用於治療血管疾病的給藥系統的製作方法

2023-05-03 14:44:01

專利名稱：用於治療血管疾病的給藥系統的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用於治療血管疾病的給藥系統，更具體的是指利用選擇性光熱解治療葡萄酒色斑(鮮紅斑痣)的一種給藥系統。
背景技術：
葡萄酒色斑(以下簡稱PWS)為先天性血管病變其主要表現為乳突狀和中網狀真皮層的毛細血管及後微血管擴張(直徑在30-300微米)。此類胎記的新生兒發生率為 0. 3-0. 5%，起初表現為平整粉紅色斑點逐漸發展成紅色到紫色的肥大性病變，其與患者年齡成正比。雖然其發病原因仍未知，但是據悉病變的逐漸肥大是因為擴張性血管周圍的神經密度太低引起的，而會導致神經營養缺乏和受損脈管系統的強直性痙攣調節。增加的灌注壓以及年齡相關的真皮層的膠原退化都可能是引起血管擴張的原因。到46歲，三分之二的患者會因為軟組織增生形成丘疹或結狀物質，從而引起畸形，不對稱之自發性出血。此外，葡萄酒色斑(PWQ所表現出來的畸形外觀會嚴重損害患者的社會心理和健康，這也是要治療PWS的一個重要因素，因為70-80%的胎記是出現在頭部和頸部的。三叉神經葡萄酒色斑(PWS)的解剖位置和皮節分布(臉部各區域的眼科，上顎，下顎分支的三叉神經)可能會引起眼科以及中樞神經系統併發症(青光眼和斯特季-韋伯綜合症)的發生機會。另外還被證實會有其它PWS相關的紊亂發生，進一步突出表明有效治療的需要。雷射凝固法是基於通過雷射照射的光熱反應所引起的選擇性破壞血管。當血管被血紅素優先吸收的波長(一般為580-600NM)雷射照射，照射能量轉化成熱能後由所謂晶核形成中心(血紅細胞)傳播到低熱區域。基於擴散和對流的程度，以及血管壁和血管周組織的情況，超臨界溫度(> 70°C )的產生和擴散引起血的熱變性。由於用於雷射凝固法的波長沒有被血管周圍組織很好吸收，當雷射脈衝在目標脈管的熱緩解時間(為組織通過傳播擴散和對流流失50%之熱能所需要的時間)持續進行時，非血管組織不會受到損害。適當脈衝時，正常尺寸的毛細管(內徑4-6 μ m)以及毛細血管後小靜脈(內徑大概816 μ m)，具有相對較短的熱緩解時間以及熱質量，所以即使在較長的脈衝時間內也不會受傷害，因為這些脈管中的熱傳遞不會有熱變溫度的產生。血管腔內的超臨界溫度的產生導致血變性，接著會引發熱凝結物的形成其是不規則變性物質團(如血漿蛋白，血紅細胞等)其是形成與超臨界加熱的區域。因雷射照射的形成人類血管中的熱凝結物在組織學治療PWS的分析已得到證實。[Hohenleutner U et al. J Invest Dermatol. 1995 May ； 104 (5) :798-802. , Fiskerstrand EJ et al. J Invest Dermatol. 1996 Nov ； 107 (5) :671-5]and in animal models[Heger M et al. Opt Express. 2005 Feb; 13 (3) :702-15,Suthamjariya K et al. J Invest Dermatol. 2004 Feb ； 122(2) :518-25, Bezemer R et al. Opt Express. 2007 Jul ；15(14) :8493-506].選擇性光熱解的效率取決於不可避免的內在的綜合因素表皮色素增生，血和脈管疊生引起的光遮擋，以及PWS解剖和形態。總得來說，治療效果和增加的黑色素含量，血管密度和重疊度，以及脈管直接和深度呈負相關，假如這些因素的顯著的程度與光穿透深度呈反比的話。因此，由脈管腔內部均勻光子分布(就像直徑較大的脈管)引起的次臨界等溫線可能會導致不完全的光致凝結，也有可能會因為整個脈管(比如處在較深位置或者光影下的脈管)的熱產生不足而阻礙(而不會產生不完全的光致凝結)。管內迴轉通量率 (J/cm2)對急性組織和血液動力反應，以及最終病灶清除，都有深遠的影響，其通過真皮血容量中的炎症介導的減少而產生。整個血管腔容積內雷射引起的超臨界溫度的發生會引起廣泛的熱壞死，以及由熱處理過的成膠狀的含有色體的血紅細胞引起的血管堵塞。臨床上而言，脈管腔內的完全光致凝結與良好反應的病灶有關[Fiskerstrand EJ et al.J Invest Dermatol. 1996 Nov ； 107 (5) :671-5]，對應大概 40 % 的案例[Greve B et al. Lasers Surg Med. 2004 ；34 (2) :168-73]。相反，適度反應(20-46% )以及難治 (14-40% )的PWS具有術後脈管形狀的特徵是，脈管部分光致凝結的程度隨半阻塞性熱凝結的變化而變化。由於現有的雷射治療方法在大約60%的案例中都是無效的，本案的目的就是要提供一種方法提高清除率。

發明內容
因此本發明提供一種與已知雷射凝固法(通過選擇性光熱解)一起使用的輔助手段，其通過解決目標血管阻塞從而提高了病灶清除率。本案研究表明在PWS脈管類似物中(倉鼠背側皮膚摺疊靜脈)，光熱響應繼血流動力反應之後發生，即初級和次級止血是在雷射引起的管內損傷之後發生的。有越來越多的證據顯示錯誤摺疊的蛋白質以及因此產生的被稱作澱粉體的纖維結構有能激活血小板 (Herczenik E et al. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2007 Jul ；27 (7) :1657-65)和接觸活化途徑的傾向(Maas C et al.J Clin Invest. 2008 Sep ； 118 (9) :3208-18).由於熱凝結是由熱變性(例如，錯誤摺疊的)蛋白質組成，這些雷射引起的病灶可能會形成除受熱折磨的內皮之外的初級和次級止血開始的基礎。初級止血反應是以雷射誘導病變周圍血小板聚集為特點(熱凝固仍然附著在血管壁上的情況)或者在引起熱凝固物的血管壁(雷射脈衝後熱凝固脫落後的情況下) [Bezemer R et al. Opt Express. 2007 Jul ；15(14) :8493-506]。我們已經證明，5，6-羧基螢光素標記的血小板堆積在熱凝結物和雷射照射血管壁上(圖1IA-F，M，0)以及血栓形成高峰在6. 15min，這標誌著纖溶隨後發病。這個過程被輸液抗-糖蛋白Λα抗體部分抑制， 表明血小板(初期止血)與血流動力反應有密切關係。此外，灌輸肝素對病灶的大小(圖 IG-L，N, 0)表現出一個阻礙的作用，表明凝血級聯(第二期止血)(圖2)對雷射誘發的血栓形成也發揮了作用。進一步表明，血栓和/或抗纖維蛋白溶解藥劑有能力通過擴增分別在半光凝血管內的血栓形成和血栓完整保存，以改善腔內阻塞，這將通過隨之而來的慢性炎症反應及配套血管的重構，而使皮損清除率最優化。PWS的選擇性光熱以及血管有關病症的的療效可以因此通過選擇性光熱之前的血栓和/或抗纖維蛋白溶解藥劑的施用而得到提高。
根據第一個方面，本發明涉及一種化合物的使用，其能夠在血栓的形成和維護方面施加影響以治療血管和血管有關的病症，特別是通過選擇性光熱作用治療的PWS。這類化合物是血栓和/或抗纖維蛋白溶解的藥劑。對非凝血病患者進行血栓和/或抗纖維蛋白溶解物質腸外給藥的潛在危險就是止血的「檢查與平衡」系統。因此，藥品的療效，最好應被限制到只有需要治療的區域，而自然發生的止血的調控不會受到影響。為了達到這個目的，本發明提供一種在血管和血管有關的病症的治療中使用的給藥系統(DDS)，其包括一個給藥平臺，包括至少一種化合物能夠在在需要治療的血管中的血栓的形成和/或維護施加影響的合物。該合併治療方法被稱為特定位置的藥物雷射治療 (SSPLT)，即同一種藥品-封裝的給藥系統結合使用的選擇性光熱分解。SSPLT的主要組成部分如圖3所示。本發明的給藥系統最好具有以下特徵以最小的被動釋放封裝藥而具有穩定的理化性質，因為藥物的外殼包封將限制其生物藥效率，而具有高包封率，具有定位雷射損傷部位的能力，是一種有效的藥物釋放機制，具有低免疫原性。脂質體的組成本案的給藥系統可以是任何現有的平臺，包括脂質體，聚合物藥物載體，細胞和鬼影細胞。鬼影細胞是指那些細胞質內容被細胞裂解液去除並被一種溶液取而代之的細胞， 例如，生理緩衝液可能含有一種藥劑。然而，脂質體，由於淺顯的製備技術(允許批量生產)，可操作性，並高效率封裝親水性和親脂性分子的能力，而構成了最有利的載體系統。除了固有的非毒性中性磷脂，脂質體可以在成分上被修改，以促成本案給藥系統的獨特的先決條件。較好地，具有脂質體給藥系統的脂質主要為磷酸膽鹼、磷酸乙醇胺、磷脂酸、磷酸甘油、磷酸絲氨酸、二磷酸肌醇、鞘氨基醇、甘油磷酸酯、甘油、乙二醇、沒食子酸丙三醇、和甘油-3-琥珀酸。脂醯基鏈最好為十三醯基(13碳)、十四醯基(14碳)、肉豆蔻烯醯基(14碳J幌式烯烴在Δ 9)、反肉豆蔻烯醯基(14碳，反式烯烴在Δ 9)、十五醯基(15碳)、十六醯基(16 碳)、棕櫚油醯基(16碳，順式烯烴在Δ9)、反棕櫚油醯基(16碳，反式烯烴在Δ9)、植烷醯基(16碳，甲基在Δ 3，7，11，15)、十七醯基(17碳)、十八醯基(18碳)、十八碳烯醯基(18 碳，順式烯烴在Δ6)、油醯基(18碳，順式烯烴在Δ9)、反油醯基(18碳，反式烯烴在Δ 9)、 亞油酸醯基(18碳，順式烯烴在Δ 9，12)、亞麻醯基(18碳，順式烯烴在Δ 9，12，1 ，十九醯基(19碳)、二十醯基(20碳)、二十烯醯基(20碳，順式烯烴在Δ 11)、花生四烯醯基(20碳， 順式烯烴在Δ5，8，11，14)，二十一醯基(21碳)、二十二醯基(22碳)、二十二碳烯醯基(22 碳，順式烯烴在Δ 13)、二十二碳六烯醇基(22碳，順式烯烴在Δ 4，7，10，13，16，19)、二十三醯基(23碳)、二十四醯基04碳)、二十四碳烯醯04碳，順式烯烴在Δ 15)。油脂具有一個單醯基(1-醯基-2-羥基-sn-甘油-3頭基)或醯基(1_醯基_2_醯基-sn-甘油-3頭基)的配置。體內循環時間可以通過適當的尺寸來提高。業內熟知的調整尺寸的方法例如 Awasthi VE ET AL研究醫藥，2003年03月06日；253 (1-2) :121_32，中所描述的。適合作為發明的給藥系統中作為給藥平臺使用的脂質體大小為30和1500納米之間，最好是90至200 納米。[Liu D et al. Biochim Biophys Acta. 1992 Feb 17 ；1104(1) :95_101]，較佳的是在160-200納米，最好約180納米。空間位阻穩定為了防止脂質體的聚集和融合，並提高循環半衰期，脂質體最好是空間位阻穩定的。空間位阻穩定的方法例如在[Klibanov AL et al. FEBS Lett. 199007,30 ；268(1) 235-7, SeniorJ et al 中有描述· Biochim Biophys Acta. I99I 年 2 月 11 ;1062 (1) :77-82, Allen TM et al. Biochim Biophys Acta. 1991 年六月 1 日；1066(1) :29-36]。本案的較佳實施例是通過嫁接聚(乙二醇)(聚乙二醇，也稱作聚氧化乙烯(PEO)或聚氧乙烯(POE))到脂質體表面，此方法在以下文章中有描述[Klibanov AL et al. FEBS Lett. 1990年6月30 日；268(1) :235-7, Allen TM et al. Biochim Biophys Acta. 1991 年 6 月 1 日；1066(1) 29-36，Blume G et al. Biochim Biophys Acta. 1990 年 11 月 2 日；1029(1) :91_7]。這會受以下因素影響，包括與脂質成分(通常是磷脂醯乙醇胺(PE)或磷脂醯甘油(PG))共價連接的線性或分枝型聚乙二醇[Torchilin VP et al. J Pharm Sci. 1995年9月；84(9) 1049-53]的摩爾分數，或者連接到脂雙層的疏水錨分子，如，但不局限於，膽固醇，聚(環氧丙烷)(PPO)，或單或雙醯基(圖4)。聚乙二醇聚合物「密集的構象雲」在脂質體表面的出現，PEG接枝膜和血液成分之間的排斥相互作用，PEG化製劑的親水性，親水性的聚乙二醇化脂質體表面的血漿蛋白吸附率的降低產生所謂的所謂的λ隱身「屬性，藉此網狀內皮系統的細胞迅速清除會被嚴重阻礙。這些隱形技術的使用也是本發明的一部分。在其它實施例中，脂質體是長循環的。可以通過各種技術使脂質體長循環。舉例包括共價鍵連接的聚合物，嵌段共聚物，和/或以下多嵌段共聚物之一聚(乙烯醇)(PVA)， 聚縮水甘油，被激活為琥珀醯亞胺酯並和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-乙烯基吡咯烷酮)(PVP)，被激活為琥珀醯亞胺酯並和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-丙烯) 嗎啉(PAeM)，聚乙基-2-惡唑啉)(PEOZ)，聚甲基-2-惡唑啉)(PMOZ)，聚丙烯醯胺，聚(N-異丙基丙烯醯胺)(NIPAM)，聚[Ν-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺](HPMA)，聚(苯乙烯-順丁烯二酸/ 二酸酐)(SMA)，聚(二乙烯基醚順丁烯二酸酐)(DIVEMA)，以及/或以下一種疏水改性多糖茁黴多糖，葡聚糖，甘露聚糖和/或聚唾液酸，或者以下葡萄糖醛酸之一棕櫚醯葡萄糖醛酸苷(PGIcUA)，和/或棕櫚醯半乳糖醛酸苷，或者選自第一類單唾液神經節苷酯(GMl)(，第三類單唾液神經節苷酯(GM3)的唾液酸衍生物。本案的另一實施例中，陰離子脂質體，即部分由陰離子成分組成的脂質體是長循環，通過吸附(電吸引力)聚合物，嵌段共聚物，和/或由以下陽離子殘留之一組成的多嵌段共聚物季銨化聚乙烯基吡啶)(PEVP)，聚(乙烯亞胺)(PEI)，聚甜菜鹼(PB)。可解吸附/可光裂解聚乙二醇的空間位阻穩定如下面介紹，有關脂質體配方(其中血漿成分和脂質體表面之間是直接接觸的) 的幾個實施方案最終可能會無法從將低免疫原性聚合物嫁接到脂質體表面獲益。空間位阻穩定，可能會阻礙目標血漿成分到達脂質膜成分。相反的，空間位阻不穩定的藥物載體的全身給藥的，尤其是那些具負仏切電位，使這些藥物載體將在調理速度大大提高。那些外表面具有嫁接肽，抗體或抗體片段的空間位阻不穩定的藥物載體也被網狀內皮系統攝取吸收。
