戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒及其製備方法
2023-05-17 02:29:41 2
專利名稱：戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒及其製備方法，屬於生物技術領域。
背景技術：
戊型肝炎過去稱為腸道傳播的非甲非B型肝炎。戊型肝炎病毒(HEV)主要侵犯肝 髒，在肝細胞中複製，本病毒通過對肝細胞的直接損傷和免疫病理作用，引起肝細胞的炎症 或壞死，臨床上表現為急性病毒性肝炎。戊型肝炎病毒主要經糞一口途徑傳播。人感染戊 型肝炎病毒後，可表現為臨床型和亞臨床型感染。該兩類病人均可隨糞便排出戊型肝炎病 毒，從而汙染水源、食物和周圍環境而發生傳播。戊型肝炎病毒的檢測可作為切斷戊型肝炎 傳播途徑為主的綜合性預防措施，防止疾病在人群中傳播。 目前戊型肝炎病毒檢測方法主要有免疫電子顯微鏡，免疫螢光法，酶聯免疫吸附 試劑，蛋白吸印試驗，逆轉錄聚合酶鏈反應法(RT-PCR)。 HEV感染的實驗室診斷方法主要有血清學檢查及分子生物學技術，常用的方法有 補體結合試驗和酶聯免疫法等，補體結合試驗參與反應的成分多，影響因素複雜，操作步驟 複雜並且要求十分嚴格，容易出現錯誤；酶聯免疫法操作繁瑣、重複性差、所需時間長、價格 昂貴，需專門人員操作實驗，在一定程度上限制了其應用。
發明內容
本發明要解決的問題是針對現有技術的不足，提供一種適用於臨床輔助診斷和鑑 別的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒及其製備方法，該試劑盒具有結構簡單、使用便捷、檢測 速度快的優點。 為解決以上問題，本發明的技術方案如下戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，其特徵 在於所述試劑盒包括 檢測盒，包括檢測盒盒體和盒蓋，盒蓋的內側設有硝酸纖維素膜，與硝酸纖維素膜 位置對應的盒蓋上設有反應孔，檢測盒盒體內設有吸水墊，硝酸纖維素膜上設有有檢測點 和質控點； 金標工作液瓶，盛有金標工作液，該金標工作液由金標濃縮液與稀釋液混合而成； 和 洗滌液瓶，盛有洗滌液，該洗滌液包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白 和鹽酸； 其中，檢測點包被有HEV抗原，質控點包被有羊抗鼠抗體。
作為上述技術方案的進一步改進 所述金標濃縮液與稀釋液的混合體積比為1 : 15-30。
所述金標濃縮液與稀釋液的混合體積比為1 : 20。
所述製備方法包括檢測盒、金標工作液和洗滌液的製備；
4
其中，金標工作液的製備包括以下步驟
a、製備金標濃縮液 取1_4%的氯金酸水溶液lOOml，加熱至沸騰，加入O. 5_1%檸檬酸三鈉溶液 0. 8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃一藍色一紫色一完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分 鍾，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100 y 1，得到混合溶液；
然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；
b、製備稀釋液 將121. 1-363. 3mg的三羥甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化鈉和O. 5-2. Omg的牛血清 白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後 用鹽酸將其pH調節至7. 4，得到稀釋液，在2 『C下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按比例混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶 內。 所述洗滌液的製備包括以下步驟 將121. 1-242. 2mg的三羥甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化鈉和O. l-lmg的牛血清白 蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽 酸將其PH調節為7. 4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2 『C下保存。
所述檢測盒的製備包括以下步驟 首先在硝酸纖維素膜的檢測點包被HEV抗原，在質控點包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋、硝酸纖維素膜、吸水墊和檢測盒盒體按照從上而下的順序組裝並扣
緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40 %的環境下乾燥2小時；
最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋內並封口 。 步驟b中，三羥甲基氨基甲烷的用量為242. 2mg，氯化鈉的用量為0. 9mg，牛血清白 蛋白的用量為lmg。 所述三羥甲基氨基甲烷的用量為121. lmg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白 的用量為0. 5mg。 本發明採用以上技術方案，與現有技術相比，具有以下優點由檢測盒、金標工作 液瓶和洗滌液瓶組成，結構簡單，只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速 診斷戊型肝炎病毒特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，臨床檢驗不需任何儀器，避免 了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明
附圖1為本發明實施例中試劑盒的結構示意圖；
附圖2為本發明實施例中檢測盒的結構示意圖；
附圖3為附圖2中A-A向的剖視圖。
圖中， 1-金標工作液瓶，2-洗滌液瓶，3-盒蓋，4-硝酸纖維素膜，5-吸水墊，6_檢測盒盒
5體，7-檢測點，8-質控點，9-反應孔，10-鋁箔袋。 具體實施例 實施例l，如圖1所示，戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶 1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。 如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維 素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊 5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有HEV抗原，質控點8包被有 羊抗鼠抗體。 金標工作液瓶l內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋 所獲得的。 洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋
白和鹽酸配製獲得的。 該試劑盒通過以下步驟製備( — )檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被HEV抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體；
然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組 裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40 %的環境下乾燥2小時；
最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口 ；
( 二 )金標工作液的製備
a、製備金標濃縮液 取1%的氯金酸水溶液lOOml，加熱至沸騰，加入O. 5X檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅 速混勻，待溶液顏色由淡黃一藍色一紫色一完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加 熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100 y 1，得到混合溶液；
然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；
b、製備稀釋液 將121. lmg的三羥甲基氨基甲烷、0. lmg的氯化鈉和0. 5mg的牛血清白蛋白置於 容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其 pH調節至7. 4，得到稀釋液，在2 『C下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按15 : 1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金
