具有催產素活性的物質在製備用於創傷癒合的藥劑方面的應用的製作方法

2023-05-17 10:20:41 2

專利名稱：具有催產素活性的物質在製備用於創傷癒合的藥劑方面的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及催產素的新應用。
可能由下列因素而引起損傷或創傷或者由外部損傷(即因意外事故或手術操作而引起創傷)；或者由組織中的病理過程而引起創傷。潰瘍(例如消化性潰瘍和骨潰瘍)主要指皮膚或膜中的創傷。損傷還包括其它各種組織中的傷害，例如骨折。在本說明書中，「創傷」這個術語被用於人體或動物體中的各種損傷。創傷可被分成急性創傷或慢性創傷。
創傷癒合的機制大體上可分成四個階段，即止血、發炎、增殖和成熟。在發炎的過程中，白細胞聚集以便對抗細菌，並且脈管壁的滲透性被增大從而導致膨脹。所述物質有很多還促進導致充血和發熱的改善的微循環。如果未發炎，則白細胞數將會減少並且被單細胞代替，所述單細胞是釋放生長因子(細胞因子)和一些化學物質的巨噬細胞和淋巴細胞，其中所述化學物質例如有組胺、5-羥色胺、前列腺素，它們是創傷癒合過程的開始和繼續的主要調節劑。最重要的調節細胞是巨噬細胞。在增殖階段中形成結締組織，其中生長新血管，於是受損傷的組織獲得再生。約一周後，成纖維細胞是優勢細胞，發炎減少了，於是創傷的抗力迅速增大了。最後在成熟期，組織蛋白膠原被穩定化，於是形成疤痕組織。該階段可能持續一長段時間，在此期間，例如神經組織的強度得到改善，並且再生在繼續。為了達到最佳創傷癒合，應充分供應各種維生素和痕量元素以及營養物，並且氧的供應也應充分。
非妥協的細胞體內平衡是創傷癒合和修復的基本因素，並且在癒合組織中需要某些條件而在形成肉芽組織和上皮芽生。體內平衡條件包括水合度、足夠的血液灌流、各種生長因子的可獲得性、適當的氧分壓、非病原性微生物區系的可接受的程度以及創傷和鄰近的正常皮膚之間電位梯度的維持。在體內平衡環境中，細胞被泡在便於正常生長和修復過程的體液中。
慢性創傷或無痛的、未癒合的創傷可能由不同的原因而引起，包括感染、異物或毒性刺激物的存在、灼傷、長期施加於皮膚的壓力和受損傷的循環引起的血液供應不足。在慢性創傷中，組織體內平衡和創傷環境被調和，於是，或者不出現癒合，或者癒合剛開始就停止了。所述條件中涉及的因素有組織壞死、脫水、慢性創傷水腫、纖維化硬結和小血管病。
腿潰瘍是一種慢性創傷，見於很大一部分人中，隨年齡增大而增多。該病程可持續從兩三個月到數十年，並且會給社會造成重大的代價以及使個體患者遭受很大的痛苦。壓力潰瘍(即褥瘡性潰瘍或褥瘡)是另一類慢性創傷，它主要傷害老年人。慢性非治癒性潰瘍是糖尿病患者中的嚴重問題。
為了提供體內平衡環境，可用被設計成保持創傷溼潤的閉塞敷料覆蓋創傷。然而，這將帶來促使創傷感染的危險。
一種用於治療慢性開口創傷的最古老的療法是水療法，該方法現今可在渦流浴中進行。通過這樣可浸掉敷料並清創壞死的組織。
在慢性皮膚潰瘍和無痛潰瘍中，如果壞死的、脫水的組織阻塞它，則可能不會出現細胞從創傷周圍遷移。壞死的組織妨礙肉芽組織的形成並且防止上皮細胞遷移穿過創傷。因此需要清創(即從傷口消除壞死的組織)，不但為了除去上面生存了細菌的死組織從而能進行肉芽生成和膠原(上皮細胞可在其上遷移從而閉合傷口)成纖維樣沉積的癒合過程，而且為了除去很多可能存在的微生物。該清創作用可通過局部施用酶、促進自溶(即通過自然存在於創傷液中的酶自身消化壞死的組織)、應用合成敷料或通過手術切除來進行。一經清創後，傷口通常將經歷肉芽生成、收縮和上皮形成。
有一些局部治療劑可能對創傷癒合速度有很深的影響。局部抗菌劑和清潔劑通常在創傷治療中被濫用，導致有害的細胞毒性效果以及最小的抗菌效果和清潔效果。作為這類治療劑的實例值得一提的有碘附、次氯酸鈉溶液、過氧化氫和氧化鋅。