為了規避這種分裂，本案給藥系統的選擇可以通過可解吸附或可裂解的空間位阻穩定劑獲得穩定，藉此暴露本發明所描述的用於調解抗纖維蛋白溶解或血栓的反應給藥系統結合的成分。在第一較佳實施例中，規避這種分裂可以通過將可解吸附聚乙二醇-衍生PE(聚乙烯)，例如醯基鏈長度不同的PEG-PE，併入陰離子脂質體(而獲得)對此在關於磷脂醯絲氨酸(PS)脂質體的[ChiuGN et al. Biochim Biophys Acta. 2002 Feb 18 ； 1560(1-2) :37-50]and[Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2003 Jun 27 ；1613(1-2) 115-21]中已經有描述。根據本案的另一實施例，該給藥系統包括含有PEG修飾的plasmenyl型血脂的脂質體。plasmenyl型脂質體或縮醛磷脂可以是包含一個線性醯基鏈，在sn-Ι (縮醛磷脂)和 sn-2(雙縮醛磷脂)位置，通過從乙烯醇乙烯殘留的乙醚血脂，和一個在Ai而不是典型的酯的烯烴，通常一個膽鹼磷酸或磷酸乙醇胺sn-3碳的甘油]，連接甘油骨幹。膽鹼磷酸主要位於心臟(-50%的PE包含烯醚)，保護細胞受單線態氧(1O2)和活性氧(ROS)的破壞性影響。1O2和ROS在電乙烯基醚鏈攻擊縮醛磷脂形成一個單鏈的表面活性劑(具有脂肪醛和 dioxymethyl作為副產品)該表面活性劑可以誘導層狀到六角晶型相轉變，(I型縮醛磷脂醯膽鹼膠束結構和一個II型膠束結構縮醛磷脂醯乙醇胺)。由於這些乙烯基醚是很容易受到酸性和氧化條件影響，只要具備這些條件，他們就可以適用於各種給藥系統的相關廣泛應用中。其中一種可能的應用是關於含聚乙二醇衍生di縮醛磷脂脂質體的聚乙二醇的光氧化去除。在本實特定施例中，含有凝血磷脂的脂質體以及表面嫁接有血栓和/或抗纖維蛋白溶解的化合物的脂質體可以通過通過摻入摩爾分數的聚乙二醇衍生縮醛磷脂而避免被調理作用。這些聚乙二醇-縮醛磷脂的合成路線是已知的，比如在下面文獻中就有提到 [Thompson DH et al. Methods Enzymol. 2004 ;387 153-68]。PEG存在於外表面有利於防止生物活性的化合物與各自的等血漿/細胞目標交互影響。脫PEG化的脫保護，從而激活給藥系統，可以通過由本分所描述的給藥系統內置光敏劑產生1O2和R0S，以及隨之產生的乙烯醚裂解和PEG的釋放，而實現。脫PEG化方法(圖4)可以和下面要描述的光敏劑的促凝SSPLT很好的結合使用。封裝/嫁接的方法在本實施例中，能夠對血栓的形成和維護施加影響的藥物活性的化合物，不是封裝在水艙就是在脂質體的磷脂雙分子層。在封裝多個化合物的情況下，該化合物可在脂質體的水隔室，或者在雙層或連結到一個給藥系統(DDQ組成。不同化合物可以在不同的隔室內(圖4)。初級止血和二次止血以及纖維蛋白溶解級聯的分子組成只能是有針對性的化合物，其不適合脂質體封裝(例如，(短的，寡的，聚)的肽，(重組，修改或純化)的蛋白質，抗體或Fab片段，因為他們是耐熱(在熱敏脂質體的情況下)且太大而無法通過跨膜通道。在另一實施例中，這類化合物可能是(共價鍵)連接到一個磷脂化合物(如1， 2- 二醯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)，一個嵌入雙層的錨定分子，脂質體的空間位阻穩定的聚合物，例如PEG，使聚合物可能含有連接藥物活性化合物(圖4)的R-基團或側鏈。根據本案的另一實施例，這些化合物可以在雷射治療前或後直接以未封裝形式一起注入全身血液循環。例如，這可以適用於抗纖溶藥物，比如，氨甲環酸(TA)、ε-氨基己酸 (ACA)、ρ-氨甲苯酸(AMBA)和4-氨甲基-雙環-2，2，2壬酸(AMBOCA)，因為這些藥物只有在出現血栓時才會產生影響。因此，這些藥物降低了打亂止血平衡的風險，特別是在亞臨床型，輔助治療劑量給藥時。抗纖維蛋白溶解劑能夠對待治療血管內血栓的形成和維護施加影響的化合物可以將此影響以任意程度施加在纖溶途徑，組織因子或接觸激活途徑(二級止血)，或血小板功能(初級止血) 上。纖溶途徑包括將纖維蛋白溶酶原轉換成纖維蛋白溶酶，將跨聚合纖維蛋白裂解成可溶性纖維蛋白降解產物，從而分解血栓。反過來纖維蛋白降解產物與凝血酶競爭，阻礙纖維蛋白原轉化為纖維蛋白。圖2為纖溶系統的示意圖。根據本發明，光凝形成血栓的纖維蛋白溶解被抑制。而通過醫藥幹預獲得的纖維蛋白溶解的抑制將保留血栓的完整性，促進雷射誘導血栓形成期間和之後的血栓的穩定，拖延或防範纖溶和剪應力引起的逐步血栓溶解的爆發。待封裝於給藥系統的適當的纖溶定位化合物，特別是脂質體內，為纖溶系統一個或多個組成成分抑制劑，其促進形成纖維蛋白溶酶，或纖維蛋白降解產物或纖溶系統的組成成分，或他們的興奮劑，並阻止纖維蛋白溶酶或纖維蛋白降解產物的形成。該化合物的第一實施例是一種纖維蛋白溶酶(原形式)抑制劑。纖溶酶，其是在血液凝固發作時慢慢形成，主要負責裂解構成血栓的網狀網絡的交叉聚合纖維蛋白鏈。纖維蛋白溶酶(原形式)抑制劑選自脂肪酸組，其包括花生四烯酸，油酸，硬脂酸(可以被併入脂質體給藥系統的脂雙層)，最好選自合成纖維蛋白溶酶(原形式)抑制劑組，其包括TA， ACA, AMBA, AMB0CA，該抑制劑為TA或ACA為佳，最好是TA.所有文中提到的纖維蛋白溶酶 (原形式)合成抑制劑都是PH值化!1值=7.4)的中性兩性離子並封裝在脂質體的水隔室。TA是一種抗纖維蛋白溶解的賴氨酸類似物，在臨床上被廣泛用來防止在心臟外科手術和其它高侵入性手術的術後失血。TA也為血友病及血管性血友病患者，以及月經過多婦女的預防藥。TA通過佔領其五個賴氨酸結合位點來完全抵消纖維蛋白溶酶(原形式)的生物活性，從而抑制纖維蛋白溶解所需的一個分子複合物的形成。TA的藥代動力學已被廣泛研究並且TA在規定的劑量測定上被認為是安全的美國食品和藥物管理局(FDA)批准的應用程式#01擬80(補充#008)和應用(補充#009#01擬81)，批准日期1999年9月9日。 TA構成發明的給藥系統較佳化合物。根據本案一較佳實施例，該化合物是一種纖維蛋白溶酶抑制劑。例如可以是纖維蛋白溶酶的直接抑制劑，包括α 2-抗纖維蛋白溶酶，α 2-巨球蛋白和凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)。纖維蛋白溶酶抑制劑可以是自純化和/或重組α 2-抗纖維蛋白溶酶組，α 2-抗維蛋白溶酶多肽，α 2-巨球蛋白，純化和/或重組TAFIjP /或抑肽酶。根據本案另一較佳實施例，該化合物是組織型纖維蛋白溶酶原激活物(tPA)或尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活物(UPA)的抑制劑。tPA和uPA，其被損壞和活化的內皮細胞分泌進入血液，通過將血栓被困纖維蛋白溶酶原轉換成纖維蛋白溶酶來調節纖維蛋白溶解。 一個正反饋環傳播可以促進纖維蛋白溶酶的纖溶狀態，因為纖溶酶會通過產生更活躍形式的tPA和uPA來進一步刺激纖維蛋白溶酶的生成。tPA和UPA被纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑1 (PAIl)和纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑(PAI-幻所抑制。TPA抑制劑最好為分離純化human PAI1，分離和純化的 human PAI2，重組human PAI1，重組人PAI2，修改human PAI1， 修改human PAI2，抑制抗體，或其衍生(例如，Fab片段)，能抑制tPA的(聚，寡，短)縮氨酸(參見US-6, 159，938)。uPA抑制劑較佳為分離純化human PAI1，分離和純化的human PAI2，重組 human PAI1，重組 human PAI2 JfShuman PAIl ,human PAI2 修改，抑制抗體，或其衍生(例如，Fab片段)，針對uPA的，抑制抗體，或它的派生形式(例如，Fab片段)，針對 UPA受體(uPAR)，能抑制uPA的(聚，寡，短)縮氨酸(參見美6，159，938)。在另一實施例中，該化合物是一種PAI1或PAI2興奮劑，即一種可以誘導分泌PAI1 或PAI2的製劑。就PAIl而言，此興奮劑是一種從玻連蛋白之S362-A380片段衍生出的被稱為BP4的合成肽，或為SFLLRN的合成肽，其通過連結蛋白酶激活受體_1 (PAR-I)促進PAIl 分泌。就PAI2而言，此興奮劑是一種促進PAI2分泌的合成肽，例如，SLIGKV連結蛋白酶激活受體-2(PAR1)，或者為防止生理條件下PAI2聚合的合成肽，例如 TEAAAGTGGVMTG(RCL-PAI2)and SEAAASTAVVIAG(RCL-AT)，其可能會損害 PAI2 循環方面的功能[Mikus P，Ny T.絲氨酸蛋白酶纖溶酶原激活物抑制因子2型細胞內的聚合。J Biol Chem.。1996 年 04 月 26 日；271 (17) :10048-53]。促凝-組織因子塗徑和接觸激活塗徑除了給藥系統的抗纖維蛋白溶解成分，還可封裝一個作用於作用於一個或多個的二次止血劑成分，而且到促凝血反應的製劑，即組織因子和接觸激活途徑(圖幻。凝血系統包括一個複雜的凝血因子級聯(如凝血因子VII，或fVII)其轉化為活性形式(例如， fVIIa)，藉此一個激活的凝血因子接著可以激活下一個酶原。組織因子和接觸激活途徑導致纖維蛋白原(FL)轉換為(FIA)，藉此通過交聯血小板和在血栓到處形成網狀網絡來凝聚和進一步鞏固血塊。調解二次止血或一個或多個組件的二次止血抑制劑成分的拮抗劑的化合物可導致促凝狀態。組織因子和接觸激活途徑的介體的例子包括(一)純化的形式，重組形式的， 或作為市售的藥物製劑的一部分的fll (a) ；fill (組織因子，TF)，純淨的形式或重組形式的fV(a)；純淨的形式，重組形式的，或作為市售的藥物製劑的一部分的fVII ；純淨的形式或重組形式的fVIII(a)；純淨的形式，重組形式的，或作為市售的藥物製劑的一部分的fIX(a)；純淨的形式，重組形式的，或作為市售的藥物製劑的一部分的fX(a)；純淨的形式或重組形式的fXI (a)；純淨的形式或重組形式的fXII ；純淨的形式或重組形式的 fXIII (a)，前激肽釋放酶(PK)，激肽釋放酶，分子量激肽原(HMWK)。促凝血-凝血抑制劑的拮抗劑為了是凝血程度與血管損害的程度成比例，很多凝血因子抑制劑在血栓形成過程中發揮了抗凝作用。最顯著的抑制劑是抗凝血酶III (ATIII)，血漿源性糖蛋白，其抑制接觸活化(flXa，FXa, fXIa, fXIIa)和組織因子(fVIIa)途徑，以及在共同通路產生的flla的在共同通路。ATIII還抑制激肽釋放酶。第二個重要組成部分是C蛋白，維生素K依賴性絲氨酸蛋白酶，其是通過內皮細胞外膜表面的凝血酶約束血栓調節蛋白激活，在輔助因子蛋白S.存在時形成活化的蛋白C(APC)。APC是負責降解fVa和fVIIIa。第三個主要的抗凝血劑是組織因子途徑抑制物(TFPI)，為可逆性地抑制fXa的單鏈多肽，並且當合成於fXa時，隨後還可以抑制fVIIa-TF聯合體。最後，蛋白質Z依賴性蛋白酶抑制劑(ZPI)是抑制 fXIa和fla的血源性絲氨酸蛋白酶(絲氨酸蛋白酶抑制劑)。後者發生在結合蛋白質Z，是一種可以另fXa-退化加快1000倍的糖蛋白。在另一實施例中，選擇的給藥系統可能封裝或嫁接凝血抑制劑的拮抗劑，其包括 ATIII，蛋白C，蛋白S，APC，血栓調節蛋白，TFPI, ZPI，蛋白質Z。凝血抑制劑的拮抗劑可以為(短，寡，聚)肽，蛋白質(重組，修改或純化)，及抗體或Fab片段。拮抗劑可封裝在給藥系統例或嫁接到一個磷脂成分，錨定分子或如上所述的用於空間位阻穩定的高分子鏈。目前可用的促凝劑和現行有效之抗凝血的拮抗劑(如抗體)有時不適合用於封裝入(熱敏)脂質體，因為這些化合物是耐熱蛋白質，因為其大尺寸可能會破壞細胞膜的通透性。此外，這些類的藥物需要精細的GMP控制的配置和處理，其往往轉化為產品的高定價。促凝血劑之-光敏劑在另一實施例中，本發明提供一種替代方法來避免使用「傳統的」促凝血劑。這種方法是基於將光敏劑列入到脂雙層的疏水核心或脂質體的水隔室(在這種情況下，光敏劑通過親水性基團功能化)。光敏劑是一種分子，當其通過輸入能量(如光)進入電子激發態時，在電子衰變到基態分子得過程中，將部分能量轉移到鄰近的分子，通常的氧分子。光敏劑主要用於光動力療法(PDT)，作為電子供體，並促進形成高度細胞毒性和凝血的單線態氧(1O2)和活性氧物種(ROS)。在pdt過程中產生這些反應的瞬態過程導致不可逆的組織破壞，賦予含有光敏劑的組織量以一種選擇性的治療效果。在選擇促凝給藥系統的情況下，活性氧物種的形成，可能會損壞那些具有血栓的細胞並進一步破壞血管壁，從而導致更多的血栓形成。在另一實施例中，光敏劑是封裝在一個單獨的脂質體配方具有促凝物質的屬性一個給藥系統。適合本發明使用的的光敏劑可以是酞菁，萘酞菁，以及綠素類和菌綠素中的內源性卟吩。特別對本發明有用的光敏劑是一般的分子C32H18N8(酞菁)，C48H2GN8(萘酞菁)， C2tlH16N4 (綠素類)或C2tlH18N4的(菌綠素)，如圖5所示，其也可以由以下一個或多個R-基團取代，包括H，F, CF(CF3)2, 0(CH2)nCF3, Cl, Br, CHCH2, (CH2)nCH3, (CH2)nCOOH, CONH(CH2) nNH2, (CH2) nC0NHCH2CH2NH2, CONH (CH2) nCH (NH2)COOH, CH2C0NHCH (CH2COOH) COOH, 0 (CH2) nCH3, S(CH2) nN (CH3)2, SO2NH (CH2) nCH3, SO2NH (CH2) nN (CH3)2, SO2N [ (CH2) nCH3]2, So2NHCH2CH(CH2CH3) (CH2) nCH3, C(CH3)3, OC[ (CH2) nCH3]3, OCH[CH(CH3)2J2, O(CH2) nN(CH3)2, O(CH2) nN(CH3)3, SC6H5， OC6H5，O(C6H4) C [(CHs)2] (C6H5)，O(C6H3) (COOH)2, O(C6H3) [COO (CH2) nCH3]2, C6H5, SO2NHCH(CH3) CH2(C6H3) (OCH3)2, SO3, SO2Cl, N(CH3)2, COOH, NO2, CH3, CONH2, CH2NH2,以及 R，基團選自 H， CH3, A1C1, A10H, AlOSi (CH3)3, AlOSO3, Co, Cu, Li, GaOH, GaCl, Fe, FeCl, FeO2, Pb, Mg, Mn, MnCl, SiCH3Cl, Si (OH)2, Si (Cl)2, Si {0C[ (CH2)nCH3]3}2, Si [COCO(C6H4) (CH2)nCH3]2, Si [OSi (CH3) 2 (CH2) nN (CH3) 2] OH, Si