標工作液瓶1內；(三)製備洗滌液 將121. lmg的三羥甲基氨基甲烷、0. lmg的氯化鈉和O. lmg的牛血清白蛋白置於容 量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH 調節為7. 4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2 『C下保存；(四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法
6
1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢測 a、取出試劑盒，室溫平衡20 30分鐘； b、滴加洗滌液1滴於硝酸纖維膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、加待測150 ii 1血清於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。 3、結果判斷 陽性若被測標本中含有戊型肝炎病毒抗體，標本中的HEV特異性抗體便與硝酸 纖維素膜4上的固相HEV抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加 上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅 色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點 8形成紅色反應標記，檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有戊型肝炎病毒 抗體，為陽性結果。 陰性若被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆
抗體與包被的HEV抗原無法形成間接抗原_抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記，同
時，金標單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記，
檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，為陰性結果。 無效反應後，若質控點不顯色，表明操作失誤或試劑失效。 使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
標本^\測試標本(例)測試結果(例)符合率(％)
陽性11310895.6
陰性88788099.2 從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測 盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷戊型肝炎病毒特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度 快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕 了操作人員的勞動強度。 實施例2，如圖1所示，戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶 1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。 如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維 素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊 5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有HEV抗原，質控點8包被有 羊抗鼠抗體。 金標工作液瓶l內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋所獲得的。 洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋
白和鹽酸配製獲得的。
該試劑盒通過以下步驟製備( — )檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被HEV抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體；
然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組 裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40 %的環境下乾燥2小時；
最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口 ； [OOSS] ( 二 )金標工作液的製備
a、製備金標濃縮液 取2%的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0. 7%檸檬酸三鈉溶液0. 8ml，迅 速混勻，待溶液顏色由淡黃一藍色一紫色一完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加 熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100 y 1，得到混合溶液；
然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；
b、製備稀釋液 將363. 3mg的三羥甲基氨基甲烷、0. 5mg的氯化鈉和1. 5mg的牛血清白蛋白置於 容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其 pH調節至7. 4，得到稀釋液，在2 『C下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按20 : 1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金
標工作液瓶1內；(三)製備洗滌液 將242. 2mg的三羥甲基氨基甲烷、0. 5mg的氯化鈉和0. 7mg的牛血清白蛋白置於容 量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH 調節為7. 4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2 『C下保存；(四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法
1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢領lj a、取出試劑盒，室溫平衡20 30分鐘； b、滴加洗滌液1滴於硝酸纖維膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、加待測150 ii 1血清於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。 3、結果判斷 陽性若被測標本中含有戊型肝炎病毒抗體，標本中的HEV特異性抗體便與硝酸
8他無關物質則被濾過，再加 上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅 色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點 8形成紅色反應標記，檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有戊型肝炎病毒 抗體，為陽性結果。 陰性若被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆
抗體與包被的HEV抗原無法形成間接抗原_抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記，同
時，金標單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記，
檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，為陰性結果。 無效反應後，若質控點不顯色，表明操作失誤或試劑失效。 使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
\^果 標本^\測試標本(例)測試結果(例)符合率(％)
陽性11310996.5
