一種注射用益氣復脈製劑中人參總皂苷的含量的測定方法
2023-04-27 12:35:41 1
專利名稱：一種注射用益氣復脈製劑中人參總皂苷的含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥檢測方法，特別涉及一種注射用益氣復脈製劑中人參總皂苷的含量的測定方法。
背景技術：
注射用益氣復脈(凍幹)是由紅參、麥冬、五味子製成的用於靜脈滴注的中藥複方製劑，具有益氣復脈，養陰生津的療效。主要用於冠心病勞累性心絞痛氣陰兩虛證，症見胸痺心痛，心悸氣短、倦怠懶言、頭暈目眩、面色少華、舌淡、少苔或剝苔，脈細弱或結代；冠心病所致慢性左心功能不全II、III級氣陰兩虛證，症見心悸、氣短甚則氣急喘促，胸悶隱痛，時作時止，倦怠乏力，面色蒼白，動則汗出，舌淡、少苔或剝苔，脈細弱或結代。注射用益氣復脈(凍幹)性狀本品為淺黃色的疏鬆塊狀物；有引溼性。取I瓶內容物,加水2 3ml溶解後，為棕紅色澄明液體。用法用量靜脈滴注。每日I次，每次8瓶，用250ml 500ml 5%葡萄糖注射液或生理鹽水稀釋後靜脈滴注。每分鐘約40滴。療程2周。近紅外光譜分析技術簡便、快速，無須提取、稀釋和破壞樣品，且光纖漫反射技術可以直接測定固體樣品，是一種理想的質量控制方法。近年來隨著計算機技術和化學計量學的快速發展，近紅外光譜技術已經廣泛的應用於食品、石油化工、菸草和醫藥等行業。近紅外光譜技術在人參類植物鑑別過程中也得到了應用，有文獻報導該法已經成功地應用於高麗參和紅參的鑑別及人參和紅參Μ的鑑別，並實現了人參中的總皂苷、總糖和水分的定量，樣品處理方便，分析精確度高，值得推廣。現行的質量標準中人參總皂苷的測定方法採用紫外分光光度法，該法前處理複雜耗時，顯色過程中對時間和溫度要求苛刻，易產生誤差，實際應用中存在一定局限。本研究建立了用近紅外漫反射光譜技術測定注射用益氣復脈(凍幹)中人參總皂苷含量的模型，並用於該樣品含量的預測，結果較為滿意。
發明內容
本發明所述的檢測注射用益氣復脈中人參總皂苷含量的方法，包括以下步驟I)對照品的製備分別精密稱取人參總皂苷對照品，加甲醇溶解，製得溶液。2)供試品溶液的製備取注射用益氣復脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水衝洗後，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，製得溶液。3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法測定樣品中人參總皂苷的含量。優選的檢測方法，包括以下步驟
I)對照品的製備分別精密稱取人參總皂苷含量對照品，製得每Iml各含約O. Img的溶液。2)供試品溶液的製備取注射用益氣復脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 μ m),流速約I. OmL · mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以O. 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次衝洗後，繼以用20 %甲醇衝洗後，最後以甲醇洗脫，洗脫液收集於IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過O. 45 μ m
膜，即可。3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法分別測定樣品中人參總皂苷的含量。本發明方法的建立2實驗部分2. I實驗儀器和材料Matrix-F (SFDA版)型傅立葉變換近紅外漫反射光譜儀(德國布魯克公司)，光纖探頭，定量分析軟體為0PUS6. 5 ；HACH DR5000紫外分光光度計(美國哈希公司)；MettlerXS105電子天平；人參皂苷Re對照品(中國藥品生物製品檢定所，批號110754-200906);試劑均為分析純，水為超純水；注射用益氣復脈(凍幹)樣品(天津天士力之驕藥業有限公司提供，科研用樣品，60批,分別編號為I 60)。2.2實驗方法2. 2. I紫外分光光度法測定總皂苷60批樣品，按注射用益氣復脈(凍幹)現行質量標準測量其總皂苷含量。2. 2. 2近紅外光譜的採集60批樣品，用布擦拭乾淨西林瓶底部，分別從西林瓶底部掃描其近紅外光譜。具體掃描參數為測量溫度26°C，溼度30%，開機預熱光譜儀I小時，漫反射檢測，掃描波長範圍為4000 12000CHT1，掃描次數32次，解析度8CHT1，每份樣品掃描6張，取其平均光譜，如圖I所示。3結果與討論3. I總皂苷定量分析模型的建立3. I. I校正集和驗證集樣品的選擇根據其總皂苷的含量測定結果，從收集到的60份樣品中，選取前50批有代表性的樣品做校正集，用於建立校正模型；剩餘10批樣品為驗證集，對模型進行外部檢驗。校正集和驗證集樣品中總皂苷的含量分布範圍見表I。表I校正集和驗證集中總皂苷的含量分布範圍表(mg/瓶)組成樣品數最小值最大值平均值校正集 50 5.3 12.5 7.3
驗證集 10 5.7 6.7 6.13. I. 2光譜預處理和波段的選擇光譜預處理和波段的選擇對近紅外實驗結果有一定的影響，值得注意。一般樣品的原始近紅外光譜中會含有基線漂移、光散射以及儀器噪音等幹擾信號，選擇合適的光譜預處理技術能剔除幹擾信號，提取有用的特徵信息，從而消除儀器不穩、環境變化和樣品不均等因素帶來的影響，提高模型預測的精度和穩定性M。目前的近紅外分析軟體雖然能進行全譜的數據處理，但由於所測的指標成分結構的特殊性，其在近紅外光譜上的信息只會包含在一段特定波長範圍內，全譜處理會帶來冗餘信息，影響預測模型的精度，故在建立模型時選取合理的波段也很重要[9]。運用0PUS6. 5數據分析軟體，分析數據，以模型的決定因子(R2)和內部驗證均方差(RMSECV)為指標，R2越接近於100，RMSECV越小說明模型越好。參考儀器自動優化條件，不斷調節，最終發現以一階導數加多元散射校正預處理技術在4246 4848CHT1及6098 7502cm-1波段範圍內的效果最好。