2, SiCH3, Si [OSi (CH3)2C(CH3)2C(CH3)J2，Ni, SnO, Sn(Cl)2, Ti (Cl)2, TiO, V0, Zn, Ag, Cd, Ge，InCl.酞菁適合的例子是^H，31H-酞菁；2，9，16，23_四叔丁基-29H，31H-酞菁；1,8, 15，22-四(苯基硫醇)-29H，3IH-酞菁；2，9，16，23-四(苯基硫醇)-29H, 3IH-酞菁；2，9， 16，23-四苯氧基-29H，3IH-酞菁；1，4，8，11，15，18，22，25-八丁氧基-29H, 3IH-酞菁；2，3， 9，10，16，17，23，24-Λ (辛氧基)49Η，31Η-酞菁；四(4-枯基苯氧基)-酞菁；29Η，31Η，1 ； 4，8，11，15，18，22，25-八氟-2，3，9，10，16，17，23，24-八全氟(異丙醇)_ 酞菁；29Η,31Η, 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六烷基，2，2-三氟乙氧基)酞菁； 鋅酞菁；四硝基鋅酞菁；鋅2，9，16，23_四叔丁基-29H，31H-酞菁；鋅2，9，16，23_四(苯基硫醇)49H，31H-酞菁；鋅 1,4,8,11,18,18,22,25-八丁氧基-29H，31H-酞菁；鋅 2，3， 9，10，16，17，23，24-八(辛氧基)-29H，31H-酞菁；1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22， 23，24，25-十六全氟-四紮31!1-酞菁；鋅 1，4，8，11，15 18，22，25-八氟-2，3，9，10，16，17， 23，24-八全氟(異丙醇)_ 酞菁；鋅 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六烷基-(2，2，2-三氟乙氧基)酞菁；鋅2，39，10，16，17，23，24-八[(3，5-二戊羰氧基)苯氧基]-酞菁；鋅2，3，9，10，16，17，23，24-八[(3，5-雙羧酯)苯氧基]-酞菁；鋅四(2， 4-dimetil-3-戊氧基)-酞菁；鋅四(N，N, N-三甲基氨乙氧基)-酞菁；鋅1，2，3，4，8，9， 10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氯-29!1，31!1-酞菁；鋅 2，3，9，10，16 17，23，24-八 [(N，N-二甲氨基)乙基硫]-酞菁；鋅酞菁-4，4』，5」，5」』-四磺酸；氯化鋁酞菁；氫氧化鋁酞菁；氯化鋁4，11，18，25-四(氯)_酞菁；氯化鋁1，8，15，22-四(苯基硫醇)49H，31H-酞菁；氯化鋁2，9，16，23_四(苯基硫醇)49Η，31Η-酞菁；鋁三乙烯矽氧烷鋁1，4，8，11， 15，18，22，25-八丁氧基 _29Η，31Η_ 酞菁；鋁 1,2,3,4,89,10，11，15，16，17，18，22，23，24， 25-十六氯-29Η,31Η-酞菁；硫酸鋁 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氯-酞菁；氯化鋁四(磺胺二甲唑)49Η，31Η-酞菁；氫氧化鋁磺胺二甲唑酞菁；氫氧化鋁 1，8- 二(磺胺二甲唑)酞菁；氫氧化矽1，8，15-三(磺胺二甲唑)酞菁；二氯化矽酞菁；二羧基矽酞菁；氯甲基矽酞菁；二羧基矽2，9，16，23-四叔丁基-29Η，31Η-酞菁；二羧基矽2， 3,9,10,16,17, 23, 24-A (辛氧基)49Η，31Η-酞菁；二羧基矽二(三己基甲矽烷基氧化物) 酞菁；二(4-叔丁基)苯甲酸矽酞菁；二(3-噻吩)醋酸矽酞菁；二 O-甲氧基苯基)醋酸矽酞菁；二(3-甲氧基苯基)醋酸矽酞菁；二甲氧基苯基)醋酸矽酞菁；二(2，5-二甲氧基苯基)醋酸矽酞菁；雙(3，4_ 二甲氧基苯基)醋酸矽酞菁；二(3，4，5_三甲氧基苯基) 醋酸矽酞菁；雙(3，4-二甲氧基)苯甲酸矽酞菁；二 3-(3，4-二甲氧基苯基)丙酸矽酞菁； 雙-4-(3，4-二甲氧基苯基)丁酸矽酞菁；羧基矽(二甲氨基)_己酯甲矽烷基氧化物酞菁； 羧基矽(二甲氨基)-戊酯甲矽烷基氧化物酞菁；羧基矽(二甲氨基)-丁酯甲矽烷基氧化物酞菁；羧基矽(二甲氨基)_丙酯甲矽烷基氧化物酞菁；羧基矽(二甲氨基)_乙酯甲矽烷基氧化物酞菁；羧基矽(二甲氨基)_甲酯甲矽烷基氧化物酞菁；矽酞菁雙甲基氧乙烯； 鈷酞菁；鈷 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氟 _29Η，31Η_ 酞菁；銅酞菁；銅1，8，15，22-四(磺胺二甲唑)酞菁；銅2，9，16，23-四叔丁基49Η，31Η-酞菁；銅 3,10,17,24-四叔丁基-1，8，15，22-四(二甲氨基)49Η，31Η-酞菁；銅 1，4，8，11，15，18， 22，25-八丁氧基-29禮31!1-酞菁；銅 2，3，9，10，16，17，23，24-八(辛氧基)49Η，31Η-酞菁；銅四(4-枯基苯氧基)_ 酞菁；銅 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氟-29Η，31Η-酞菁；聚(銅酞菁)；二鋰酞菁；氯化鎵酞菁；氫氧化鎵酞菁；鐵酞菁；氯化鐵
14酞菁；鐵2，9，16，23_四(磺胺二甲唑)_酞菁；鉛酞菁；四(4-枯基苯氧基)鉛酞菁；鎂酞菁；錳酞菁；氯化錳酞菁；鎳酞菁；氫氧化鎳3，10，17，24-四(磺胺二甲唑)_酞菁；氫氧化鎳4，11，18，25-四(磺胺二甲唑)酞菁；鎳 1，4，8，11，15，18，22，25-八丁氧基-29H，31H-酞菁；氧化錫酞菁；鈦酞菁；二氯化鈦酞菁；釩2，9，16，23-四苯基-29H，3IH-酞菁；釩3，10， 17，24-四叔丁基-1，8，15，22-四(二甲氨基)-29H，3IH-酞菁；其它可能的金屬鈀，鍺，釕， 鉬，陸，釓。萘酞菁均選自，2，3_萘酞菁；2，11，20，四_四叔丁基_2，3_萘酞菁；5，9，14，18， 23，27，32，36-八丁氧基-2，3-萘酞菁；氯化硼sub_2，3-萘酞菁；鈷2，3-萘酞菁；銅2，3-萘酞菁；銅5，9，14，18，23，27，32，36-八丁氧基-2，3-萘酞菁；氯化鎵2，3_萘酞菁；鎳5，9， 14，18，23，27，32，36-八丁氧基_2，3-萘酞菁；二氯化矽2，3-萘酞菁；二羧基矽2，3-萘酞菁；二辛基氧化矽2，3_萘酞菁；矽二(三己基甲矽烷基氧化物)2，3_萘酞菁；錫2，3_萘酞菁；釩2，3-萘酞菁；釩2，11，20，29-四叔丁基_2，3-萘酞菁；鋅2，11，20，四-四-叔丁基-2，3-萘酞菁。如上所述，使用光敏劑的另一個優點是，除了上述的觸發效果，活性氧物種的形成可能進一步破壞排列於血管壁的內皮細胞，從而導致加劇了血栓的形成。促凝血劑-陰離子脂質體另一個凝血級聯的介體是磷脂醯絲氨酸(PQ，一個通過一個ATP依賴的轉移酶行動不對稱分布在靜息血小板胞漿膜的陰離子磷脂。血小板活化後，流下稱為血小板衍生微粒，其已經失去了不對稱PS分布，從而PS易位到外胞質膜。血小板衍生微粒提供一個通過凝血酶原複合物凝結增殖所需的陰離子環境(圖2)。PS結合凝血酶上的兩個部位，fXa的兩個部位，fVa上的四個部位以誘導這些有助於凝血形成的蛋白質的構象變化。在這方面，有研究表明，[Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2003年06 月 27 ;1613 (1-2) :115-21]， 由PS組成的陰離子脂質體，磷脂酸，[Jones ME et a 1. Thromb Res. 1985年9月15 ；39 (6) 711-24]並在較小程度上，磷脂(PG)和磷脂醯肌醇(PI)能夠調解凝血和凝血酶的形成。在另一實施例中，由PS，PA, PG或PI陰離子磷脂組成的脂質體是用於SSPLT的血栓成分，以促進通過凝血酶原複合物促進雷射弓I起的凝血。這類脂質體(圖4)可封裝或嫁接本發明使用的抗纖維溶解劑，促凝血劑，和血小板激動劑，並且可以如上所述的是空間位阻穩定的。在另一實施例中，該空間位阻穩定可以通過加入2-6%的可光裂解PEG來實現，從而使陰離子膜在脫PEGy化能後可以接近凝血因子。促凝血劑-PE脂質體當PK，HMWK, fXI，and fXII接觸到帶負電荷的表面時，接觸激活途徑開始發生。 這一發生是循環脂蛋白顆粒的磷脂(主要是磷脂，PE)相互作用的結果，如乳糜微粒和極低密度脂蛋白(VLDLs) [Klein S, Arterioscler Thromb Vase Biol. 2001 Oct ；21 (10) 1695-700]。在另一實施例中，通過併入PE作為膜的而模仿PE豐富的乳糜微粒和VLDLs的脂質體，可以通過開始激活通路用來增強(ENHANCE)血栓症。這類脂質體可封裝或嫁接本發明使用的抗纖維溶解劑，促凝血劑，和血小板激動劑，並且可以如上所述的是空間位阻穩定的。在另一實施例中，所選擇的給藥系統的含PE的脂質體可以通過加入2-6%的可光裂解PEG來實現空間穩定，並使脂質體表面較易接近1 ，HMWK及各個凝血因子，於脫PEGy化時。促凝血劑之-含Ca21脂質體凝血的形成高度依賴胞外鈣離子的存在(圖幻。凝血因子II，VII，IX和X通過鈣離子與活化血小板的帶負電荷的膜(即PS)結合，藉此構成fVlla組織因子複合物和 tenase和凝血酶原複合物。此外，在血栓形成過程中的血小板動力學受胞外鈣的超生理濃度的影響，因為鈣通過一種包括TXA2合成的正反饋機制來擴大ADP誘導的血小板聚集。[Hu H et al. Thromb Res. 2005 ； 116 (3) :241-7]。在另一實施例中，鈣是單獨異封裝或與本案適用的抗纖維溶解劑，促凝血劑，和血小板激動劑一起封裝入所選擇的給藥系統(圖4)。在另一實施例中，鈣是封裝在如前所述的空間位阻穩定的含脂質體的陰離子磷脂中。該空間位阻穩定可以通過加入2-6%的可光裂解PEG來實現，從而使陰離子膜在脫PEGy化能後可以接近凝血因子。血小板激動劑除了抗纖溶和促凝給藥系統，還可封裝一個通過對初級止血發揮影響而血栓性的藥劑。在傳統意義上的中，初級(初期)止血是受擾內皮方位的血小板附著引起的。該附著過程是由糖蛋白複合物讓-以-￥，^^^(在高剪切力的區域)以及糖蛋白Ia/Iia和纖維蛋白原(在低剪切力的區域)調節的。血小板附著到血管壁上之後，開始血小板活化。特徵在於細胞，糖蛋白Ilb/IIIa的表達式，細胞表面P-選擇素的細胞形態改變，以及α和緻密顆粒成分(包括血小板因子4，如血小板反應蛋白，纖維連接蛋白和vWF的凝血因子，和初級/次級的抗止血物質，如ADP，血清素和鈣離子)的釋放。此外，血小板合成和釋放血栓素 Α2 (TXA2)以及血小板活化因子(PAF)，其是有效的血小板活化劑。ADP，血清素，TXA2，和PAF 的釋放促進額外的血小板的活化和補充，其與凝血酶結合發生是凝血途徑的產物。血小板聚集主要是通過將纖維蛋白原與相鄰血小板上的糖蛋白Ilb/IIIa結合來調節。正如上述推測，可能是雷射誘導的內皮細胞損傷和熱凝固中熱變性的蛋白質的出現最初觸發了初級 (次級)止血。在另一實施中，化合物封裝到用於激活或調解初級止血增殖的給藥系統中。適合的化合物選自具以下通用化學式的天然PAF磷脂1-烷基-2-乙醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸和1-烷基-2-羥基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，合成PAFS包括1_0_十六烷基_2_乙醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十八烷基-2-乙醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十六烷基-2- 丁醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十八烷基-2- 丁醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-棕櫚醯基-2-乙醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十六烷基-2-油醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，3-0-十六烷基-2-乙醯基-sn-甘油-1-膽鹼磷酸，1-0-十六烷基-2-乙醯基-sn-甘油，1-0-十六烷基-2-羥基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十八烷基_2_羥基-sn-甘油3-膽鹼磷酸，1-0-十六烷基-2-(亞麻酸醯基)-sn-甘油-3-膽鹼磷酸， 1-0-十六烷基-2-花生四烯醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十六-2- 二十碳五烯醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十六-2- 二十二碳六烯醇基-sn-甘油_3_膽鹼磷酸， 1-0-十八烷基-2-0-甲基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，1-0-十六烷基_2_ 丁烯醯基-sn甘油-3-膽鹼磷酸，1-肉豆蔻醯-2- (4-硝基苯琥珀醯基)-sn-甘油-3-膽鹼磷酸，磷酸腺苷 (ADP)，血清素，凝血酶，血栓素(TXA2)。藥物釋放方式-熱敏脂質體