已假定損傷的創傷癒合可能是由生長因子適當刺激的缺乏而引起的。實際上，生長因子已被用於臨床試驗而檢測它們是否能改善患慢性未癒合創傷的患者的傷口閉合。最近用生長因子對創傷癒合進行了有希望的動物實驗，但對人的慢性創傷的局部施用尚未成功。已建議應用與蛋白酶抑制劑組合的數種不同的生長因子。
另一種方法是單獨移植上皮細胞或者與成纖維細胞和胞外基質成分一起移植。還推測了將調節治癒性多肽的合成的基因用於移植的細胞或者直接施用在傷口上。
大體上，促細胞分裂生長因子或者趨化生長因子或者促進一種或多種參與修復受損傷皮膚的細胞的分化的生長因子可促進皮膚癒合。成纖維細胞生長因子(FGFs)是九種已知的同源促細胞分裂原的一族，所述促細胞分裂原通過至少四種單一跨膜酪氨酸激酶受體及其備選的轉錄變體刺激中胚層和外胚層來源的細胞。酸性FGF(aFGF或FGF-1)似乎是鑑定了的FGFs中獨特的，是由於它高親和性地結合所有已知的FGF受體的能力。該廣範圍的受體專一性可能促成它的體外多細胞靶和組織修復的動物模型中多樣的治療相關的生物活性。aFGF是一種短多肽，它是來自皮膚成纖維細胞、血管內皮細胞和表皮角質形成細胞(皮膚中的主細胞)的有效的促細胞分裂原。此外，aFGF在體外對血管內皮細胞有趨化性並且誘導體內新血管生長。在大鼠和小鼠中，外源性應用的aFGF促進全厚皮膚創傷的癒合並導致暫時增大切開的創傷中的抗張強度。Liying Sun等，「用aFGF cDNA的轉染改善了創傷癒合」，皮膚病學研究雜誌(Journal of Investigative Dermatology)，Vol.108，No.3，1997。然而，aFGF的應用受到限制，這是因為需要施用較大量的重組aFGF，它通常由於焦痂的原因而受阻不能到達靶組織。aFGF的短半壽期是局部施用的另一個缺點，它要求頻繁施用。頻繁高劑量施用aFGF而克服擴散問題費用會很大。
另一族生長因子是轉化生長因子β，TGF-β包括種類繁多具有多生物活性的多肽。已闡述了TGF-β1、TGF-β2和TGF-β3在創傷修復中的重要作用。TGF-β1是皮膚形態發生和皮膚創傷修復的重要調節子，並且已證實對創傷的外部施用可加速動物的創傷癒合過程。為了弄清TGF-β1的機制，已鑑定並克隆了培養的角質形成細胞中由該因子調節的作用基因，參見B.Munz等，「依鈣結合蛋白I亞基膜聯蛋白II和pll在培養的角質形成細胞中和在創傷修復期間的差異表達」，皮膚病學研究雜誌，Vol.108，No.3，1997。此外，所述物質還通過表皮生長因子(EGF)和角質形成細胞生長因子(KGF)而增多，這兩種因子都刺激角質形成細胞增殖。
P.Luppi等在「NGF在人妊娠期間被釋放入血漿；是催產素介導的響應嗎？」，神經報導(Neuroreport)，4(8)，1063～5，1993中，已闡述了生物活性神經生長因子(NGF)在婦女妊娠、勞動和哺乳期間的外周循環中增加五倍。由於在雌性大鼠中靜脈內注射催產素也引起下丘腦中NGF量的增多，所以人們推測循環NGF量的增加可能與血漿中高含量的催產素或者與下丘腦-垂體-腎上腺軸的活化有關。
G.Jansen等在「針刺後的大鼠中局部缺血性肌皮瓣存活率的增加」，斯堪地那維亞生理學學報(Acta Physiol.Scand.)，135，555～558，1989中研究了針刺療法對大鼠皮瓣存活率的影響，證實手工針刺和電針刺使所述皮瓣的存活率與未處理的對比物相比顯著增高了。
現已意外地發現了催產素具有創傷癒合效果。該癒合效果至少部分是由於這一事實，即催產素激活對不同組織的癒合重要的生長因子。尤其現已發現，FGF型生長因子和/或它們的受體通過施用催產素而被活化。
本發明涉及具有催產素活性的物質在製備用於祛病治療或預防包括人在內的哺乳動物創傷的藥物組合物方面的應用。
一個優選的應用是治療皮膚、骨、粘液、腱、肌、神經、脈管和結締組織中的創傷。
