竹節參皂苷v或/和竹節參總皂苷在製備抗血栓藥物中的應用的製作方法
2023-05-03 23:28:11
專利名稱：竹節參皂苷v或/和竹節參總皂苷在製備抗血栓藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥領域，具體涉及竹節參皂苷ν或/和竹節參總皂苷在製備抗血栓 藥物中的應用。
背景技術：
血栓的形成涉及到心腦血管疾病。特別是腦血栓的形成，可以由腦出血引起，可以 由腦缺血引起，可以由腦血管硬化引起，也可以由血液生化學變化引起。腦血栓的形成的致 死率和致殘率極高。心肌梗塞同樣是由血栓形成引起。心腦血管的血栓形成造成的危害， 居人類死亡率的首位。目前，治療該類疾病臨床應用的西藥主要有抗血小板藥和溶栓藥物。其中常用的 有影響花生四烯酸代謝藥，其代表藥為阿司匹林(aspirin)。但是阿司匹林有許多不 良反應，如出血、胃腸道刺激症狀及腹瀉、皮疹等。對於經皮冠狀動脈介入術(PCI)後需用 大劑量阿司匹林時，可同時使用胃黏膜保護劑、H2受體拮抗劑及質子泵抑制劑，有助於減少 胃腸黏膜出血的發生。血栓素A2(TXA2)合成酶抑制藥和TXA2受體拮抗藥，其代表藥為奧扎格雷 (ozagrel) 0但是奧扎格雷會導致過敏反應，呼吸困難，過敏性休克，腦出血，眼結膜出血等 不良反應。環核苷酸磷酸二酯酶抑制藥，其代表藥為雙嘧達莫(dipyridamole)(潘生丁)、西 洛他唑。雙嘧達莫(潘生丁)是磷酸二酯酶抑制劑，其缺點為化學穩定性差，半衰期短，必 須加倍劑量或者使用緩釋劑才能在Mh內起到抑制血小板功能的作用。推薦每日總量為 400mg。與ASA合用時劑量為100 200mg/d。副作用誘發心肌缺血，引起血壓升高，引起 III度房室傳導阻滯，雙嘧達莫性結石病。雙嘧達莫不良反應輕而短暫，長期服用可有頭痛、 頭暈、嘔吐、腹瀉、面紅、皮疹和皮膚瘙癢等。而西洛他唑不良反應有皮疹、頭暈、頭痛、心悸、 噁心、嘔吐，偶有消化道出血、尿路出血等。抗凝血藥，其代表藥為普通肝素(UFH)及低分子量肝素(LMWH)。肝素有如下不良 反應(1)可逆的血小板減少症①發生於開始肝素化的第10 15d ；②是免疫複合物和免 疫球蛋白交互作用即免疫機理產生；③肝素過量或與抗血小板藥並用可出現出血的反應， 但嚴重出血危及生命者少。( 偶見過敏反應，包括發熱。( 其他①脫髮；②骨質疏鬆。 直接凝血酶抑制劑代表藥水蛭素(hirudin)、重組水蛭素(recombinanthirudin)、來匹盧 定、比伐盧定(bivalirudin)、阿加曲班。溶栓藥物的代表藥為纖維蛋白溶解藥尿激酶，但是其抗血栓的療效也不甚理想。因此，目前研究具有消栓作用確切、安全性高、質量可控的中藥新藥，具有重要的 社會意義和經濟意義。
發明內容
竹節參為五加科人參，屬多年生草本植物Panax japonicus C. A. Mey.的乾燥根， 含有多種皂苷、揮髮油、糖類和多種胺基酸。原是一種名貴的民間中草藥，現已收載於《中 華人民共和國藥典》，藥用功能類似人參和三七。竹節參生於山坡溝邊、陰溼地區或巖石溝 澗旁，主要分布於貴州、湖南、雲南、安徽、江西、湖北等地。每年秋季採挖，除去莖葉，分出肉 質根，將根莖除去外皮，曬乾或陰乾即可入藥。始載於《本草綱目拾遺》。竹節參甘、微苦， 溫。具有活血化瘀、消腫止痛、滋補強壯等多種功效，既有類似人參的滋補強壯作用，又有類 似三七的散瘀止痛、止血、祛痰作用，主要用於病後虛弱、勞嗽咳血、咳嗽痰多、跌打損傷。本發明的目的是提供一種竹節參皂苷ν或/和竹節參總皂苷在製備抗血栓藥物中 的應用。本發明的目的是通過以下技術方案實現的竹節參皂苷ν或/和竹節參總皂苷作為活性成分在製備抗血栓藥物中應用。特別 是竹節參皂苷ν或/和竹節參總皂苷可作為活性成分在製備抗腦血栓的藥物中的應用。所 述的腦血栓可由腦出血引起、由腦缺血引起、由腦血管硬化引起或由血液生化學變化引起。其中，竹節參總皂苷中竹節參皂苷ν的含量> 50% ；所述的竹節參皂苷ν的純度 彡 90%。