根據本發明，給藥系統最好是一經觸發就能夠迅速釋放其內容。因此藥物輸送系統，可以具有熱敏性的脂質體。 熱敏脂質體是一類相對較新的脂質體給藥系統。高熱已經被用於體內和體外的許多脂質體製劑以產生膜通透性的改變，其將導致加載分子的快速釋放。熱誘導藥物釋放集中在出現在磷脂混合系統的晶界的周圍，該磷脂混合系統與相對有序的凝膠(Li3)和相對無序的液態晶體(LA)階段或在單核細胞增多以及經歷的主要過渡階段(Tm)同時存在。一旦到達Tm，脂鏈的構型熵的增益驅動鏈融化過渡，其主要導致在旋轉異構化(從一個TRANS 過渡到旁式構象)和水分子的順序(即膜的水合狀態)的改變。這接著會導致膜表面跨越分子的包裝缺陷，藉此極性和電荷的分子可以通過向溫誘導空腔進入疏水核心。其次，細胞膜的通透性的增加與橫向壓縮性的增加相關，即在或接近Tm的脂質鏈截面積的變化(或每脂質分子體積)，並在T米附近。根據理論模型，這些在雙層的臨界密度振蕩在Tm最大， 降低了離子擴散跨膜自由能障，並且據推測可以降低分子化合物——一種可以(用數學方法)推斷到的Tm上下幾個。C的溫度範圍的效果。在近臨界狀態的極性頭基之間的間距將碳氫化合物暴露於H2O,這與半球形腔的暴露正好一致，從而可以作為滲透性通道。根據本案的較佳實施例，至少部分給藥平臺由熱敏脂質體組成。鑑於在光凝固過程中腔內損害的熱性質，封裝在水隔室的藥物活性化合物可以很容易從脂質體的給藥系統釋放。在一第一實施例中，觸發機制是基於溫敏性，其中磷脂是有脂質體組成的，該脂質體在體溫以上產生一個Tm，尤其在38°C和45°C之間，特別是在約42°C。脂質體給藥系統的熱敏特性最好源自納入1，2-二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC)為主要成分的磷脂(Tm值41°C)。在另一實施例中，具同相變溫度(即具有不同頭基和/或醯基鏈長)的磷脂可以併入脂脂質體配方以調整系統的Tm。DPPC最好與一個變量醯基鏈長為士2個碳原子的卵磷脂的摩爾分數混合，以確保理想的混合階段，並延長Tm的溫度肩膀(TEMPERATURE SHOULDER)。在另一實施例中，熱敏脂質體通過併入2-6mol%的聚乙二醇獲得空間位阻穩定， 從而延長循環時間。除了的由卵磷脂組成的傳統熱敏脂質體，含溶血軟磷脂的熱敏脂質體已被發現可以提高包括在脂質體化合物的釋放動力。在另一實施例中，溶血磷脂醯膽鹼，溶血磷脂醯乙醇胺，溶血磷脂醯甘油，溶血磷脂醯絲胺酸，溶血磷脂酸，或溶血磷脂的溶血磷脂質的摩爾分數的納入脂質體的DDS以加快釋放動力。待治療血管的溫度通過第二個雷射脈衝(第一個雷射脈衝用於光凝誘導)或其它熱源，如紅外線(IR)光或加熱墊，可以提高到Tm。藥物釋放方式-縮酵磷脂脂質體在第二個實施例中，觸發機制是基於含縮醛磷脂脂質體中的光氧化誘導的膜滲透。縮醛磷脂比如1-0-(1』 -Z-十六碳)-2-棕櫚醯基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸))和雙縮醛磷脂(比如1，2_ 二 _0-(1』 -Z-十六碳)-sn-甘油-3-膽鹼磷酸)，通過酸或氧化誘導進行乙烯基團的裂解(該裂解導致膜不穩定和脂質體內容的釋放)，形成單鍊表面活性劑。 合成縮醛磷脂醯膽鹼和雙縮醛磷脂醯膽鹼的方法在業內是已知的，例如在下面文獻中就有描述[Rui YJetal. J Organic Chem. 1994 ；59 (19) :5758-5762] and [Shin J et al. J Org Chem. 2003Aug 22 ；68 (17) :6760-6]。
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為了產生1O2和活性氧物種(ROS)，在給藥系統中必須加入光敏劑以將能量轉移到氧分子。迄今為止，已使用過三種不同的光敏劑，包括酞菁鋅，八丁氧基酞菁錫，細菌葉綠素 a，其產生感光劑的最快光敏釋放，從而在不到20分鐘內讓鈣黃綠素完全釋放。然而，在本案中只用的任何光敏劑都會構成一個合適的化合物，通過脂質膜的光氧化不穩定而調解觸發藥物的釋放。藥物釋放方式-光聚合膜脂在另一實施例中，觸發機制是基於膜脂的光聚作用。Bondurant和0』 Brien [J. Am. Chem. Sec. 1998，120，13541-13542]表明，由紫外線照射產生的具 1，2_ 二 [10-2，， 4』 -己二烯基)癸醯氨sn-甘油-3-膽鹼磷酸(bis-SorbPC，山梨醯卵磷脂)的膜的交叉連接可能破壞某些聚乙二醇脂質體並導致雙層膜通透性增加28000倍[Bondurant乙等。 [Bondurant Betal. Biochim Biophys Acta. 200IMar 9 ；1511(1) :113-22 ；Spratt Tetal. Biochim Biophys Acta. 2003 年 4 月 1 日；1611 (1-2) :35-43]。同樣，含山梨醯卵磷脂的脂質體可以因將_1，1』 -雙十八烷基-3-3-3』 _3』 -四甲基吲哚羰基花青(DiI)或二硬脂醯基吲哚羰基花青(distearoyl indocarbocyanine) (DiIC(18) —起封裝入磷脂雙分子層而被可見光破壞穩定。這種技術和脂質體的製備已在下面文獻有描述[Mueller A et al.Macromolecules. 2000 Jun 27 ；33(13) :4799_4804]and[Miller CR et al. FEBS Lett.2000 Feb 4 ；467(1) :52-6]。定位-抗體較佳的是，本案的給藥系統具有目標定位特異性。導引脂質體到目標地點可以通過抗體，Fab』片段或多肽和所選擇的給藥系統的連接(圖4)來實現，最好連接到用於空間穩定的聚合物鏈其化學修飾末端，如PEG。抗體，Fab』片段或多肽最好是針對血小板活化特定的抗原表位的，包括CD41 (糖蛋白Lnb/IIIa)和CD62P(P_選擇素)，或是針對對纖維蛋白的。同樣，激活的內皮細胞針對激活這些與白細胞粘附分子(比如E-選擇素和 VCAM-I)表達式有關的細胞，其有利於白血球附著到激活內皮細胞以及之後的白血球滲出。 在另一實施例中，所選擇的給藥系統可以通過針對活化內皮細胞特定抗原表位(包括E-選擇素，ICAM-l，and VCAM-1)的抗體，Fab』片段或多肽的結合來鎖定照射組織內的活化內皮細胞。定位-聚乙二醇化陰離子脂質體較佳的是，磷脂合併，維持系統的熱敏性能，空間位阻穩定，增強活化血小板親和力(而不是靜止休眠的血小板)。根據本發明令人驚訝的發現是，當脂質體由46mol%的 DPPC, 50mol % 的 1，2- 二棕櫚醯 _sn_ 甘油-3-磷酸甘油(DPPG)，和 4mol % 的 DSPE-PEG 構成時，本發明的給藥系統是有限鎖定活化的血小板，即血栓中發現的血小板，而不是靜止休眠的血小板(圖6和7)。雖效果差一些，這也同樣適用於由46mol%的DPPC，50mol%的1， 2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(DPPS)，和4mol %的DSPE-PEG (如圖6)組成的脂質體。根據另一實施例，給藥系統的目標鎖定可以通過具有一個磷酸甘油和/或磷酸絲氨酸頭基和2-6mol%的DSPE-PEG的任何醯基鏈長度的磷脂來實現。誘導藥物的釋放治療方法中最好包含一個有利於熱誘導藥物釋放和光敏效果的臨床工具。在第一實施例中，集成到一個面板的發光二極體(LED)，在脈衝染料雷射治療和給藥系統在半光凝血管形成積累後，將用來照射，在照射雷射治療的鮮紅斑痣。發光二極體發出血紅蛋白優先吸收的波長，以是血液到達熱敏脂質體(即藥物釋放)的相變溫度以及光化誘導ROS的產生(即誘發凝血和細胞毒作用)。前者適合的波長為600-620納米，而後者適合的波長為能被封裝光敏劑最大吸收的波長。入射光的路徑最好是垂直於皮膚表面。該面板最好是可以全方向調節，這樣LED就可以靠近的鮮紅斑痣而不會引起病人的不適或位移。在第二實施例中，該面板的發光二極體發出的波長為被血紅蛋白優先吸收，藉此誘導藥物從熱敏脂質體釋放。在第三實施例中，該面板的發光二極體發出的波長應該為能封裝的光敏劑最大吸收，藉此誘導產生ROS和血栓，以及產生局部的細胞毒作用。在另一實施例中，熱誘導藥物釋放和ROS的產生可以通過其它形式的光源來調節，比如紅外燈，雷射，或氙汞燈為基礎的光源系統。HfMt -導向 SSPU(^iirwmmm^ff)為了達到最佳的治療效果，理想的選擇是使用目標血管手術周圍成像設備，視野內的血管的雷射照射設備，以及局部熱感應設備。合適的成像設備如Microscan公司的[美國專利 US2006241364，US2006184037, US2007232874, US2009012378]中揭露的設備，可以加以改進成一個同時具有成像，輻射和熱感應的一體手持設備。該成像組件可以包括一個， 用於正交偏振光譜成像[Heger M etal.，Opt Express 2005 Feb 7 ； 13 (3) :702-15]或用於的暗視野成像的放置於探頭頂端的LED燈環[Goedhart PT et al.，Opt Express. 2007 Nov 12 ;15(23) :15101-14],形狀的寬帶光源。照射組件包括具有基於光纖雷射系統的手持設備，藉此成像組件光路和雷射光路可以(部分)相同，並可以在用於成像的射出光的路徑上設置一個反射鏡。鏡子反射波長(範圍)必須對應雷射的波長，而不會干擾用於成像的射出光的傳輸。該熱誘導組件可以一個用於正交偏振光譜成像中作為光源的寬帶光源[Heger Metal. , Opt Express 2005 Feb]或用於的暗視野成像的放置於探頭頂端的LED燈環系統 [Goedhart PT et al. ,Opt Express. 2007 Nov 12 ；15(23) :15101-14]，使發出的光波波長大於600nm(例如，近紅外光)。這種裝置可以在SSPLT(特定位置的藥物雷射治療)中和光增透劑結合使用(在 [W02005062938]中有敘述)用於1，定位目標血管2，通過雷射照射以及給藥系統的活化和釋放來治療目標血管3，通過血流成像來確定雷射治療的效果，及4)通過血流成像來確定藥物幹預的效果。治療後血管生成妨礙物和新血管生成在[Heger etal. , Thromb Haemost. 2005 Feb ；93 (2) :242-56]中描述了兩種可以缺氧驅動的裝置，其可能會妨礙療效，即血管生成，即從現有的血管叢形成新血管，以及新血管生成，即在沒有現有的血管網的情況下形成新血管。雷射治療後損傷清除是通過消除發炎的光凝血管來減少真皮層血液量而獲得的結果。因此，雷射治療後血管生成以及新血管生成可能受到抑制，以防止在治療後皮膚的血液量增加，從而優化治療結果[Heger et al. ,Thromb Haemost. 2005 Feb ；93 (2) J42-56]。一些研究表明，治療後血管生成抑制劑的局部應用改善了被脈衝染料雷射照射過的鮮紅斑痣病變的清除。[e.g.，Wumg TL et al.,Lasers Surg Med. 2008 Jan ；40(1) :1_5]。過多的分子調節參與到血管生成和以及新血管生成，其中一些在這兩個進程中都發揮了作用。這些分子包括來自用於降低細胞外基質以形成血管官腔的單核細胞/巨噬細胞的蛋白酶(如纖維蛋白溶酶)。凝血酶，纖維蛋白降解產物，單核細胞趨化蛋白l(MCP-I)， 血管內皮生長因子(VEGF)，以及轉化生長因子-β (TGF-β)，來自血小板衍生性生長因子都有助於炎性細胞的補充。血管內皮生長因子以及基質細胞衍生因子-I(SDF-I)與新血管生成過程中形成內皮單層的內皮先驅細胞(EPCs)的補充有關。此外，細胞激素如血管內皮生長因子，鹼性成纖維細胞生長因子(bFGF)，白細胞介素-6(IL-6)，IL-8和MCP-I是負責將單核細胞/巨噬細胞轉或EPCs分化成成熟的內皮細胞。專門針對這些配體及其受體的藥物化合物(如血管內皮生長因子受體Flt-I和Flt-1/KDR)可能會因此被用來阻止血管生成和新血管生成。同樣，負責將EPCs附著到細胞外基質的附著分子，比如整合素ανβ3，ανβδ, α 2β 1及α 5β 1，，可能會妨礙可雷射治療後的血管生成和新血管生成過程。在另外的實施例中，能夠抑制雷射治療血管和血管有關的病理中血管生成和新血管生成的化合物可應用於雷射治療前，後，中能夠的局部或全身注射。該化合物可以以未封裝形式或封裝形式施用。對於任何現有平臺的這些化合物，包括脂質體，聚合物藥物載體， 細胞和鬼細胞，可以進行封裝。此外，血管生成和新血管生成的抑制劑可以通過圖4中所述的任何手段嫁接到給藥系統的表面。SSPLT(特定位置的藥物雷射治療)的應用範圍本發明是關於血管和血管相關病症的治療準備藥劑的給藥系統的使用。病理的一個具體實施例為一個葡萄酒色斑。其它的病理表現還包括血管瘤，毛細血管擴張，化膿性肉芽腫，靜脈湖泊，匐行性血管瘤。