本發明另一個優選的應用是治療慢性創傷。
催產素是待分離和測序的第一肽激素之一。它是一種具有兩個半胱氨酸殘基的九肽，如下式所示，所述兩個半胱氨酸殘基在位置1和位置6之間形成二硫鍵
曾經在很長一段時間中認為催產素的作用只是它對排乳和子宮收縮的刺激效果，但在近數十年中，證實了催產素在CNS中產生的寬範圍的效果。有人提出，催產素參與控制記憶和學習過程和各種行為(例如攝食、運動)，以及母性行為和性行為。還有人認為催產素參與心血管功能、體溫調節、痛覺閾和流體平衡的控制。還有跡象表明，催產素與各種免疫過程的控制有關。最近已證實，在重複施用後，催產素注射引起血壓降低和體重增加的長期效果。
有合成催產素的不同方法，工業方法例如被描述於美國專利2,938,891和3,076,797中。
在人體內，催產素是在下丘腦的室旁核(PVN)和視上核(SON)中產生的。它與加壓素(它也是在這些核中產生的)不同之處僅在於兩個胺基酸。SON和PVN的大細胞的催產素能神經元將投射物送入垂體後葉腺(催產素或加壓素就是從該腺體分泌入循環的)。發源於PVN中的小細胞神經元投射入中樞神經系統(CNS)中的多區。產生催產素的細胞受神經支配，即受膽鹼能神經元、兒茶酚胺能神經元和肽能神經元的支配。催產素在腦外不同組織(例如子宮、卵巢、睪丸、胸腺、腎上腺髓質和胰腺)中的存在已被證實，並且人們認為催產素在這些器官內產生局部效果。
催產素平行分泌入大腦區和分泌入循環是響應某種刺激(例如哺乳)而發生的，但其它刺激作用可引起催產素能神經元的獨立的活化，在大腦或垂體中終止。
在這裡，催產素，只要適用，除了指催產素外還指表現相同性能的前體、代謝衍生物、催產素興奮劑或類似物。
本發明具有催產素活性的物質可通過通式I描述
其中W選自Ile、Cha、Val、Hoph和Phe；X選自Gln、Ser、Thr、Cit、Daba和Arg；Y選自Leu、Ile、Arg、Hos、Daba、Cit和Val；其中Leu、Ile和Val給出催產素類似物，而Arg、Hos、Daba和Cit則給出加壓素類似物；以及Z選自Gly和Ala。
所述物質中的非天然胺基酸具有下列結構Cha(環己基丙氨酸)
Hoph(高苯丙氨酸)
Cit(瓜氨酸)
Daba(二苯基丁酸)
Hos(高絲氨酸)
所述胺基酸全部可商購，例如可從Bachem和Sigma商購。
本發明的物質中的胺基酸可以是L-胺基酸或D-胺基酸。
本發明的物質還包括具有帶反向肽鍵的序列的九肽。這些序列優選是反向序列，更優選包括D-胺基酸。
認為式I的九肽由於與具有下式的催產素的結構相似性而表現出催產素活性
在該催產素結構中，位置1、2、5、6和7保持未變，也就是說，所述二硫鍵和被認為是穩定所述鍵因而對性能至關重要的胺基酸(即位置2中的Tyr、位置5中的Asn和位置7中的Pro)保持未變。在位置3中，疏水性Ile可用其它疏水性胺基酸更換，並且在位置4中，親水性Gln可用其它親水性胺基酸更換。在位置8中，如果Leu被疏水性胺基酸Ile或Val更換則獲得催產素類似物；並且如果用親水性胺基酸Arg、Hos、Cit或Daba更換Leu則獲得加壓素類似物。本發明的九肽已通過下列文獻中所述方法而編譯了S.Hellberg等，「肽定量結構-活性關係，一種多變的方法」，醫療化學雜誌(J.Med.Chem.)，1987，30，1126以及J.Jonsson等，「55個編碼的和非編碼的胺基酸的多變量參數化」，Quant.Struct.-Act.Relat.，8，204～209(1989)。所述肽可按已知方法合成[例如由Streitwieser和Heathcock在「有機化學導論」(Introduction to OrganicChemistry)(第3版)，p.949～950中描述的『Merrifields固相合成法』]。具有反向肽鍵的序列也可通過例如『向後-逆向修飾』(retro-inversomodification)(例如參見S.Muller等，PNAS Vol 94，No.97，12545～12550)製備。