陰性88787098. 1 從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測 盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷戊型肝炎病毒特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度 快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕 了操作人員的勞動強度。 實施例3，如圖1所示，戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶 1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。 如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維 素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊 5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有HEV抗原，質控點8包被有 羊抗鼠抗體。 金標工作液瓶1內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋 所獲得的。 洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋
白和鹽酸配製獲得的。
該試劑盒通過以下步驟製備( — )檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被HEV抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體；
然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組 裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40%的環境下乾燥2小時；
最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口 ；
(二)金標工作液的製備
a、製備金標濃縮液 取3%的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0. 8%檸檬酸三鈉溶液0. 8ml，迅 速混勻，待溶液顏色由淡黃一藍色一紫色一完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加 熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100 y 1，得到混合溶液；
然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；
b、製備稀釋液 將242. 2mg的三羥甲基氨基甲烷、0. 9mg的氯化鈉和1. Omg的牛血清白蛋白置於 容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其 pH調節至7. 4，得到稀釋液，在2 『C下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按25 : 1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金
標工作液瓶1內；(三)製備洗滌液 將121. lmg的三羥甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化鈉和0.5mg的牛血清白蛋白置於容 量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH 調節為7. 4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2 『C下保存；(四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法
1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢領[J a、取出試劑盒，室溫平衡20 30分鐘； b、滴加洗滌液1滴於硝酸纖維膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、加待測150 ii 1血清於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。 3、結果判斷 陽性若被測標本中含有戊型肝炎病毒抗體，標本中的HEV特異性抗體便與硝酸 纖維素膜4上的固相HEV抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加 上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅 色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點 8形成紅色反應標記，檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有戊型肝炎病毒 抗體，為陽性結果。 陰性若被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆 抗體與包被的HEV抗原無法形成間接抗原_抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記，同 時，金標單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記， 檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，為陰性結果。
無效反應後，若質控點不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
10
使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
\^果 標本^\測試標本(例)測試結果(例)符合率(％)
陽性11311198. 2
陰性88788599.8 從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測 盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷戊型肝炎病毒特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度 快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕 了操作人員的勞動強度。 實施例4，如圖1所示，戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶 1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。 如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維 素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊 5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有HEV抗原，質控點8包被有 羊抗鼠抗體。 金標工作液瓶l內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋 所獲得的。 洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋
白和鹽酸配製獲得的。 該試劑盒通過以下步驟製備( — )檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被HEV抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體；
然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組 裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40%的環境下乾燥2小時；
最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口 ；
(二)金標工作液的製備
a、製備金標濃縮液 取4%的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入1. 0%檸檬酸三鈉溶液0. 8ml，迅 速混勻，待溶液顏色由淡黃一藍色一紫色一完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加 熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100 y 1，得到混合溶液；
然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；