其它可以同本發明給藥系統光熱解治療的眼內血管或血管方面的病變，比如可以是，脈絡膜新血管生成(如溼性黃斑變性，脈絡膜視網膜炎，高度近視，血管樣條紋症，眼組織胞漿菌病的某些形式)，視網膜大動脈瘤，眼內黑色素瘤，視網膜母細胞瘤，角膜血管生成，中心性漿液性脈絡膜視網膜病變等。可以用本發明治療的胃腸道手術方面的血管或血管方面的病變包括藍色橡皮大皰痣症候群，胃竇血管擴張，輻射直腸結腸炎，遺傳性出血性毛細血管擴張症本發明的藥物輸送系統還可以用於去除高度血管實體腫瘤，以及在腦外科手術進行複雜的動靜脈畸形的微創治療。最佳實施例以下為根據權利要求項所述的本案較佳實施例的概述。本發明是關於用於治療血管和血管相關病症的給藥系統，其包含一個給藥平臺， 該給藥平臺包括至少一個能在待治療血管血栓的形成和維護施加影響的化合物。該給藥平臺可以是脂質體，高分子藥物載體，細胞和鬼細胞。其最好是空間阻位穩定的，這可以通過很多方法實現(穩定)。當該平臺包括脂質體時，該空間位阻穩定可以通過在脂質體表面嫁接聚乙二醇(PEG)或列入共價連接的聚合物的脂質體，嵌段共聚物，和/或多嵌段共聚物的脂質體來實現，該多嵌段共聚物可以是聚(乙烯醇)(PVA)，聚縮水甘油，被激活為琥珀醯亞胺酯並和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-乙烯基吡咯烷酮)(PVP)，被激活為琥珀醯亞胺酯並和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-丙烯)嗎啉(PAcM)，聚乙基-2-惡唑啉)(PEOZ)，聚O-甲基_2_惡唑啉)(PMOZ)，聚丙烯醯胺，聚(N-異丙基丙烯醯胺)(NIPAM)，聚[N_(2_羥丙基)甲基丙烯醯胺](HPMA)，聚(苯乙烯-順丁烯二酸/ 二酸酐)(SMA)，聚(二乙烯基醚順丁烯二酸酐) (DIVEMA)，和/或以下形式的疏水改性多糖茁黴多糖，葡聚糖，甘露聚糖和/或聚唾液酸， 或以下葡萄糖醛酸之一棕櫚醯葡萄糖醛酸苷(PGIcUA)，棕櫚醯半乳糖醛酸苷，或者選自單唾液神經節苷酯(GMl)，GM3的唾液酸衍生物。當該平臺包括部分由陰離子成分組成的脂質體時，該空間位阻的穩定可以通過由以下物質的(電吸引力)的吸附來實現，包括聚合物，陽離子殘基組成的多嵌段共聚物(該陽離子殘基可以是陽離子季銨化聚(4-乙烯基吡啶)(PEVP)，聚(乙烯亞胺)(PEI)，聚甜菜鹼(PB)。給藥平臺包括脂質體，並且能夠對血栓形成和/或維護施加影響的化合物被封裝在水隔室和/或脂質的磷脂雙層，和/或耦合(連接)到空間位阻穩定計和/或連接到脂質體雙層。該化合物可以被耦合(連接)到空間位阻穩定計的末端或側鏈。另外，該化合物也可以通過通過一個連接器或錨耦合(連接)到脂質雙分子層。該化合物對待治療血管中血栓的形成和/或維護適當施加影響，可以在纖溶途徑，組織因子，接觸激活途徑(次級止血)，或血小板功能(初級止血)。因此，該化合物可能的纖維蛋白溶酶原酶抑制劑，為脂肪酸之一，比如花生四烯酸，油酸，硬脂酸，或者是合成纖溶酶(原形式)抑制劑，其中包括氨甲環酸(TA)，ε-氨基己酸(ACA)，ρ-氨甲苯酸(AMBA)，4-氨甲基-雙環-2，2，2壬酸(AMBOCA)。或者，該化合物為一種纖維蛋白溶酶抑制劑，比如純化和/或重組α 2抗纖溶酶，α 2抗纖溶酶多肽，純化和 /或重組凝血酶激活的纖溶抑制物TAFI和抑肽酶。在另一實施例中，該化合物是組織型纖溶酶原激活物(tPA)或尿激酶型纖溶酶原激活物(UPA)的抑制劑。該組織型纖溶酶原激活(tPA)抑制劑可以是以下製劑之一分離純化的人類PAI1，分離和純化的人類PAI2，重組人類PAI1，重組人類PAI2，修改人類PAI1， 修改人類PAI2，抑制抗體或其針對tPA的衍生物，多肽，寡肽或短肽，特別是在2-10胺基酸肽，抑制tPA和uPA的抑制劑，包括分離純化人類PAI1，分離和純化的人類PAI2，重組人類 PAI1，重組人類PAI2，修飾人類PAI1，修飾人類PAI2，抑制抗體或及其針對uPA的衍生物， 抑制抗體或及其針對uPA受體(uPAR)的衍生物，多肽，寡肽或短肽，特別是在2-10胺基酸肽，其能抑制uPA的。當該化合物為PAIl or PAI2的激動劑時，該針對PAIl激動劑是一種人工合成的肽是玻連蛋白碎片s362-A38°的衍生物，簡稱為BP4，或者是通過結合蛋白酶活化受體-1 (PAR-I)而促進PAI2分泌的人工合成肽，特別是SFLLRN，針對PAI2的激動劑是促進PAI2分泌的人工合成肽.特別是SLIGKV，其結合於蛋白酶活化受體_2 (PAR-2)，或者是一種在生理條件下可以防止PAI2聚合的人工合成肽，特別是TEAAAGTGGVMTG(RCL-PAI2) andSEAAASTAVVIAG(RCL-AT)。該給藥系統還可進一步包括一個通過作用於組織因子和接觸激活途徑而導致 (誘導)促凝血反應的製劑。這些製劑是次級止血系統的激動劑，可以是凝血因子11(a)， 凝血因子III (組織因子，凝血因子V(a)，凝血因子VII (a)，凝血因子VIII (a)，凝血因子 IX (a)，凝血因子X (a)，凝血因子XI (a)，凝血因子XII (a)，凝血因子XIII (a)，或者是接觸激活途徑的調節劑，比如前激肽釋放酶0 )，激肽釋放酶，分子量激肽原(HMWK)。
在另一實施例中，該給藥平臺包括具有光敏劑的脂質體。該光敏劑是酞菁，萘酞菁，氯，菌綠素和內源性卟吩(如圖5所示)，其可以被一個或多個r-基團取代，該r-基團包括h，f, cf(cf3)2, o(ch2)ncf3, cl, br, chch2, (ch2)nch3, (ch2)ncooh, conh(ch2)nnh2, (ch2) nc0nhch2ch2nh2, conh (ch2) nch (nh2) c00h, ch2c0nhch (ch2cooh) cooh, 0 (ch2) nch3, s (ch2) nn (ch3)2, so2nh (ch2) nch3, so2nh (ch2) nn (ch3)2, so2n [ (ch2) nch3]2, So2NHCH2CH(CH2CH3) (ch2) nch3, c(ch3)3, 0c[(ch2)nch3]3, och [ch (ch3)2j2, 0 (ch2) nn (ch3) 2, 0 (ch2) nn (ch3) 3, sc6h5, oc6h5, o(c6h4) c [(ch3)2] (c6h5), o(c6h3) (cooh)2, o(c6h3) [coo (ch2) nch3]2, c6h5, so2nhch(ch3) ch2 (c6h3) (och3)2, so3, so2cl，n(ch3)2, cooh, no2, ch3, conh2，ch2nh2。並且 r，-基團選自以下基團之一 h，ch3, a1c1, a10h, alosi (ch3)3, aloso3, co, cu, li，gaoh，gacl，fe，fecl，feo2, pb, mg, mn, mncl，sich3cl, si(oh)2, si(cl)2, si {0c[ (ch2)nch3]3}2，si [coco(c6h4) (ch2)nch3]2, si [osi (ch3) 2 (ch2) nn (ch3) 2] oh, si
2, sich3, si [osi (ch3)2c(ch3)2c(ch3)j2，ni, sno, sn(cl)2, ti (cl)2, tio, v0, zn, ag, cd, ge, incl0另外，該給藥平臺可設有目標定位分子。該目標分子可以是抗體或其衍生物，特別是針對血小板抗原表位或纖維蛋白的fab』碎片。該血小板抗原表位可以是cd41或cd62p。在已特別實施例中，該給藥平臺由脂質體和以下脂質體之一的頭基形成，包括磷脂醯膽鹼，磷酸膽鹼，磷脂醯乙醇胺，磷脂酸，磷脂醯甘油，磷脂醯絲氨酸，磷脂醯乙醇胺，磷脂醯肌醇，鞘磷脂，甘油磷酸，甘油，乙二醇，沒食子酸丙三醇和甘油-3-琥珀酸。該脂質醯基鏈為以下之一十三醯基(13碳)，十四醯基(14碳)，肉豆蔻烯醯基(14碳，順式烯烴在 δ 9)，反肉豆蔻烯醯基(14碳，反式烯烴在δ 9)，十五醯基(15碳)，十六醯基(16碳)，棕櫚油醯基(16碳，順式烯烴在△ 9)，反棕櫚油醯基(16碳，反式烯烴在△ 9)，植烷醯基(16碳， 甲基在δ3，7，11，ι5)，十七醯基(17碳)，十八醯基(18碳)，十八烯醯基(18碳，順式烯烴在δ 6)，油醯基(18碳，順式烯烴在δ 9)，反油醯基(18碳，反式烯烴在δ 9)，亞油酸醯基 (18碳，順式烯烴在δ 9，12)，亞麻醯基(18碳，順式烯烴在δ 9，12，15)，十九醯基(19碳)， 二十醯基(20碳)，二十烯醯基(20碳，順式烯烴在Δ 11)，花生四烯醯基(20碳，順式烯烴在δ 5，8，11，14)，二十一醯基(21碳)，二十二醯基(22碳)，二十二碳烯醯基(22碳，順式烯烴在δ 13)，二十二碳六烯醇基(22碳，順式烯烴在δ 4，7，10，13，16，19)，二十三醯基(23 碳)，二十四醯基( 碳)，二十四碳烯醯( 碳，順式烯烴在δ 15)。該脂質體可以是單醯基(1-醯基-2-羥基-sn-甘油-3頭基)或二醯基(1_醯基-2-醯基-sn-甘油-3頭基)結構。在另一實施例中，該給藥平臺包括脂質體和至少構成該脂質體的部分磷脂，該脂質體是二棕櫚醯磷脂醯甘油(dppg)。該給藥平臺也可以包含熱敏脂質體。因此，這些脂質體可以包括相變溫度高於體溫的磷脂，特別是相變溫度介於37°c和45°c之間，特別是41°c。在一較佳實施例中，至少形成脂質體的部分磷脂是二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(dppc)。本發明進一步是關於治療血管和血管相關病症的準備藥劑的給藥系統。該病理通常是葡萄酒色斑，但也可能是皮膚病症，比如血管瘤，毛細血管擴張，化膿性肉芽腫，靜脈湖，匐行性血管瘤。也可以是眼科病變，如脈絡膜新血管生成(如溼性黃斑變性，脈絡膜視網膜炎，高度近視，血管樣條紋，眼組織胞漿菌病的某些形式)，視網膜大動脈瘤，眼內黑色素瘤，視網膜母細胞瘤，角膜血管生成，中心性漿液性脈絡膜視網膜病變；或者是胃腸手術方面的藍色橡皮大皰痣症候群，胃竇血管擴張，輻射直腸結腸炎，遺傳性出血性毛細血管擴張症。除以上之外，本發明也可以不用施用給藥平臺來施用該能否對待治療血管中的血栓的形成和/或維護產生作用的化合物。一個合適的例子是未封裝形式的抗纖維蛋白溶解劑氨甲環酸(TA)的施用。適當，該化合物為佐劑數量。本發明將在以下實施例中做進一步說明，而這些實施例並非用來限制本發明。請參考以下圖示1-11和表1-2。


圖和表格說明圖1 :5，6_羧基螢光素(CF)聚合-標定血小板用活體螢光顯微鏡觀察到的在倉鼠背側皮膚摺疊靜脈雷射引起的損傷，沒有(A-F)，有(G-L)預先注入肝素(HEP)。在㈧中的明亮的橢圓形是雷射光斑。A=細動脈，V=小靜脈，箭頭表示流動方向。相對雷射脈衝的時間顯示在右上角(min:sec)。箭頭(B)表示為有熱敏脂質體釋放的熱導CF釋放導致的高螢光殘留區。箭頭(G)指向的是殘餘熱凝固。病變尺寸的mean士SD(平均加減標準差) 最小和最大值作為羧基螢光素標記血小板(M)和肝素(N)裡出現的羧基螢光素標記的血小板的時間函數。在(0)中，病變的相對增長描繪成一個時間的函數。垂直線表示CF(淡) 和CF+H印(深暗)的增長高峰。圖2 次級止血接觸激活，組織因子和凝血的共同途徑。當前激肽釋放酶，高分子量激肽原，凝血因子XI和凝血因子XII接觸到帶負電荷的表面時，該接觸激活途徑被激活 (啟動)。組織因子途徑與損傷的部位開始啟動，以組織因子的釋放作為反應。羅馬數字表示各自凝結因子，而"a "表示一個激活狀態。因子XII和TF需要陰離子磷脂(如磷脂質絲胺酸和磷脂醯肌醇)增殖凝血。陰離子磷脂的存在，還需要tenase，凝血酶原，和TF-VIIA 複合物的形成。血栓，其是血小板聚集(初級止血)和纖維蛋白形成的結果，是酶裂解成纖維蛋白溶解後的纖維蛋白降解產物。纖維蛋白溶解由組織型纖溶酶原激活物(tPA)和尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)將纖維蛋白溶酶原轉換成纖溶酶而引起的，是一個被纖溶酶原激活物抑制劑(PAI) I和2，和fXIa，fXIIa,激肽釋放酶(由前激肽釋放酶，PK，通過fXIIa形成)抑制的過程。接著，血栓的纖維蛋白溶酶水解破裂被α2-抗纖溶酶(α-2-ΑΡ)，Ci2-巨球蛋白(α-2-Μ)，和凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)抑制。生理抗凝血劑顯示在右上角， 其包括抗凝血酶III (ATIII)，蛋白C(PC)和蛋白S(PS)化合作為輔助因子，蛋白質Z(PZ)， 蛋白質Z依賴性蛋白酶抑制劑(ZPI)和組織因子途徑抑制物(TFPI)。圖3 傳統的選擇性光熱(SP)與特定地點的藥物雷射治療(SSPLT)的原則對比。 在SP中，用黃色雷射(A)照射難治性葡萄酒色斑(PWS)會導致半阻塞的光凝(B，插入)和血栓形成⑶。在10分鐘之內，血栓就會因為纖溶和剪應力增加(C)而減弱(惡化)，導致病變漂白不最理想的損壞側面(D:l，熱凝固；2，血栓；3，專利內腔)。SSPLT是一種治療難治性鮮紅斑痣的替代方法，據此，SP就與血栓和/或含有抗纖維蛋白溶解藥物載體的全身給藥相結合。一經雷射照射(E)，藥物載體就積累在血栓(F)裡和其內容通過第二個刺激(例如，熱)(G)獲得釋放，導致局部高凝血及血管腔(H)的堵塞。損害側面(I)符合最佳的皮損漂白預後。圖4 特定位置藥物雷射治療脂質體可能配方的基本圖示。可能的脂質體配方被分成四個主要類別傳統的脂質體，陰離子脂質體，空間位阻穩定脂質體，目標定位脂質體。 每種主要類比都可以包含任何以下分類A)藥物類型1。親水性藥物(如氨甲環酸)；2。 疏水性藥物(例如，光敏劑)；3。官能光敏劑；4。離子(如鈣)；B)藥物嫁接方法5。(共價)附件組件(磷酸)脂質；6。(共價鍵)連接到一個錨定分子(如膽固醇)7。(共價) 附件一種聚合物側鏈(如聚乙二醇，聚乙二醇)8。(共價鍵)連接到一個功能化的聚合物的末端；C)膜的成分9。磷脂醯膽鹼；10。具陰離子摩爾分數的磷脂醯膽鹼(磷酸)，血脂； D)空間位阻穩定方法11。單鏈聚合物(如聚乙二醇)；12。多鏈聚合物；13。多塊共聚物 (如二或三嵌段共聚物)；14。可光裂解聚合物(如聚乙二醇縮醛磷脂)；15。吸附聚合物 (到陰離子膜表面上)；E)目標定位方法16。抗體；17。抗體碎片(例如Fab』碎片)；18。 肽。各主要種類不是相互唯一的，例如，空間位阻穩定的脂質體可能含有陰離子膜成分以及目標抗體。圖5 可以封裝在所選擇的給藥系統例的光敏劑分子結構。