催產素的應用構成本發明優選的實施方案。
本發明另一個優選的實施方案是具有下列結構式的物質即鳥催產素、硬骨魚催產素、加壓素或8-精加壓催產素的應用Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Ile-Gly-NH2(鳥催產素)(當在式I中時W＝Ile，X＝Gln，Y＝Ile和Z＝Gly)Cys-Tyr-Ile-Ser-Asn-Cys-Pro-Ile-Gly-NH2(硬骨魚催產素)(當在式I中時W＝Ile，X＝Ser，Y＝Ile和Z＝Gly)Cys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2(加壓素)(當在式I中時W＝Phe，X＝Gln，Y＝Arg和z＝Gly)
Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2(8-精加壓催產素)(當在式I中時W＝Ile，X＝Gln，Y＝Arg和Z＝Gly)用於本發明的應用的其它優選的物質有Cys-Tyr-Cha-Cit-Asn-Cys-Pro-Arg-Gly-NH2，Cys-Tyr-Val-Thr-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2Cys-Tyr-Hoph-Thr-Asn-Cys-Pro-Val-Gly-NH2，Cys-Tyr-Phe-Cit-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，Cys-Tyr-Cha-Arg-Asn-Cys-Pro-Hos-Ala-NH2，Cys-Tyr-Val-Daba-Asn-Cys-Pro-Daba-Ala-NH2，Cys-Tyr-Hoph-Daba-Asn-Cys-Pro-Cit-Ala-NH2和Cys-Tyr-Phe-Arg-Asn-Cys-Pro-Val-Ala-NH2.
實驗已證明，催產素通過中樞作用的方式提高大鼠中的中樞α2受體的活性。這些受體具有抑制作用並且對抗腦中主要經由α1受體(它們激活環化AMP)介導的去甲腎上腺素的活化方面。當α2受體刺激超過α1受體刺激時，則活性通過舒張而交換，能量朝向生長和癒合分流傳送，即能量未被用於應力或肌收縮和活動。結果，副交感神經音超過交感神經音，於是，肌肉系統就鬆弛了。可推測催產素也在人體中產生類似的效果。在乳房餵養(一種以重複分泌催產素為特徵的情況)過程中，見到了在重複施用催產素後的實驗動物中觀察到的所有效果。不知道催產素對α2受體的作用是如何被介導的，但可能不是通過傳統的催產素受體介導的作用。
催產素的效果可這樣延長或增強與增大催產素和/或一些受體(例如雌激素)的釋放的藥物或具有α2興奮效果的藥物(例如可樂定)組合施用。
本發明還涉及與雌激素組合的催產素在製備用於治療性或預防性創傷癒合的藥物組合物方面的應用。催產素和雌激素或者被一起施用或者先施用雌激素再施用催產素。雌激素增大催產素的釋放和合成、催產素受體的合成，並且它還上調α2受體的活性。
催產素的短期效果(例如短期解痛、短期鎮靜和激素釋放)是通過催產素拮抗劑逆轉的，於是可被描述成直接效果。
長期效果(達數天～數月的減輕，是在數周～數月的時間間隔重複治療3～10天、優選5～8天後獲得的)從一般觀點來看也是出乎意外的，並且以前尚未報導過其它任何藥物在患者中的長期效果。當獲得所述效果之後，例如可通過每周一次的治療而保持它。該長期效果是通過α2拮抗劑逆轉和通過α2興奮劑增強的。
