一種甜葉菊中的新黃酮苷化合物及其分離鑑定方法
2023-05-17 17:45:26
專利名稱：一種甜葉菊中的新黃酮苷化合物及其分離鑑定方法
技術領域：
本發明涉及一種甜葉菊中的新黃酮苷化合物及其分離鑑定方法。
背景技術：
甜葉菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)為菊科甜菊屬多年生草本植物。主要含有甜菊苷類和黃酮類成分，其中黃酮類成分具有良好的降糖、降壓、降脂等生物活性。經文獻檢索，從甜葉菊中分離得到的化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]為一新黃酮苷類化合物。
發明內容
本發明的目的在於提供一種甜葉菊中新黃酮苷類化合物；本發明的另一個目的在於提供一種新化合物的分離方法；本發明的第三個目的在於提供一種新化合物的結構鑑定方法。
本發明是通過如下技術方案實現的 一種甜葉菊中的新黃酮苷化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]，其化學結構式如下
本發明化合物還可以製備成含有上述結構式的化合物及其鹽或衍生物。其中該化合物的鹽或衍生物可以是但不限於如下幾種 A.該化合物黃酮母核上的-OH、咖啡醯基上的-OH可分別或同時甲基化，生成甲基化衍生物，示例結構式為
B.該化合物及A所述衍生物黃酮母核上的-OH、咖啡醯基上的-OH分別或同時與Na+、K+等金屬離子結合生成金屬鹽衍生物，示例衍生物結構式為
C.該化合物及A、B所述衍生物上鄰二酚羥基、黃酮母核的5-羥基、4-羰基可分別或同時與金屬離子Al3+、Sr2+、Mg2+、Zr2+等結合生成金屬絡合物，示例絡合物結構式為
D.該化合物及A、B、C所述衍生物咖啡醯基上的反式烯氫可轉化為順式衍生物，示例衍生物結構式為
E.該化合物及A、B、C、D所述衍生物咖啡醯基上的烯氫可發生加成反應生成一系列衍生物，示例衍生物結構式為
F.該化合物及A、B、C、D、E所述衍生物可發生分子內聚合反應，示例衍生物結構式為
H.該化合物及A、B、C、D、E所述衍生物可發生分子內脫水反應，示例衍生物結構式為
本發明新化合物的分離方法為 選用市售的甜葉菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)，為菊科甜菊屬多年生草本植物的乾燥葉片，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或它們的至少兩種混合物為溶劑提取，回收溶劑後將提取物通過選自溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、聚醯胺層析法、矽膠柱層析法、反相柱層析法或Toyopearl HW-40，Pharmadex LH-20柱層析法，重結晶法的一種或者多種方式分離，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、環己烷等或它們的至少兩種混合物作為洗脫劑洗脫，採用薄層層析法檢識，合併洗脫液，乾燥後得新黃酮苷化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]。
根據本發明，在對原料進行提取時，可在室溫或加熱狀態下，選用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或它們的至少兩種混合物為溶劑，採用煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取，提取次數可以是一次，也可以是多次。其中，優選10～95％乙醇水溶液加熱回流提取1～3次，每次提取0.5～2h。
根據本發明，在採用大孔樹脂吸附法進行分離時，樹脂可選用為D101型大孔吸附樹脂、D3526型大孔吸附樹脂、HPD400型大孔吸附樹脂、AB-8型大孔吸附樹脂、S-8型大孔吸附樹脂、X-5型大孔吸附樹脂以及其它型號聚苯乙烯型大孔樹脂，洗脫溶劑用水、乙醇、甲醇、丙酮中的一種或多種，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。其中大孔樹脂吸附法優選為將提取液或提取物用水分散溶解，上清液或過濾液通過大孔吸附樹脂，用水或5～20％的丙酮、乙醇、甲醇或丙醇的水溶液清洗除去雜質，用量為1～7倍樹脂體積，再用20～90％的丙酮、乙醇、甲醇或丙醇的水溶液洗脫，用量為2～8倍樹脂體積，收集洗脫液，回收溶劑，即得含有甜葉菊新黃酮苷的部位。
在本發明所用的聚醯胺層析法中，可選用柱層析或靜態吸附過濾法，洗脫劑選自水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、乙酸乙酯等一種或多種，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。優選為將吸附有樣品(含有槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷])的聚醯胺上樣於聚醯胺層析柱，用乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇、甲醇梯度洗脫和氯仿、氯仿-甲醇、甲醇梯度洗脫分步收集，根據檢識情況，合併部分流份，回收溶劑，得甜葉菊中新黃酮苷化合物。
在本發明所用的矽膠柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，所用填料為40～400目矽膠，用石油醚、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁酮、二氯甲烷、水等或它們的至少兩種混合物溶劑，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