左欄為母體結構，右欄為替代衍生物。圖6 各種流式細胞圖藻紅蛋白標記的⑶61 (⑶61-PE)染色的(FL2)靜止休眠的(上排)和convulxin-activated人類血小板(下排)，用2毫米的羧基封裝(FLl)的 DPPC 孕育 30 分鐘DPPS DSPE-PEG (摩爾比 46 50 4)， DPPC DPPE DSPE-PEG (46 50 4)，DPPC DPPG DSPE-PEG (46 50 4)，and DPPC DPPA DSPE-PEG(46 50 4)擠壓技術配製的大型單層囊胚泡(LUVETs，直徑 0200納米)。在右上角的一個離散血小板群的出現，標誌著血小板和LUVETs之間的相互作用，為含DPPG的LUVETs中觀察到的，並在含DPPS的LUVETs中也較少程度的可觀察到。 DPPC，1,2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼；DPPS，1,2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸；DSPE-PEG，1,2-十八醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙二醇；DPPE，1,2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；DPPG，1,2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷酸甘油；DPPA，1，2_ 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂酸。圖7 體外誘導血栓的共聚焦顯微鏡圖像，通過2毫米的羧基(CF)封裝的DPPC， DPPG DSPE-PEG(摩爾比46 50 4)孕育十分鐘，其有擠壓技術配製，並由藻紅蛋白標記 ⑶61(⑶61-PE，紅色)復染色的大型單層囊胚泡(LUVETs， 4. 8mM最終血脂濃度)。LUVET 封裝的CF的綠色螢光和CD61-PE標記的血小板的紅色螢光的共定位，證實了如圖5流式細胞儀所觀察到的血小板和LUVETs之間的相互作用。圖8 幾個如例子1，2中所描述的氨甲環酸含聚乙二醇熱敏配方中的脂質體的大小(Y軸)和多分散性(條狀內)。圖9:熱譜圖氨甲環酸封裝的DPPC DSPE-PEG (摩爾比為96 4)和 DPPC MPPC DSPE-PEG(86 10 4)擠壓技術獲得的大型單層囊胚泡，其包括抗纖維蛋白溶解SSPLT備選配方配製。圖10 氨甲環酸以下例子1，2中描述的幾個含氨甲環酸的聚乙二醇化熱敏配方的脂質比。
圖11 左邊DPPC釋放的熱誘導氨甲環酸(TA) DSPE-PEG (96 4)擠壓技術獲得的大型單層囊胚泡，在39. 3°C (黑色虛線)和43.3°C (灰色，實線)的加熱時間對比。 右邊DPPC MPPC DSPE-PEG (86 10 4) LUVETs釋放的熱誘導氨甲環酸(TA)對比在 36. O0C (黑色虛線)和40·0 (灰色，實線)的加熱時間。釋放的TA濃度用總脂質體TA 濃度的means士SD百分百表示。圖12 計算圖像分析程序中所使用的步驟概述。一個125幀對比產生對應血小板通量對比圖(1)。然後與一種子圖( 結合產生血管的第一近似值(3)。血管的缺少部分通過強度梯度和多項式插值重建G)。血管中最小流動部分用臨界值挑選出來(5)。在檢測的血栓和血管壁每一個像素分配兩個概率後 (6)，血栓的最終輪廓就可以形成了(7)。縮寫(按時間順序)det.=檢測；deriv.=衍生；polynom.=多項式；int.=插值。表格1 準備在例1. 2中所述的平均包封率(Ε E FF)，陷閉量(Vt)，和幾個含氨甲環酸的聚乙二醇化熱敏配方的血管內氨甲環酸濃度(Cta)。表格2 幾個在下列例子1，2中要描述的含氨甲環酸(TA)的聚乙二醇熱敏配方的基本屬性，其被用來計算參數，如每囊泡陷閉量(eVt)和血管內氨甲環酸濃度((^表1)。 DPPC，1，2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼；DSPE-PEG，1，2-十八醯-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙二醇；MPPC，1-棕櫚醯-2-羥基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼；0M，外膜；IM，內膜。實施例1 本發明給藥系統的配製.可以用於SSPLT中的給藥系統的幾個可能的組合在圖4中都有顯示。不同脂質體給藥系統的配製如下所述。1、封裝抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環酸)的熱敏感型脂質體。1，2- 二棕櫚醯-sn-甘油_3_磷脂醯膽鹼(DPPC)和1_棕櫚醯_2_羥基-sn-甘油-3-膽鹼磷酸(MPPC)都來自阿凡提極性脂(阿拉巴斯特，阿拉巴馬州)。HEPES[4-羥乙基哌嗪乙磺酸]的鈉鹽是來自Sigma Aldrich (聖劉易斯，密蘇裡州)。氨甲環酸(4_(氨甲基)環己烷-1-羧酸，TA)購自Fluka公司(瑞士布克斯，)。所有其它試劑均為分析純。擠壓技術配製的大型單層囊胚泡以90 10摩爾比由DPPC MPPC配製而得。DPPC 溶解於氯仿和MPPC，氯仿/甲醇比為G 1比例)，並且按上述比例混合。解決的辦法是蒸發乾燥，利用N2氣體乾燥並在真空保幹器內乾燥20分鐘。由此產生的脂質膜與318mM TA 在IOmM HEPES [4-羥乙基哌嗪乙磺酸]緩衝液(pH值7. 4，滲透壓為0. 302osmol/公斤)) 裡水合到最終脂質濃度為5毫米和進行10分鐘的浴槽式超聲處理。將裝有樣品的管子保持在55°C的恆溫水浴中，使混合物經歷10次凍融循環並用0. 2微米的過濾器(Anotop，濾紙，布倫特福德，英國)擠壓5次。未封裝的TA通過體積排阻色譜在4分鐘內用離心法 IOOxg (2毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L,經S印hadex G-50罰款，奇異醫療， Chalfont聖賈爾斯，英國)從LUVET懸浮液中排除。平衡緩衝液，從而成為LUVETs存儲緩衝液，由IOmM的HEPES和0. 88% (W/V)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫LUVETs存儲在溫度4°C的黑暗環境中。MPPC包含物是必要的，以防止在缺乏空間位阻穩定的情況下脂質體的聚集和融
25口 O2、封裝抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環酸)的PEGlated熱敏感型脂質體。1，2- 二棕櫚醯-sn-甘油_3_磷脂醯膽鹼(DPPC)和1_棕櫚醯_2_羥基-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(MPPC)的聚乙二醇化熱敏性脂質體來自阿凡提極性脂(阿拉巴斯特，阿拉巴馬州)。1,2-十八醯-Sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙烯-乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG平均分子質量為2000amu)和HEPES [4-羥乙基哌嗪乙磺酸]鈉鹽來自西格瑪艾德立奇公司(聖劉易斯，密蘇裡州)。氨甲環酸氨甲基)環己烷-1-羧酸，TA)購自芙蘭卡公司(布克斯，瑞士)。所有其它試劑均為分析純。擠壓技術配製的大型單層囊胚泡(LUVETs)在下列化合物中配製DPPC DSPE-PEG2000 (摩爾比 98 2，96 4，禾口 94 6)禾口 DPPC MPPC DSPE-PEG2000 (84 :10:6 以及 86 10:4)。DPPC 和 DSPE-PEG2000 溶解在氯仿和MPPC溶解在氯仿甲醇G 1比例)並按上述比例混合。解決的辦法是蒸發乾燥，利用N2氣體乾燥並在室溫(RT)的真空保幹器內乾燥20分鐘。由此產生的脂質膜與 318mMTA在IOmM HEPES緩衝液(pH值7. 4，滲透壓為0. 302osmol/公斤))裡水合到最終脂質濃度為5mM和進行10分鐘的浴槽式超聲處理。使混合物在55°C恆溫下經歷10次凍融循環並用0.2微米的過濾器(Anotop，濾紙，布倫特福德，英國)擠壓5次。該配方保存在4°C 的黑暗環境中有待後續只用。未封裝的TA通過體積排阻色譜法在4分鐘內用離心法100xg(以及自4°C於2毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L，經S印hadex G-50罰款，奇異醫療，Chalfont 聖賈爾斯，英國)從LUVET懸浮液中排除。平衡緩衝液，即LUVETs存儲緩衝液，由IOmM的 HEPES和0.88% (w/v)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫的LUVETs 存儲在溫度4°C的黑暗環境中。3.含有光敏劑的脂質體使卵磷脂脂質體將酞菁鋅(ZnPC)封裝在磷脂雙分子層的製備方法在[Ricchelli F et al. Biochim Biophys Acta. 1994 Dec 30 ； 1196 (2) :165-71] and[de Oliveira CA et al. Chem Phys Lipids. 2005 Jan ； 133(1) :69-78]中已經有揭露。使卵磷脂脂質體將功能化的酞菁鋅(ZnPC)封裝在磷脂雙分子層的製備方法(例如，鋅2，3，9，10，16，17，23，M-octakis [(N，N-二甲氨基)甲硫基肉桂酸1]酞菁)在 [Vittar NB et al. IntJ Biochem Cell Biol. 2008 ；40 (10) :2192-205]中已有揭露。一種用聚乙二醇磷脂脂質體將具有功能的aluminum phthalocyanine封裝於脂質體水隔室的製備方法在[Derycke AS et al. J Natl Cancer Inst. 2004Nov 3 ；96 (21) 1620-30]中已有揭露。4.封裝抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環酸)於包含PEGylated zinc phthalocyanine 的脂質體1，2-二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC)的含鋅酞菁的聚乙二醇熱敏脂質體來自阿凡提公司極性脂(阿拉巴斯特，阿拉巴馬州)。1，2-十八醯-sn-甘油-3-磷脂-聚乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG平均分子質量為 2000amu)，酞菁鋅(SiPC)，HEPES鈉鹽購自西格瑪艾德立奇公司(聖劉易斯，密蘇裡州)。氨甲環酸氨甲基)環己烷-1-羧酸，TA)購自芙蘭卡公司(布克斯，瑞士)。所有其它試劑均為分析純。擠壓技術配製的大型單層囊胚泡(LUVETs)在下列化合物中配製 DPPC DSPE-PEG2000摩爾比96 4，含5μ M酞菁鋅。磷脂溶於氯仿，酞菁鋅溶於吡啶 (100 μ M原液)，並按上述比例混合。解決的辦法是蒸發乾燥，利用Ν2氣體乾燥直到膜出現， 並在真空保幹器內乾燥1小時。由此產生的脂質膜與318mM TA在IOmM HEPES緩衝液(pH 值7. 4，滲透壓為0. 302osmol/公斤))裡水合到最終脂質濃度為5mM，進行間歇性地浴槽式超聲處理30秒鐘，同時在55攝氏度的溫度下孕育1小時。將裝有樣品的管子保持在55°C 的恆溫水浴中，使混合物經歷10次凍融循環並用0. 2微米的過濾器(Anotop，濾紙，布倫特福德，英國)擠壓5次。未封裝的TA通過體積排阻色譜法在4分鐘內用離心法100秘0毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L，經S印hadex G-50罰款，GE醫療，Chalfont 聖賈爾斯，英國)從LUVET懸浮液中排除。平衡緩衝液，即LUVETs存儲緩衝液，由IOmM的 HEPES和0.88% (w/v)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫的LUVETs 存儲在溫度4°C的黑暗環境中。5.調解凝血酶原複合物形成的可解吸聚乙二醇陰離子脂質體陰離子脂質體，(可解吸)聚乙二醇陰離子脂質體，和(可解吸)含功能化聚乙二醇陰離子脂質體的配製在以下兩處分別都有揭露[Jones ME etal. Thromb Res. 1985 Sep 15 ；39 (6) :711-24], [Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2002 Feb 18 ；1560 (1-2) 37-50]，和[Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2003 Jun 27 ；1613(1-2) :115-21] 6.封裝光敏劑和抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環酸)的聚乙二醇化縮醛磷脂脂質體。封裝聚乙二醇化光敏劑的縮醛磷脂脂質體的配製在[Shin J et al. J Control Release. 2003 Aug 28 ；91 (1-2) :187-200]禾口 [Thompson DH et al. Methods Enzymo 1. 2004 ；387 :153-68]都有揭露。該脂質膜不是與鈣黃綠素和緩衝液水合，而是與含有318mM TA的IOmMHEPES緩衝液中水合到以配製封裝TA的脂質體。未封裝的TA通過體積排阻色譜法在4分鐘內用離心法IOOxg在4°C於2毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L，經(Sephadex G-50罰款，GE醫療，Chalfont聖賈爾斯，英國)從LUVET懸浮液中排除。平衡緩衝液，即LUVETs存儲緩衝液，由IOmM的HEPES 和0. 88% (w/v)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫的LUVETs存儲在溫度4 °C的黑暗環境中。實施例2:本發明給藥系統的特徵1.測定給藥系統的理化特徵脂質體給藥系統脂質體的大小和多分散性(粒度分布的測量)的理化特徵是在用平衡緩衝液(10 毫米 HEPES，0. 88% (w/v)的 NaCl，pH 值=7.4,0. 291 公斤 osmol/kg)稀釋後，用測量光子相關光譜在90°角度使用單峰分析(英國馬爾文儀器，馬爾文雷射粒度儀3000)測量獲得。幾個備選配方的結果顯示在圖8.脂質體的相變溫度是在用平衡緩衝液將脂質體稀釋到最終脂質濃度為3mM後再用差示掃描量熱法(MICR0CAL，北安普頓，麻薩諸塞州)量測獲得。平衡緩衝液是用來作為參考。兩個候選配方的結果顯示在圖9。