b、製備稀釋液 將242. 2mg的三羥甲基氨基甲烷、lmg的氯化鈉和2mg的牛血清白蛋白置於容量瓶 內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7. 4，得到稀釋液，在2 『C下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按30 : 1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金
標工作液瓶1內；(三)製備洗滌液 將121. lmg的三羥甲基氨基甲烷、lmg的氯化鈉和lmg的牛血清白蛋白置於容量瓶 內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節 為7. 4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2 『C下保存；(四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法
1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢測 a、取出試劑盒，室溫平衡20 30分鐘； b、滴加洗滌液1滴於硝酸纖維膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、加待測150 ii 1血清於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。 3、結果判斷 陽性若被測標本中含有戊型肝炎病毒抗體，標本中的HEV特異性抗體便與硝酸 纖維素膜4上的固相HEV抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加 上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅 色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點 8形成紅色反應標記，檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有戊型肝炎病毒 抗體，為陽性結果。 陰性若被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆
抗體與包被的HEV抗原無法形成間接抗原_抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記，同
時，金標單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記，
檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有戊型肝炎病毒抗體，為陰性結果。 無效反應後，若質控點不顯色，表明操作失誤或試劑失效。 使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
標本測試表本(例)測試結果(例)符合率(％)
陽性11311097.3
陰性88788699,9 從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測 盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷戊型肝炎病毒特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度
12快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕 了操作人員的勞動強度。
權利要求
戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，其特徵在於所述試劑盒包括檢測盒，包括檢測盒盒體(6)和盒蓋(3)，盒蓋(3)的內側設有硝酸纖維素膜(4)，與硝酸纖維素膜(4)位置對應的盒蓋(3)上設有反應孔(9)，檢測盒盒體(6)內設有吸水墊(5)，硝酸纖維素膜(4)上設有有檢測點(7)和質控點(8)；金標工作液瓶(1)，盛有金標工作液，該金標工作液由金標濃縮液與稀釋液混合而成；和洗滌液瓶(2)，盛有洗滌液，該洗滌液包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸；其中，檢測點(7)包被有HEV抗原，質控點(8)包被有羊抗鼠抗體。
2. 如權利要求1所述的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒其特徵在於所述金標濃縮液與 稀釋液的混合體積比為l : 15-30。
3. 如權利要求2所述的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒其特徵在於所述金標濃縮液與 稀釋液的混合體積比為1 : 20。
4. 戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述製備方法包括檢測 盒、金標工作液和洗滌液的製備；其中，金標工作液的製備包括以下步驟a、 製備金標濃縮液取1_4%的氯金酸水溶液lOOml，加熱至沸騰，加入O. 5-1%檸檬酸三鈉溶液0. 8ml，迅 速混勻，待溶液顏色由淡黃一藍色一紫色一完全透明的酒紅色，繼續煮沸IO分鐘，停止加 熱，冷卻至室溫；向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100iU，得到混合溶液； 然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；b、 製備稀釋液將121. 1-363. 3mg的三羥甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化鈉和O. 5_2. Omg的牛血清白蛋 白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽 酸將其pH調節至7. 4，得到稀釋液，在2 『C下保存，備用；c、 將稀釋液與金標濃縮液按比例混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶(1)內。
5. 如權利要求4所述的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述 洗滌液的製備包括以下步驟將121. 1-242. 2mg的三羥甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化鈉和O. l-lmg的牛血清白蛋白 置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將 其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶(2)內，置於2 『C下保存。
6. 如權利要求4所述的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述 檢測盒的製備包括以下步驟首先在硝酸纖維素膜的檢測點(7)包被HEV抗原，在質控點(8)包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋(3)、硝酸纖維素膜(4)、吸水墊(5)和檢測盒盒體(6)按照從上而下的順 序組裝並扣緊，組裝成檢測盒；將檢測盒放置在溼度小於40%的環境下乾燥2小時；最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋內並封口 。
7. 如權利要求4所述的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於步驟b中，三羥甲基氨基甲烷的用量為242. 2mg，氯化鈉的用量為0. 9mg，牛血清白蛋白的用量為 lmg。
8. 如權利要求5所述的戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所 述三羥甲基氨基甲烷的用量為121. lmg，氯化鈉的用量為O. 9mg，牛血清白蛋白的用量為 0. 5mg。
全文摘要
本發明涉及一種戊型肝炎病毒抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、盛有金標工作液的金標工作液瓶和盛有洗滌液的洗滌液瓶，檢測盒包括檢測盒盒體和盒蓋，盒蓋的內側設有硝酸纖維素膜，與硝酸纖維素膜位置對應的盒蓋上設有反應孔，檢測盒盒體內設有吸水墊，硝酸纖維素膜上設有有檢測點和質控點，檢測點包被有HEV抗原，質控點包被有羊抗鼠抗體，只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷戊型肝炎病毒特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
文檔編號G01N33/576GK101738475SQ201010011330
公開日2010年6月16日 申請日期2010年1月11日 優先權日2010年1月11日
發明者孫明強, 楊致亭, 王好玉, 範永熙, 陶德友 申請人:楊致亭