一種從爵床中提取山荷葉素的方法
2023-04-23 01:12:06
專利名稱：一種從爵床中提取山荷葉素的方法
技術領域：
本發明屬於中藥化學領域，涉及一種從爵床中提取山荷葉素的方法。
背景技術：
爵床為爵床科植物爵床Tfo1SteBWaria procumbens (Linn. ) Nees的乾燥全草。別名小青草、六角英、赤眼老母草、節節寒等。收載於中國藥典(1977年版，一部)，在東漢前已載入《神農本草經》。具有清熱解毒，利尿消腫的功效，用於治療感冒發熱、咳嗽、喉痛、瘧疾、 腎盂腎炎、乳糜尿、肝硬化腹水、疳積等症，分布在我國西南部和南部各省及臺灣等地，資源十分豐富。爵床的化學成分主要是木脂素及其苷類。山荷葉素(diphyllin)是近期所發現的具有抗腫瘤活性的新結構的天然產物，分子式=C21H16O7,分子量380. 353，屬於1_芳基萘木脂素類，主要從爵床中分離得到。它具有抗癌、抗菌和抗病毒等廣泛的生物活性。Diphyllin具有較好的抗腫瘤活性，對於人鼻咽癌細胞(KB)的ED5(1<3ymol/mL。研究發現Diphyllin類化合物能夠作用於細胞分裂周期的 S期，Gl期，使細胞分裂停留在Gl期，對於S期有很強的抑制作用。實驗證明，用於HCT116 細胞時，在M小時內，能夠使S期的細胞的比率從70%下降到41%，而使Gl期細胞所佔比重由21%增加到42%，對MCF-7細胞也有類似的結果。Diphyllin類化合物具有廣泛的生理活性，已引起許多藥學家、化學家的廣泛關注。現有技術中，張永利採用80%乙醇回流提取，所得浸膏依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取部分再分別利用矽膠柱色譜、VLC色譜、Diaion HP_20、MC1 Gel CHP-20, Sephadex LH-20、RPC-18等柱層析及製備薄層層析分離純化單體化合物，該方法僅限於實驗室少量製備和化學成分分離鑑定。中國專利(申請號201010535341.0)公開了一種乙醇熱回流、乙酸乙酯-水混合溶劑多級逆流萃取、大孔樹脂柱層析、丙酮結晶的方法製備山荷葉素，該方法萃取率低、產品純度不穩定。
發明內容
本發明的目的是提供一種從爵床中提取山荷葉素的方法，該方法得到的山荷葉素純度大於98%，對促進山荷葉素的應用具有重要的意義。為實現本發明的目的，本發明所採用的技術方案是
一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特徵在於，該方法採用以下步驟
(1)以爵床為原料經超微粉碎後，用60%-75%丙酮滲漉提取，滲漉液濃縮得濃縮液；
(2)濃縮液用等體積量的二氯甲烷萃取3-4次，合併二氯甲烷相併濃縮成浸膏；
(3)將上述浸膏用中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶液按15:1-5:2的配比進行梯度洗脫，收集各部分洗脫液；
(4)將洗脫液5:2部分用高效液相色譜法進行分離純化，流速為10-50ml/min，以甲醇-水為流動相，即得到山荷葉素。為使細胞中的有效組分充分提取出來，步驟1中山荷葉經超微粉碎至粒徑10 μ m以下。步驟3中氧化鋁中低壓柱的柱壓為4_7bar，柱內徑為20-100mm，層析柱徑高比為 1:5-15。本發明的優勢在於本發明採用超微粉碎，再滲漉提取，操作簡單，提取率高；採用二氯甲烷-丙酮混合溶劑洗脫，危害小，汙染低；使用中低壓柱進行層析，上樣量大，周期短，分離度好，產品純度高。
具體實施例方式下面將通過以下實施例作進一步闡述，但並不限制本發明的保護範圍。實施例1:
取IOkg經超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用65%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取3次，合併二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為7bar，中低壓柱內徑為20mm，層析柱徑高比為1 5，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)進行梯度洗脫， 收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為20ml/min， 以甲醇-水為流動相，逐步調整二者比例逐級細分，即得到白色針晶，經結構檢測確認，該白色針晶為純度98. 5%的山荷葉素。實施例2:
取IOkg經超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用70%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取4次，合併二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為6bar，中低壓柱內徑為25mm，層析柱徑高比為1 7，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)進行梯度洗脫， 收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為lOml/min， 以甲醇-水為流動相，逐步調整二者比例逐級細分，即得到白色針晶，經結構檢測確認，該白色針晶為純度98. 8%的山荷葉素。實施例3:
取IOkg經超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用65%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取4次，合併二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為4bar，中低壓柱內徑為100mm，層析柱徑高比為1:15，用二氯甲烷-丙酮(15:1 —5:2)進行梯度洗脫，收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為40ml/ min，以甲醇-水為流動相，逐步調整二者比例逐級細分，即得到白色針晶，經結構檢測確認，該白色針晶為純度98. 4%的山荷葉素。實施例4:
取IOkg經超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用60%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取3次，合併二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為^ar,中低壓柱內徑為36mm，層析柱徑高比為1 12，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)進行梯度洗脫， 收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為50ml/min，以甲醇-水為流動相，逐步調整二者比例逐級細分，即得到白色針晶，經結構檢測確認，該白色針晶為純度98. 6%的山荷葉素。
權利要求
1.一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特徵在於，該方法採用以下步驟(1)以爵床為原料經超微粉碎後，用60%-75%丙酮滲漉提取，滲漉液濃縮得濃縮液；(2)濃縮液用等體積量的二氯甲烷萃取3-4次，合併二氯甲烷相併濃縮成浸膏；(3)將上述浸膏用中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶液按15:1-5:2的配比進行梯度洗脫，收集各部分洗脫液；(4)將洗脫液5:2部分用高效液相色譜法進行分離純化，流速為10-50ml/min，以甲醇-水為流動相，即得到山荷葉素。
2.按照權利要求1所述的一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特徵在於步驟1山荷葉經超微粉碎至粒徑10 μ m以下。
3.按照權利要求1所述的一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特徵在於步驟3中氧化鋁中低壓柱的柱壓為4-7bar，柱內徑為20_100mm，層析柱徑高比為1:5-15。
全文摘要
一種從爵床中提取山荷葉素的方法，具體步驟為將爵床經超微粉碎後用丙酮滲漉提取，滲漉液濃縮後用二氯甲烷萃取3-4次，二氯甲烷相上樣至氧化鋁為300-400目的氧化鋁柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶劑洗脫，洗脫液濃縮過濾後採用高效液相製備色譜進一步分離，即可獲得純度大於98%的山荷葉素。該方法操作流程簡單，所獲得的化合物純度高，工業化生產容易實現。
文檔編號C07D407/04GK102311429SQ20111018745
公開日2012年1月11日 申請日期2011年7月6日 優先權日2011年7月6日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司