2.脂質體的氨甲環酸的測定脂質的比例，封裝效率，被困量，每囊泡陷閉量，每囊泡氨甲環酸分子的數量和血管內氨甲環酸濃度。建立一種基於具螢光胺(4-苯基螺-呋喃-2 (3H)，1_ 二氫異苯並呋喃]_3，3_ 二酮)(西格瑪艾德立奇公司，聖劉易斯，密蘇裡州)的初級胺衍生物的檢測方法以在洗滌劑處理過的緩衝液裡的脂質體氨甲環酸(TA)量化。擠壓技術配製的大型單層囊胚泡(LUVETs 5mM最終脂質濃度)並用平衡緩衝液 (IOmM 的 HEPES，0. 88% (w/v)的 NaCl，pH 值=7. 4，滲透壓的 0. 291osmolkg)進行稀釋 500x。500 μ L的LUVET溶液與250 μ L的5% ΤΧ100(芙蘭克公司，布克斯，瑞士)(終濃度 1 % )和500 μ L的1. 08毫米螢光胺於丙酮中(終濃度為432 μ Μ)混合。[Udenfriend S et al. Science 1972 ；178 (63) :871-872].在37°C的溫度孵育30分鐘後，這些樣品通過螢光光譜測定λ ex = 391 士5nm and λ em = 483士5nm(SPF500C，美國儀器公司，銀泉，馬裡蘭州)。 每次測定都使用在0-4. 0μ M TA濃度範圍內參考標準。TA脂質體的濃度，是通過解各自的螢光發射強度的參考曲線的回歸方程而測算得到的。磷脂濃度是根據[Rouser G et al. Lipids. 1970 ；5 (5) :494-6]通過磷含量測定獲得的。藥脂質比是通過將螢光測定(凝膠過濾效率糾正)獲得的TA濃度除以由ROUSER 測定的磷脂濃度而計算出來。藥物幾個候選配方的脂質比例如圖10所示。封裝效率，Eeff，是通過將脂質體TA 脂質摩爾比除以最初TA 摩爾比(318mM TA每 5mM磷脂，即63. 6)而計算獲得，封裝效率以百分比表達(表1)。陷閉量(Vt，L · mole-1 lipid)通過從[N. J. Zuidam, R. de Vrueh, D. J. Crommelin, in :V.P.Torchilin, V.Weissig(Eds. ), Liposomes,2nd Edition, Oxford University Press, Oxford, 2003, pp. 64]中獲得的方程式中計算得到，該方程式為Vt = (500/3) (A) (N) (rv)其中A是一個脂質佔據膜的面積，N為阿伏加德羅常數(6. 022χ1023Μ0Γ1)， 和rv是囊泡的半徑(基於光子相關光譜法)。每個磷脂分子面積是49. 4A2(DPPC)源自 [Nagle JF et al. Curr. Opin. Struc. Biol. 2000 ； 10 (4) :474-480]，50. OA2 (DSPE-PEG)源自 [Majewski J et al. J. Am. Chem. Soc. 1998 ； 120 (7) :1469-1473]，和 48. OA2 (MPPC)[Chi LM et al. Biophys. J. 1990 ；57 (6) 1225-1232]，磷脂混合物面積為指示各脂質成分的摩爾比為的加權平均值A(ffeighted) = [(Adppc) (mol % DPPC) + (ADspe-PEg) (mol % DSPE-I5EG) + (Amppc) (ΠΙΟ 1 %
J]/100%所有沒有MPPC的配方的A(Weighted)是49. 4A2，而所有具有MPPC配方的則是49. 3A2。幾個候選配方的VtS如表1所示。每囊泡的Vt(eVt，表達為L/囊泡)是通過推斷每個囊泡的磷脂分子的數量(表幻而得出的。每個囊泡的磷脂分子的數量被定義為外膜(l。m)和內膜單張(Iim)上的脂質體的累計數，基於Aweighted，測得的囊泡大小，半徑rv，雙層厚度3. 93nm [Tahara Y et al. Micron. 1994 ；25 (2) :141-149]，一球形形態(其中球形面積=4 π r2 ；Iom = 4 Ji rv2/AffeightedIim = 4 Ji (rv_3.93) VAffeighted
eVt 由 eVt = [ (l。m+lim) Vt]/N 計算得到。每個囊泡(Qta)的TA分子數量通過(l。m+lim)乘以TA 脂質比而計算得到。血管內TA濃度(Cta)可以從一已知eV的每個囊泡(Qta)的TA分子數量計算得到。Cta = (Qta/N) (1/eVt)幾個候選配方的CTAs如表1所示。3.脂質體光敏劑濃度，二聚平衡常數，三重態性質，和活性氧物種的產生的測定。脂質體的鋅酞菁濃度的測定在[deOliveira CA et al. Chem Phys Lipids. 2005 Jan ； 133(1) :69-78]中已有揭露。脂質體配方中的光敏劑二聚常數和三重態性質的測定在[Nunes SM et al. Braz J Med Biol Res. 2004 Feb ；37 (2) :273-84]中有揭露。用脂質體光敏劑測定活性氧產量物種的方法在[Hadjur C et al. Journal of Photochemistry and Photobiology B =Biology 1997 ；38 :196-202]巾實施例3本發明給藥系統的藥物釋放1.熱致氨甲環酸從聚乙二醇熱敏脂質體的釋放從擠壓技術製備的熱敏性大型單層囊胚泡(LUVETs)釋放的熱誘導釋放的氨甲環酸的量化是為由DPPC DSPE-PEG(96 4摩爾比)and DPPC MPPC DSPE-PEG(86 10 4摩爾比)組成的配方而準備的。在熱處理之前，凝膠過濾的LUVET懸浮液通過保存在4攝氏度環境中的平衡緩衝液進行十倍稀釋。其中20 μ L凝膠過濾的LUVET懸浮液被稀釋50倍(n = 3per experiment) 並經過螢光光譜測定血管內總體TA濃度(最終稀釋1250倍)。平均總體TA濃度用來計算釋放的TA分子的百分比。在4°C的5分鐘平衡後，並在熱致藥物釋放前，160 μ L LUVETs懸浮在0. 2mL超薄PCR管內(套管金，康寧，紐約，紐約)並孕育在4°C的環境中10分鐘，其通過熱循環儀來達成的(Biozym，奧爾登多夫，德國)。從TA-封裝DPPC DSPE-PEG (96 4) and DPPC MPPC DSPE-PEG(86 10 4)LUVETs的活性藥物釋放是最大相變溫度(Tm)附近，即分別為43. 3和40. 0°C，(圖9)，以及低於！^!。樣品被經過預設時間加熱後，立即被淹沒在冰浴。整個然後轉移至0. 5mL聚碳酸酯超速離心機管進行離心分離(355，000xg， 時間60分鐘，溫度4攝氏度)藉此使LUVETs變成球狀。50 μ L表面漂浮物被仔細吸出，該漂浮物中釋放的TA在用平衡緩衝液稀釋50倍後(最終稀釋係數1250)被螢光光譜測定量化。磷脂的上清液分析表明，至少有99.9%的磷脂被顆粒化(球形話)。四份未經處理的 160LLUVET樣本也放入超速離心步驟中作為陰性對照。這些樣本按熱處理樣品同樣方法處理以測定超速離心誘導的TA洩露。TA釋放是通過熱處理樣品上層清液的平均TA濃度除以LUVETs裡的總TA濃度而計算得到。TA濃度因超速離心對照樣本中上清液中平均TA內容而得到糾正。該理想控制的 DPPC DSPE-PEG (96 4) and DPPC MPPC DSPE-PEG (86 10 4) LUVEI1S 樣本中的上清液中的該mean士SD TA濃度是總囊泡TA濃度的2. 4士5. 1% (n = 48)和7. 1 士 11. 1% (η =56).從 DPPC DSPE-PEG (96 4) and DPPC MPPC DSPE-PEG (86 10 4) LUVETs 釋放的熱誘導TA釋放動力如圖11所示。
2.光敏劑的誘導釋放從縮醛磷脂脂質體釋放的光氧化介導內容的誘導和量化在[Thompson DH et al. Biochim Biophys Acta. 1996 Feb 21 ；1279(1) :25-34]中有揭露。實施例4目標定位機制將聚乙二醇光敏劑封裝免疫脂質體目標定位到雷射誘導損傷部位為了免疫脂質體目標定位到雷射誘導損傷部位的體內研究，倉鼠背側皮膚摺疊模型跟活體螢光顯微鏡和外部雷射照明結合使用，如[Bezemer R et al. ,Opt Express 2007 Jul 25 ； 15 (4) :8493-8506]中所述。如實施例1. 4中所述一樣配製含聚乙二醇化鋅酞菁(ZnPC)的脂質體。大鼠抗小鼠CD62P 單克隆抗體(clone RB40. 34，Fitzgerald Industries, Concord, MA)與空間位阻穩定脂質體的結合配對在[A. L. Klibanov，V. P. Torchilin， S. Zalipsky, in :V. P. Torchilin, V. Weissig (Eds. ) , Liposomes, 2nd Edition, Oxford University Press, Oxford, 2003, pp. 231-263]中有詳細揭露。其上沒有嫁接抗體的脂質體以及缺乏抗體的不含鋅酞菁的體脂質體作為陰性對照。關於螢光血栓染色，血小板在體內通過全身給藥5，6_羧基都被標記，根據[Heger M etaL· Anal Quant Cyto Histol0 In press]。血小板標記後，經鎖骨下靜脈輕輕注入180 μ L脂質體混懸液(10毫米最終血脂濃度)。用倍頻Nd :YAG雷射(532nm，Entertainer，雷射量子；圖5，7)功率2 毫瓦以及 mean士SD入射輻射曝光量為289士38J/cm2，光斑大小2. 3X10_3mm2，誘導亞阻塞血栓。雷射是安裝在一個轉換臺上，將以一角度導引的光束通過雷射探針的尖端的一面鏡子軸向定位到血管上。30毫秒的脈衝持續時間可以通過設置在雷射光圈和反光鏡之間的振動控制的模擬快門調節。雷射束穿過與快門光圈結合的10%的傳輸過濾器，生成一個用以目標定位的低功耗光斑。雷射誘導血栓可用FITC過濾器裝置Uex = 480士 15nm，DC = 505nm，λ em = 535士20nm，B2EC, Nikon, Tokyo, Japan)成像顯示，另外血栓和脂質體的共定位通過使用一個定製設計的過濾器設置觀察顯示Uex = 650 士 lOnm，型號FB650-10，Thorlabs，牛頓，新澤西州；λ em = 700 士 40nm，型號 FB700-40，Thorlabs ；分色鏡=664nm,型號 NT47-425，埃德蒙光學，巴林頓，新澤西州)。血管內情況記錄30分鐘。關於圖像分析，在Mathematica開發了一款軟體(版本6. 0. 1，Wolfram Research, Champaign, IL)基於客觀參數的基礎上量化標記CF的病變。該程序是從圖12中所示的算法序列進行編寫的。基本前提是該程序編排圍繞包括了動態流量環境中損傷的相對靜態性質。因此， 第一個被用來區分」靜態」和」動態」區域的參數是血流量，這是通過計算像素點亮度的平均值時間導數計算出來的，即，螢光標記的血小板，在125125幀(5S)的時間內，通過超過連續幀的一個像素的數量(圖12，第1步)。隨後，區域增長算法可以使用於使用者定義的種子圖片，其中需要查看的血管都被用畫線或畫叉做了手工標記(圖12，第2步)，並結合使用流信息來劃分相關血管(圖12，第3步)。由於在雷射致損傷部分缺乏流動，相應血管的無流段部分就可以從劃定的血管結構中排除。像素亮度數據的二階高斯衍生可以用在垂直於血管縱軸的方向以重建缺失段。 此外，多項式插值是用來消除不確定的血管段，並用來合併固有像素亮度梯度引起的缺失的血管像素(圖12，第4步)。對側血管壁的界限被定義後，雷射導致的損傷可以通過將臨界值放入流量數據，再僅選擇血管中最低流量的部分，就可以找出雷射致傷部位(圖12，第 5步)段。流的臨界值由損傷部位的平均像素亮度的二階導數零交叉流切斷價值定義。該數值在處理整套前，如種子圖像，整個分析放映是都保持不變。下一步中，每一個像素點都被賦予兩個概率，視已被定義為部分血栓或血管壁其附近的像素數量而定(圖12，第6步)。 隨後，血管壁附近的血栓利邊緣通過比較這些概率進一步進行細化(圖12，第7步)。最後， 損傷輪廓成像放在單獨的圖像文件保存以使用Sigmakan Pro量化Apix and It。t(SYSTAT軟 #，Mountain View, CA)。1.將聚乙二醇化陰離子脂質體目標定位於雷射引起的損傷部位如實施例1.4中敘述的，按46 50 4的摩爾比配製按聚乙二醇化鋅酞菁 (ZnPC)含陰離子脂質體組成的1，2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂醯膽鹼(DPPC)，1，2- 二棕櫚醯-sn-甘油-3-磷脂(DPPG)，和1，2distear0yl-sn-甘油-3-磷脂-聚乙二醇 (DSPE-PEG2000, PEG 平均分子質量 2000amu)關於體內將脂質體定位血栓到血管內雷射導致的損傷，其方案在例子4. 1中已經有描述。已經結合附圖介紹了本案的實施例，需要明白的是本發明不僅限於這些實施例， 在不離開本發明的精神和所附權利要求書的範圍的情況下，可以作多種改變和變化。表格權利要求
