一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法
2023-04-23 07:09:21 1
專利名稱：一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法
技術領域：
本發明屬於天然藥物化學技術領域，具體涉及一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法。
背景技術：
沙苑子來源於豆科植物扁莖黃芪Astragalus complanatus R.Br.的乾燥成熟種子。甘，溫。歸肝、腎經。具有補腎助陽，固精縮尿，養肝明目的功效。用於腎虛腰痛，遺精早洩，遺尿尿頻，白濁帶下，眩暈，目暗昏花。有文獻報導沙苑子對血液流變學、免疫功能、血壓和腦血流量均有影響，並且還有解熱鎮痛、鎮靜、耐寒、抗疲勞、抗炎和降脂保肝的作用。沙苑子所含化學成分主要有胺基酸、黃酮類、三萜類、脂肪酸以及微量元素等。其中黃酮是沙苑子的主要有效成分之一，具有許多藥理活性。藥理研究表明沙苑子總黃酮有明顯的降低血清膽固醇、甘油三脂，減輕肝脂肪變形作用，還可降低脂蛋白-膽固醇含量。近年來研究認為沙苑子總黃酮可保護大鼠重要器官免受運動損傷，明顯提高大鼠的運動能力，抑制肝纖維化形成，抗腫瘤E4-63，此外對SHR和RHR-83有明顯的降壓作用。沙苑子苷A是沙苑子黃酮的主要特徵性成分，且在沙苑子中的含量較高，也是沙苑子保肝抗肝纖維化的主要有效成分之一。吳文倩等在文獻「沙苑子中沙苑子苷A對照品的製備及鑑定」中介紹了沙苑子苷 A對照品的製備方法，該方法取沙苑子粗粉石油醚脫脂，80%乙醇提取，ZTC-5黃酮大孔吸附樹脂吸附，50%乙醇洗脫，經聚醯胺柱層析，水及不同濃度乙醇梯度洗脫，再上矽膠柱，用醋酸乙酯甲醇梯度洗脫，醋酸乙酯甲醇(10 2)洗脫部位析出沙苑子苷A結晶，甲醇進行多次重結晶，得淡黃色針狀結晶。此法經過三次柱層析，生產周期長，損失較大，回收率低，難以擴大生產。申請號為200910057073. 3的中國專利介紹了一種沙苑子苷A的製備方法，該法採用80%乙醇提取、乙酸乙酯萃取、水飽和正丁醇萃取，然後用大孔樹脂吸附，10-30%甲醇、 50-70%甲醇洗脫，50-70%乙醇洗脫部分濃縮至幹，甲醇溶解，上反相C18柱，30-50%甲醇洗脫，濃縮至幹、重結晶即得，純度在98 %以上。此法使用大量有機溶劑和有毒的甲醇溶液， 溶劑殘留較大。
發明內容
本發明的目的在於提供一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，尤其是採用膜濾技術、大孔樹脂吸附、中壓柱層析方法製備高純度沙苑子苷的方法。本發明的目的是通過以下技術方案實現的一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於包括以下步驟取沙苑子用鹼性水或鹼性稀醇溶液提取，過濾，提取液加入超濾膜系統，收集透過液，透過液濃縮後再加酸調PH至3-5，沉澱加熱水溶解，放冷，用石油醚萃取2-4次，除去脂溶性雜質，水層加入沉澱劑澄清，液體經大孔樹脂吸附，40-70 %乙醇洗脫，洗脫液濃縮成浸膏，加入中壓矽膠柱分離純化，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，氯仿-甲醇(3 1)重結晶即得沙苑子苷。所述的鹼性水為氨水溶液、氫氧化鈉溶液、碳酸氫鈉溶液、石灰水，所述的鹼性稀醇溶液中醇為乙醇，濃度為40-60%，液料比為8-20 1。所述的提取方法為加熱回流法、超聲提取、滲漉提取、微波提取或煎煮法。所述的超濾膜為截留分子量4000-10000的管式複合超濾膜。所述的石油醚加入量為沉澱體積的4-8倍。所述的沉澱劑為ZTC澄清劑、CTS中藥澄清劑、去乙醯殼聚糖中的任一種，加入量為液體的0.6% -2.2%。所述的大孔樹脂為DS401、HZ818、LS-303、ADS-21中的一種，洗脫劑用量為4_8倍柱體積。所述的中壓矽膠柱柱長為50-300cm，柱直徑為5-lOOcm，填充矽膠目數為100-300 目，柱壓為0. l-4MPa。所述的乙酸乙酯-乙醇混合溶劑比例為20 1-2 1。本發明的有益效果生產成本低、生產周期短、產品純度高，所用試劑低毒性，可回收利用，便於工業連續化生產。