所述含催產素的藥物組合物可被配製成供局部的、離子電滲療法的、鼻的、肺內的、腸胃外的(例如皮下的、腹膜內的或靜脈內的、鞘內的或腦室內的)施用。優選的施用方式是局部用藥和鼻內用藥。腸胃外的組合物例如是供皮下、肌內或靜脈內注射的溶液或乳液。局部組合物可以是洗劑、乳膏、軟膏或凝膠(例如被摻入膏藥)。
局部施用中應給出的劑量可以是1～1000μg/cm2，優選10～100μg/cm2；腸胃外施用中為0.05～1mg/kg；而鼻內施用中則是1～100IU/天，優選是25～50IU/天。1IU(或國際單位)相當於2μg。對於患臍絞痛的兒童來說，優選的劑量可以是20～50IU/天、更優選25～30IU/天(經鼻施用)，優選在1～2小時中施用2～3次。在i.c.v或i.t.施用中，劑量一般是腸胃外劑量的1/10～1/1000。
市場上現在有供注射和噴鼻的商品溶液供應。


圖1是在皮下施用催產素和催產素拮抗劑後大鼠的肌皮瓣存活率的條線圖。生物試驗一個已有的創傷癒合模型旨在研究大鼠的肌皮瓣存活率。在整形外科學中，重構問題通常是通過外科皮瓣解決的。手術皮瓣的主要缺點是其造成局部缺血和最後遠端部分壞死的傾向。該併發症最終會破壞手術後看來優良的結果。進行了很多研究致力於解釋外科皮瓣存活的機制以及如何預防和消除既成的局部缺血。
為了研究皮膚創傷治癒劑對慢性未癒合皮潰瘍的效果，已產生突變型C57BL/Ks-db/db糖尿病小鼠作為可能相關的癒合-損傷的模型。這些基因上純合的糖尿病小鼠發展成胰島素抗性的肥胖和高血糖症，它與人II型糖尿病相似。它們還顯示糖尿病跡象，例如過量飲水和排尿以及大為升高的尿葡萄糖含量。這些小鼠中的創傷在細胞浸潤、肉芽組織形成和傷口閉合方面表現出顯著延遲。以前的研究應用了該模型來評定aFGF的製劑。試驗1.施用催產素後大鼠中皮瓣的存活率。
本研究的目的是研究催產素對大鼠肌皮瓣存活率的影響。
將71隻雌性白化大鼠(Sprague-Dawley，重180～220g)用水合氯醛(0.4g/kg)麻醉，剃光背部，隆起一塊基於顱背側的標準皮瓣(2×7cm)然後在適當位置縫合。所述皮瓣是從肌的深筋膜處隆起的並且包括表麵筋膜、肉膜、皮下組織和皮膚。分別在手術前24小時和1小時以及手術後24小時用1mg/kg催產素(s.c.)(n＝20)、催產素拮抗劑[即1-脫氨基-2-D-Tyr-(OEt)-4-Thr-8-Orn-催產素，以1mg/kg的量(n＝15)]、用1mg/kg所述催產素拮抗劑處理這些大鼠；再在30分鐘後用1mg/kg催產素(n＝16)或者用鹽水(n＝20)處理。
在手術後六天估測所述皮瓣的存活率。與鹽水處理的對比組(p＜0.05)相比，催產素處理過的大鼠具有高得多的皮瓣存活率。當先施用催產素拮抗劑再注射催產素時，則該效果被消除了。與鹽水處理過的大鼠(不顯著，p＝0.13)和催產素處理過的大鼠(p＜0.05)相比，單獨的催產素拮抗劑降低了皮瓣存活率。
該研究的結果被闡述於圖1中，圖1示出皮下處理過的大鼠肌皮瓣的存活率，即用鹽水(NaCl)、催產素(Ox)、催產素拮抗劑(OxA)和催產素拮抗劑+催產素(OxA+Ox)處理過。結果以平均值±SD表示。用單向ANOVA接著通過學生t-檢驗進行了統計估測。試驗2.施用催產素後的糖尿病小鼠中創傷的癒合11周大小的雌性C57BL/Ks-db/db糖尿病小鼠得自JacksonLaboratories(Bar Harbor，ME)。將小鼠關在具有無菌水和墊層的無菌微型隔離盒中(每盒四隻)，並且保持在半封閉的檢疫設施內。在引起創傷後用電熱板以每盒一半提供增補的熱從而防止降溫並減小死亡率。