竹節參總皂苷是由如下方法製備得到的取竹節參藥材，加入竹節參6-12倍量的 乙醇或甲醇回流提取1-3小時，濾過，得濾液；藥渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取 1-3次，每次1-3小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇至無醇味，配製成含0. 05-0. 5g藥材/ ml的藥液，上HPD-100大孔樹脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脫，棄去水洗脫液，合併60%的 乙醇洗脫液，回收溶劑至近幹，減壓乾燥，得到竹節參總皂苷。所述的回流提取用的乙醇或 甲醇的濃度為10-90%，優選50-70%。竹節參皂苷ν是由如下方法製備得到的取竹節參藥材，加入竹節參6-12倍量的 乙醇或甲醇回流提取1-3小時，濾過，得濾液；藥渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取 1-3次，每次1-3小時，濾過，合併濾液，減壓回收乙醇至無醇味，配製成含0. 05-0. 5g藥材/ ml的藥液，上HPD-100大孔樹脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脫，棄去水洗脫液，合併60%的 乙醇洗脫液，回收溶劑至近幹，減壓乾燥，得到竹節參總皂苷，竹節參總皂苷再經ADS-7大 孔樹脂柱純化，收集50% -90%的乙醇洗脫液，減壓乾燥，得竹節參皂苷V。所述的回流提取 用的乙醇或甲醇的濃度為10-90 %，優選50-70 %。所述的竹節參皂苷ν或/和竹節參總皂苷作為活性成分可與藥學上可接受的載體 或者常規輔料製備成抗血栓的組合物。上述藥學上可接受的載體包括口服製劑輔料或胃腸 外途徑給藥的輔料。給藥途徑可以是口服、注射、局部給藥等。根據本發明的技術方案，該 組合物可以是口服製劑或注射用製劑，其中口服製劑包括膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、口服 液、片劑、滴丸等。所用輔料包括澱粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二 醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨 酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂酸鹽和明膠等常規輔料，製劑的後期製備工藝及設 備均屬製藥領域的常規技術，本發明對此不作限定，故在此不予詳述。上述組合物口服給藥的劑量為2-3次/天，每次折合成竹節參皂苷ν或竹節參總 皂苷的劑量分別為0. 075 0. 15g/次和0. 15 0. 30g/次。
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竹節參是常用的中草藥，有長期的中醫用藥經驗，該藥使用安全性高，無明顯毒性 作用記載。本發明所述的竹節參皂苷ν或竹節參總皂苷是從天然的中藥竹節參中提取得到 的，藥效實驗表明竹節參總皂苷、竹節參皂苷ν對血凝塊均有明顯的溶解作用，並且體內抗 血栓形成實驗結果顯示竹節參總皂苷、竹節參皂苷V具有較強抗體內血栓形成的作用。與現有技術比較本發明的有益效果本研究首次表明竹節參總皂苷、竹節參皂苷 ν有顯著的抗血栓的作用，因此，將竹節參總皂苷、竹節參皂苷ν開發成抗血栓藥物具有廣 闊的應用前景。
具體實施例方式實施例1竹節參皂苷ν (也稱人參皂苷Ro，簡稱Ro)和竹節參總皂苷部位(簡稱Z5)的體外 溶栓試驗1、受試藥物竹節參總皂苷，製備方法為取竹節參粗顆粒200克，置於3000ml的圓底燒瓶中， 加入竹節參粗粉10倍量的60%的乙醇，浸泡2小時，水浴回流提取2小時，濾過，得濾液。 藥渣再用10倍量的60%的乙醇回流提取2次，每次2小時，濾過。合併3次濾液，減壓回收 乙醇至無醇味，配製成濃度為含0. 5g藥材/ml的藥液，上HPD-100大孔樹脂柱，依次用水、 60%的乙醇洗脫，棄去水洗脫液，合併60%的乙醇洗脫液，回收溶劑至近幹，經65°C減壓幹 燥，得到竹節參總皂苷約15克。