具體實施例方式實施例1:取沙苑子原料5kg投入小型提取罐中，加入8倍量2 %氫氧化鈉溶液滲漉提取至滲漉液顏色變淺，合併滲漉液，加入截留分子量6000的管式複合超濾膜系統超濾，透過液濃縮成浸膏後加鹽酸調PH至3. 5，濾出沉澱，沉澱物加熱回流溶解，放冷，用5倍體積石油醚萃取2次，水層加入2. 2% CTS中藥澄清劑，靜置，離心，清液上HZ818大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質，再以50%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將100-200目矽膠4kg用乙酸乙酯混懸後，均勻加入柱長200cm，內徑20cm的不鏽鋼層析柱中，驅除氣泡，壓力控制在 0.3MPa，將200g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進樣，上樣後以乙酸乙酯-乙醇20 :1-2:1 梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監測，合併高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試劑，氯仿-甲醇(3 1)重結晶，濾出結晶，乾燥，得沙苑子苷2. 5g，純度98.4%。回收的洗脫劑經再生後可作下次重複使用。實施例2:取沙苑子原料^g投入小型提取罐中，加入15倍量3%石灰水溶液超聲提取4次， 每次1小時，合併提取液，加入截留分子量4000的管式複合超濾膜系統超濾，透過液濃縮成浸膏後加鹽酸調PH至3. 0，濾出沉澱，沉澱物加熱回流溶解，放冷，用4倍體積石油醚萃取3 次，水層加入1.5%去乙醯殼聚糖，靜置，離心，清液上ADS-21大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質，再以70%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將200480目矽膠6kg用乙酸乙酯混懸後，均勻加入柱長100cm，內徑5cm的不鏽鋼層析柱中，驅除氣泡，壓力控制在0. 8MPa，將 200g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進樣，上樣後以乙酸乙酯-乙醇20 1-2 1梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監測，合併高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試劑，氯仿-甲醇(3 1)重結晶，濾出結晶，乾燥，得沙苑子苷2. 3g，純度98.7%。回收的洗脫劑經再生後可作下次重複使用。
實施例3:取沙苑子原料IOkg投入小型提取罐中，加入20倍量5%氨水醇溶液(醇濃度為 50% )煎煮，過濾，合併提取液，加入截留分子量5000的管式複合超濾膜系統超濾，透過液濃縮成浸膏後加鹽酸調PH至4. 0，濾出沉澱，沉澱物加熱回流溶解，放冷，用8倍體積石油醚萃取2次，水層加入1. 2% CTS中藥澄清劑，靜置，離心，清液上LS-303大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質，再以40%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將150-250目矽膠IOkg用乙酸乙酯混懸後，均勻加入柱長250cm，內徑50cm的不鏽鋼層析柱中，驅除氣泡，壓力控制在 2. 3MPa，將400g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進樣，上樣後以乙酸乙酯-乙醇20 :1-2:1 梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監測，合併高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試劑，氯仿-甲醇(3 1)重結晶，濾出結晶，乾燥，得沙苑子苷5. 0g，純度98.2%。回收的洗脫劑經再生後可作下次重複使用。實施例4 取沙苑子原料IOkg投入小型提取罐中，加入16倍量3%碳酸氫鈉醇溶液(醇濃度為40% )微波提取3次，每次45分鐘，合併提取液，加入截留分子量8000的管式複合超濾膜系統超濾，透過液濃縮成浸膏後加鹽酸調PH至4. 