金果欖組培繁殖方法及其誘導培養基的製作方法
2023-05-17 11:53:26
專利名稱：金果欖組培繁殖方法及其誘導培養基的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養繁殖領域，具體涉及到一種金果欖組培繁殖方法及其誘
導培養基。
背景技術：
金果欖(Tinospora capillipes feign印.)為防己科青牛膽屬常綠纏繞藤本植物，主產於四川、湖南、廣西、湖北、貴州等省區。它是中藥金果欖基源植物之一，具有清熱解毒、利咽止痛之功效，主治咽喉腫痛、癰疽疔毒、洩瀉、痢疾、脘腹熱痛等。金果欖藥用塊根，是《中國藥典》歷年收載的藥材品種，其塊根含掌葉防己鹼(Palnmtine)和咖倫賓 (Colmtfifin)、巴馬汀、藥根鹼、非洲防己鹼、千金藤鹼、蝙蝠葛鹼和木蘭花鹼。民間廣泛用於治療胃痛，現代藥理研究表明，金果欖有明顯的抗炎鎮痛、抗菌、抗腫瘤、降血糖、抗應激、 抗潰瘍及解毒作用等，又被喻為可替代抗生素的天然藥物。一直以來，金果欖都依靠挖取野生品作藥用，由於只挖不種，加上生長較慢，野生資源日趨枯竭，人工種植和撫育勢在必行。另外，金果欖雌雄異株，授粉受到環境影響極大， 自然結實率低，資源調查和引種中發現，雄株遠多於雌株(約50 1)，結果機會大大減少； 且種子有明顯的休眠期，發芽率較低。因此，種源缺乏是金果欖資源銳減的主要原因。目前， 金果欖扦插繁殖未獲得成功。組織培養快速繁殖是現代生物技術，在香蕉、羅漢果、甜茶、石斛等作物上已取得成功，並應用於生產，而金果欖組培繁殖研究並未見成功報導。利用MS 培養基(Murashige and Skoog Stock)為基礎培養基，添加不同濃度和不同種類的激素，在多種植物組織培養中已獲得成功。其中，所用激素或激素組合及其濃度是組培成功與否的技術關鍵，不同植物使用的激素和濃度大不相同。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種金果欖組培繁殖方法，以有效利用現有資源快速繁殖金果欖，並能充分保障其醫藥用途開發所需原料來源。本發明要解決的另一技術問題是提供用於上述金果欖組培繁殖方法的叢生芽誘導培養基和生根誘導培養基。為解決上述技術問題本發明採用如下技術方案金果欖組培繁殖方法，將金果欖外植體接種到叢生芽誘導培養基中進行培養，待叢生芽長至3cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基中進行培養；上述叢生芽誘導培養基以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質6-節氨基嘌呤 0. 46 0. 55mg/L 奈乙酸 0. 18 0. 24mg/L赤黴素0. 8 1. 3mg/L激動素 0. 15 0. 23mg/L,其pH 值為 4. 5 5.0 ；上述生根誘導培養基以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質吲哚丁酸0. 6 1. 2mg/L奈乙酸 0. 6 1. 2mg/L。
外植體為嫩莖。嫩莖先經洗淨並用0. 1 % HgCl2溶液消毒處理8 IOmin。培養均在溫度26士3°C、光照時間12 14h. cf1、光照強度20 30 μ mol. m_2· s-1的條件下進行。單苗長到5 7cm時，於室內煉苗1周，取出洗淨種植於已消毒拌有50%育苗基質的紅壤土中。金果欖叢生芽誘導培養基，以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質6-節氨基嘌呤 0. 46 0. 55mg/L 奈乙酸 0. 18 0. 24mg/L赤黴素0. 8 1. 3mg/L激動素 0. 15 0. 23mg/L0該培養基的pH值為4. 5 5. 0。金果欖生根誘導培養基，以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質吲哚丁酸0. 6 1. 2mg/L奈乙酸 0. 6 1. 2mg/L。