中藥有效成分漁用抗菌劑的製作方法
2023-04-27 18:36:01 2
專利名稱：中藥有效成分漁用抗菌劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及獸藥技術領域，特別是涉及一種中藥有效成分漁用抗菌劑。
背景技術：
目前控制水產動物細菌性疾病的主要手段是使用抗菌藥物，而使用化學抗菌藥物、抗生素藥物普遍存在易引發病原菌耐藥性、導致養殖魚類藥物殘留超標等問題，因此國內外都在尋找更加安全有效的代用品。我國有使用中藥防治水產動物疾病的傳統，中藥因具有資源豐富，殘留少，副作用小等優勢，符合無公害水產養殖要求等普遍認可的特點，已經成為人類研究防治水產動物疾病藥物的主要材料。但從國內外有關防治水產動物細菌性疾病的報導中可見，相關試驗大多數停留在中藥單方和驗方的抑菌和應用上，缺少對中藥配方及有效成分配方的研究。由於從中藥中提取有效成分(化合物單體)難度很大，找到有效部位(大類物質)十分困難，使現有漁用中藥在有效成分的化學物質基礎描述上存在很大的模糊性，技術含量較低。只有使用先進的技術，現代分離手段，才能將複方中藥分離為各個有效部分，並從中提取分離到有效成分。從已有中藥中提取分析有效成分，從而採用人工方法合成，可以大幅度減少藥物篩選的人力和財力，也能極方便地運用於生產中。到目前為止，尚未見有關中藥有效成分組成的漁用抗菌劑的研究報導。
發明內容
本發明的目的在於，克服現有抗菌藥物存在的易引發病原菌耐藥性、導致養殖魚類藥物殘留超標、不符合無公害水產養殖要求等問題，提供一種中藥有效成分漁用抗菌劑，其組分全部是純中藥有效成分，同時具有廣譜抗菌作用。
本發明的中藥有效成分漁用抗菌劑為水劑，其組分及質量百分含量分別為沒食子酸10～12％、黃酮類4～5％、蒽醌類1～2％，其餘為水；其中，黃酮類是黃芩苷或槲皮素或二者任意比例的混合物，蒽醌類是1，8-二羥基蒽醌或大黃素或蘆薈大黃素或三者任意比例的混合物。
本發明的中藥有效成分漁用抗菌劑的製備方法如下方法一因該中藥有效成分漁用抗菌劑的各組分沒食子酸、黃芩苷、槲皮素、1，8-二羥基蒽醌、大黃素以及蘆薈大黃素等均可從市場購買，故最簡單的方法是直接購買商用中藥有效成分各單體，按上述配方混合，即製成抗菌劑。
方法二採用乙醇加熱連續回流提取等方法，從富含沒食子酸、黃酮類、蒽醌類的中藥中提取這些有效成分。分別從斑地錦中提取沒食子酸等有效成分、從苦參中提取黃酮類等有效成分、從大黃中提取蒽醌類等有效成分。取各單方中藥分別提取其有效成分，按W∶V＝1∶8的比例加入濃度為70％的乙醇，用鹽酸調節pH值為2，76℃下用索氏提取儀回流提取90分鐘，收取液體，殘渣再重複提取兩次，合併抽提液，揮發至無醇味且乾燥成粉。將獲得的提取物沒食子酸、黃酮類、蒽醌類乾粉及水按上述比例混合，即製成抗菌劑。因各成分提取方法相同，各中藥單方也可按相應比例合併提取。按照斑地錦∶苦參∶大黃＝5∶3∶1的質量比例混合提取其有效成分，取混合物2克，可製成100ml抗菌劑。該方法成本較低。用高效液相色譜法提取斑地錦中沒食子酸得率可達到29.8％。