在本發明所用的反相柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，所用填料為十八烷基鍵合相或八烷基鍵合相，洗脫溶劑為含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮、含水丙醇一種或幾種，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
在本發明所用Toyopearl HW-40的柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，洗脫溶劑選自含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮、含水丙醇一種或幾種，有機相濃度為0～100％，分步收集，根據檢測情況，合併部分流份，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
在本發明所用的Pharmadex LH-20柱層析中，可選用常壓或加壓柱層析，洗脫溶劑選自含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮、含水丙醇一種或幾種，有機相濃度為5～100％，分步收集，根據檢測情況，合併部分流份，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
在本發明所用的重結晶法中，重結晶溶劑選自含水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中一種、幾種或兩種以上的混合物溶劑，反覆多次重結晶。
本發明新化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]的結構鑑定方法為 黃色無定形粉末，mp240℃(分解)，鹽酸-鎂粉反應呈陽性，UV λmaxMeOH255.4，351.8；示其結構母核為黃酮。高分辨FAB-MS給出其分子式為C36H36O19(實測值795.177399；計算值795.174849)。
由1H-NMR可知，該化合物結構中存在一組苯環上間位耦合氫信號，即δ6.33(1H，d，J＝2.0Hz)，δ6.18(1H，d，J＝2.0Hz)。還含有兩組苯環上ABX耦合系統，即δ7.52(1H，d，J＝2.0Hz)，δ7.66(1H，dd，J＝2.0Hz，8.0Hz)，δ6.81(1H，d，J＝8.0Hz)，δ7.03(1H，d，J＝2.0Hz)，δ6.98(1H，dd，J＝2.0Hz，8.0Hz)，δ6.74(1H，d，J＝8.0Hz)，示結構中含有兩個苯環上的三取代。在δ12.57(1H，s)的信號為A環5位OH上氫的信號，說明黃酮母核的A環上6、8位有兩個間位耦合的氫，B環上有一個ABX系統。
由1H-1HCOSY，可將兩組ABX耦合系統的6個氫信號區分開，分別為δ7.52(1H，d，J＝2.0Hz)，δ7.66(1H，dd，J＝2.0Hz，8.0Hz)，δ6.81(1H，d，J＝8.0Hz)和δ7.03(1H，d，J＝2.0Hz)，δ6.98(1H，dd，J＝2.0Hz，8.0Hz)，δ6.74(1H，d，J＝8.0Hz)。1H-NMR和1H-1HCOSY中δ7.44(1H，d，J＝16.0Hz)，δ6.20(1H，d，J＝16.0Hz)為烯鍵上的兩個反式耦合氫；HMQC譜顯示，δ7.44氫(烯鍵上氫)與δ145.88碳相連接；HMBC譜顯示δ145.88碳與δ7.03氫和δ6.98氫，δ7.44氫與δ166.99的羰基碳相關，以上說明結構中含有咖啡醯基。
表1新化合物、甲基-β-D-半乳糖苷及甲基-α-L-鼠李糖苷的13C-NMR數據 (13C-NMR data for New Compound、Methyl-β-D-galacoside andMethyl-α-L-rhamoside)
1H-NMR中δ4.50(1H，br s)，δ5.31(1H，d，J＝7.6Hz)為糖上端基氫。由1H-NMR中δ0.84(3H，d，J＝2.0Hz)及13C-NMR中δ17.494的信號可知其中的一個糖為鼠李糖，且δ4.50(1H，s)為其端基氫。將該化合物的碳譜中糖的信號與標準糖的1位甲基化物比較(表2-2)可知，鼠李糖的4位被取代，結構中含有β-半乳糖，且其6位被取代。HMBC譜中，鼠李糖的1位氫δ4.50與半乳糖的6位碳δ66.6相關點，說明結構中有α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖片斷。
HMBC譜中，半乳糖的1位氫δ5.31與黃酮的3位碳δ134.12，說明半乳糖C-1與黃酮的3位碳連結。
咖啡醯基的羰基碳δ166.99與鼠李糖的4位碳有相關點，咖啡醯基與鼠李糖的C-4相連。
綜上，該化合物的結構為槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷](Quercetin-3-O-(4-O-trans-caffeoyl-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-galacopyranoside))。
下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明。
由2DNMR(HMBC、HMQC、DEPT、1H-1HCOSY、TOCSY)確定了該化合物上各碳氫歸屬。結果見表2。
表2 新化合物的NMR數據(400MHz，in DMSO) (Table1-2 NMR data of New Compound(400MHz，in DMSO))
a 由於屏蔽作用信號不清晰(Signals pattern are unclear due to overlapping.) 下述實施例均能實現上述實驗例的效果
具體實施例方式 實施例1 化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]，其結構式如下