本發明採用MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA) +奈乙酸(NAA) +赤黴素(GA3) +激動素(KT) 作為金果欖叢生芽誘導培養基，這四種生長激素組合，在合適的濃度和弱酸性的環境下，可激活金果欖體細胞內的作用酶，促進金果欖外植體的萌發和生長，培養20天就能形成粗壯的叢生芽，擴繁達25倍；本發明還採用MS+吲哚丁酸(IBA) +奈乙酸(NAA)作為生根誘導培養基，能有效地促進金果欖單苗生根形成新植株。應用上述兩種誘導培養基的金果欖組培繁殖方法，可快速有效地繁殖金果欖，解決了其野生資源日益減少和自然繁殖率低的問題， 為深入開發其醫藥價值提供了有力的種源保障。
具體實施例方式實施例1(1)叢生芽誘導取金果欖幼嫩莖，先用洗潔精洗去表面汙垢，接著流水衝洗15min，然後在超淨工作檯上用75%乙醇處理30s，無菌水衝洗1遍，再用0. 1 % HgCl2消毒lOmin，無菌水衝洗5 次；用無菌濾紙吸乾外植體，植於用MS添加6-BA 0. 46mg/L、NAA 0. 24mg/L,GA30. 8mg/L、KT 0. 15mg/L，pH值調節至4. 5的培養基上，在溫度為^±3°C，光照時間為12 14h. cf1，光照強度20 30 μ mol. m_2. s—1的條件下，培養22天，平均得到25. 2倍的叢生芽，叢生芽較粗壯，綠色，生長稍緩慢。(2)生根誘導待叢生芽生長至3 4cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根培養基，生根培養基配方為在MS上，添加IBA 0. 6mg/L+NAA 1. 2mg/L製成；在溫度為^±3°C，光照時間為12 14h. cf1，光照強度20 30 μ mol. m_2. s—1的條件下，培養30天開始生長出白色的不定根，50天長出1 2條，粗壯，長度約Icm的不定根。(3)煉苗與移栽待上述已生根的單苗生長有5 7cm的組培苗，打開培養瓶蓋，於室內煉苗1周， 取出洗淨種植於疏鬆的紅壤土中；在透光度30%左右的育苗棚中，保持溼潤，培養2個月， 葉片淡綠色，成活率達82%。實施例2
4
(1)叢生芽誘導取金果欖幼嫩莖，先用洗潔精洗去表面汙垢，接著流水衝洗15min，然後在超淨工作檯上用75 %乙醇處理30s，無菌水衝洗1遍，再用0. 1 % HgCl2消毒8min，無菌水衝洗5 次；用無菌濾紙吸乾外植體，植於用MS添加6-BA 0. 50mg/L、NAA 0. 20mg/L、GA3 1. Omg/L、 KT 0. 20mg/L，pH值調節至4. 7的培養基上，在溫度為洸士3°C，光照時間為12 14h. d—1，光照強度20 30 μ mol. m_2. s—1的條件下，培養20天，平均得到27倍的叢生芽，叢生芽粗壯， 葉濃綠色、肥厚，長勢好。(2)生根誘導待叢生芽生長至3 4cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根培養基，生根培養基配方為在MS上，添加IBA 1. Omg/L+NAA 1. Omg/L製成；在溫度為^±3°C，光照時間為12 14h. cf1，光照強度20 30 μ mol. m_2. s—1的條件下，培養25天開始生出白色的不定根，45天長出2 3條，粗壯，長度約2cm的不定根。(3)煉苗與移栽待上述已生根的單苗生長有5 7cm的組培苗，打開培養瓶蓋，於室內煉苗1周， 取出洗淨種植於已消毒拌有50%育苗基質的紅壤土中；在透光度30%左右的育苗棚中，保持溼潤，培養2個月，葉片濃綠色，生長健壯，成活率達88%，此基質適合金果欖幼苗生長。實施例3(1)叢生芽誘導取金果欖幼嫩莖，先用洗潔精洗去表面汙垢，接著流水衝洗15min，然後在超淨工作檯上用75 %乙醇處理30s，無菌水衝洗1遍，再用0. 1 % HgCl2消毒9min，無菌水衝洗5 次；用無菌濾紙吸乾外植體，植於用MS添加6-BA 0. 55mg/L、NAA 0. 18mg/L、GA3 1. 3mg/L、 KT 0. 23mg/L, pH值調節至5. 