恢復到與常規方法中所獲得的這些濾液大致相同的值。進一步可見 本發明方法的產率與常規方法大致相同。因此，本發明的方法允許過濾高濃縮的硬葡聚糖 溶液，該溶液包含了高出常規方法所用的硬葡聚糖溶液大約5倍的硬葡聚糖。作為其結果， 本發明方法的生產率明顯的高於常規的，並因此提供了大的成本節約潛力。對比例根據常規方法的硬葡聚糖的淨化將體積為150L的自來水加熱到80°C，並且在80rpm的攪拌下加入2. 4kg的 polytran N(最終濃度8g/L)(粉末形式的無水醇處理過的發酵液，以商標名ACTIGUM CS6 獲自法國Cargill of Baupte)，隨後在80°C攪拌2h。接下來，加入5. 625kg的floM(最 終濃度18. 75g/L)( 一種珍珠巖類型的助濾劑，以商標名CLARCEL FloM獲自法國Ceca ofHonfleur)，將所形成的混合物用水稀釋到300L，在80°C連續攪拌14h。然後在l_4bar的 壓力和80°C的溫度使用壓濾器(獲自法國Choquenet ofChauny)過濾該混合物。向所獲得的濾液中加入基於1重量份的濾液為1重量份的異丙醇，來沉澱該硬葡 聚糖。使用尼龍過濾器對沉澱物排水，並且用1重量份的70%異丙醇重新清洗。使用Coq 螺旋壓榨機來壓榨最終的沉澱物。最後，將壓榨過的硬葡聚糖在75°C的空氣流化床乾燥機 中進行乾燥，隨後使用帶有常規篩網的球磨機進行研磨和過篩，來獲得粒度為大約250 μ m 的硬葡聚糖粉末。通過這種常規方法所獲得的硬葡聚糖的產率、粘度和ρΗ表示在表1中。ρΗ和粘度 值是分別使用PH計和Brookfield粘度計，通過測量的硬葡聚糖溶液來確定的，該溶液 是通過將所獲得的250 μ m的硬葡聚糖粉末在25°C的去離子水中再溶解成1重量％而獲得 的。產率對應於所獲得的硬葡聚糖粉末的乾重量百分比，基於所使用的polytran N粉末的乾重量。表1.常規淨化的硬葡聚糖的產率、粘度和pH 要注意的是在這個實施例中所用的加工參數對應於在一系列初步的試驗中所確定的最佳的加工參數。在這些初步的試驗中，已經發現用於獲得高產率和高粘度的最佳條 件包括將polytran N起始溶液加熱到大約80°C。進一步提高該溫度不會明顯的提高產率或者增加粘度。在提高的溫度例如80°C，16h的溶解時間(solubilization time)足以達 到高的產率和粘度。另外，已經證實混合速度是不太重要的。此外和重要的，已經證實過濾 器在高於8g/l的polytran N濃度時發生了堵塞。因此，常規硬葡聚糖淨化方法是使用Sg/ 1的polytran N濃度來進行的，其在80rpm的攪拌下在80°C溶解了 16h。本發明的實施例按照本發明的鹼方法來淨化硬葡聚糖將體積為300L水加熱到60°C，加入0. 599kg的六偏磷酸鈉(對應於在最終的溶液 中，六偏磷酸鹽與polytran N的比例為0.057 1. 0)，以及加入5. 04kg的氫氧化鉀(對 應於在最終的溶液中，氫氧化鉀與polytran N的比例為0. 48 1.0),隨後加入10. 5kg的 polytran N(對應於大約35g/l的最終濃度)。將所形成的混合物保持在60°C，並在SOrpm 攪拌16h。在攪拌完成後，在攪拌下加入7. 38kg的floM(最終濃度為大約28g/l)，隨後連 續攪拌大約15分鐘。然後，使用壓濾器(獲自法國Choquenet of Chauny)過濾該混合物。在過濾後，加入鹽酸(大約15L的6N HCI)將濾液的pH調整到3。然後在約15分 鍾內將該酸性溶液從60°c加熱到110°C，然後在110°C保持 ο分鐘。向所獲得的加熱濾液 中加入1. 5重量份的異丙醇，基於1重量份的濾液，來沉澱硬葡聚糖。使用尼龍過濾器對沉 澱物排水，並且用1重量份的70%異丙醇重新清洗。然後使用Coq螺旋壓榨機來壓榨最終 的沉澱物，並乾燥壓榨過的硬葡聚糖，隨後如對比例所述進行研磨和過篩，來獲得粒度為大 約250 μ m的硬葡聚糖粉末。在上述方法過程中粘度的變化表示在表2中，並且將最終所獲得的硬葡聚糖的產 率、粘度和PH性能表示在表3。該pH、粘度和產率如對比例中所述來確定。表2.在本發明方法過程中粘度的變化。 表2中所示的粘度值證實了在鹼化和過濾步驟之後，polytran N溶液(35g/l)的 粘度下降到小於大約20cP的粘度，隨後粘度升高到高於3000cP。