其分離方法為選用菊科甜菊屬多年生草本植物甜葉菊(SteviaRebaudiana Bertoni)的乾燥葉7000g，用14倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次1.0小時，過濾。合併濾液並減壓濃縮至10L後，用水稀釋至56L，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫3個柱體積後再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色後，合併上述乙醇洗脫液，減壓濃縮後置真空乾燥箱中50～70℃乾燥，得到幹浸膏重917g。
將上述幹浸膏917g用聚醯胺柱色譜分離(色譜分離I)，水-乙醇混合系統梯度洗脫，分份收集，每100ml收集一份，共收集I水洗部分、II 30％醇洗、III50％醇洗部分，IV70％醇洗部分V90％醇洗部分五個流份。色譜分離I得到的第IV70％醇洗部分經聚醯胺色譜分離(色譜分離II)，用乙酸乙酯-甲醇混合溶劑10∶1→6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶3→1∶6梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集50～60個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離II得到的39～41流份合併，經聚醯胺柱色譜分離(色譜分離III)，用氯仿-甲醇混合溶劑6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶2→1∶4梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集15～20個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離III得到的10～14流份合併，用丙酮重結晶後，得到槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]0.020g。
實施例2 化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]，其結構式如下
其分離方法為選用菊科甜菊屬多年生草本植物甜葉菊(SteviaRebaudiana Bertoni)的乾燥葉5000g，用14倍體積份的50～95％乙醇提取2次，每次2.0小時，過濾。合併濾液並減壓濃縮至10L後，用水稀釋至50L，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫5個柱體積後再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色後，合併上述乙醇洗脫液，減壓濃縮後置真空乾燥箱中50～70℃乾燥，得到幹浸膏重615g。
將上述幹浸膏615g用聚醯胺柱色譜分離(色譜分離I)，水-乙醇混合系統梯度洗脫，分份收集，每100ml收集一份，共收集I水洗部分、II30％醇洗、III50％醇洗部分，IV70％醇洗部分V90％醇洗部分五個流份。色譜分離I得到的第IV70％醇洗部分經聚醯胺色譜分離(色譜分離II)，用乙酸乙酯-甲醇混合溶劑10∶1→6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶3→1∶6梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集50～60個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離II得到的39～41流份合併，經聚醯胺柱色譜分離(色譜分離III)，用氯仿-甲醇混合溶劑6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶2→1∶4梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集15～20個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離III得到的10～14流份合併，用丙酮重結晶後，得到槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]0.015g。
實施例3 化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]，其結構式如下
其分離方法為選用菊科甜菊屬多年生草本植物甜葉菊(SteviaRebaudiana Bertoni)的乾燥葉10000g，用16倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次2.0小時，過濾。合併濾液並減壓濃縮至10L後，用水稀釋至80L，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫4個柱體積後再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色後，合併上述乙醇洗脫液，減壓濃縮後置真空乾燥箱中50～70℃乾燥，得到幹浸膏1310g。