1.一種治療血管疾病的給藥系統，包含一個給藥平臺，該給藥平臺包括至少一個能在待治療血管血栓的形成和維護施加影響的化合物。
2.如權利要求1所述的給藥系統，其中該給藥平臺是脂質體，聚合物藥物載體，細胞或鬼細胞。
3.如權利要求1或2所述的給藥系統，其中該給藥平臺是空間位阻穩定的。
4.如權利要求3所述的給藥系統，其中該給藥平臺包括脂質體，該空間位阻穩定可以通過在脂質體表面嫁接聚乙二醇來實現。
5.如權利要求3或4所述的給藥系統，其中該平臺包括脂質體，該空間位阻穩定可以通過在脂質體列入共價連接的聚合物的脂質體，嵌段共聚物，和/或多嵌段共聚物的脂質體來實現，該多嵌段共聚物可以是聚(乙烯醇)(PVA)，聚縮水甘油，被激活為琥珀醯亞胺酯並和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N -乙烯基吡咯烷酮)(PVP)，其被激活作為琥珀醯亞胺酯並和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N -丙烯)嗎啉(PAcM)，聚(2 -乙基-2 -惡唑啉)(ΡΕ0Ζ)，聚(2 -甲基-2 -惡唑啉)(ΡΜ0Ζ)，聚丙烯醯胺，聚(N -異丙基丙烯醯胺) (NIPAM)，聚[N - (2 -羥丙基)甲基丙烯醯胺](HPMA)，聚(苯乙烯-順丁烯二酸/ 二酸酐)(SMA)，聚(二乙烯基醚順丁烯二酸酐)(DIVEMA)，和/或以下之一形式的疏水改性多糖 茁黴多糖，葡聚糖，甘露聚糖和/或聚唾液酸，和/或以下葡萄糖醛酸之一棕櫚醯葡萄糖醛酸苷(PGIcUA)，和/或棕櫚醯半乳糖醛酸苷，或者選自第一類單唾液神經節苷酯(GMl)，第三類單唾液神經節苷酯(GiO)的唾液酸衍生物。
6.如權利要求3或4或5所述的給藥系統，其中該平臺包括部分由陰離子成分組成的脂質體，該空間位阻的穩定可以通過由以下物質的(電吸引力)的吸附來實現，包括聚合物， 陽離子殘基組成的多嵌段共聚物(該陽離子殘基可以是陽離子季銨化聚(4 -乙烯基吡啶) (PEVP)，聚(乙烯亞胺)(PEI )，聚甜菜鹼(PB)。
7.如權利要求1-6中任一項所述的給藥系統，其中給藥平臺包括脂質體，並且能夠對血栓形成和/或維護施加影響的化合物被封裝在水艙和/或脂質的磷脂雙層，和/或耦合連接到空間位阻穩定劑和/或連接到脂質體雙層。
8.如權利要求7所述的給藥系統，其中該化合物可以被耦合連接到空間位阻穩定劑的末端或側鏈。
9.如權利要求7所述的給藥系統，其中該化合物也可以通過一個連接器或錨耦合連接到脂質雙分子層。
10.如權利要求1-9中任一項所述的給藥系統，其中該化合物對待治療血管中血栓的形成和維護適當施加影響，可以在纖溶途徑，組織因子，接觸激活途徑(次級止血)，或血小板功能(初級止血)。
11.如權利要求10所述的給藥系統，其中該化合物是纖維蛋白溶酶原酶抑制劑。
12.如權利要求11所述的給藥系統，其中該抑制劑為脂肪酸之一，比如花生四烯酸， 油酸，硬脂酸，或者是合成纖溶酶(原形式)抑制劑，其中包括氨甲環酸(ΤΑ)，ε-氨基己酸 (ACA), ρ -氨甲苯酸(ΑΜΒΑ)，4 -氨甲基-雙環-2，2，2壬酸(AMB0CA)。
13.如權利要求10所述的給藥系統，其中該化合物為一種纖維蛋白溶酶抑制劑。
14.如權利要求13所述的給藥系統，其中該纖維蛋白溶酶抑制劑包括純化和/或重組 α 2抗纖溶酶，α 2抗纖溶酶多肽，純化和/或重組凝血酶激活的纖溶抑制物TAFI和抑肽酶。
15.如權利要求10所述的給藥系統，其中該化合物是組織型纖溶酶原激活物(tPA)或尿激酶型纖溶酶原激活物(UPA)的抑制劑。
16.如權利要求15所述的給藥系統，其中該組織型纖溶酶原激活(tPA)抑制劑可以是以下製劑之一分離純化的人類PAI1，分離和純化的人類PAI2，重組人類PAI1，重組人類 PAI2，修改人類PAI1，修改人類PAI2，抑制抗體或其針對tPA的衍生物，多肽，寡肽或短肽， 特別是在2-10胺基酸肽，抑制tPA和uPA的抑制劑，包括分離純化人類PAIl，分離和純化的人類PAI2，重組人類PAI1，重組人類PAI2，修飾人類PAIl，修飾人類human PAI2，抑制抗體或及其針對uPA的衍生物，抑制抗體或及其針對uPA受體(uPAR)的衍生物，多肽，寡肽或短肽，特別是在2-10胺基酸肽，其能抑制uPA的。
17.如權利要求10所述的給藥系統，其中該化合物為針對PAIlor PAI2的激動劑。
18.如權利要求17所述的給藥系統，其中，該針對PAIl激動劑是一種人工合成的肽是玻連蛋白碎片s 362 "A 380的衍生物，簡稱為BP4，或者是通過結合蛋白酶活化受體-1 (PAR-I)而促進PAI2分泌的人工合成肽，特別是SLIGKV，其結合於蛋白酶活化受體-2 (PAR- 2)， 或者是一種在生理條件下可以防止PAI2聚合的人工合成肽，特別是TEAAAGTGGVMTG (RCL-PAI2)and SEAAASTAVVIAG (RCL-AT)。
19.如權利要求10-18中任一項所述的給藥系統，包括通過作用於組織因子和接觸激活途徑而導致(誘導)促凝血反應的製劑。
20.如權利要求19所述的給藥系統，其中這些製劑是次級止血系統的激動劑，其包括凝血因子II (a)、凝血因子111(組織因子，凝血因子V(a)、凝血因子VII (a)、凝血因子 VI 11(a),凝血因子IX(a)、凝血因子X(a)、凝血因子XI (a)、凝血因子XII (a)、和凝血因子 XIII(a)。
21.如權利要求19所述的給藥系統，其中這些製劑是接觸激活途徑的調節劑，包括前激肽釋放酶(PK )、激肽釋放酶、分子量激肽原(HMWK )。
22.如權利要求1-21中任一項所述的給藥系統，其中該給藥平臺包括具有光敏劑的脂質體。
23.如權利要求22所述的給藥系統，其中該光敏劑包括酞菁，萘酞菁，氯，菌綠素和內源性卟吩(如圖5所示)，其可以被一個或多個R -基團取代，該R-基團包括 H, F, CF(CF3)2，0 (CH2 )nCF3，Cl, Br, CHCH2，(CH2 )nCH3，(CH2 ) nCOOH, CONH (CH2) nNH2, (CH2) nC0NHCH2CH2NH2, CONH (CH2) nCH (NH2) C00H, CH2 CONHCH (CH2 C00H) C00H, 0 (CH2 )nCH3 , S (CH2 ) nN(CH3)2，SO2 NH(CH2)nCH3，SO2 NH (CH2)nN(CH3)2，SO2 N[(CH2 )nCH3 ]2 , SO2 NHCH2 CH(CH2 CH3 ) (CH2 )nCH3 , C(CH3 ) 3，OC [(CH2 )nCH3 ]3，OCH[CH(CH3 )2 ]2，0 (CH2 )nN(CH3 )2，0 (CH2 ) nN(CH3 ) 3，SC6 H5，OC6 H5，O(C6H4)Ct (CH3)2 ] (C6 H5 )，0 (C6 H3 ) (C00H)2，0 (C6 H3 ) [C00(CH2 )nCH3 ]2 , C6 H5 , SO2 NHCH(CH3 )CH2 (C6 H3 ) (OCH3 )2，SO3，SO2Cl, N(CH3 )2，C00H, NO2，CH3 ，CONH2，CH2 NH2 ；並且 R，-基團選自以下基團之一H, CH3, A1C1, A10H, AlOSi(CH3)3 ，AlOSO3，Co, Cu, Li, GaOH, GaCl, Fe, FeCl, FeO2，Pb, Mg, Mn, MnCl, SiCH3Cl, Si (OH)2) Si (Cl)2) Si {0C[ (CH2 )nCH3 ]3 I2 , Si [COCO(C6 H4 ) (CH2 )nCH3]2，Si [OSi (CH3 )2 CH2 )nN (CH3) 2] 0H, Si
2，Si [OSi (CH3) 2 (CH2) nN (CH3) 2，Si [OSi (CH2) nCH3] 2，SiCH3 ，Si [OSi (CH3 )2 C (CH3 )2 C (CH3 )2 ]2 , Ni, SnO, Sn (Cl)2 , Ti (Cl)2 , TiO, V0, Zn, Ag,Cd, Ge, InCl。
24.如權利要求1-23中任一項所述的給藥系統，其中該給藥系統具有目標定位分子。
25.如權利要求M所述的給藥系統，其中該目標分子是抗體或其衍生物，特別是纖維蛋白的Fab』碎片。
26.如權利要求25所述的給藥系統，其中該抗體或其衍生物是針對血小板抗原表位或纖維蛋白。
27.如權利要求沈所述的給藥系統，其中，該血小板抗原表位是⑶41或⑶62P。
28.如權利要求1-27中任一項所述的給藥系統，其中該給藥平臺由脂質體和以下脂質體之一的頭基形成，包括磷脂醯膽鹼、磷酸膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂醯絲氨酸、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、神經鞘磷脂、甘油磷酸、甘油、乙二醇、沒食子酸丙三醇和甘油-3-琥珀酸。
29.如權利要求觀所述的給藥系統，其中該脂質醯基鏈為以下之一十三醯基(13碳)、 十四醯基(14碳)、肉豆蔻烯醯基(14碳，順式烯烴在Δ9)、反肉豆蔻烯醯基(14碳，反式烯烴在Δ9)、十五醯基(15碳)、十六醯基(16碳)、棕櫚油醯基(16碳，順式烯烴在Δ9)、反棕櫚油醯基(16碳，反式烯烴在Δ 9)、植烷醯基(16碳，甲基在Δ 3，7，11，I 5)、十七醯基 (17碳)、十八醯基(18碳)、十八烯醯基(18碳，順式烯烴在Δ 6)、油醯基(18碳，順式烯烴在 Δ9)、反油醯基(18碳，反式烯烴在Δ9)、亞油酸醯基(18碳，順式烯烴在Δ9，12)、亞麻醯基(18碳，順式烯烴在Δ 9，12，15)、十九醯基(19碳)、二十醯基(20碳)、二十烯醯基(20碳， 順式烯烴在Δ 11)、花生四烯醯基(20碳，順式烯烴在Δ5，8，11，14)、二i^一醯基(21碳)、 二十二醯基(22碳)、二十二碳烯醯基(22碳，順式烯烴在Δ 13)、二十二碳六烯醇基(22碳， 順式烯烴，Δ4，7，10，13，16，19)、二十三醯基(23碳)、二十四醯基(24碳)、或二十四碳烯醯( 個碳，順式烯烴在Δ15)。
30.如權利要求四所述的給藥系統，其中該脂質體具有單醯基(1-醯基-2-羥基_ sn -甘油-3頭基)或二醯基(1 -醯基-2-醯基-sn -甘油-3頭基)結構。
31.如權利要求1-30中任一項所述的給藥系統，其中該給藥平臺包括脂質體和至少構成該脂質體的部分磷脂，該脂質體是二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)。
32.如權利要求1-31中任一項所述的給藥系統，其中該給藥平臺包含熱敏脂質體。
33.如權利要求32所述的給藥系統，其中該脂質體包括相變溫度高於體溫的磷脂。
34.如權利要求33所述的給藥系統，其中該磷脂相變溫度介於37°C和45°C之間，特別是41°C。
35.如權利要求34所述的給藥系統，其中該至少形成脂質體的部分磷脂是二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)。
36.如權利要求1-35中任一項所述的給藥系統，其中該給藥平臺具有一種抑制血管生成和/或新血管生成的複合藥劑。
37.一種促進如權利要求1-36所述給藥系統的藥物釋放或光敏作用的臨床手段是熱感應。
38.一種促進如權利要求37所述熱感應或光敏作用的是由發光二極體。
39.如權利要求37所述的熱感應是通過一個用於正交偏振光譜成像和/或側流暗視場成像中作為光源的寬帶光源或用於支流暗視野成像系統的LED燈環系統，來產生。
40.如權利要求1-36中任一項所述的給藥系統用於製備一種血管相關病症的藥劑。
41.如權利要求40所述的病症為葡萄酒色斑。
42.如權利要求40所述，其中該病症為皮膚中的病症，比如血管瘤，毛細血管擴張，化膿性肉芽腫，靜脈湖，匐行性血管瘤；也可以是眼科病變，如脈絡膜新血管生成(如溼性黃斑變性，脈絡膜視網膜炎，高度近視，血管樣條紋，眼組織胞漿菌病的某些形式)，視網膜大動脈瘤，眼內黑色素瘤，視網膜母細胞瘤，角膜血管生成，中心性漿液性脈絡膜視網膜病變；或者是胃腸手術方面的藍色橡皮大皰痣症候群，胃竇血管擴張，輻射直腸結腸炎，遺傳性出血性毛細血管擴張症。
全文摘要
本發明涉及一種用於治療血管疾病的給藥系統，包含一個給藥平臺，該給藥平臺包括至少一個能在待治療血管血栓的形成和維護施加影響的化合物。該給藥平臺是空間位阻穩定的脂質體形成。該空間位阻穩定可以通過在脂質體表面嫁接聚乙烯(乙二醇)來實現。該化合物為止血環酸。該給藥系統用於治療葡萄酒色斑。
文檔編號A61K31/198GK102300557SQ201080013481
公開日2011年12月28日 申請日期2010年1月26日 優先權日2009年1月26日
發明者麥克海洛 申請人:阿卡戴密克醫學中心