表3.本發明方法淨化的硬葡聚糖的產率、粘度和pH 從表3中顯然可見，通過本發明所淨化的硬葡聚糖是以與常規淨化的硬葡聚糖大 致相同的產率來獲得的，並且表現出大致相同的粘度(參見表1)。但是，本發明的方法允許 使用濃度高得多的硬葡聚糖溶液，這導致了生產率顯著的提高。更具體的，已經發現能夠沒 有任何問題的對polytran N濃度高到40g/L的溶液進行過濾。在高於40g/L的濃度，過濾 所需的壓力開始升高，這使得過濾更加困難(結果未示出)。
權利要求
一種用於製備淨化的β-(1，3)-D-葡聚糖的方法，該方法包括提供pH高於11.0的β-(1，3)-D-葡聚糖的初始水溶液，過濾該β-(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液來獲得含有β-(1，3)-D-葡聚糖的濾液，用酸將該含有β-(1，3)-D-葡聚糖的濾液的pH調整為低於5.0的pH，來獲得酸性β-(1，3)-D-葡聚糖溶液；將該酸性β-(1，3)-D-葡聚糖溶液加熱到60-160℃的溫度的範圍。
2.權利要求1的方法，其中該β-(1，3)- -葡聚糖完全由β_(1，3)_連接的D-葡萄糖 殘基組成，或者完全由β _ (1，3)-連接的D-葡萄糖殘基的主鏈組成，該主鏈帶有一種或多 種葡萄糖殘基的β_(1，6)_連接的接枝。
3.權利要求2的方法，其中該i3-(l，3)-D-葡聚糖選自硬葡聚糖、裂褶多糖和凝膠多糖。
4.權利要求1-3中任何一項的方法，其中該β_(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液是發酵液 或者未精製的β-(1，3)- -葡聚糖的再生溶液。
5.權利要求1-4中任何一項的方法，其中將該β-(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液的ρΗ調 整到高於12.3。
6.權利要求1-5中任何一項的方法，其中通過加入足量的鹼來調整該初始水溶液的ρΗ。
7.權利要求6的方法，其中用於調整該初始i3-(l，3)-D-葡聚糖溶液的ρΗ的鹼是氫氧 化鉀或者碳酸鉀。
8.權利要求1-7中任何一項的方法，其中使用選自下面的助濾劑來過濾該初始β-(1， 3)-D-葡聚糖溶液珍珠巖、硅藻土和纖維素。
9.權利要求1-7中任何一項的方法，其中將該含有β-(1，3)-D-葡聚糖的濾液的ρΗ用 酸調整到低於3。
10.權利要求1-9中任何一項的方法，其中用來獲得酸性i3-(l，3)-D-葡聚糖溶液的酸是鹽酸。
11.權利要求1-10中任何一項的方法，其中將該酸性β-(1，3)-D-葡聚糖溶液加熱到 85-135°C的溫度範圍。
12.權利要求1-11中任何一項的方法，其中提供β_(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液的步 驟包括將鈣絡合劑加入到該初始溶液中的步驟。
13.權利要求1-12中任何一項的方法，其中提供β_(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液的步 驟包括將該初始溶液加熱到50-80°C溫度範圍的步驟。
全文摘要
這裡提供了一種用於製備淨化的β-(1，3)-D-葡聚糖的方法，其包括步驟提供pH高於11.0的β-(1，3)-D-葡聚糖的初始水溶液，過濾該β-(1，3)-D-葡聚糖初始水溶液來獲得含有β-(1，3)-D-葡聚糖的濾液，用酸將該含有β-(1，3)-D-葡聚糖的濾液的pH調整為低於5.0的pH，來獲得酸性β-(1，3)-D-葡聚糖溶液，和將該酸性β-(1，3)-D-葡聚糖溶液加熱到60-160℃的溫度的範圍。
文檔編號C08B37/00GK101848941SQ200880114327
公開日2010年9月29日 申請日期2008年9月4日 優先權日2007年11月13日
發明者J·P·洛諾伊, J·馬祖瓦耶 申請人:卡吉爾公司