將上述幹浸膏1310g用聚醯胺柱色譜分離(色譜分離I)，水-乙醇混合系統梯度洗脫，分份收集，每100ml收集一份，共收集I水洗部分、II30％醇洗、III50％醇洗部分，IV70％醇洗部分V90％醇洗部分五個流份。色譜分離I得到的第IV70％醇洗部分經聚醯胺色譜分離(色譜分離II)，用乙酸乙酯-甲醇混合溶劑10∶1→6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶3→1∶6梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集50～60個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離II得到的39～41流份合併，經聚醯胺柱色譜分離(色譜分離III)，用氯仿-甲醇混合溶劑6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶2→1∶4梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集15～20個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離III得到的10～14流份合併，用丙酮重結晶後，得到槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]0.025g。
實施例4 化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]，其結構式如下
其分離方法為選用菊科甜菊屬多年生草本植物甜葉菊(SteviaRebaudiana Bertoni)的乾燥葉3000g，用12倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次1.5小時，過濾。合併濾液並減壓濃縮至5L後，用水稀釋至20L，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫3個柱體積後再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色後，合併上述乙醇洗脫液，減壓濃縮後置真空乾燥箱中50～70℃乾燥，得到幹浸膏400g。
將上述幹浸膏400g用聚醯胺柱色譜分離(色譜分離I)，水-乙醇混合系統梯度洗脫，分份收集，每100ml收集一份，共收集I水洗部分、II30％醇洗、III50％醇洗部分，IV70％醇洗部分V90％醇洗部分五個流份。色譜分離I得到的第IV70％醇洗部分經聚醯胺色譜分離(色譜分離II)，用乙酸乙酯-甲醇混合溶劑10∶1→6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶3→1∶6梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集50～60個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離II得到的39～41流份合併，經聚醯胺柱色譜分離(色譜分離III)，用氯仿-甲醇混合溶劑6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶2→1∶4梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集15～20個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離III得到的10～14流份合併，用丙酮重結晶後，得到槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]0.010g。
實施例5 化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]，其結構式如下
其分離方法為選用傘形科植物防風的乾燥根製成的防風飲片4000g，用10倍體積份的50～95％乙醇提取3次，每次0.5小時，過濾。合併濾液並減壓濃縮至5L後，用水稀釋至30L，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫4個柱體積後再用30～70％乙醇洗脫，洗至乙醇洗脫液近無色後，合併上述乙醇洗脫液，減壓濃縮後置真空乾燥箱中50～70℃乾燥，得到幹浸膏500g。
將上述幹浸膏400g用聚醯胺柱色譜分離(色譜分離I)，水-乙醇混合系統梯度洗脫，分份收集，每100ml收集一份，共收集I水洗部分、II30％醇洗、III50％醇洗部分，IV70％醇洗部分V90％醇洗部分五個流份。色譜分離I得到的第IV70％醇洗部分經聚醯胺色譜分離(色譜分離II)，用乙酸乙酯-甲醇混合溶劑10∶1→6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶3→1∶6梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集50～60個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離II得到的39～41流份合併，經聚醯胺柱色譜分離(色譜分離III)，用氯仿-甲醇混合溶劑6∶1→4∶1→2∶1→1∶1→1∶2→1∶4梯度洗脫，分份收集，每50ml收集一份，共收集15～20個流份，聚醯胺薄檢識後合併相同流份。色譜分離III得到的10～14流份合併，用丙酮重結晶後，得到槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]0.012g。
實施例6 該化合物咖啡醯基上的反式烯氫可轉化為正式，示例衍生物結構式為
實施例7 該化合物黃酮母核上的-OH、咖啡醯基上的-OH可分別或同時甲基化，生成甲基化衍生物，示例結構式為
實施例8 該化合物黃酮母核上的-OH、咖啡醯基上的-OH分別或同時與Na+、K+等金屬離子結合生成金屬鹽衍生物，示例衍生物結構式為
實施例9 該化合物鄰二酚羥基、黃酮母核的5-羥基、4-羰基可分別或同時與金屬離子Al3+、Sr2+、Mg2+、Zr2+等結合生成金屬絡合物，示例絡合物結構式為