3. I. 3模型的建立運用偏最小二乘法(PLS)將50份校正集樣品的NIR光譜與紫外分光光度法測得的總皂苷值進行回歸關聯，建立總皂苷校正模型，圖2為總皂苷預測值和測定值的相關圖，可以看出樣品點比較均勻的分布在回歸線兩側，採用內部交叉驗證，得R2為90. 04，RMSECV為O. 614，最佳回歸因子數(Rank)為9。校正集RMSECV與Rank之間的相關圖如圖3表示。3.2總皂苷定量分析模型的檢驗將10份驗證集樣品的近紅外光譜輸入校正模型，預測其總皂苷的含量，並與紫外分光光度法測定值進行比較。計算得模型預測均方差(RMSEP)為O. 517，10份樣品的預測值和真實值之間RSD平均值為4. I %，。3. 3分析與討論3.3.1因凍乾粉針樣品是藥液直接放在西林瓶中減壓凍幹成形的，西林瓶中的內容物在顆粒的緊實度和厚度上有良好的一致性，且樣品的含水量低，僅為約O. 4%，打開測定易吸潮，故選擇用光纖探頭直接從西林瓶底部進行掃描。同時在掃描時以空西林瓶背景，每份樣品取6張光譜的平均值，用以消除西林瓶、樣品顆粒度、厚度等不一致引入的幹擾。3. 3. 2作為一種非侵入性的二級分析方法，近紅外技術分析樣品時的預測準確度主要取決於建立模型時所採用的測定方法的準確度，還與儀器，測量環境、建模樣品的多少及代表性有關。因為注射用益氣復脈現行測總皂苷的紫外分光光度法存在一定的誤差，且建模樣品濃度分布不均，導致了本研究中近紅外預測模型的決定因子欠佳，10批樣品的模型預測值和真值之間的不能完全重合。有關總皂苷測定方法的優化，將在以後不斷積累樣品，做進一步研究。4 結論本研究表明近紅外漫反射光譜法在4246 4848CHT1及6098 7502CHT1波段範圍、內，原始光譜經一階導數和多元散射校正技術預處理，結合偏最小二乘法回歸，可實現對注射用益氣復脈(凍幹)中人參總皂苷的快速定量分析，適合於生產上大量樣品的快速測定。本發明效果好，操作簡單，易於推廣。
圖160批樣品的近紅外光譜2校正集NIR預測值與真值之間的相關3校正集RMSECV與Rank之間的相關圖
具體實施例方式
以下通過實施例，進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。實施例I包括以下步驟I)對照品的製備分別精密稱取人參總皂苷含量對照品，製得每Iml各含約O. Img的溶液。2)供試品溶液的製備取注射用益氣復脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 μ m),流速約I. OmL · mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以O. 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次衝洗後，繼以用20 %甲醇衝洗後，最後以甲醇洗脫，洗脫液收集於IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過O. 45 μ m
膜，即可。3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法分別測定樣品中人參總皂苷的含量。
權利要求
1.一種注射用益氣復脈製劑中人參總皂苷的含量的測定方法，其特徵在於，包括以下步驟 1)對照品的製備 分別精密稱取人參總皂苷對照品，加甲醇溶解，製得溶液。
2)供試品溶液的製備 取注射用益氣復脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水衝洗後，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，製得溶液。
3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法測定樣品中人參總皂苷的含量。
2.根據權利要求I的檢測方法，其特徵在於，包括以下步驟 1)對照品的製備 分別精密稱取人參總皂苷含量對照品，製得每Iml各含約O. Img的溶液。
2)供試品溶液的製備 取注射用益氣復脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 μ m)，流速約I. OmL · mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以O. 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次衝洗後，繼以用20 %甲醇衝洗後，最後以甲醇洗脫，洗脫液收集於IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過O. 45 μ m膜，即可。
3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法分別測定樣品中人參總皂苷的含量。
3.根據權利要求I的測定方法，其特徵在於，該方法精密度良好。
4.根據權利要求I的測定方法，其特徵在於，供試品溶液在24h內穩定。
5.根據權利要求I的測定方法，其特徵在於，該方法重複性良好。
6.根據權利要求I的測定方法，其特徵在於，該方法回收試驗良好。
7.根據權利要求I的測定方法，其特徵在於，近紅外漫反射光譜在4246 4848CHT1及6098 7502CHT1波段範圍內。
全文摘要
本發明涉及一種注射用益氣復脈製劑中人參總皂苷的含量的測定方法，該方法包括以下步驟1)對照品的製備分別精密稱取人參總皂苷對照品，加甲醇溶解，製得溶液，2)供試品溶液的製備取注射用益氣復脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水衝洗後，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，製得溶液，3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液，紫外分光光度法測定樣品中人參總皂苷的含量。
文檔編號G01N21/33GK102759514SQ20111010904
公開日2012年10月31日 申請日期2011年4月28日 優先權日2011年4月28日
發明者葉正良, 周大錚, 李德坤, 韓曉萍 申請人:天津天士力之驕藥業有限公司