竹節參皂苷V，製備方法為取竹節參粗粉，加入竹節參粗粉10倍量的60%的乙 醇，浸泡2小時，水浴回流提取2小時，濾過，得濾液。藥渣再用10倍量的60%的乙醇回流 提取2次，每次2小時，濾過。合併3次濾液，減壓回收乙醇至無醇味，配製成濃度為含0. 5g 藥材/ml的藥液。上HPD-100大孔樹脂柱，依次用水、60%的乙醇洗脫。合併60%的乙醇洗 脫液，回收溶劑至近幹，經65°C減壓乾燥，得到竹節參總皂苷。竹節參總皂苷再經ADS-7大 孔樹脂柱純化，收集50% -90%的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，減壓乾燥，得竹節參皂苷V。對照藥注射用尿激酶，規格10萬單位，麗珠製藥廠，批號100403。2.竹節參皂苷ν及其竹節參總皂苷的含量測定(1)色譜條件SPD-20A 高效液相色譜儀，色譜柱為 Boston analytics, Green ODS-AQ 4. 6 X 150mm 5um，波長為203nm，進樣量為20ul，流速為1. Oml/min，柱溫為25°C，流動相為 乙腈(A) =IOmM磷酸緩衝水溶液(B)(稱取KH2PO4藥物0. 68g，加入500ml純淨水，用K2HPO4 調PH值至5. 8，混勻，經0.45um的微孔濾膜過濾，超聲10-15分鐘即得)梯度洗脫(洗脫 的梯度為0-19 分鐘，A B = 27 73;20-33 分鐘，A B = 28 72;34_43 分鐘，A B =34 66;44-57 分鐘，A B = 43 57 ;57. 5-64 分鐘，A B = 85 15 ;65_80 分鐘， A B = 27 7 。(2)對照品竹節參皂苷ν (也稱人參皂苷Ro，可簡稱Ro)溶液的配製取竹節參皂 苷ν適量，以水配製成對照品溶液，其濃度為1. 45mg/ml。(3)竹節參皂苷ν及其竹節參總皂苷樣品液的製備稱取的竹節參總皂苷樣品23. 71mg,以水定溶為25ml，為竹節參總皂苷樣品液。
稱取的竹節參皂苷ν樣品12. OOmg,以水定溶為25ml，為竹節參皂苷ν樣品液。(4)竹節參皂苷ν及其竹節參總皂苷樣品的含量測定分別精取上述竹節參總皂苷樣品液、竹節參皂苷ν樣品液和對照品溶液各20ul， 注入色譜柱，按上述色譜條件測定，測得的對照品Ro峰面積為5750034. 5，測得的竹節參總 皂苷樣品中Ro峰面積為1962145. 125，測得的竹節參皂苷ν樣品中Ro峰面積為1758717. 5，計算得到的竹節參總皂苷樣品中Ro的濃度， C竹節參總皂苷樣品=C對照品Χ§竹節參總皂苷樣品 /s對照品=1. 45X1962145. 125/5750034. 5 = 0. 495mg/ml。計算竹節參總皂苷樣品中Ro的 百分含量，為 C竹節參總皂苷樣品X V竹節參總皂苷樣品/W竹節參總皂苷樣品=0. 495mg/ml X 25ml/23. 7Img = 52. 2%。計算得到的竹節參皂苷ν樣品中Ro的濃度， G竹節參皂苷ν樣品=G對照品XS竹節參皂苷ν樣品 /s對照品=1. 45X1758717. 5/5750034. 5 = 0. 4435mg/mL·計算竹節參皂苷ν樣品中Ro的 百分含量，為C竹節參皂苷V樣品χ ν竹節參皂苷V樣品/W竹節參皂苷V樣品=0. 4435mg/mlX25ml/12. OOmg = 92. 4%。3、實驗動物家兔，普通級，體重Jkg，雌性。由江寧縣青龍山動物繁殖場提供，動物質量合格證 號SCXK(蘇)2007-0008。4、主要試劑與儀器(1)生理鹽水，山東魯抗辰欣藥業有限公司，批號1005319012。(2) Sartorius分析天平北京賽多利斯天平有限公司；數顯恆溫水浴鍋(HH-2) 國華電器有限公司。5、試驗方法家兔頸總動脈插管採血，待血液凝固後分取大小近似的血塊。各血塊用濾紙吸取 液體部分，天平稱重後(W)放入潔淨的試管內，各試管加入等體積的試藥，陰性對照組加相 應的生理鹽水。池後取出，用濾紙吸取液體部分，天平稱重(G)。比較給藥前後血凝塊的重 量，計算血凝塊溶解率。溶解率=(W-G)/W X 100%6、統計學處理所有數據均用均值士標準差(SiS)表示。用單因素方差分析ANOVA對給藥組與 對照組進行組間顯著性檢驗，P < 0. 05表示有顯著性差異，P <0.01表示有非常顯著性差