圖1FAB-MS高分辨質譜數據 圖2新化合物的1H-NMR譜 圖3新化合物的1H-NMR譜(局部放大圖) 圖4新化合物的1H-1HCOSY譜(局部放大圖) 圖5新化合物的HMQC譜(局部放大圖) 圖6新化合物的HMBC譜(局部放大圖) 圖7新化合物的HMBC譜(局部放大圖) 圖8新化合物的HMBC譜(局部放大圖) 圖9新化合物的HMBC譜(局部放大圖) 圖10新化合物的HMBC譜(從氫到碳)(The HMBC correlations observed in new compound(from H to C))。
權利要求
1. 一種甜葉菊中的新黃酮苷類化合物，其特徵在於該化合物的化學結構式為
2. 一種藥物，其特徵在於該藥物含有如下結構式的化合物及其鹽或衍生物
3. 如權利要求1所述的甜葉菊中的新黃酮苷化合物分離方法，其特徵在於該方法為
選用市售甜葉菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)為菊科甜菊屬多年生草本植物甜葉菊(Stevia Rebaudiana Bertoni)的乾燥葉片，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或它們的至少兩種混合物為溶劑提取，回收溶劑後將提取物通過選自溶劑萃取法、大孔樹脂吸附法、聚醯胺層析法、矽膠柱層析法、反相柱層析法或Toyopearl HW-40、Pharmadex LH-20、柱層析法的一種或者多種方式分離，用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚、環己烷等或它們的至少兩種混合物作洗脫劑洗脫，採用薄層層析法檢識，合併部分洗脫液，乾燥後得甜葉菊新黃酮苷化合物。
4. 如權利要求3所述甜葉菊新黃酮苷化合物的分離方法，其特徵在於對原料進行提取是在室溫或加熱狀態下，採用煎煮、加熱回流、超聲提取、冷浸、滲漉、微波提取、高壓提取，提取次數可以是一次，也可以是多次。
5. 如權利要求3所述甜葉菊新黃酮苷化合物的分離方法，其特徵在於所用的溶劑萃取法以選自甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇或它們的至少兩種混合物作為溶劑，在室溫或加熱狀態下進行萃取，萃取次數可以是一次，也可以是多次。
6. 如權利要求3所述的甜葉菊新黃酮苷化合物分離方法，其特徵在於所用的大孔樹脂吸附法中所用的樹脂為聚苯乙烯型吸附樹脂，洗脫溶劑選自水、甲醇、乙醇、丙酮、丙醇或它們的至少兩種混合物作為洗脫劑，洗脫方法可以是等度洗脫，也可以是梯度洗脫。
7. 如權利要求6所述的大孔樹脂吸附法，其特徵在於所用樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂、X-5型大孔吸附樹脂、D3526型大孔吸附樹脂、HPD400型大孔吸附樹脂、S-8型大孔吸附樹脂、NKA-II型大孔吸附樹脂。
8. 如權利要求6所述的大孔樹脂吸附法，其特徵在於所述大孔樹脂吸附法為將提取液或提取物用水分散溶解，上清液或過濾液通過大孔吸附樹脂，用水或5～20％的丙酮、乙醇、甲醇或丙醇的水溶液清洗除去雜質，用量為1～7倍樹脂體積，再用20～90％的丙酮、乙醇、甲醇或丙醇的水溶液洗脫，用量為2～8倍樹脂體積。
9. 如權利要求3所述的甜葉菊新黃酮苷化合物分離方法，其特徵在於所述聚醯胺層析法為柱層析或靜態吸附過濾法，洗脫劑選自水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、甲醇、乙酸乙酯等組成的溶劑，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
10. 如權利要求3所述的甜葉菊新黃酮苷化合物分離方法，其特徵在於所述矽膠柱層析為常壓或加壓柱層析，所用填料為40～400目矽膠，用石油醚、氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁酮、水等或它們的至少兩種混合物為洗脫劑，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
11. 如權利要求3所述的甜葉菊新黃酮苷化合物分離方法，其特徵在於所述反相柱層析為常壓或加壓柱層析，所用填料為十八烷基鍵合相或八烷基鍵合相，洗脫溶劑選自含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮、含水丙醇中的一種或幾種，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
12. 如權利要求3所述甜葉菊新黃酮苷化合物的分離方法，其特徵在於所述Toyopearl HW-40柱層析法為常壓或加壓柱層析，洗脫溶劑選自由含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮、含水丙醇組成的洗脫劑，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
13. 如權利要求3所述甜葉菊新黃酮苷化合物的分離方法，其特徵在於所述Pharmadex LH-20柱層析法為常壓或加壓柱層析，洗脫溶劑選自由含水甲醇、含水乙醇、含水丙酮、含水丙醇組成的洗脫劑，洗脫時可以採用等度洗脫，也可以採用梯度洗脫。
14. 如權利要求3所述的甜葉菊新黃酮苷化合物分離方法，其特徵在於合併洗脫液後，可以採用丙酮、氯仿、甲醇、乙醇、水或它們的至少兩種混合物溶劑重結晶，得到甜葉菊新黃酮苷化合物。
全文摘要
本發明公開了一種甜葉菊中新黃酮苷及其分離製備方法。本發明甜葉菊中新黃酮苷化合物槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡醯基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]化學結構式如圖。
文檔編號C07H17/07GK101245087SQ20071011131
公開日2008年8月20日 申請日期2007年6月18日 優先權日2007年6月18日
發明者石任兵, 斌 劉, 華 姜 申請人:石任兵, 斌 劉