腹膜內注射每kg體重為110mg的氯胺酮和9mg的賽拉嗪而麻醉小鼠。剃光背中部和胸廓的皮膚，並用2％氯己定外科擦洗液接著用70％乙醇消毒。在中背區應用一塊直徑為1.6cm的模板標記一個2.0cm2的圓圈，用已滅菌的彎曲虹膜剪通過平端摘除造成一個全厚傷口。在損傷後不久，傷口面積一般增大到約2.3cm2，可能是因為真皮沿傷口周邊收縮的緣故。應用完全無菌的技術在層流罩超靜臺中進行所有的外科操作和隨後的癒合分析操作。在損傷前連續5天，以及損傷後第0、3和7天施用劑量。分別以不同的劑量(0.001、0.01、0.1、1.0、10.0和100.0μg/cm2)給每個劑量為16隻小鼠的組施用催產素。用半透明Bioclusive敷料(Johnson Johnson Products，New Brunswick，NJ)覆蓋傷口從而保護傷口、保持溼潤的環境和防止形成痂。在損傷後第10天取傷口液體樣並進行需氧微生物和厭氧微生物培養。從本研究分析中排除表現出每個傷口多於50個菌落的動物。防止甚至輕度的或亞臨床的感染導致一致的最大癒合損害，於是為評定治療效果提供大的創傷癒合窗。
用照相方法記錄傷口外觀並將傷口周邊印在無菌載玻片上，即在預先用一滴無菌生理鹽水潤溼後直接將所述載玻片印在裸露的傷口表面。在引起創傷後立即地並且隨後一周兩次地進行測定直至傷口完全閉合。應用計算機化圖象分析從載玻片印跡測定傷口面積和周長。應用不成對的兩尾學生t-檢驗(unpaired two-tailed Student t-test)估算組間差異的統計顯著性。
以初始面積減小的百分數表示的癒合被轉化成從傷口周邊的線性內生長，方法是以時序間隔將傷口面積的差值除以平均傷口周長。在特定時間總的內生長值是直到該時刻為止增加的內生長距離之和。該轉化將閉合作為時間的函數線性化，於是能以隨時間恆定的動力學速度表述癒合。
當不再出現溼肉芽組織(指示一層功能性表皮水滲透性屏障)時，就認為創傷(每周兩次地檢查從而監測全部閉合的時間)完全癒合了。還從組織學上進一步證實閉合。通過用耶茲矯正的x2-統計分析癒合傷口對未癒合傷口分數的時間點對比，並且通過不成對的兩尾學生t-檢驗分析各只動物完全閉合的絕對天數的組對比。
作為對在引起創傷後第一周內施用的三次各為10μg/cm2(初始傷口面積)的劑量的響應，直徑為1.6cm的全厚皮切口閉合得比用相應的介質對照的處理組快得多。早在損傷後第7天就見到並且在整個試驗期間繼續見到處理過的傷口癒合速度的統計顯著性的增強(p≤0.01)。從損傷後第14天，在催產素處理過的傷口和介質處理過的傷口之間出現50％的最大差異(以初始面積的百分數計)。該差異相當於在第14天，處理過的小鼠傷口尺寸與接受相應的PBS/肝素介質的小鼠相比要小10倍。雖然接受液體介質的創傷比未接受任何物質的創傷癒合得稍快些，但用PBS或生理鹽水處理後的癒合速度與用含肝素的PBS介質處理過的相當(未示出數據)。
傷口閉合作為時間的函數是非線性的，所以催產素處理的效果大小似乎隨時間而變。由於這些全厚傷口是通過從傷口周邊逐漸癒合而閉合的，所以我們將所述數據從初始傷口面積的百分數轉變為從初始傷口周邊開始的平均線性癒合長度。該計算將初始3天延遲後的平均癒合速度線性化了。在全部時間間隔，用催產素處理顯著(p≤0.01)增大了從傷口周邊癒合的線性速度。對每隻動物測定了作為時間的函數的累積線性癒合長度的斜率。按處理分組的這些斜率表明，10μg/cm2催產素將平均線性癒合速度從0.18mm/天(在介質處理過的組中觀測到的)增大到0.45mm/天(p≤0.01)。
用所述劑量的催產素處理還明顯減少了達到整個傷口閉合的時間。在第14天見到整個閉合中統計顯著性(p≤0.05)增大了。完全閉合的中間時間從介質處理過的創傷的52天減少到在損傷後第一周中用三次催產素劑量處理過的創傷的僅僅23天(p≤0.0001)。
三次局部施用氧(每次劑量在1～100μg/cm2範圍內，在損傷後第一周中施用)導致癒合速度比成對的介質對比組顯著劑量相關的增大。0.001μg/cm2、0.01μg/cm2和0.1μg/cm2的劑量都無效，於是確定「無效」量在0.001～1μg/cm2之間。