已 升。7、試驗結果由表1可見，與生理鹽水組相比較，R0和Z5各劑量組對血凝塊均有明顯的溶解作 用，且有統計學意義。與尿激酶組比較，R0的25mg/ml、5mg/ml、lmg/ml、0. 2mg/ml劑量組與 Z5的0. 4mg/ml劑量組有顯著性差異。表1.竹節參皂苷ν和竹節參總皂苷部位對兔血凝塊的溶解作用
權利要求
1.竹節參皂苷V或/和竹節參總皂苷作為活性成分在製備抗血栓的藥物中的應用。
2.竹節參皂苷ν或/和竹節參總皂苷作為活性成分在製備抗腦血栓的藥物中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特徵在於所述的腦血栓為由腦出血引起、由腦缺血 引起、由腦血管硬化引起或由血液生化學變化引起。
4.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於所述的竹節參總皂苷中竹節參皂苷ν 的含量彡50%。
5.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於所述的竹節參皂苷ν的純度>90%。
6.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於所述的竹節參總皂苷是由如下方法制 備得到的取竹節參藥材，加入竹節參6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小時，濾過，得 濾液；藥渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次，每次1-3小時，濾過，合併濾液， 減壓回收乙醇至無醇味，配製成含0. 05-0. 5g藥材/ml的藥液，上HPD-100大孔樹脂柱，依 次用水、60%的乙醇洗脫，棄去水洗脫液，合併60%的乙醇洗脫液，回收溶劑至近幹，減壓幹 燥，得到竹節參總皂苷。
7.根據權利要求6所述的應用，其特徵在於所述的回流提取用的乙醇或甲醇的濃度為 10-90%，優選 50-70%。
8.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於所述的竹節參皂苷ν是由如下方法制 備得到的取竹節參藥材，加入竹節參6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小時，濾過，得 濾液；藥渣再用6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3次，每次1-3小時，濾過，合併濾液， 減壓回收乙醇至無醇味，配製成含0. 05-0. 5g藥材/ml的藥液，上HPD-100大孔樹脂柱，依 次用水、60%的乙醇洗脫，棄去水洗脫液，合併60%的乙醇洗脫液，回收溶劑至近幹，減壓幹 燥，得到竹節參總皂苷，竹節參總皂苷再經ADS-7大孔樹脂柱純化，收集50 % -90 %的乙醇 洗脫液，減壓乾燥，得竹節參皂苷V。
9.根據權利要求8所述的應用，其特徵在於所述的回流提取用的乙醇或甲醇的濃度為 10-90%，優選 50-70%。
10.一種抗血栓的藥物組合物，含有權利要求1-9中任意一項的竹節參皂苷ν或/和竹 節參總皂苷及藥物上可接受的載體。
全文摘要
本發明公開了竹節參皂苷v或/和竹節參總皂苷在製備抗血栓的藥物中的應用。藥效實驗表明竹節參總皂苷、竹節參皂苷v對血凝塊均有明顯的溶解作用，體內抗血栓形成實驗結果顯示竹節參總皂苷及竹節參皂苷v具有較強抗體內血栓形成的作用。竹節參皂苷v和竹節參總皂苷用於製備抗血栓的藥物具有良好的應用前景。
文檔編號A61K31/704GK102125570SQ20101061596
公開日2011年7月20日 申請日期2010年12月30日 優先權日2010年12月30日
發明者楊小林 申請人:楊小林