5，濾出沉澱，沉澱物加熱回流溶解，放冷，用6倍體積石油醚萃取3次，水層加入0. 6% ZTC1+1澄清劑，靜置，離心，清液上DS401大孔吸附樹脂柱，先以水洗去雜質，再以60%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將300-400 目矽膠8kg用乙酸乙酯混懸後，均勻加入柱長300cm，內徑80cm的不鏽鋼層析柱中，驅除氣泡，壓力控制在3. 6MPa,將400g浸膏以乙酸乙酯分散，用泵進樣，上樣後以乙酸乙酯-乙醇 20 1-2 1梯度洗脫，分段收集，TLC跟蹤監測，合併高含量沙苑子苷的流分，減壓回收試齊U，氯仿-甲醇(3 1)重結晶，濾出結晶，乾燥，得沙苑子苷4. 9g，純度98.5%。回收的洗脫劑經再生後可作下次重複使用。
權利要求
1.一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於包括以下步驟取沙苑子用鹼性水或鹼性稀醇溶液提取，過濾，提取液加入超濾膜系統，收集透過液，透過液濃縮後再加酸調PH至3-5，沉澱加熱水溶解，放冷，用石油醚萃取2-4次，除去脂溶性雜質，水層加入沉澱劑澄清，液體經大孔樹脂吸附，40-70%乙醇洗脫，洗脫液濃縮成浸膏，加入中壓矽膠柱分離純化，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，氯仿-甲醇(3 1)重結晶即得沙苑子苷。
2.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的鹼性水為氨水溶液、氫氧化鈉溶液、碳酸氫鈉溶液、石灰水，所述的鹼性稀醇溶液中醇為乙醇， 濃度為40-60%，液料比為8-20 1。
3.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的提取方法為加熱回流法、超聲提取、滲漉提取、微波提取或煎煮法。
4.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的超濾膜為截留分子量4000-10000的管式複合超濾膜。
5.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的石油醚加入量為沉澱體積的4-8倍。
6.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的沉澱劑為ZTC澄清劑、CTS中藥澄清劑、去乙醯殼聚糖中的任一種，加入量為液體的 0. 6% -2. 2%。
7.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的大孔樹脂為DS401、HZ818、LS-303、ADS-21中的一種，洗脫劑用量為4_8倍柱體積。
8.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的中壓矽膠柱柱長為50-300cm，柱直徑為5-lOOcm，填充矽膠目數為100-300目，柱壓為 0.l-4MPa。
9.如權利要求1所述的從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，其特徵在於，所述的乙酸乙酯-乙醇混合溶劑比例為20 1-2 1。
全文摘要
本發明公開了一種從沙苑子中提取純化沙苑子苷的方法，取沙苑子用鹼性水或鹼性稀醇溶液提取，過濾，提取液加入超濾膜系統，收集透過液，透過液酸調pH至3-5，沉澱加熱水溶解，放冷，用石油醚萃取除去脂溶性雜質，水層再加入沉澱劑澄清，液體經大孔樹脂吸附、中壓矽膠柱分離純化、氯仿-甲醇重結晶得到較高純度的產品，所得產品純度可達98％以上。本發明方法採用膜分離技術，提高了沙苑子苷的純度，並減輕了樹脂的損害，延長了樹脂的使用壽命，另外中壓矽膠柱生產周期短，在提取純化過程中，大部分使用食用乙醇，汙染少。
文檔編號C07H17/07GK102558259SQ201010603920
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月24日 優先權日2010年12月24日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司