0的培養基上，在溫度為^±3°C，光照時間為12 14h. cf1， 光照強度20 30 μ mol. m_2. s—1的條件下，培養18天，平均得到25. 8倍的叢生芽，叢生芽較粗壯，葉濃綠色，生長較快。(2)生根誘導待叢生芽生長至3 4cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根培養基，生根培養基配方為在MS上，添加IBA 1. 2mg/L+NAA 0. 6mg/L製成；在溫度為^±3°C，光照時間為12 14h. cf1，光照強度20 30mol. m_2. s—1的條件下，培養30天開始生長出白色的不定根，48天長出2條，粗壯，長度約2cm的不定根。(3)煉苗與移栽用上述已生根的單苗生長高於培養瓶，高度約8 IOcm的組培苗，打開培養瓶蓋， 於室內煉苗1周，取出洗淨種植於已消毒拌有50%育苗基質的紅壤土中；在透光度30%左右的育苗棚中，保持溼潤培養；打開瓶蓋後3 4天有頂芽壞死現象，但苗還成活，種植2個月，側芽萌發，葉片綠色，成活率達83%。
權利要求
1.一種金果欖組培繁殖方法，其特徵在於將金果欖外植體接種到叢生芽誘導培養基中進行培養，待叢生芽長至3cm時，將叢生芽分割成小叢或單苗接種到生根誘導培養基中進行培養；所述叢生芽誘導培養基以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質 6-節氨基嘌呤0. 46 0. 55mg/L 奈乙酸0. 18 0. 24mg/L 赤黴素0. 8 1. 3mg/L激動素0. 15 0. 23mg/L,其PH值為4. 5 5.0 ；所述生根誘導培養基以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質 吲哚丁酸0. 6 1. 2mg/L 奈乙酸0. 6 1. 2mg/L。
2.根據權利要求1所述的金果欖組培繁殖方法，其特徵在於所述外植體為嫩莖。
3.根據權利要求2所述的金果欖組培繁殖方法，其特徵在於所述嫩莖先經洗淨並用 0. 1% HgCl2溶液消毒處理8 lOmin。
4.根據權利要求3所述的金果欖組培繁殖方法，其特徵在於所述培養均在溫度 26士3°C、光照時間12 14h. cf1、光照強度20 30 μ mol. m_2· s-1的條件下進行。
5.根據權利要求4所述的金果欖組培繁殖方法，其特徵在於待所述單苗長到5 7cm 時，於室內煉苗1周，取出洗淨種植於已消毒拌有50%育苗基質的紅壤土中。
6.一種金果欖叢生芽誘導培養基，其特徵在於以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質6-節氨基嘌呤0. 46 0. 55mg/L 奈乙酸0. 18 0. 24mg/L 赤黴素0. 8 1. 3mg/L激動素0. 15 0. 23mg/L。
7.根據權利要求6所述的金果欖叢生芽誘導培養基，其特徵在於該培養基的PH值為 4. 5 5. O0
8.—種金果欖生根誘導培養基，其特徵在於以MS培養基為基礎，含有下列濃度的物質吲哚丁酸0. 6 1. 2mg/L 奈乙酸0. 6 1. 2mg/L。
全文摘要
本發明公開了一種金果欖組培繁殖方法及其誘導培養基。本發明採用MS+6-苄氨基嘌呤(6-BA)+奈乙酸(NAA)+赤黴素(GA3)+激動素(KT)作為金果欖叢生芽誘導培養基，這四種生長激素組合，在合適的濃度和弱酸性的環境下，可激活金果欖體細胞內的作用酶，促進金果欖外植體的萌發和生長，培養20天就能形成粗壯的叢生芽，擴繁達25倍；本發明還採用MS+吲哚丁酸(IBA)+奈乙酸(NAA)作為生根誘導培養基，能有效地促進金果欖單苗生根形成新植株。應用上述兩種誘導培養基的金果欖組培繁殖方法，可快速有效地繁殖金果欖，解決了其野生資源日益減少和自然繁殖率低的問題，為深入開發其醫藥價值提供了有力的種源保障。
文檔編號A01H4/00GK102150620SQ20111006596
公開日2011年8月17日 申請日期2011年3月18日 優先權日2011年3月18日
發明者馮世鑫, 潘麗梅, 王曉峰, 閆志剛, 馬小軍, 黃曦 申請人:廣西壯族自治區藥用植物園