劑量響應關係還從傷口完全閉合的時間看出。施用每次劑量為1～100μg/cm2顯著減少了這些傷口完全閉合所需的時間。在1.0～10.0μg/cm2的劑量範圍內，創傷癒合得比它們各自的介質對比組大約快10天。該閉合速度、0.001μg/cm2(未示出)和0.01μg/cm2劑量在減少達到完全閉合的時間方面是無效的。
在損傷後7天，比較了從用10μg/cm2催產素處理過的十隻小鼠和用PBS處理過的十隻小鼠的損傷區(「潰瘍」)取的皮膚活組織檢查中FGF的濃度。結果表明，催產素處理過的小鼠合成的FGF-1比用PBS介質處理過的小鼠合成的多162％。該濃度的增大具有高度的顯著性(p＜0.001)並且有力地支持了這一假設，即催產素通過FGF-1的增大的表達和合成加速了創傷癒合。
權利要求
1.具有催產素活性的物質在製備用於祛病治療或預防包括人在內的哺乳動物創傷的藥物組合物方面的應用。
2.權利要求1的物質的應用，其特徵在於，該物質具有下式I的結構
其中W選自Ile、Cha、Val、Hoph和Phe；X選自Gln、Ser、Thr、Cit、Daba和Arg；Y選自Leu、Ile、Arg、Hos、Daba、Cit和Val；其中Leu、Ile和Val給出催產素類似物，而Arg、Hos、Daba和Cit則給出加壓素類似物；以及Z選自Gly和Ala；以及具有反向肽鍵的序列。
3.權利要求1或2的應用，其特徵在於，所述物質是催產素。
4.權利要求1或2的應用，其特徵在於，所述物質是鳥催產素、硬骨魚催產素、加壓素或8-精加壓催產素。
5.權利要求1或2的應用，其特徵在於，所述物質選自下組序列Cys-Tyr-Cha-C1t-Asn-Cys-pro-Arg-Gly-NH2，Cys-Tyr-Val-Thr-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，Cys-Tyr-Hoph-Thr-Asn-Cys-Pro-Val-Gly-NH2，Cys-Tyr-Phe-Cit-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，Cys-Tyr-Cha-Arg-Asn-Cys-Pro-Hos-Ala-NH2，Cys-Tyr-Val-Daba-Asn-Cys-Pro-Daba-Ala-NH2，Cys-Tyr-Hoph-Daba-Asn-Cys-Pro-Cit-Ala-NH2和Cys-Tyr-Phe-Arg-Asn-Cys-Pro-Val-Ala-NH2.
6.權利要求1～5任一項的催產素在治療皮膚、骨、粘液、腱、肌、神經、脈管和結締組織中的創傷方面的應用。
7.權利要求1～6的催產素在治療慢性創傷方面的應用。
8.權利要求1-8任一項的與雌激素組合的催產素的應用。
9.權利要求1～8任一項的應用，其中所述藥物組合物包括與藥物惰性載體組合的催產素。
10.權利要求1～9任一項的應用，其中所述藥物組合物被配製供鼻或局部施用。
11.權利要求1～10任一項的應用，其中所述藥物組合物呈鼻噴霧劑的形式。
12.治療創傷的方法，該方法包括施用治療有效劑量的具有催產素活性的物質或催產素興奮劑，尤其是催產素。
13.權利要求12的方法，該方法包括每天經鼻施用5～100IU、優選25～50IU的催產素。
全文摘要
具有催產素活性的物質可被用於製備供祛病治療或預防創傷(例如慢性創傷)的藥物組合物。創傷癒合效果可通過將催產素與雌激素組合而增強或延長。
文檔編號A61K31/56GK1251530SQ9880376
公開日2000年4月26日 申請日期1998年3月26日 優先權日1997年3月27日
發明者託馬斯·倫德伯格, 謝斯廷·烏納斯姆伯格 申請人:介入技術醫學股份公司