方法二所提中藥有效成分的鑑定方法如下抗菌劑有效成分的薄層色譜鑑定用矽膠GF2540和0.5％的羧甲基纖維素鈉制板，苯∶乙醇∶甲酸(7∶3∶1)為展開劑，氨燻-三氯化鐵日光下顯色，測量抗菌劑各成分點的比移值Rf。按Rf值大小排列，抗菌劑有效成分分別為沒食子酸、槲皮素、黃芩苷、蘆薈大黃素、大黃素和1-8二羥基蒽醌。
方法二所提中藥有效成分的分離方法如下柱層析分離各有效成分用柱層析矽膠幹法裝柱，苯∶乙醇∶甲酸(7∶3∶1)為洗脫劑，用自動收集儀收集分離樣品，每間隔一分鐘收集一個樣品，且用薄層分析(TLC)跟蹤檢測，同時合併相同斑點的洗脫液。柱層析分離共收集到抗菌劑77個樣品，對比可知按洗脫順序樣品1～11是1，8二-羥基蒽醌、12～15是大黃素、17～21是蘆薈大黃素、24～30是黃芩苷、33～47是槲皮素、49～77是沒食子酸。
1，8-二羥基蒽醌 大黃 素蘆薈大黃素 黃芩苷槲皮素 沒食子酸該抗菌劑的使用方法如下使用時，抗菌劑拌餌劑量按0.25％～0.5％的比例添加在飼料中，即100ml抗菌劑混合在400～200g飼料中；口服和注射劑量為0.5～2.0ml/kg·d，即按每天每公斤魚體重給予的抗菌劑劑量為0.5～2.0ml。
抗菌劑各有效成分的抑菌活性順序為沒食子酸＞蒽醌(包含1-8二羥基蒽醌、大黃素、蘆薈大黃素)＞黃芩苷＞槲皮素。聯合用藥研究表明，沒食子酸和蒽醌具有協同作用，沒食子酸和黃芩苷、沒食子酸和槲皮素、蒽醌和黃芩苷三組同屬於累加作用。
本發明具有以下優點(1)抗菌劑具有廣譜抗菌作用，對遲鈍愛德華氏菌、溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、魯克氏耶爾森氏菌、柱狀屈撓桿菌等水產動物常見致病菌的體外抑菌效果明顯，抑菌環直徑可達到2.0～4.0之間。
(2)抗菌劑能有效地防治水產動物細菌性疾病，藥效試驗表明對溫和氣單胞菌等常見致病菌的防治率在80％～95％之間，總體防治率可達到85％以上。酸性磷酸酶和鹼性磷酸酶活性測定顯示抗菌劑可以明顯增強魚體的非特異性免疫能力；谷丙轉氨酶、穀草轉氨酶、膽鹼酯酶、肌酐和尿酸等生化指標測定顯示抗菌劑對患病魚受損的肝臟、腎功能和魚機體均有明顯的改善作用。
(3)抗菌劑安全無毒採用急性毒性試驗進行抗菌劑安全性測定，急性毒性的分級標準LD50＞10mg/kg為無毒。試驗抗菌劑給藥量達到10000mg(生藥)/kg時魚體依然未出現中毒，表明抗菌劑對魚體屬於實際無毒級。
具體實施例方式
實施例1購買商用中藥有效成分各單體沒食子酸、黃酮類(黃芩苷、槲皮素)、蒽醌類(1，8-二羥基蒽醌、大黃素或蘆薈大黃素)，按沒食子酸10％、黃酮類(黃芩苷∶槲皮素為1∶1)4％、蒽醌類(1，8-二羥基蒽醌∶大黃素∶蘆薈大黃素為1∶1∶1)1％，其餘為水的比例混合，即製成抗菌劑。抑菌實驗表明，對柱狀屈撓杆的抑菌環直徑達2.0，藥效試驗表明對柱狀屈撓桿菌等常見致病菌的防治率達80％。
實施例2購買商用中藥有效成分各單體；沒食子酸、黃酮類(黃芩苷、槲皮素)、蒽醌類(1，8-二羥基蒽醌、大黃素或蘆薈大黃素)，按沒食子酸11％、黃芩苷4.5％、1，8-二羥基蒽醌1.5％，其餘為水的比例混合，即製成抗菌劑。抑菌實驗表明，對溫和氣單胞菌的抑菌環直徑達到3.0，藥效試驗表明對溫和氣單胞菌等常見致病菌的防治率達90％。
實施例3購買商用中藥有效成分各單體；沒食子酸、黃酮類(黃芩苷、槲皮素)、蒽醌類(1，8-二羥基蒽醌、大黃素或蘆薈大黃素)，按沒食子酸12％、槲皮素5％、大黃素2％，其餘為水的比例混合，即製成抗菌劑。抑菌實驗表明，對遲鈍愛德華氏菌的抑菌環直徑達到4.0，藥效試驗表明對遲鈍愛德華氏菌等常見致病菌的防治率達95％。
實施例4取各單方中藥斑地錦、苦參、大黃，分別提取其有效成分，按W∶V＝1∶8的比例加入濃度為70％的乙醇，用鹽酸調節pH值為2，76℃下用索氏提取儀回流提取90分鐘，收取液體，殘渣再重複提取兩次，合併抽提液，揮發至無醇味且乾燥成粉。將獲得的提取物按沒食子酸10％、黃酮類5％、蒽醌類1％，其餘為水的比例混合，即製成抗菌劑。抑菌實驗表明，對魯克耶爾森氏菌的抑菌環直徑達到2.0，藥效試驗表明對魯克耶爾森氏菌等常見致病菌的防治率達80％。
實施例5取各單方中藥斑地錦、苦參、大黃，分別提取其有效成分，按W∶V＝1∶8的比例加入濃度為70％的乙醇，用鹽酸調節pH值為2，76℃下用索氏提取儀回流提取90分鐘，收取液體，殘渣再重複提取兩次，合併抽提液，揮發至無醇味且乾燥成粉。將獲得的提取物按沒食子酸12％、黃酮類5％、蒽醌類2％，其餘為水的比例混合，即製成抗菌劑。抑菌實驗表明，對殺鮭氣單胞菌的抑菌環直徑達到4.0，藥效試驗表明對殺鮭氣單胞菌等常見致病菌的防治率達95％。
實施例6取各單方中藥斑地錦、苦參、大黃，按照斑地錦∶苦參∶大黃＝5∶3∶1的比例混合提取其有效成分。取混合物2克，按W∶V＝1∶8的比例加入濃度為70％的乙醇，用鹽酸調節pH值為2，76℃下用索氏提取儀回流提取90分鐘，收取液體，殘渣再重複提取兩次，合併抽提液，加水至100ml，即製成抗菌劑。經測定，沒食子酸、黃酮類、蒽醌類的含量分別為10.47％、4.2％、1.51％。抑菌實驗表明，對嗜水氣單胞菌的抑菌環直徑達到3.5，藥效試驗表明對嗜水氣單胞菌等常見致病菌的防治率達92％。
權利要求
1.一種中藥有效成分漁用抗菌劑，其特徵在於，抗菌劑為水劑，其組分及質量百分含量分別為沒食子酸10～12％、黃酮類4～5％、蒽醌類1～2％，其餘為水；其中，黃酮類是黃芩苷或槲皮素或二者任意比例的混合物，蒽醌類是1，8-二羥基蒽醌或大黃素或蘆薈大黃素或三者任意比例的混合物。
全文摘要
一種中藥有效成分漁用抗菌劑，其組分及質量百分含量分別為沒食子酸10～12％、黃酮類4～5％、蒽醌類1～2％，其餘為水；該抗菌劑能克服現有抗菌藥物存在的易引發病原菌耐藥性、導致養殖魚類藥物殘留超標、不符合無公害水產養殖要求等問題，具有廣譜抗菌作用，能有效地防治水產動物細菌性疾病，藥效試驗表明對溫和氣單胞菌等常見致病菌的防治率在80％～95％之間，總體防治率可達到85％以上，抗菌劑安全無毒。
文檔編號A61P31/00GK1939297SQ20061009516
公開日2007年4月4日 申請日期2006年9月27日 優先權日2006年9月27日
發明者鄭曙明, 吳青, 黃建軍 申請人:西南大學